Raznolikost u interakcijama Bakterija-domaćin u vrstama Helicobacter heilmannii sensu stricto

Raznolikost u interakcijama Bakterija-domaćin u vrstama Helicobacter heilmannii pregled sensu stricto pregled apstraktne pregled Helicobacter (H.) heilmannii pregled sensu stricto (SS) je zoonotic bakterija koja se prirodno naseljava želudac od pasa i mačaka , U ljudi, to mikroorganizam je povezana s gastritisa, peptičkog ulkusa i sluznica limfnog tkiva (MALT) limfom. Malo informacija dostupno o patogenezi H. heilmannii pregled S.S. infekcija kod ljudi i ne zna da li postoje razlike u virulenciji unutar ove vrste. Dakle, mongolski skočimiš model koristi za proučavanje bakterija-host interakcije 9 H. heilmannii pregled S.S. naprezanja. Kolonizacija Sposobnost sojeva intenzitet gastritis i genske ekspresije različitih upalnih citokina u želucu se određuju u 9 tjedana nakon pokusne infekcije. Indukcija jedne antralnom dominantne kroničnog aktivnog gastritisa sa formiranjem agregata limfocitne prikazan je 7 vrsta. Visoki antralne kolonizacija viđen 4 sojeva, a kolonizacije 4 drugih sojeva ograničila i jedan soj nije detektiran u želucu na 9 tjedana nakon infekcije. Svi sojevi izazivaju kronični aktivni gastritis uzrokovan je doreguliranje u pro-upalni citokin IL-1 u antrumu. Snižena sekundarnom izraz H + /K + ATPaze je viđen u želucu nakon infekcije sa 3 visoko kolonizatora sojeva i 2 vrlo kolonizatora sojeva uzrokovalo povećanu ekspresiju gastrin u fundusa. Niti u jednoj od H. heilmannii
S.S.-inficiranih skupina, IFN-γ izraz bio regulira prema gore. Ova studija pokazuje raznolikost u interakcije bakterija-domaćina u H. vrsta heilmannii pregled S.S. i pregled da se patogeneza želučanih infekcija s ovim mikroorganizmom nije identičan onom nekog H. pylori pregled infekcije. Uvod pregled Helicobacter (H.) pylori pregled je najčešći Helicobacter pregled vrsta kolonizaciju želučane sluznice ljudi i povezana je s gastritisom, peptičkog ulkusa i želučani rak [1-3]. Osim H. pylori
, drugi morfološki različita ne-H. pylori Helicobacter pregled (NHPH) vrste, također naziva H. heilmannii
sensu lato (S. L.) [4] su povezane sa želučanom bolesti i kod ljudi [5-10]. NHPH predstavlja skupinu usko povezane, ali različitih bakterijskih vrsta, uglavnom se nalaze u različitih životinjskih vrsta, kao što su H. felis Netlogu H. salomonis Netlogu, H. bizzozeronii
, H. heilmannii
sensu stricto (sS), H. cynogastricus pregled i H. baculiformis
u mačaka i pasa i H. suis Netlogu u svinja [5, 7, 10-15]. Ovi mikroorganizmi odlikuju se izuzetno izbirljivoj prirode, koji je do sada rezultirala ograničenom broju in vitro izolata dostupnom cijelom svijetu.
H. heilmannii pregled S.S. tek nedavno izolirani i uzgajani in vitro [16]. To je otkrivena u divljem mačji i ljudskih želučanih biopsija, ali to se najčešće nalazi u želučanoj sluznici mačaka i pasa s prevalencijom u rasponu od 20 do 100% [5-7, 10, 12]. Iako je ovaj bakterija je povezana s kroničnim aktivnim gastritisom u pasa i mačaka [12], njegova važnost patogeni ostaje zagonetna i vjerojatno naprezanje ovisne. Kod ljudi, H. heilmannii pregled S.S. Otkrivena je u 8-19% želučanih biopsija histološkog dokaz NHPH infekcije [5, 8, 10]. Infekcija ove bakterije u ljudi je povezana s gastritisa, peptičkog ulkusa i sluznice povezane limfnog tkiva (MALT) limfom [5, 8, 10, 17, 18].
