Diverzitás baktérium-gazda kölcsönhatások fajok Helicobacter heilmannii szigorú értelemben vett

Diverzitás baktérium-gazda kölcsönhatások fajok Helicobacter heilmannii katalógusa szigorú értelemben vett katalógusa Abstract katalógusa Helicobacter (H.) heilmannii katalógusa szigorú értelemben vett (ss) egy zoonózis baktérium, amely természetes módon szaporodik a gyomorban a kutyák és macskák . Emberben ez mikroorganizmus kapcsolatba hozták a gyomorhurut, gyomorfekély-betegség és Nyálkahártyához kapcsolódó limfoid szövet (MALT) limfóma. Kevés információ áll rendelkezésre a patogenezisében H. heilmannii katalógusa S. S. fertőzések emberben és nem ismert, hogy különbségek virulencia belül létezik ez a faj. Ezért egy mongol futóegér modellt alkalmaztunk, hogy tanulmányozza a baktérium-gazda kölcsönhatások 9 H. heilmannii katalógusa S. S. törzsek. Kifejtett kolonizációs képességét a törzsek, az intenzitást a gyomorhurut és a génexpresszió különböző gyulladásos citokinek a gyomorban meghatároztuk a 9 héttel a kísérleti fertőzés. Az indukció egy antrum-domináns krónikus aktív gastritis képződése limfocitás aggregátumok mutatták 7 törzs. Magas szintű antrális kolonizáció volt látható 4 törzsek, míg a kolonizáció 4 Egyéb törzsek korlátozottabb és egy törzs nem volt kimutatható a gyomorban a 9 héttel a fertőzés után. Minden törzs indukáló krónikus aktív gastritis okozott egy up-regulációja a pro-gyulladásos citokin az IL-1β a antrum. Egy csökkentett antrális expresszióját H + /K + ATP-áz volt látható a gyomorban való fertőzés után 3 erősen kolonizáló törzsek és 2 nagyon kolonizáló törzsek okozta megnövekedett gasztrin kifejezést a fundus. Az egyik H. heilmannii
S. S.-fertőzött csoportban, az IFN-γ expresszió volt, akár szabályozott. Ez a tanulmány azt mutatja sokszínűség baktérium-gazda kölcsönhatások fajok H. heilmannii katalógusa S. S. és hogy a patogenezisében gyomor fertőzések ez mikroorganizmus nem azonos a H. pylori
fertőzés.
Bevezetés
Helicobacter (H.) pylori
a legelterjedtebb Helicobacter
fajok kolonizáló gyomornyálkahártya az emberek és kapcsolatba hozták a gyomorhurut, gyomorfekély-betegség és gyomorrák [1-3]. Emellett a H. pylori katalógusa, más morfológiailag különböző nem-H. pylori Helicobacter
(NHPh) fajok, más néven H. heilmannii
sensu lato (S. L.) [4] összefüggésbe hoztak a gyomor betegség emberben [5-10]. NHPh csoportját képviseli szorosan kapcsolódó, de különálló baktériumfaj, főképp a különböző állatfajok, például a H. felis katalógusa, H. salomonis katalógusa, H. bizzozeronii katalógusa, H. heilmannii katalógusa szigorú értelemben vett (ss), H. cynogastricus
és H. baculiformis
macskák és kutyák és H. suis
sertésekben [5, 7, 10-15]. Ezek a mikroorganizmusok jellemző, hogy rendkívül válogatós természetét, amely eddig eredményezett korlátozott számú in vitro izolátumok világszerte elérhető.
H. heilmannii katalógusa S. S. csak nemrég izolálták és in vitro tenyésztjük. [16] Ez kimutatható volt a vad macska és a humán gyomor biopsziák, de leggyakrabban megtalálható a gyomornyálkahártya macskák és kutyák egy előfordulás, amely 20 és 100% [5-7, 10, 12]. Bár ez a baktérium összefüggésbe hozták a krónikus aktív gastritis a macskák és kutyák [12], a patogén jelentősége marad rejtélyes és valószínűleg a törzs-függő. Az emberben, H. heilmannii
S. S. kimutatható volt a 8-19% -a gyomor biopsziák hisztológiai bizonyítékok NHPh fertőzés [5, 8, 10]. Fertőzés ez a baktérium emberekben kapcsolatba hozták gyomorhurut, gyomorfekély-betegség és Nyálkahártyához kapcsolódó limfoid szövet (MALT) limfóma [5, 8, 10, 17, 18].
