Diversitéit vun Bakterie-Provider Interaktioune innerhalb der Art Helicobacter heilmannii sensu stricto

Diversitéit an Bakterie-Provider Interaktioune innerhalb der Art Helicobacter heilmannii VerfÜgung sensu stricto VerfÜgung méiglech VerfÜgung Helicobacter (H.) heilmannii VerfÜgung sensu stricto (s) ass e zoonotic Bakterie datt de Mo vun Muppen a Kazen natierlech bewunnt. Am Mënsch, deem microorganism gouf mat gastritis, peptic oppent Krankheet an mucosa verbonne lymphoid Otemschwieregkeeten (Malz) lymphoma assoziéiert. Little Renseignement iwwer d'pathogenesis vun H. heilmannii VerfÜgung s.s. Aids an de Mënschen an et ass onbekannt ob Differenzen an virulence bannent dëser Aarten existéieren. Dofir, war e Persounen gerbil Modell ze studéieren Bakterie-Provider Interaktioune vun 9 H. heilmannii VerfÜgung s.s. benotzt analyséieren. D'Kolonisatioun Fähegkeet vun der analyséieren, d 'Intensitéit vun gastritis an der Gentherapie Ausdrock vu verschiddenen demagogesch cytokines am Mo. sech um 9 Wochen no experimentellen Wonn sech. D'Aféierungs- vun enger antrum-dominant chronescher aktiv gastritis mat Équipe vun Rezepter Bodrum war fir 7 analyséieren gewisen. High-Niveau antral Kolonisatioun war fir 4 analyséieren gesinn, während Kolonisatioun vun 4 aner analyséieren war méi limitéiert an eng Deformatioun war net am Mo. um 9 Wochen Post Krankheet erwëscht. All analyséieren enger chronescher aktiv gastritis Pinguin ass ëmmer eng weider-Regulatioun vun de pro-demagogesch cytokine IL-1β an der antrum. Eng reduzéiert antral Ausdrock vun H + /K + ATPase war an de Mo no Wonn mat 3 héich colonizing analyséieren an 2 héich colonizing analyséieren ëmmer eng fräi gastrin Ausdrock vun der fundus gesinn. An keent vun den H. heilmannii VerfÜgung s.s.-Krankheet Gruppen, IFN-γ Ausdrock war bis-reegelen. Dës Etude beweist Diversitéit an Bakterie-Provider Interaktioune innerhalb der Art H. heilmannii VerfÜgung s.s. an dass de pathogenesis vun gastric Aids mat dësem microorganism fir dass vun en H. pylori VerfÜgung Wonn net identesch ass. VerfÜgung Erschléisse VerfÜgung Helicobacter (H.) pylori VerfÜgung ass déi verwandelt Helicobacter VerfÜgung Arten colonizing der gastric mucosa vu Mënschen an huet mat gastritis, peptic oppent Krankheet an gastric Kriibs [1-3] assoziéiert gouf. Nieft H. pylori VerfÜgung, aner morphologically z'ënnerscheedde Net-H. pylori Helicobacter VerfÜgung (NHPH) Arten, zu Éieren ass och den H. heilmannii VerfÜgung sensu lato (s.l.) [4] gewiescht mat gastric Krankheet am Mënschen [5-10] assoziéiert. NHPH stellt eng Grupp vun streng wëssenschaftlech mä z'ënnerscheedde bakteriell Arten, haaptsächlech vun verschidden Déierenaarten fonnt, wéi H. felis VerfÜgung, H. salomonis VerfÜgung, H. bizzozeronii VerfÜgung, H. heilmannii VerfÜgung sensu stricto (s), H. cynogastricus VerfÜgung an H. baculiformis VerfÜgung zu Kazen an Muppen an H. sinn VerfÜgung zu Schwäin [5, 7, 10-15]. Dës microorganisms sinn duerch hir extrem fastidious Natur charakteriséiert, déi sou wäit duerchgesat huet an enger limitéierter Zuel vun kënschtlech isolates weltwäit sinn. VerfÜgung H. heilmannii VerfÜgung s.s. huet nëmmen kierzlech eng kënschtlech [16] isoléiert an cultured. Et gouf zu wëll Déifferdeng an zu Mënsch gastric biopsies fonnt, mee et Meeschter ass allgemeng am gastric mucosa vu Kazen an Hënn mat enger prevalence rangéiert vun 20 bis 100% [5-7, 10, 12] fonnt. Obwuel dës Bakterie huet mat chronescher aktiv gastritis zu Kazen a Muppe [12], seng pathogenic Bedeitung bleift Déift an ass wahrscheinlech Deformatioun-ofhängeg assoziéiert gouf. An Mënschen, H. heilmannii VerfÜgung s.s. gouf an 8-19% vun gastric biopsies mat histological Beweiser vun NHPH Wonn [5, 8, 10] fonnt. Krankheet mat dësem Bakterie am Mënsch huet mat gastritis, peptic oppent Krankheet an mucosa verbonne lymphoid Otemschwieregkeeten (Malz) lymphoma [5, 8, 10, 17, 18]. VerfÜgung puer Wonn Studien an experimentell Déier Modeller goufen standing zu verbonne ginn der pathogenesis vun H. pylori VerfÜgung Aids am Mënschen ermëttelen. Am Géigesaz, wéineg Informatiounen ass mat der pathogenesis vun H. heilmannii VerfÜgung s.s. sinn bewäerten Aids an de Mënschen. Dëst Bakterie ass fir bis zu 28 Méint am Mais propagated a konnt Malz lymphoma an der Mamm vun dësen Déieren [18] zu induce. Ee vun dëse Maus Experimenter, war homogenized gastric Otemschwieregkeeten