Nekoliko studija infekcija u eksperimentalnim životinjskim modelima su provedena istraži patogenezu H. pylori pregled infekcija u ljudi. Za razliku od toga, malo informacija dostupno bave patogenezi H. heilmannii pregled S.S. infekcije kod ljudi. Ova bakterija je propagirao u miševa do 28 mjeseci i bio u mogućnosti da se potakne MALT-limfoma u želucima tih životinja [18]. Međutim, u ovom mišjem pokusu, homogenizirana želučani tkivo je korištena kao inokulum. To znači da su i drugi mikroorganizmi inokulirane zajedno s H. heilmannii pregled S.Š., koji bi mogli utjecati na rezultate, kao što je ranije [19] što je opisano. Dakle, da bi se dobio bolji uvid u patogenezu ljudske želučane bolesti povezane s H. heilmannii pregled S.Š., eksperimentalna istraživanja infekcija s čistim kulturama tog mikroorganizma su bitni. Stoga je cilj ovog istraživanja bio je proučiti bakterija-host interakcije 9 H. heilmannii pregled S.S. sojevi izolirane od želučane sluznice različitih mačaka. Mongolski gerbilnog modela Prethodno je pokazano da je koristan životinjski model za proučavanje Helicobacter pregled su povezane s želučano patologija kod ljudi i stoga se koristi u ovom istraživanju [19-21].
Materijal i metode
bakterijskih sojevi
Devet sojevi H. heilmannii
ss dobiveni su iz želučane sluznice različitih mačaka i označen ASB1 (= soj, DSM 23983, [16]), ASB2, ASB3, ASB6, ASB7, ASB9, ASB11, ASB13 i ASB14. Bakterije kultivirane na bifazne Brucella pregled agar pločama (oksoid, Basingstoke, UK) uz dodatak 20% (v /v) fetalnog telećeg seruma (Hyclone, Logan, UT, USA), 5 mg /L amphothericin B (Fungizone, Brystal -Myers Squibb, New York, SAD), Skirrow (oksoid, sadrži 10 mg /l vankomicin, 5 mg /l trimetoprim laktat i 2500 U /L polimiksin B), Vitox dodatak (oksoid) i 0,05% HCl (pH 5). Nakon inkubacije, u uvjetima microaerobic (85% N 2, 10% CO 2, 5% O 2 37 ° C), a bakterija je skupljena i konačna koncentracija je podešena na 7 × 10 8 izvediv bakterija /ml, što je određeno brojanjem u Neubauer računajući komore pregled životinje, stanovanje i eksperimentalni postupak pregled Specifična bez patogena (SPF) ženska pet tjedana stari mongolskih gerbila (Crl. MON (Tum), n = 48 pregled) dobiveni su iz Charles River Laboratories (Lille, Francuska). Životinje su smještene u kaveze filter vrh (1500 cm 2), u autoklavu drvene strugotine i autoklav sijeno. Oni su hranjeni ad libitum autoklavirani komercijalne prehrani (Teklad 2018S, koji sadrži 18% proteina, Harlan, Nizozemska) i autoklaviranc vodu. Za svaki od 9 H. heilmannii pregled S.S. sojeva ispituje, 5 životinja su inokulirane intragastrično 3 puta na 2 dana intervalima s 300 ul bakterijske suspenzije. Tri životinje su inokulirane Brucella pregled mediju (pH 5, Oxoid) i služio je kao negativna kontrola. Inokulacija je provedena pod kratkom anesteziju izofluranom (2.5%), upotrebom lopte vrhom igle za instilaciju. Na 9 tjedana nakon prve inokulacije, životinje se žrtvuje cervikalnom dislokacijom pod dubokom anestezijom izofluranom (5%). Želudac i dvanaesniku svakog gerbila su resected i uzeti su uzorci za patohistološku pregleda i kvantitativnog real-time (RT) -PCR analize.
In vivo eksperiment je odobren od strane Etičkog povjerenstva Veterinarskog fakulteta, Ghent sveučilište Belgija (EC 2011/090).
