Įvairovė bakterija-šeimininko sąveikos rūšies viduje Helicobacter heilmannii sensu stricto

Įvairovė bakterija-šeimininko sąveikos rūšies viduje Helicobacter heilmannii
sensu stricto
Anotacija
Helicobacter (H.) heilmannii
sensu stricto (SS) yra zoonozių bakterija, kuri natūraliai kolonizuoja šunų ir kačių skrandį , Žmonėms šis mikroorganizmas buvo susijęs su gastritas, pepsinė opa ir gleivinė limfoidinis audinys (SALYKLAS) limfoma. Mažai informacijos apie H. heilmannii
S.S. patogenezėje infekcinę ligą žmonėms ir kol kas nežinoma, ar egzistuoja skirtumai virulentiškumo per šios rūšies. Todėl, mongolų Smiltpelės modelis buvo naudojamas studijuoti bakterija-šeimininko sąveiką 9 H. heilmannii
S.S. padermes. Kolonizacija gebėjimas kamienai, gastrito ir genų ekspresijos įvairių uždegiminių citokinų skrandžio intensyvumas buvo nustatomas 9 savaites po eksperimentinio infekcijos. Sukūrus Ertmė dominuojantis lėtinį aktyvų gastritas su formavimo Limfocitinio agregatų indukcija buvo parodyta 7 kamienų. Aukšto lygio antralinių kolonizacija buvo pastebėtas 4 kamienų, o kolonizacija 4 kitų padermių buvo siauresnė ir vienas štamas nebuvo aptikta, 9 savaites po infekcijos skrandį. Visi štamai sukelianti lėtinį aktyvų gastritas sukėlė UP-reguliavimą pro-uždegiminių citokinų IL-1β į antralinėje dalyje. Sumažintas antralinių išraiška H + /K + ATPazės buvo pastebėtas skrandžio po užsikrėtimo su 3 labai kolonizavimo padermių ir 2 labai kolonizavimo padermių sukeltas padidėjęs gastrinas išraišką į dugno. Nė vienoje iš H. heilmannii
S.S. infekuotų grupių, IFN-γ išraiška buvo reguliuojama. Šis tyrimas rodo, įvairovę bakterija-šeimininko sąveikos per rūšies H. heilmannii
S.S. ir kad skrandžio infekcijos patogenezė su šiuo mikroorganizmų nėra tapati, H. pylori
infekcijos.
Įvadas
Helicobacter (H.) pylori
yra labiausiai paplitusi Helicobacter
rūšys kolonizavimo skrandžio gleivinę žmonėms ir buvo susijęs su gastritas, skrandžio opa ir skrandžio vėžio [1-3]. Be H. pylori pervežimas, kitos morfologiškai atskira ne-H. pylori Helicobacter
(NHPH) rūšis, taip pat vadinama H. ​​heilmannii pervežimas sensu lato (S.L.) [4] buvo susijęs su skrandžio ligomis žmonėms [5-10]. NHPH sudaro glaudžiai susijusiose, tačiau skirtingi bakterijų rūšių grupė, dažniausiai būna įvairių gyvūnų rūšių, kaip antai H. felis
, H. salomonis
, H. bizzozeronii pervežimas, H. heilmannii pervežimas sensu stricto (SS), H. cynogastricus parsisiųsti ir H. baculiformis
katėms ir šunims ir H. suis
kiaulių [5, 7, 10-15]. Šie mikroorganizmai yra būdingas jų labai išrankus pobūdžio, pagal kurias iki šiol lėmė tam tikrą skaičių in vitro izoliatų prieinamas visame pasaulyje.
H. heilmannii
S.S. tik neseniai buvo izoliuotas ir kultūringas in vitro [16]. Ji buvo aptikta laukinių kačių ir žmogaus skrandžio biopsijos, bet ji yra dažniausiai aptinkami skrandžio gleivinės kačių ir šunų su paplitimo svyruoja nuo 20 iki 100% [5-7, 10, 12]. Nors ši bakterija buvo susijusi su lėtiniu aktyviu gastritas kačių ir šunų [12], jo patogeniškumo reikšmė išlieka paslaptingas ir tikriausiai padermė priklausomas. Žmonėms, H. heilmannii
S.S. buvo aptikta 8-19% skrandžio biopsijos su histologiniai NHPH infekcijos [5, 8, 10]. Infekcija šios bakterijos žmonėms buvo susijęs su gastritas, pepsinė opa ir gleivinės susijusių limfoidinio audinio (SALYKLAS) limfoma [5, 8, 10, 17, 18].