als inoculum benotzt. Dëst beinhalt déi aner microorganisms zesummen inoculated sech mat H. heilmannii VerfÜgung s.s., wat d'Resultater Afloss kéinten, wéi huet virdru beschriwwen ginn [19]. Also, besser Abléck an der pathogenesis vum Mënsch gastric Krankheet mat H. heilmannii VerfÜgung s.s., experimentell Wonn Studie mat pure Kulture vun dëser microorganism essentiel verbonne ze kréien. Dofir, war d'Zil vun der presentéieren Etude Bakterie-Provider Interaktioune vun 9 H. heilmannii VerfÜgung s.s. ze studéieren analyséieren, isoléiert vun der gastric mucosa vu verschiddene Kazen. Déi Persounen gerbil Modell huet virdrun eng nëtzlech Déier Modell ginn ze studéieren Helicobacter VerfÜgung -related gastric wirklech zu de Mënschen a war dofir am Moment studéieren [19-21]. VerfÜgung Material a Methoden VerfÜgung bakteriell benotzt gewisen ze ginn néng analyséieren vun H. VerfÜgung analyséieren heilmannii VerfÜgung s sech aus der gastric mucosa vu verschiddene Kazen an designéierte ASB1 (= Typ Klischee, Deem 23983, [16]), ASB2, ASB3, ASB6, ASB7, ASB9, ASB11, ASB13 an ASB14 kritt. Bakterien sech kultivéiert op biphasic Brucella VerfÜgung Agar Placke (Oxoid, Basingstoke, UK) ergänzt mat 20% (v /v) An et Kallef serum (HyClone, Logan, féier, USA), 5 mg /L amphothericin B (Fungizone, Brystal -Myers Squibb, New York, USA), Skirrow (Oxoid, enthält 10 mg /L vancomycin, 5 mg /L trimethoprim lactate an 2500 U /L polymyxin B), Vitox Zousaz (Oxoid) an 0,05% HCl (pH 5). No incubation ënner microaerobic Konditiounen (85% N 2, 10% CO 2, 5% O 2; 37 ° C), waren d'Bakterien recoltéiert a war d'Finale Konzentratioun op 7 × 10 ugepasst 8 liewensfäeg Bakterien /mL, wéi sech déi zu engem Neubauer Zielen Chambre Zielen VerfÜgung Déieren, Wunnen an experimentell Prozedur VerfÜgung Spezifësch-pathogen-gratis (SPF) weiblech fënnef-Woch-al Persounen gerbils (loosen:. MON (Tüm), n VerfÜgung = 48) sech vum Charles River Laboratoiren (Lille, Frankräich) kritt. D'Déiere waren am filter erop Käfeg (1500 cm 2) op autoclaved Holz shavings an autoclaved Hee waren. Si waren ad libitum eng autoclaved kommerziell Ernährung (TEKLAD 2018S, 18% FAQ wouvun; Harlan, Holland) z'iesse an autoclaved Waasser. Fir jiddereng vun den 9 H. heilmannii VerfÜgung s.s. analyséieren getest, 5 Déieren intragastrically 3 Mol mat 300 μL vun engem bakteriell Ophiewe bei 2 Deeg nolauschterer inoculated goufen. Dräi Déieren sech mat Brucella VerfÜgung läschen (pH 5, Oxoid) inoculated an als negativ kontrolléiert. Inoculation war ënner dowéinst isoflurane Anästhesie (2,5%) gesuergt, mat engem Ball-harmlos gavage Effekt. Um 9 Wochen no der éischter inoculation, goufen d'Déieren vun cervical dislocation ënner déif isoflurane Anästhesie (5%) euthanized. De Mo an d'Ausléiser vun all gerbil sech resected an Echantillon waren fir histopathological Examen a grouss real-Zäit (RT) -PCR Analyse geholl. VerfÜgung d'zu VIVO Experimenter déi ethneschen Comité vun der Fakultéit vun Veterinary Medezin, Gent ofgeseent gouf Universitéit, Belsch (CE 2011/090). VerfÜgung Histopathology an immunohistochemistry VerfÜgung a longitudinal Rubrik, aus dem Enn vun der forestomach Start an mat der antrum an der fundus vun de Mo an Deel vun der Ausléiser, war laanscht de Schnëtt grouss curvature an déi Norm Methoden zu 10% phosphate gefiermt formalin, Filteren fix a fir Liicht microscopy zu paraffin Ënnerbewosstsinn. Dräi hannereneen Rubriken vun 5 μm sech gelooss. No deparaffinization an hydration, Hëtzt-entschlof antigen retrieval war zu citrate Prellbock (pH 6) gesuergt. endogenous peroxidase Aktivitéit an Net-spezifesch Reaktioune ze blockéieren, sech drënner mat 3% H 2O 2 zu methanol (5 min) an 30% Geess serum (30 min) incubated, bzw.. Déi éischt Sektioun war mat haematoxylin /eosin (H & E) Kierchefënster d'Intensitéit vun der gastritis zu stoung laut der Aktualiséiert Sydney System [22] awer mat e puer Ännerungen, wéi virdru beschriwwen [19]. (; Menarini kinnt, Zaventem, Belsch 1/25) iwwert déi zweet Kapitel, war epithelial Zell Prolifératioun vun immunohistochemical staining mat enger Maus monoclonal anti-Ki67 antibody alles. , Souwuel zu antrum an fundus: Ki67-positiv epithelial Zellen sech an 5 per Zoufall ausgewielt High Power Fields um Niveau vun der gastric hëlt (400 × Vergréisserung) gezielt. Den Duerchschnëtt vun de positiven Zell Grof war fir all experimentell Grupp an zwee Mo. Regiounen berechent VerfÜgung Parietal Zellen op d'drëtt Sektioun vun immunohistochemical staining fir de Waasserstoff KaliumiodidPëlle ATPase mat enger Maus monoclonal antibody (1/200 identifizéiert goufen;. Abcam Ltd, Cambridge, UK). Incubation mat Primärschoul antibodies ausernee géint Ki67 a Waasserstoff KaliumiodidPëlle ATPase war vun incubation mat engem HRP-Label Secondaire antibody (Stellt Link Mouse K4007, DakoCytomation, Heverlee, Belsch) fir visualization gefollegt. VerfÜgung DNA erauszéien a quantification vun heilmannii H. colonizing