Histopatologija i imunohistokemijski
uzdužni presjek, polazeći od kraja forestomach i sadrži antruma i fundus želuca i dio duodenuma, smanjena je duž veće zakrivljenosti i fiksirane u 10% fosfat-puferiranom formalinu, obrađuje standardnim postupcima i uklopljene u parafin za svjetlosnim mikroskopom. Tri uzastopne sekcije od 5 uM su rez. Nakon deparaffinization i hidratacije, popravljanje antigenom izazvanog toplinom je provedena u citratnom puferu (pH 6). Radi blokiranja endogene peroksidaze i ne-specifične reakcije, stakalca su inkubirana s 3% H 2O 2 u metanolu (5 minuta) i 30% kozjim serumom (30 min), respektivno. Prvi dio je obojena hematoksilin /eozinom (H &E) postići intenzitet gastritisa prema ažuriranoj Sydney sustava [22], ali s nekim izmjenama, kao što je prethodno opisano [19]. Na drugom dijelu, proliferacija epitelnih stanica određena je imunohistokemijski bojanjem pomoću mišjim monoklonskim anti-Ki67 protutijela (1/25; Menarini Diagnostics, Zaventem, Belgija). epitelne stanice Ki67 pozitivnih broje u 5 nasumično odabranom High power poljima na razini želučanih jama (povećanje: 400 ×), kako u antruma i fundusa. Prosječna pozitivnog broja stanica izračunat je za svaku pokusnu skupinu u obje regije želuca
parijetalni stanice identificirane su na trećem dijelu imunokemijskim metodama za vodika kalij ATPaze pomoću miša monoklonskih protutijela (1/200;. Abcam doo, Cambridge, UK). Inkubacija s primarnim antitijelima usmjerenim protiv Ki67 i vodik kalij ATPaze je slijedila inkubacija sa HRP obilježenim sekundarnim protutijelom (Predvidjeti Link miš K4007, DakoCytomation, Heverlee, Belgija) za vizualizaciju.
Ekstrakcija DNA i kvantificiranje kolonizaciji H. heilmannii
ss u želucu i dvanaesniku
Iz svake gerbila, uzeti su uzorci iz fundusa i antruma želuca i nešto od dvanaesnika. Uzorci tkiva su pohranjeni u 1 mL RNA kasnije (Ambion, Austin, TE, USA) pri -70 ° C do RNA- i DNA-ekstrakciju. Uzorci tkiva su homogenizirani (MagNALyser, Roche, Mannheim, Njemačka) i RNA i DNA su razdvojeni pomoću TriReagent RT (Molecular Research Center Inc, Cincinnati, USA) u skladu s uputama proizvođača. Broj koloniziranje H. heilmannii pregled S.S. po mg želuca tkivo je određena u uzorcima DNA pomoću H. heilmannii
S.S.-specifične kvantitativne RT-PCR. Za generaciju standarda, dio je ureAB pregled skupine gena (1224 bp) iz H. heilmannii pregled S.S. ASB1 umnožen pomoću primera U430F i U1735R, kao što je prethodno opisano [6]. Standard sastoji se od 10-slojnim-razrjeđenja s početkom u 10 8 PCR amplikonima za svaku od 10 jal reakcijske smjese. Jedan ul ekstrahira DNA kalupa se suspendira u reakcijskoj smjesi 10 ul čine 0.25 uL oba prajmera smještenih unutar bp fragment od 1224, da bi se dobio 212 bp PCR produkt je (osjetnog primera: HH_SP1: 5'-CTT TCT CCT GGT GAA GTG ATT CTC-3 ', negativna početnica: HH_RVQ: 5'-GCT GTA CCA GCA GAG ATG TCC AAG-3', temperatura očvršćavanja 58 ° C), 3.5 ul HPLC vode i 5 ul SensiMix ™ SYBR ne-ROX (Bioline reagensi Ltd , Velika Britanija). Oba standarda i uzorci su korišteni u duplikatu na CFX96 ™ RT-PCR sustava s C1000 Termalni brojača (Bio-Rad, Hercules CA, USA). The (verzija 1.6) softver Bio-Rad CFX Manager se koristi za izračunavanje graničnih ciklusa (CT) -values ​​i analiza krivulja taljenja umnožene DNK. Prosječne vrijednosti duplikata su se koristili za kvantifikaciju H. heilmannii pregled S.S. DNK u uzorcima tkiva. Pregled Priprava mRNA i Gene Expression pregled Ukupna RNA iz uzorka tkiva, pročišćen