Számos fertőzés a vizsgálatokból kísérleti állatmodellekben végeztek vizsgálja patogenezisében H. pylori katalógusa fertőzések emberben. Ezzel szemben a kevés információ áll rendelkezésünkre foglalkozó patogenezisében H. heilmannii katalógusa S. S. fertőzések emberben. Ez a baktérium úgy lett szaporítva egerekben, legfeljebb 28 hónap, és képes volt indukálni MALT lymphoma a gyomor ezen állatok [18]. Azonban ebben az egér kísérletben homogenizált gyomor szövetet használtunk inokulumként. Ez azt jelenti, hogy más mikroorganizmusok oltottunk együtt H. heilmannii
S. S., amelyek befolyásolhatják az eredményt, mivel korábban már leírták [19]. Így hogy jobb betekintést patogenezisében emberi gyomor kapcsolatos betegség H. heilmannii
S. S., kísérleti fertőzés vizsgálatokat tiszta tenyészeteket az e mikroorganizmus elengedhetetlen. Ezért a cél a jelen tanulmány volt, hogy tanulmányozza a baktérium-gazdasejt kölcsönhatást 9 H. heilmannii
S. S. törzsek, izolált gyomornyálkahártya különböző macskák. A mongol egérmodell Korábban kimutatták, hogy hasznos állatmodell tanulmányozására Helicobacter
val kapcsolatos gyomor- patológia emberekben és ezért használhatók a jelen tanulmányban [19-21].
Anyag és módszer katalógusa Bakteriális törzsek katalógusa kilenc törzsek H. heilmannii katalógusa ss kaptuk a gyomor nyálkahártya különböző macskák és a kijelölt ASB1 (= típusú törzset, a DSM 23983, [16]), ASB2, ASB3, ASB6, ASB7, ASB9, ASB11, ASB13 és ASB14. A baktériumokat tenyésztettük kétfázisú Brucella
agar lemezeken (Oxoid, Basingstoke, UK), kiegészítve 20% (v /v) magzati borjúszérumot (Hyclone, Logan, UT, USA), 5 mg /l amfotericin B (Fungizone, Brystal -Myers Squibb, New York, amerikai Egyesült Államok), Skirrow (Oxoid, 10 mg /l vankomicint, 5 mg /l trimetoprim laktát és 2500 U /L polimixin B), Vitox Supplement (Oxoid) és 0,05% HCI-ot (pH = 5). Az inkubálás után alatt mikroaerob körülmények között (85% N 2, 10% CO 2, 5% O 2; 37 ° C), a baktériumokat elkülönítettük, és a végső koncentráció-ját 7 × 10 8 életképes baktérium /ml, meghatározva számlálás Neubauer számláló kamra. katalógusa Animals, a lakhatás és a kísérleti eljárás katalógusa Egyedi-kórokozóktól mentes (SPF) női öt hetes mongol futóegér (Cri: H (TUM), N
= 48) szereztünk be a Charles River Laboratories (Lille, Franciaország). Az állatokat a szűrő felső ketrecben (1500 cm 2) autoklávozott faforgács és autoklávban széna. Ők ad libitum egy autoklávozott kereskedelmi étrend (Teklád 2018S, tartalmazó 18% fehérjét; Harlan, The Netherlands) és autoklávozott vízzel. Az egyes 9 H. heilmannii
S. S. vizsgált törzs, 5 állatot intragasztrikusan oltottunk 3-szor 2 nap intervallum 300 ul egy bakteriális szuszpenzió. Három állatot beoltottunk Brucella
húsleves (pH = 5, Oxoid), és szolgált negatív kontrollként. Beoltása mellett végeztük rövid izoflurán anesztézia (2,5%), golyós végű gyomorszondatűvel. A 9 héttel az első beoltás az állatokat leöltük nyaki diszlokáció alatt mély izoflurán anesztézia (5%). A gyomor és a nyombél minden futóegér kimetszettük és mintákat venni a kórszövettani vizsgálat és kvantitatív, valós idejű (RT) PCR-analízis.