s am Mo an Ausléiser VerfÜgung Vun all gerbil Echantillon vun der fundus an der antrum vun de Mo a vun der Ausléiser sech geholl. Ray Echantillon waren an 1 ml RNS spéit (Ambion, Austin, TE, USA) bei -70 ° C bis RNA- an DNA-Reduktioun gespäichert. Ray Echantillon waren homogenized (MagNALyser, Roche, Mannheim, Däitschland) an RNS an DNA huet mat TriReagent RT (cuisine Research Center INC, Cincinnati, USA) getrennt no der Taktik vum Produzent. D'Zuel vun colonizing H. heilmannii VerfÜgung s.s. pro mg gastric Otemschwieregkeeten an der DNA Echantillon alles war en H. heilmannii VerfÜgung s.s.-spezifesch grouss RT-Hinnen alleguer benotzt. Fir Generatioun vun der Norm, Deel vun der Gentherapie Stärekoup VerfÜgung ureAB (1224 BP) vum H. heilmannii VerfÜgung s.s. ASB1 war mat primers U430F an U1735R Implikatioune verstärkt, wéi virdru beschriwwen [6]. D'Norm huet aus 10-fantastesch-dilutions um 10 ab 8 Hinnen alleguer amplicons fir all 10 μL vun Reaktioun Mëschung. One μL vun ofgebaut DNA Skelett war vun engem 10 μL Reaktioun Mëschung suspendéiert aus 0,25 μL souwuel primers bannent de 1224 BP ofgesprengt etabléiert, eng 212 BP Hinnen alleguer Produit (Sënn primer, nozeginn: HH_SP1: 5'-CTT TCT CCT GGT GAA GTG ATT CTC-3 ", antisense primer: HH_RVQ: 5'-GCT GTA CCA Série GCA ATG tcc AAG-3", annealing Temperaturen 58 ° C), 3,5 μL HPLC Waasser a 5 μL SensiMix ™ SYBR Nee-Rox (Bioline Reagents Ltd , UK). Béid Standarden an Echantillon waren am zweete op engem CFX96 ™ RT-Hinnen alleguer System mat engem C1000 sideresch LS (Bio-Rad, Hercules CA, USA) lafen. D'Bio-Rad CFX Manager (Versioun 1.6) Software war Berechnunge vun loung Monaco (Kosovo) -values ​​a vermëschen rop Analyse vun Implikatioune DNA benotzt. D'Moyenne Wäerter vun der Retard huet fir quantification vun H. heilmannii VerfÜgung s.s. benotzt DNA an der Otemschwieregkeeten Echantillon. VerfÜgung RNS Virbereedung an der Gentherapie Ausdrock VerfÜgung Total RNS, aus der Otemschwieregkeeten Echantillonen, gouf mat de Kit RNeasy Mini sidd (QIAGEN, Hilden, Däitschland), no der Taktik vum Produzent. Rengheet vum RNS gouf duerch Miessunge d'Verhältnis vun absorbance bei 260 nm a 280 nm mat NanoDrop bewisen, déi an all Fäll ongeféier 2. D'RNS Konzentratioun an all Prouf gouf ugepasst fir 1 μg /μL an cDNA direkt no RNS Offäll Wierderbuch war mat iScript ™ cDNA Synthes Kit (Bio-Rad). Aliquots vun cDNA (1/5 dilution) huet fir Moossen Gentherapie Ausdrock wéi e Skelett fir grouss RT-Hinnen alleguer benotzt. D'mRNA Ausdrock Niveau vun verschiddenen cytokines (IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17, IFN-γ an TNF-α), gastrin an H + /K + ATPase goufen zum laachen. D'housekeeping Genen GAPDH, β-actin VerfÜgung an HPRT VerfÜgung als Referenz Genen agebaut goufen. Primer Message sinn an Table 1 [23-28] gewisen. Fir all Zil- Genen an Referenzmaterial Genen, goufen d'primer efficiencies tëscht 1,9 an 2.1. Reaktioune waren zu 10 μL Bänn mat 1 μL cDNA, 0,05 μL souwuel primers, 3,9 μL HPLC Waasser a 5 μL SensiMix ™ SYBR Nee-Rox gesuergt. bei 95 ° C fir 15 min denaturation, gefollegt vun amplification Zykle bei 95 ° C fir 20: D'experimentell Protokoll fir Hinnen alleguer Reaktioun (40) zouféieren war mat engem C1000 sideresch LS (Bio-Rad) op engem CFX96 ™ RT-Hinnen alleguer System gesuergt ass, annealing bei 60 ° C fir 30 s an Extensioun bei 73 ° C fir 30 ass. Kontroll Reaktioune ouni de Géigendeel transcriptase Schrëtt ëmgesat ze DNA kontaminéierte vun der RNS Echantillon auszeschléissen. Nee-Skelett-Kontroll Reaktioun Dampgemësch sech och an all Echantillon waren am zweete Course. Der CT-Wäerter waren normalized dem geometreschen menge vun der CT-Wäerter aus der 3 Lokalzäit Genen, no deem normalized mRNA Niveauen sech mat der 2 berechent -ΔΔCt Method [29] .Table 1 Primer opzefëllen.