uporabom RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Njemačka), prema uputama proizvođača. Čistoća RNA pokazana mjerenjem omjera apsorpcije pri 260 nm i 280 nm, s NanoDrop koja je u svim slučajevima bio približno 2. Koncentracija RNA u svakom uzorku je podešen na 1 ug /ul, a cDNA sintetiziran je neposredno nakon čišćenja pomoću RNA iScript ™ cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad). Alikvoti cDNA (1/5 razrjeđenje) su korišteni kao kalup za kvantitativne RT-PCR za mjerenje ekspresije gena. Razina ekspresije mRNA raznih citokina (IL-1, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17, IFN-γ i TNF-α), gastrin i H + /K + ATPaze su kvantificirani. Na domaćih gena GAPDH, β-aktin
i HPRT pregled su uključeni kao referentne gene. Nizovi primera su prikazani u tablici 1, [23-28]. Za sve ciljnih gena i referentnih gena, primera učinkovitosti su između 1,9 i 2,1. Reakcije su izvedene u 10 ul volumena koji sadrži 1 ul cDNA, 0.05 ul oba primera, 3.9 ul HPLC vode i 5 ul SensiMix ™ SYBR Ne-Rox. Eksperimentalni protokol za PCR reakcije (40 ciklusa) je izvedena na CFX96 ™ RT-PCR sustavu sa C1000 Thermal Cycleru (Bio-Rad): denaturacija kroz 15 min na 95 ° C, nakon čega slijedi amplifikcijskih ciklusa na 95 ° C 20 s, nalijeganjem na 60 ° C tijekom 30 sekundi i ekstenzije na 73 ° C tijekom 30 sekundi. Kontrola reakcije bez koraku reverzne transkriptaze su provedene isključiti kontaminacija DNK uzoraka RNA. Ne-template kontrole su reakcijske smjese uključeni i svi uzorci su korišteni u duplikatu. CT-vrijednosti normalizirane su na geometrijsku sredinu CT-vrijednosti od 3 referentnih gena, nakon čega normalizirane razine mRNA su izračunate primjenom 2 -ΔΔCt postupak [29] 1 .table parova početnica.
Primeri
Sequence (5 '→ 3')
Citokini pregled IL-1β FW23 pregled GGC AGG TGG TAT CGC TCA TC pregled, IL 1β RV23
CAC CTT GGA TTT GAC TTC TA pregled, IL-5 FW pregled AGA GAA GTG TGG CGA GGA GAG ACG
IL-5 RV
ACA GGG CAA TCC CTT MAČKA CGG Netlogu IL-6 FW pregled CAA AGC CAG AGC CAT TCA GAG
IL-6 RV
GCC ATT CCG TCT GTG ACT CCA GTT TCT CC pregled IL-10 FW pregled GGT TGC CAA GCC TTA TCA GA pregled IL-10 RV pregled GCT OKS TTC TGA GGG TCT TC pregled, IL-12p40 FW pregled GAC ACG ACC TCC ACC AAA GT pregled IL-12p40 RV pregled MAČKA TCT GGG ACT GGA ccc TA pregled, IL-17 FW23
AGC TCC AGA GGC CCT CGG AC
IL-17 RV23
agg ACC aGG ATC TCT TGC TG
IFN-γ FW24
AZTN TGA ACG CTA CAC Zakona OKS TC pregled, IFN-γ RV24 pregled GAA GTA GAA AGA GAC AAT CTG g pregled TNF-α FW23 pregled GCT CCC cca GAA GTC GGC g pregled TNF-a RV23
CTT GGT GGT TGG GTA CGA CA pregled gastrina pregled gastrina FW25 pregled gCC CTG GAA CCG CAA CA pregled gastrina RV25 pregled TTC tTG GAC AGG TCT GCT tTG AA pregled H + /K + ATPaze ( parijetalni stanice) pregled ATP4b FW pregled GGG GGT AAC CTT gag ACC TGA TG pregled ATP4b RV pregled AAG AAG TAC CTT TCC GAC GTG CAG
referentni geni
GAPDH FW26 pregled AAC GGC ACA GTC AAG GCT GAG AAC g
GAPDH RV26
CAA MAČKA ACT CGG CAC CGG mačka CG pregled HPRT FW27 pregled CTC ATG GAC TGA TTA TGG Aca g pregled HPRT RV27 pregled AGC TGA gag ATC ATC TCC ACC AAT pregled β-aktin FW28 pregled CCA AGG CCA ACC GCG AGA TGA C pregled β-aktin RV28 pregled AGG GTA CAT GGT GGT GCC GCC AGA C pregled parova početnica za mjerenje su prikazani mRNA ekspresijskih razina IL-1, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17, IFN-y, TNF-a, gastrina i H + /K + ATPaze. Na domaćih gena GAPDH, β-aktin
i HPRT pregled su uključeni kao referentne gene.