Az in vivo kísérlet hagyta jóvá Etikai Bizottságának Faculty of Veterinary Medicine, Ghent University, Belgium (EC 2011/090).
hisztopatológiai és immunhisztokémiai
Egy hosszmetszete, kezdve a végén a előgyomor és tartalmazza a antrum és a fundus a gyomor és részben a duodenum, volt vágva mentén nagyobb görbület és a fix 10% -os, foszfáttal pufferolt formaiinban, feldolgozott szabványos módszerekkel, és paraffinba ágyaztuk a fénymikroszkóppal. Három egymást követő szakaszait 5 um vágták. Miután deparaffinization és hidratálás, hővel indukált antigén-visszanyerés végeztünk citrát-pufferrel (pH = 6). Az endogén peroxidáz blokkolása aktivitás és a nem-specifikus reakciók, metszeteket 3% -os H 2 O 2 metanolban (5 perc), és 30% -os kecske szérummal (30 perc), ill. Az első rész festettük hematoxilin /eozin (H &E), hogy pont az intenzitása a gyomorhurut szerint a frissített Sydney Rendszer [22], de bizonyos módosításokkal, a korábban leírtak szerint [19]. A második szakasz, hámsejtek proliferációját határoztuk meg immunhisztokémiai festést használva egér monoklonális anti-Ki67 antitest (1/25; Menarini Diagnostics, Zaventem, Belgium). Ki67 hámsejtek megszámoltuk 5 véletlenszerűen kiválasztott High Power Fields szintjén a gyomor gödrök (nagyítás: 400 ×), mind a antrumban és fundus. Az átlagos pozitív sejtszám számoltuk minden egyes kísérleti csoportban mindkét gyomor régiókban.
Parietális sejtekben azonosították, a harmadik szakasz immunhisztokémiai festéssel a hidrogén kálium ATP-áz egy egér monoklonális antitest (1/200; ABCAM Ltd, Cambridge, Egyesült Királyság). Inkubációs primer antitestekkel elleni Ki67 és hidrogén-kálium ATP-áz-t majd inkubáltuk egy HRP-vel jelzett szekunder antitesttel (Envision Hivatkozás Mouse K4007, DakoCytomation, Heverlee, Belgium) a megjelenítés.
DNS-extrakció és mennyiségi kolonizáló H. heilmannii
ss a gyomorban és a nyombélben
Minden egyes futóegér származó mintákat a fundus és az antrum a gyomor és a duodenum vettünk. A szövetmintákat tárolva 1 ml RNS később (Ambion, Austin, TE, USA) -70 ° C hőmérsékleten, amíg RNS és a DNS-extrakció. Szöveti mintákat homogenizáltunk (MagNALyser, Roche, Mannheim, Németország), és RNS-t és DNS-t elválasztottuk a TriReagent RT (Molecular Research Center Inc., Cincinnati, USA), a gyártó utasításai szerint. Száma gyarmatosító H. heilmannii katalógusa S. S. mg-onként gyomor szöveti meghatároztuk a DNS-mintákból egy H. heilmannii
S. S.-specifikus kvantitatív RT-PCR-rel. Generálására a standard, része a ureAB katalógusa géncsoport (1224 bp) a H. heilmannii
S. S. ASB1 amplifikáltuk primerek U430F és U1735R, a korábban leírtak szerint [6]. A szabványos állt 10-szeres-hígítások kezdődően 10 8 PCR amplikonok minden 10 ul reakcióelegyben. Egy ul kivont DNS templát szuszpendáljuk 10

• Genom szekvencia analízise Helicobacter pylori törzsek járó gyomorfekély és a gyomorrák
• Az antimikrobiális aktivitás, az akut toxicitás és sejtvédő hatását Crassocephalum vitellinum (Benth.) S. Moore kivonat egy patkány etanolos HCl gyomorfekély model