Keletas infekcijos tyrimus su eksperimentiniais gyvūnais modeliai buvo atliekama siekiant ištirti H. pylori
infekcijų žmonėms patogenezę. Priešingai, mažai informacijos, susijusius su H. heilmannii
S.S. patogenezėje žmonių infekcijoms. Ši bakterija buvo dauginami pelėms iki 28 mėnesių ir galėjo sukelti salyklo limfoma į šių gyvūnų [18] skrandžius. Tačiau šiame pelės eksperimento, homogenizuotas skrandžio audinio buvo naudojamas kaip sėjimo kultūros. Tai reiškia, kad kiti mikroorganizmai buvo pasėta kartu su H. heilmannii
S.S., kurie galėtų paveikti rezultatus, kaip buvo aprašyta anksčiau [19]. Taigi, siekiant gauti geresnius įžvalgų žmogaus skrandžio ligos, susijusios su H. heilmannii
S.S. patogenezės, eksperimentinės infekcijos tyrimai su grynųjų kultūrų šio mikroorganizmų yra labai svarbus. Todėl šio tyrimo tikslas buvo ištirti bakterija-šeimininko sąveiką 9 H. heilmannii
S.S. padermės, išskirtos iš skrandžio gleivinės skirtingų kačių. Mongolų Smiltpelės modelis anksčiau buvo įrodyta, kad būti naudinga gyvūnų modelis studijuoti Helicobacter
AMŽIAUS skrandžio patologija žmonėms, todėl buvo naudojamas šiame tyrime [19-21].
Medžiaga ir metodai
bakterinės padermių
Devyni padermių H. heilmannii
ss buvo gauti iš skrandžio gleivinės skirtingų kačių ir paskirta ASB1 (= tipo padermės DSM 23.983, [16]), ASB2, ASB3, ASB6, ASB7, ASB9, ASB11, ASB13 ir ASB14. Bakterijos buvo auginamos bifaziniuose Brucella
agaro lėkštelių (OXOID Basingstoke, Jungtinė Karalystė) papildytas 20% (v /v) serumas iš veršiuko embriono (HyClone, Logan, UT, JAV), 5 mg /L amphothericin B (Fungizone, Brystal -Myers Squibb, Niujorkas, JAV), Skirrow (Oxoid, yra 10 mg /l vankomicinu, 5 mg /l trimetoprim laktatas ir 2500 U /l polimiksino B), Vitox priedas (Oxoid) ir 0,05% HCl (pH 5). Po inkubacijos pagal microaerobic sąlygomis (85% N 2, 10% CO 2, 5% O 2; 37 ° C), bakterijos buvo surinktos ir galutinė koncentracija buvo pakoreguotas 7 × 10 8 gyvybingų bakterijų /ml, kaip nustatyta suskaičiavus, kiek Neubauer skaičiavimo kamerą
Gyvūnai, būsto ir eksperimentinė procedūra
Konkretus-patogenais neužkrėsti (SPF) moterys penkių savaičių amžiaus mongolų smiltpelės (CRL:. MON (Tum), N
= 48) buvo gauti iš Charles River Laboratories (Lille, Prancūzija). Gyvūnai buvo laikomi filtrų viršų narvuose (1500 cm, 2) autoklaviniuose medžio drožlės ir autoklavinio šieno. Jie buvo šeriami iki soties yra autoklavinio komercinės dietos (TEKLAD 2018S, kurių sudėtyje yra 18% baltymų; Harlan, Nyderlandai) ir AUTOKLAVINIO vandenį. Kiekvienai iš 9 H. heilmannii
S.S. kamienai išbandytas, 5 gyvūnai buvo intragastrically inokuliuojama 3 kartus 2 dienų tarpu, su 300 pL bakterinės suspensijos. Trys gyvūnai buvo pasėta Brucella
sultinio (pH 5, OXOID) ir tarnavo kaip neigiamos kontrolės. Sėjimas buvo atlikta pagal trumpą izoflurano narkozės (2,5%), naudojant kamuolį nulenkti zondą adatą. Tuo 9 savaitėms po pirmosios suleistas, gyvūnai buvo numarinti gimdos kaklelio dislokacija pagal giliai izoflurano narkozės (5%). Skrandžio ir kiekvieno smiltpelės dvylikapirštės žarnos buvo rezekcijos ir buvo paimti mėginiai histopatologiniams tyrimams ir kiekybinės realiu laiku (RT) -PCR analizė.