Statistička analiza pregled, normalnosti i varijance homogenosti podataka analizirani su pomoću Shapiro-Wilk normalnosti test i Levenov test homogenosti od odstupanja. Gastritis rezultate, kolonizacija kapacitet i ATPaze i gastrin genske ekspresije su uspoređene između različitih zaraženih skupina i kontrole koriste Kruskall-Wallis analiza, nakon čega je Mann-Whitney U pregled, test. ekspresija citokina i broj Ki67 pozitivnih stanica su analizirani analizom varijance s Bonferroni post hoc testom. Razlike su smatrane za statistički značajne na str Netlogu ≤ 0,05. SPSS Statistics 21 programa (IBM) je koristiti za sve analize. Pregled Rezultati
infekcije s zarazan H. heilmannii pregled S.S. soja izaziva antruma-dominantna kronični aktivni gastritis pregled želuca svih kontrolnih životinja pokazala normalan histomorphology (Slika 1a). Upala u želucu gerbila zaraženih H. heilmannii pregled S.S. sojevi ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 i ASB14 obilježio je kroničnog aktivnog gastritisa sa formiranjem limfocitne agregata u lamina propria i submukozi od antruma želuca (slika 1b). Debljina sa sluznicom je blago povećana, a otkrivene su samo nekoliko neutrofili. Za razliku od toga, H. heilmannii pregled S.S. opterećuje ASB7 i ASB9 nije uzrokovalo eksplicitan sekundarnom upalu i tek blagi porast broja limfocitne stanica je primijećen u lamina propria antruma želuca (Slika 1c). U svim H. heilmannii pregled S.S. inficirane gerbili, samo ograničeni znakovi upale su otkrivene u fundus želuca (Dodatni file 1). U antralne upala indeks za svakog pojedinog životinje prikazane su na slici 2d. Statistički značajna razlika između upale rezultate za gerbila je ubrizgana ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 i ASB14 usporedbi s pokazana je kontrolna skupina (Mann-Whitney U pregled, test, p izvoznici < 0.05, Slika 2d). Slika 1 H &E bojenje antrumu od gerbila želuca. Normalno histologija antrumu negativnog kontrolne životinje sham inokuliranih (a). Eksplicitno limfocitni infiltracija lamina propria i submukoze s formiranje limfoidne folikule (strelice) u antrumu od gerbila cijepljenu s H. heilmannii pregled S.S. ASB1 (b). Blaga do odsutni infiltracije limfocita (strelice) u lamina propria u antruma i kod gerbila pokus s H. heilmannii pregled S.S. ASB7 (c). Bar = 30 m. Pregled, Slika 2 Kolonizacija kapacitet H. heilmannii S.S. sojevi i želuca Upala ocjena nakon eksperimentalne infekcije. Kolonizacija kapacitet je prikazan kao log10 vrijednosti H. heilmannii pregled S.S. bakterija po mg tkiva, otkrivenih u kvantitativnom RT-PCR u fundusa (a) i (c) antruma želuca i u duodenum (b). Rezultati ispod granice detekcije (log 2,39 bakterija po mg tkiva) su bili postavljeni na 0 antralne upala (d) je ocijenjen na skali od 0 do 4 (0: nema infiltracijom s mononuklearnim i /ili polimorfonuklearne stanice 1: blaga difuzno infiltracija s mononuklearnih i /ili polimorfonuklearne stanice ili prisutnost jedne male (50-200 stanice) agregat upalnih stanica 2: umjereno difuzno infiltracija s mononuklearnim i /ili polimorfonuklearnih stanica i /ili prisutnosti 2-4 upalnih agregata 3: označen difuzni infiltracija s jezgrom i /ili polimorfonuklearnih stanica i /ili prisutnosti najmanje pet upalnih agregata 4: difuzno infiltracije velikih regija s velikih agregata mononuklearnih i /ili polimorfonuklearnih stanica) .Individual gerbili se opisuju kao slikama oko srednje vrijednosti ( linije). Statistički značajne razlike u odnosu na kontrolne životinje su označeni s * (Mann-Whitney U pregled test, p pregled i 0.05) pregled Kolonizacija kapacitet H. heilmannii pregled S.S.. opterećuje u želucu i dvanaesniku