Primers
liichtkraaftarm (5 '→ 3')
Cytokines VerfÜgung IL-1β FW23 VerfÜgung GGC AGG TGG Stoffel CGC TCA TC VerfÜgung IL- 1β RV23 VerfÜgung CAC CTT GGA Eenzelzäitfueren GAC TTC TA VerfÜgung IL-5 kascht VerfÜgung Agées GAA GTG TGG CGA GGA Série ACG VerfÜgung IL-5 RV VerfÜgung ACA GGG CAA tcc CTT CAT CGG VerfÜgung IL-6 kascht VerfÜgung CAA AGC CAG AGC CAT TCA Série VerfÜgung IL-6 RV VerfÜgung GCC ATT CCG TCT GTG ACT CCA GTT TCT CC VerfÜgung IL-10 kascht VerfÜgung GGT TGC CAA GCC TTA TCA GA VerfÜgung IL-10 RV VerfÜgung GCT GCA TTC Name GGG TCT TC VerfÜgung IL-12p40 kascht VerfÜgung GAC ACG zu Enn tcc zu Enn AAA GT VerfÜgung IL-12p40 RV VerfÜgung CAT TCT GGG ACT GGA CCC TA VerfÜgung IL-17 FW23 VerfÜgung AGC tcc Agées GGC CCT CGG AC VerfÜgung IL-17 RV23 VerfÜgung AGG zu Enn AGG ATC TCT TGC TG VerfÜgung IFN-γ FW24 VerfÜgung CCA Name ACG cta CAC ACT GCA TC VerfÜgung IFN-γ RV24 VerfÜgung GAA GTA GAA Agées GAC AAT CTG G VerfÜgung TNF-α FW23 VerfÜgung GCT CCC CCA GAA GTC GGC G VerfÜgung TNF-α RV23 VerfÜgung CTT GGT GGT TGG GTA CGA CA VerfÜgung Gastrin VerfÜgung Gastrin FW25 VerfÜgung GCC CTG GAA CCG CAA CA VerfÜgung Gastrin RV25 VerfÜgung TTC TTG GAC AGG TCT GCT TTG AA VerfÜgung H + /K + ATPase ( parietal Zellen) VerfÜgung ATP4b kascht VerfÜgung GGG GGT AAC CTT Série zu Enn Name TG VerfÜgung ATP4b RV VerfÜgung AAG AAG TAC CTT tcc GAC GTG CAG VerfÜgung Referenz Genen VerfÜgung GAPDH FW26 VerfÜgung AAC GGC ACA GTC AAG GCT Série AAC G VerfÜgung GAPDH RV26 VerfÜgung CAA CAT ACT CGG CAC CGG CAT CG VerfÜgung HPRT FW27 VerfÜgung CTC ATG GAC Name TTA TGG ACA G VerfÜgung HPRT RV27 VerfÜgung AGC Name Série ATC ATC tcc zu Enn AAT VerfÜgung β-actin FW28 VerfÜgung CCA AGG CCA zu Enn GCG Agées Name C VerfÜgung β-actin RV28 VerfÜgung AGG GTA CAT GGT GGT GCC GCC Agées C VerfÜgung Primer Puer benotzt fir Moosse der mRNA Ausdrock Niveau vun IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17, IFN-γ, TNF-α, gastrin an H + /K + ATPase sinn gewisen. D'housekeeping Genen GAPDH, β-actin VerfÜgung an HPRT VerfÜgung als Referenz Genen agebaut goufen. Statistique Analyse VerfÜgung Zukunft an Varianz homogeneity vun Donnéeën VerfÜgung huet andems Shapiro-Wilk Normalitéit Test an Levene d'Test fir homogeneity analyséiert vun variances. Gastritis ragerullt, Kolonisatioun Muecht an ATPase an gastrin Gentherapie Ausdrock sech tëscht verschiddene Krankheet Gruppen a Kontrollen Verglach Kruskall-Wallis Analyse benotzt, gefollegt vun engem Mann-Whitney U VerfÜgung Test. Cytokine Ausdrock an d'Zuel vun Ki67-positiv Zellen sech duerch Analyse vun Varianz mat engem Post hoc Test Bonferroni analyséiert. Differenzen sech statistesch relevant als um p VerfÜgung ≤ 0,05. SPSS Statistics 21 Software (IBM) war fir all Analysë benotzt. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Wonn mat virulent H. heilmannii VerfÜgung s.s. analyséieren induces eng antrum-dominant chronescher aktiv gastritis VerfÜgung De Mo vun all Kontroll Déieren eng normal histomorphology (Dorënner 1a) gewisen. Inflammation am Mo vun gerbils Krankheet mat H. heilmannii VerfÜgung s.s. analyséieren ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 an ASB14 vun enger chronescher aktiv gastritis mat Équipe vun Rezepter Bodrum an der lamina propria an submucosa vun der antrum vun de Mo. (Dorënner 1b) markéiert huet. D'mucosal deck gouf liicht geklommen a just puer neutrophils goufen erwëscht. Am Géigesaz, H. heilmannii VerfÜgung s.s. analyséieren ASB7 an ASB9 net explizit antral inflammation an nëmmen e mëll Erhéijung vun Rezepter Zell Zuel war an der lamina propria vun der antrum vun de Mo. (Dorënner 1c) observéiert Ursaach hat. An all H. heilmannii VerfÜgung s.s.-Krankheet gerbils, nëmme limitéiert Unzeeche vun inflammation am fundus vun de Mo. fonnt goufen (Zousätzleche Fichier 1). D'antral inflammation Fändelen vun all eenzel Déier ginn an Dorënner 2D gewisen. A statistesch groussen Ënnerscheed tëscht inflammation Fändelen fir mat ASB1 inoculated gerbils, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 an ASB14 Verglach mat der Kontroll Grupp war hien (Mann-Whitney U VerfÜgung Test, p VerfÜgung &Si besteet; 0,05, Dorënner 2D). Figur 1 H & E staining vun der antrum vun engem gerbil Moo. Normal Histologie vun der antrum vun enger Geldstrof-inoculated negativ Kontroll Déier (en). Ausdrécklechen Rezepter einfach vun der lamina propria an der submucosa mat der Opstellung vun lymphoid follicles (Feiler) an der antrum vun engem gerbil inoculated mat H. heilmannii VerfÜgung s.s. ASB1 (b). Mëll ze Rezepter einfach (Feiler) vun der lamina propria an der antrum vun engem gerbil inoculated mat H. heilmannii VerfÜgung s.s. feelen ASB7 (c). Bar = 30 μm. VerfÜgung Dorënner 2 Kolonisatioun Kapazitéit vun H. heilmannii s.s. analyséieren an gastric inflammation Spillstand no experimentellen Wonn. Kolonisatioun Muecht ass wéi log10 Wäerter vun H. heilmannii VerfÜgung s.s. dës Bakterien pro mg Otemschwieregkeeten, mat grouss RT-Hinnen alleguer an der fundus (e) an der antrum (c) vun de Mo an der Ausléiser fonnt (b). Resultater ënnert erkennen Limit (Diskussioun 2,39 Bakterien pro mg Otemschwieregkeeten) waren Formatioun als 0 Antral inflammation (d) op enger Skala vun 0 bis 4 (0 geschoss huet: net einfach mat mononuclear an /oder polymorphonuclear Zellen; 1: mëll diffusen einfach mat mononuclear an /oder polymorphonuclear Zellen oder d'Präsenz vun enger klenger (50-200 Zellen) ugesammelt vun demagogesch Zellen; 2: moderéiert diffusen einfach mat mononuclear an /oder polymorphonuclear Zellen an /oder d'Präsenz vun 2-4 demagogesch Bodrum; 3: markéiert diffusen einfach mat mononuclear an /oder polymorphonuclear Zellen an /oder d'Präsenz vun op d'mannst fënnef demagogesch Bodrum; 4: diffusen einfach vun grouss Regioune mat grousser Bodrum vun mononuclear an /oder polymorphonuclear Zellen) .Individual gerbils sinn als Zuele ronderëm d'mengen duergestallt ( Linnen). Statistique Differenze Verglach Déieren ze kontrolléieren sinn duerch * uginn (Mann-Whitney U VerfÜgung Test, p VerfÜgung &Si besteet; 0,05) VerfÜgung Kolonisatioun Kapazitéit vun H. heilmannii VerfÜgung s.s.. analyséieren an de Mo a Ausléiser VerfÜgung Detektioun vum H. heilmannii VerfÜgung s.s. DNA mat grouss RT-Hinnen alleguer um 9 Wochen Post-Wonn réischt héich-Niveau