Otkrivanje H. heilmannii pregled S.S. DNA u kvantitativnom RT-PCR na 9 tjedana nakon infekcije pokazala visoku razinu kolonizaciju ASB1, ASB2, ASB3 i ASB6 u želucu (slika 2a-c). Nasuprot tome, kolonizacije ASB7, ASB11, ASB13 i ASB14 ograničila a ASB9 nije detektiran u želucu (slika 2a-c). Općenito, kolonizacija kapacitet u fundusa (slika 2a) bila je niža nego u antralnom (slika 2c) za sve testirane sojeve i najmanjim brojem bakterija je otkriven u dvanaesterac (Slika 2b). Osim toga, jasno Udruga je viđen između kolonizacije kapacitetom od H. heilmannii pregled S.S. sojevi i želučanih upala rezultate u antruma želuca (slika 2c-d). pregled Virulentni H. heilmannii pregled S.Š. sojevi uzrokuju antralne proliferaciju epitelnih stanica, želučani pregled Rezultati želučanog epitela proliferacije bodovanje u antrumu želuca prikazani su na slici 3C. Značajno veće brojeve Ki67 pozitivnih proliferacijom epitelnih stanica vidi na antrum i ASB1- i ASB6 inficirane gerbila, u usporedbi s kontrolnom skupinom (ANOVA, p
0,05, slika 3a-b). Brojevi Ki67-pozitivnih stanica su umjereno povećana u ASB2-, ASB3-, ASB11-, ASB13- i ASB14-inficiranih gerbila, iako ne statistički značajna. H. heilmannii pregled S.S. sojevi ASB7 i ASB9 nije uzrokovalo porast želučanog proliferacije epitelnih stanica. Osim toga, značajno veći broj proliferacijom epitelnih stanica su pokazali u antrumu od ASB1-, ASB2- i ASB6 inficirane gerbila, u usporedbi s gerbila zaraženih ASB7 i ASB9 (ANOVA, p
0,05). Slika 3 Želučani sekundarnom proliferacija epitelnih stanica. Ki67 uprljanje antruma od gerbila pokus s H. heilmannii pregled S.S. ASB1 (b) pokazuje veći broj proliferacijom epitelnih stanica u usporedbi sa 'sham inokuliranih negativne kontrolne životinje (a). Brzina proliferacije epitelnih stanica je određen brojanjem Ki67-pozitivne stanice epitela u 5 nasumce odabranih visokog energije polja na razini želučane kripte (povećanje: 400 ×) na antrum i gerbila želuca (c). Srednje brojeve Ki67 pozitivnih stanica su prikazani na svakoj pokusnoj skupini. Značajne razlike između H. heilmannii
S.S. inokuliranih i kontrolnih životinja su označene s * (ANOVA, p
0,05). Značajne razlike u usporedbi s ASB7 i ASB9 inokulirane skupine označene su + i # respektivno (ANOVA, p izvoznici < 0,05).
U fundusa svih H. heilmannii
SS-om gerbili, epitelnog velik broj proliferacije stanica nije bio značajno viši u usporedbi s kontrolnim životinjama (Dodatni datoteka 2). genska ekspresija citokina pregled u želucu kao odgovor na H. heilmannii pregled ss Infekcija pregled lokalni domaćin imunološkog odgovora prema H. ​​heilmannii pregled S.S. Infekcija je karakteriziran mjerenjem razine mRNA ekspresije IFN-y, IL-1, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17 i TNF-a u želucu od gerbila. Rezultati su prikazani u tablici 2 i na slici 2. 4.Table statističku analizu mRNA razina ekspresije.
antruma
Fundus
IL-1β
IFN-γ
pregled, H + /K + ATPaze pregled
gastrina
znači CT-Ctrefa
p-VALUE mlrd
Srednja CT-Ctref
p-vrijednost
Srednja CT-Ctref
p-vrijednost
Srednja CT-Ctref
p-vrijednost
ASB1 pregled 6,92 ± 0,29 * pregled 0,031 pregled 6,87 ± 0,60 pregled 1,000 pregled 3,70 ± 2,11 * pregled 0,050 pregled 7,20 ± 1,68 pregled 0,101
ASB2
7,48 ± 1,42 pregled 0,231 pregled 8,15 ± 1,26 pregled 1,000 pregled 2,42 ± 5,01 pregled 0.513 pregled, 5,94 ± 2,49 * pregled 0,050 pregled ASB3
6,55 ± 0,80 * pregled 0,008 pregled 7,54 ± 0,37 pregled 1,000 pregled 3,49 ± 2,28 * pregled 0,050 pregled 7,71 ± 1,17 pregled 0,101 pregled ASB6 pregled 6,12 ± 0,67 * pregled 0.001 pregled, 7,99 ± 0,90 pregled 1,000 pregled 2,23 ± 1,99 * pregled 0,050 pregled 5,33 ± 2,39 * pregled 0,025 pregled ASB7
10,25 ± 0,37 Netlogu 1,000 pregled 7.98 ± 0.52 pregled 1,000 pregled 0,45 ± 2,51 pregled 0,724 pregled 7,12 ± 1,54 pregled 0,180 pregled ASB9 pregled 9,03 ± 2,54 pregled 1,000 pregled 8,55 ± 0.71 pregled 1,000 pregled 0,79 ± 0,03 pregled 0,564 pregled 8,11 ± 1,58 pregled 1,000 pregled ASB11
7,47 ± 0,15 pregled 0,499 pregled 10,45 ± 0,95 * pregled 0.004 pregled, 1,32 ± 1,45 pregled 0,248 pregled 7,67 ± 1,25 pregled 0,289 pregled ASB13 pregled 7,72 ± 1,17 pregled 0,523 pregled 9,54 ± 1,55 * pregled 0,044 pregled 3,80 ± 0.34 pregled 0,083 pregled 8,10 ± 0,93 pregled 0,456 pregled ASB14
7,07 ± 0,52 pregled 0,054 pregled 8,51 ± 0,97 pregled 1,000 pregled 3,81 ± 3,11 pregled 0.127
7,77 ± 2,96 pregled 0,881 pregled Negativna kontrola pregled, 9,71 ± 1,13
- 7.08 ± 0.65
- 0,15 ± 1,82
- 8,70 ± 0,62
- Prikazana je statistička analiza IL-1, IFN-y i ekspresiju H + /K + ATPaze mRNA u antralnom i gastrin mRNA ekspresije u fundus želuca gerbila na 9 tjedana nakon eksperimentalne infekcije. ekspresija citokina je analizirana analizom varijance s Bonferroni post hoc testom. H + /K + ATPaze i gastrin genske ekspresije su u odnosu između različitih zaraženih skupina i kontrole koriste Kruskall-Wallis analiza, nakon čega je Mann-Whitney U pregled, test. Razlike su smatrane za statistički značajne na str Netlogu ≤ 0,05. SPSS Statistics 21 programa (IBM) se koristi za sve analize
srednju CT-Ctref. Za svaku pokusnu skupinu, prikazane su srednja normalizirana CT-vrijednosti ± standardna devijacija pregled bp pregled-vrijednost. : točne p
-values ​​se daju pregled * Statistički značajne razlike u odnosu na uninfected kontrolnu skupinu (p
≤ 0.05)
Slika 4 razine mRNA ekspresije citokina IL-1 i IFN.. y u antrumu želuca. Citokina mRNA razine ekspresije u fundusa i antruma želuca ispitani su kvantitativnom RT-PCR. prikazana su razine ekspresije IL-1 (a), i IFN-y (b) u antrumu. Podaci su prikazani kao mnogostrukost promjene u ekspresiji gena normalizirana 3 referentne gene i u odnosu na negativnom kontrolnom skupinom koja se smatra se 1. podaci prikazani kao srednje ± standardna devijacija. Značajne razlike u stupnju ekspresije između pokusnih skupina i negativnom kontrolnom skupinom su označene * p
< 0,05 (ANOVA).
Upalni citokin IL-1 je potentni inhibitor izlučivanja želučane kiseline [30] i igra ulogu u akutnoj fazi upale [31]. Ekspresija IL-1 je up-regulirana u antruma želuca za gerbila zaraženih H. heilmannii pregled S.S. ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 i ASB14, u usporedbi s negativnim životinjama kontrole (Slika 4a). Za gerbila je ubrizgana ASB7 i ASB9, bez up-regulaciji IL-1 je viđen.