Kolonisatioun vun ASB1, ASB2, ASB3 an ASB6 am Mo. (Dorënner 2a-c). Am Géigesaz, Kolonisatioun vun ASB7, ASB11, ASB13 an ASB14 war méi honnertprozenteg iwwerdeems ASB9 net am Mo. (Dorënner 2a-c) fonnt gouf. Am Allgemengen, war d'Kolonisatioun Muecht am fundus (Dorënner 2a) manner wéi am antrum (Dorënner 2C) fir all getest analyséieren an déi ënnescht Zuel vu Bakterien war an der Ausléiser (Dorënner 2b) fonnt. Ausserdeem war eng kloer Associatioun tëscht der Kolonisatioun Muecht vun der H. heilmannii VerfÜgung s.s. gesinn analyséieren an d'gastric inflammation Fändelen an der antrum vun de Mo. (Dorënner 2C-d). VerfÜgung Virulent H. heilmannii VerfÜgung s.s. analyséieren opgrond gastric antral epithelial Zell Prolifératioun VerfÜgung Resultater vun der gastric epithelial Zell Prolifératioun spillen an der antrum vun de Mo. sinn zu Dorënner 3C gewisen. (; 0,05, Dorënner 3A-b ANOVA, p VerfÜgung &Si besteet) signifikativ méi héich Zuelen vun Ki67-positiv epithelial Zellen proliferating waren an der antrum vun ASB1- an ASB6-Krankheet gerbils, am Verglach zu der Kontroll Grupp gesinn. Zuel vun Ki67-positiv Zellen sech am ASB2-, ASB3-, ASB11-, ASB13- an ASB14-Krankheet gerbils mëttelméisseg fräi, wann och net statistesch relevant. H. heilmannii VerfÜgung s.s. analyséieren ASB7 an ASB9 rauszesichen eng Erhéijung vun gastric epithelial Zell Prolifératioun féieren. (; 0,05 ANOVA, p VerfÜgung &Si besteet) an ausserdem, vill méi héich Zuelen vun proliferating epithelial Zellen sech am antrum vun ASB1-, ASB2-, an ASB6-Krankheet gerbils, am Verglach zu gerbils Krankheet mat ASB7 an ASB9 bewisen. Figur 3 Gastric antral epithelial Zell Prolifératioun. Ki67 staining vun der antrum vun engem gerbil inoculated mat H. heilmannii VerfÜgung s.s. ASB1 (b) enger héijer Zuel vu proliferating epithelial Zellen am Verglach zu enger Geldstrof-inoculated negativ Kontroll Déier weist (e). (: 400 × Vergréisserung) an der antrum vun der gerbil Mo. (c) den Taux vun epithelial Zell Prolifératioun war vun Zielen Ki67-positiv epithelial Zellen zu 5 per Zoufall ausgewielt High Power Fields um Niveau vun der gastric hëlt sech. Déi heeschen Zuelen vun Ki67-positiv Zellen sinn an all experimentell Grupp gewisen. Grouss Ënnerscheeder tëscht H. heilmannii VerfÜgung s.s.-inoculated a Kontroll Déieren sinn duerch * uginn (ANOVA, p VerfÜgung &Si besteet; 0,05). Differenze am Verglach mat ASB7 an ASB9 inoculated Gruppen agestallt ginn duerch + a # bzw. (ANOVA, p VerfÜgung &Si besteet; 0,05). VerfÜgung An der fundus vun all H. heilmannii VerfÜgung s-Krankheet gerbils, déi epithelial Zell Prolifératioun war Taux héich net vill am Verglach zu der Kontroll Déieren (Zousätzleche Fichier 2). VerfÜgung Cytokine Gentherapie Ausdrock am Mo. an Äntwert ze H. heilmannii VerfÜgung s Wonn VerfÜgung D'lokal Provider immun Äntwert Richtung H. heilmannii VerfÜgung s.s. Wonn gouf duerch Miessunge vun der mRNA Ausdrock Niveau vun IFN-γ, IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17 an TNF-α an de Mo vun der gerbils charakteriséiert. Resultater sinn an Table 2 an zu kengem 4.Table 2 statistique Analyse vun mRNA Ausdrock Niveauen gewisen.