Th1 citokina IFN-y, potpis oznaku od Th1-polarizirane odgovoru [24, 32], pokazuju smanjenu ekspresiju u antruma od gerbila zaraženih ASB11 i ASB13 (slika 4b), u usporedbi s kontrolnim životinjama.
nema značajne razlike u ekspresiji između inficiranim i lažno inokuliranih gerbila može se uočiti za IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17 i TNF-α.
parijetalni stanica H + /K + ATPaze mRNA je dolje regulira odgovor na kolonizaciji sa H. heilmannii pregled ss
Nema jasan gubitak parijetalni stanice mogu biti vizualizirana imunohistokemijsko bojanje u fundusa i antruma od H. heilmannii
SS inficirane gerbili odnosu na neinficirane kontrole (podaci nisu prikazani). Međutim, kvantitativna RT-PCR je pokazao jasnu smanjenje ekspresije želučane H + /K + ATPaze na antrum od gerbila inficiranih ASB1, ASB3 i ASB6 (Slika 5 i Tablica 2). U usporedbi s kontrolnim životinjama s razinama ekspresije mRNA postavljen na 1,0, srednja relativna ekspresija bila 0,09 ± 2,11 za ASB1-, 0.10 ± 2.28 i 0.24 za ASB3- ± 1,99 za ASB6 inficirane gerbila, respektivno. Nema značajne promjene u izrazu zabilježen u fundus od H. heilmannii
S.S. inficiranih gerbila. Slika 5 mRNA razina ekspresije H + /K + ATPaze na antruma želuca. Hidrogen kalij ATPaze mRNA razina ekspresije u želucu ispitan je pomoću kvantitativne RT-PCR. H + /K + ATPaze mRNA razina ekspresije u antruma prikazan. Podaci su prikazani kao mnogostrukost promjene u ekspresiji gena normalizirana 3 referentne gene i u odnosu na negativnom kontrolnom skupinom koja se smatra se 1. podaci prikazani kao srednje ± standardna devijacija. Značajne razlike u razini ekspresije između pokusnih skupina i negativnom kontrolnom skupinom su označene * P pregled ≤ 0,05 (Mann-Whitney U pregled, test).
Virulentni H. heilmannii pregled S.S. sojevi izazivaju povećanu ekspresiju gastrin u fundus
peptidni hormon gastrin potiče lučenje želučane kiseline parijetalni stanice. Poremećaj u svom izričaju može dovesti do hipergastrinemija. Izraz gastrina je vrlo up-regulirana u fundus gerbila zaraženih ASB2 i ASB6 na 9 tjedana nakon infekcije (Slika 6 i tablica 2). U odnosu na kontrolne životinje, srednja relativna ekspresija bila 6,79 ± 2,49 za ASB2- i 10.35 ± 2.39 na ASB6 inficirane gerbila. U antrumu želuca, ne doreguliranje gastrina ekspresije detektiran. Slika 6 mRNA razina ekspresije gastrina u fundus želuca. Gastrin mRNA razina ekspresije u želucu ispitan je pomoću kvantitativne RT-PCR. Prikazano je razina ekspresije u fundus. Podaci su prikazani kao mnogostrukost promjene u ekspresiji gena normalizirana 3 referentne gene i u odnosu na negativnom kontrolnom skupinom koja se smatra se 1. podaci prikazani kao srednje ± standardna devijacija. Značajne razlike u razini ekspresije između pokusnih skupina i negativnom kontrolnom skupinom su označene * p Netlogu ≤ 0,05 (Mann-Whitney U pregled, test). Pregled Rasprava Netlogu U 9 tjedana nakon inokulacije, kronični aktivni gastritis u antruma želuca je uočena kod gerbila pokusno zaraženih 7 od 9 H. heilmannii pregled ss sojevi testirani u ovom ispitivanju (ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 i ASB14). Lamina propria i submukoze su masovno infiltrirana limfocita, što je rezultiralo formiranjem limfoidne folikule. H. heilmannii pregled S.S. sojevi su uglavnom otkrivene su u antruma te u manjoj mjeri u fundus i dvanaesniku. Kod ljudi zaraženih NHPH, kolonizacija i upala također uglavnom javljaju u antruma želuca [5, 33-35]. To potvrđuje da mongolskih gerbila su prikladniji model za proučavanje H. heilmannii pregled S.S. infekcije kod ljudi, kao što je također pokazano za H. suis
[19] i H. pylori pregled [20, 21]. Svi autori pročitali i odobrili konačnu rukopis. Pregled

• Genom analiza sekvence Helicobacter pylori sojeva povezanih sa želučanom ulceracija i želučanom analiza cancer
• Antimikrobna aktivnost, akutna toksičnost i zaštite stanice učinak Crassocephalum vitellinum (Benth.) S. Moore izvući u rat etanol-HCl čira na želucu model