Antrum
Fundus
IL-1β
IFN-γ
VerfÜgung H + /K + ATPase
Gastrin

Mëttler CT-Ctrefa
p-valueb
Mëttler CT-Ctref
p-Wäert
Mëttler CT-Ctref
p-Wäert
Mëttler CT-Ctref
p-Wäert
ASB1 VerfÜgung 6,92 ± 0,29 * VerfÜgung 0,031 VerfÜgung 6,87 ± 0,60 VerfÜgung 1.000 VerfÜgung 3,70 ± 2,11 * VerfÜgung 0,050 VerfÜgung 7,20 ± 1,68 VerfÜgung 0,101
ASB2 VerfÜgung 7,48 ± 1,42 VerfÜgung 0,231 VerfÜgung 8,15 ± 1,26 VerfÜgung 1.000 VerfÜgung 2,42 ± 5,01 VerfÜgung 0,513 VerfÜgung 5,94 ± 2.49 * VerfÜgung 0,050 VerfÜgung ASB3
6,55 ± 0,80 * VerfÜgung 0,008 VerfÜgung 7,54 ± 0,37 VerfÜgung 1.000 VerfÜgung 3,49 ± 2,28 * VerfÜgung 0,050 VerfÜgung 7,71 ± 1,17 VerfÜgung 0,101 VerfÜgung ASB6 VerfÜgung 6,12 ± 0,67 * VerfÜgung 0,001 VerfÜgung 7,99 ± 0,90 VerfÜgung 1.000 VerfÜgung 2,23 ± 1,99 * VerfÜgung 0,050 VerfÜgung 5,33 ± 2,39 * VerfÜgung 0,025 VerfÜgung ASB7 VerfÜgung 10,25 ± 0,37 VerfÜgung 1.000 VerfÜgung 7,98 ± 0,52 VerfÜgung 1.000 VerfÜgung 0,45 ± 2,51 VerfÜgung 0,724 VerfÜgung 7,12 ± 1,54 VerfÜgung 0,180 VerfÜgung ASB9 VerfÜgung 9,03 ± 2,54 VerfÜgung 1.000 VerfÜgung 8,55 ± 0,71 VerfÜgung 1.000 VerfÜgung 0,79 ± 0,03 VerfÜgung 0,564 VerfÜgung 8,11 ± 1,58 VerfÜgung 1.000 VerfÜgung ASB11 VerfÜgung 7,47 ± 0,15 VerfÜgung 0,499 VerfÜgung 10.45 ± 0,95 * VerfÜgung 0,004 VerfÜgung 1.32 ± 1,45 VerfÜgung 0,248 VerfÜgung 7,67 ± 1,25 VerfÜgung 0,289 VerfÜgung ASB13 VerfÜgung 7,72 ± 1,17 VerfÜgung 0,523 VerfÜgung 9,54 ± 1,55 * VerfÜgung 0,044 VerfÜgung 3,80 ± VerfÜgung 0,34 0.083 VerfÜgung 8,10 ± 0,93 VerfÜgung 0,456 VerfÜgung ASB14 VerfÜgung 7,07 ± 0,52 VerfÜgung 0,054 VerfÜgung 8,51 ± 0,97 VerfÜgung 1.000 VerfÜgung 3,81 ± 3,11 VerfÜgung 0,127
7,77 ± 2,96 VerfÜgung 0,881 VerfÜgung Negativ Control VerfÜgung 9,71 ± 1,13 VerfÜgung - VerfÜgung 7,08 ± 0,65 VerfÜgung - VerfÜgung 0,15 ± 1,82 VerfÜgung - VerfÜgung 8,70 ± 0,62 VerfÜgung - VerfÜgung ass dës statistesch Analyse vun IL-1β, IFN-γ an H + /K + ATPase mRNA Ausdrock vun der antrum an gastrin mRNA Ausdrock vun der fundus vun der gerbil Mo. um 9 Wochen no experimentellen Wonn. Cytokine Ausdrock war vun Analyse vun Varianz mat engem Bonferroni Post hoc Test analyséiert. H + /K + ATPase an gastrin Gentherapie Ausdrock sech tëscht verschiddene Krankheet Gruppen a Kontrollen Verglach Kruskall-Wallis Analyse benotzt, gefollegt vun engem Mann-Whitney U VerfÜgung Test. Differenzen sech statistesch relevant als um p VerfÜgung ≤ 0,05. SPSS Statistics 21 Software (IBM) war fir all Analysë benotzt VerfÜgung e Mëttler CT-Ctref:. Fir all experimentell Grupp, déi menge vun der normalized CT-Wäerter ± normale deviation gewise ginn VerfÜgung BP VerfÜgung -value. : déi sinn genau p VerfÜgung -values ​​entscheet VerfÜgung * statistesch Differenze par rapport zu der uninfected Kontroll Grupp (p VerfÜgung ≤ 0,05) 4 mRNA Ausdrock Niveau vun cytokines IL-1β an Dorënner VerfÜgung IFN-.. γ an der antrum vun de Moo. Cytokine mRNA Ausdrock Niveauen an der fundus an antrum vun de Mo. sech duerch grouss RT-Hinnen alleguer iwwerpréift. Ausdrock Niveau vun IL-1β (en) an IFN-γ (b) an der antrum sinn gewisen. Date sinn wéi déi fantastesch Ännerung vun der Gentherapie Ausdrock normalized fir 3 Lokalzäit Genen a relativ zu den negativen Kontroll Grupp presentéiert, déi dorunner ass den 1. Daten sinn wéi heescht + Standard deviation gewisen. Differenze vun Ausdrock Niveau tëscht inoculated Gruppen an negativ Kontroll Grupp sinn duerch * p VerfÜgung &Si besteet uginn; 0,05 (ANOVA). VerfÜgung Déi pro-demagogesch cytokine IL-1β ass eng mächtegst inhibitor vun gastric Seier secretion [30] a spillt eng Roll an de Fouss dohinner Phase vun inflammation [31]. Ausdrock vun IL-1β war mat H. am antrum vun de Mo. vun gerbils Krankheet an-reegelen heilmannii VerfÜgung s.s. ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 an ASB14, am Verglach zu den negativen Kontroll Déieren (Dorënner 4A). Fir gerbils mat ASB7 an ASB9 inoculated, keng weider-Regulatioun vun IL-1β gesi war. VerfÜgung D'Th1 cytokine IFN-γ, eng Ënnerschrëft Bewaacher vun der Th1-Polarisatioun Äntwert [24, 32], Schatzkummer engem ofgeholl Ausdrock vun der antrum vun gerbils mat ASB11 an ASB13 (Dorënner 4B) Krankheet, am Verglach zu der Kontroll Déieren. VerfÜgung keng Differenze vun Ausdrock tëscht Krankheet a Geldstrof-inoculated gerbils hätt fir IL-5, IL-6, IL-10, observéiert ginn IL-12p40, IL-17 an TNF-α. VerfÜgung Parietal Zell H + /K + ATPase mRNA ass Ausdrock an Äntwert-verwandelt reglementéiert mat H. zu Kolonisatioun heilmannii VerfÜgung s VerfÜgung Nee kloer Verloscht vun parietal Zellen kéint vun immunohistochemical staining an der fundus an der antrum vun den H. visualized heilmannii VerfÜgung s-Krankheet gerbils Verglach zu der uninfected Kontrollen (Donnéeën net gewisen). Allerdéngs, awer grouss RT-Hinnen alleguer e kloer Ofsenkung vun den Ausdrock vun gastric H + /K + ATPase an der antrum vun der Krankheet gerbils mat ASB1, ASB3 an ASB6 (Dorënner 5 an Table 2). Verglach zu der Kontroll Déieren mat Niveauen mRNA Ausdrock gesaat 1.0, déi mengen relativ Ausdrock war 0,09 ± 2,11 fir ASB1-, 0.10 ± 2,28 fir ASB3- an 0,24 ± 1,99 fir ASB6-Krankheet gerbils, bzw.. Nee bedeitend Ännerung am Ausdrock war an der fundus vun der heilmannii H. gesinn VerfÜgung s.s.-Krankheet gerbils. Figur 5 mRNA Ausdrock Niveau vun H + /K + ATPase an der antrum vun de Moo. Waasserstoff KaliumiodidPëlle ATPase mRNA Ausdrock Niveau vun de Mo. war déi grouss RT-Hinnen alleguer iwwerpréift. H + /K + ATPase mRNA Ausdrock Niveau vun der antrum ass gewisen. Date sinn wéi déi fantastesch Ännerung vun der Gentherapie Ausdrock normalized fir 3 Lokalzäit Genen a relativ zu den negativen Kontroll Grupp presentéiert, déi dorunner ass den 1. Daten sinn wéi heescht + Standard deviation gewisen. Differenze vun Ausdrock Niveau tëscht inoculated Gruppen an negativ Kontroll Grupp vun * p ugewise sinn VerfÜgung ≤ 0,05 (Mann-Whitney U VerfÜgung Test). VerfÜgung Virulent H. heilmannii VerfÜgung s.s. analyséieren induce fräi gastrin Ausdrock vun der fundus VerfÜgung D'peptide Hormon gastrin der secretion vun gastric Seier vun parietal Zellen koum. A Stéierung vun hiren Ausdrock vläicht ze hypergastrinemia Féierung. Den Ausdrock vun gastrin war héich erop-reegelen am fundus vun gerbils mat ASB2 an ASB6 um 9 Wochen Post-Krankheet (Dorënner 6 a Table 2) infizéiert. Am Verglach zu Kontroll Déieren, war d'mengen relativ Ausdrock 6,79 ± 2.49 fir ASB2- an 10.35 ± 2,39 fir ASB6-Krankheet gerbils. An der antrum vun de Mo, keng weider-Regulatioun vun gastrin Ausdrock ass fonnt. Figur 6 mRNA Ausdrock Niveau vun gastrin an der fundus vun de Moo. Gastrin mRNA Ausdrock Niveau vun de Mo. war déi grouss RT-Hinnen alleguer iwwerpréift. Dës ass den Ausdrock Niveau vun der fundus. Date sinn wéi déi fantastesch Ännerung vun der Gentherapie Ausdrock normalized fir 3 Lokalzäit Genen a relativ zu den negativen Kontroll Grupp presentéiert, déi dorunner ass den 1. Daten sinn wéi heescht + Standard deviation gewisen. Differenze vun Ausdrock Niveau tëscht inoculated Gruppen an negativ Kontroll Grupp sinn duerch * p VerfÜgung ≤ 0,05 (Mann-Whitney U VerfÜgung Test). VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung Um 9 Wochen Post inoculation, enger chronescher aktiv gastritis uginn an der antrum vun de Mo. war zu gerbils experimentally Krankheet mat 7 vun 9 H. heilmannii observéiert VerfÜgung s Dës Etude getest analyséieren (ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 an ASB14). D'lamina propria an submucosa sech Rei mat lymphocytes communal, an d'Équipe vun lymphoid follicles doraus. Den H. heilmannii VerfÜgung s.s. analyséieren sech haaptsächlech an de antrum an zu enger klenger Mooss vun der fundus an den Ausléiser fonnt. Am Mënsch mat NHPH Krankheet, Kolonisatioun an inflammation geschéien och haaptsächlech am antrum vun de Mo [5, 33-35]. Dëst dé Persounen gerbils en passenden Modell sinn ze studéieren H. heilmannii VerfÜgung s.s. All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• Nepgen Haaptrei Analyse vun Helicobacter pylori analyséieren verbonne mat gastric ulceration an gastric Kriibs
• Antimicrobial Aktivitéit, Fouss toxicity an cytoprotective Effet vun Crassocephalum vitellinum (. Benth) S. Moore Extrait vun engem Grenzwäerter Ethanol-HCl gastric oppent Modell