In vivo bandymą buvo patvirtintas Etikos komiteto Veterinarinės medicinos Gento fakulteto universitetas, Belgija (EB 2011/090).
histopatalogiją ir imunohistocheminis
išilginis pjūvis, pradedant nuo prieskrandžio pabaigoje ir apimanti Ertmė ir skrandžio ir dvylikapirštės žarnos trečiosios dalies dugnas, buvo supjaustyti išilgai didesnis iškrypimas ir fiksuoto 10% fosfato buferiniame formalino, tvarkomi standartiniais metodais ir įdėta į parafino šviesos mikroskopu. Trys iš eilės skyriai 5 pm buvo sumažinti. Po to, kai deparaffinization ir hidratacijos, šilumos sukelta antigenas paieška buvo atlikta citrato buferio (pH 6). Norėdami užblokuoti endogeninio peroksidazės aktyvumo ir nespecifiniai reakcijas, skaidres buvo inkubuojami su 3% H 2O 2 metanolyje (5 min) ir 30% ožkos serumas (30 min), atitinkamai. Pirmajame skyriuje buvo tamsintas hematoksilinu /eozinu (H & E) rezultatą, kad gastritas intensyvumą pagal atnaujintą Sidnėjaus sistemos [22], bet su tam tikrais pakeitimais, kaip aprašyta anksčiau [19]. Antrame skyriuje epitelio ląstelių proliferacija nulėmė imunohistocheminį dažymo, naudojant pelę monokloninis anti-KI67 antikūnas (1/25; Menarini Diagnostics, Zaventem, Belgija). Ki67 teigiamas epitelio ląstelės buvo skaičiuojami 5 atsitiktinai pasirinktą High Power laukai skrandžio duobes (Didinimas: 400 ×) lygio, tiek antralinėje dalyje ir dugno. Teigiamas ląstelių skaičiaus vidurkis buvo apskaičiuotas kiekvienos tiriamosios grupės abiejų skrandžio regionuose
pakauškaulio ląstelės buvo nustatyta trečią sekcijoje imunohistocheminį dažymo vandenilio kalio ATPazės naudojant pelės monokloninis antikūnas (1/200;. Abcam Ltd Kembridžo, JK). Inkubacijos su pirminių antikūnų, nukreiptų prieš KI67 ir vandenilio kalio ATPazės lydėjo inkubacijos su HRP pažymėtą antrinio antikūno (Įsivaizduoti Nuoroda Pelės K4007, DakoCytomation, Heverlee, Belgija) vizualizavimo.
DNR išskyrimo ir kiekybiškai kolonizavimo H. heilmannii
SS skrandžio ir dvylikapirštės žarnos
iš kiekvienos smiltpelės, mėginiai buvo paimti iš dugno ir skrandžio antralinėje dalyje ir nuo dvylikapirštės. Audinių mėginiai buvo laikomi 1 ml RNR vėliau (Ambion, Austin, TE, JAV) -70 ° C iki RNA- ir DNR gavyba. Audinių mėginiai buvo homogenizuoti (MagNALyser Roche, Manheimas, Vokietija) ir RNR ir DNR buvo atskirti naudojant TriReagent RT (molekulinė tyrimų centras Inc Cincinatis, JAV) pagal gamintojo instrukcijas. Iš kolonizacijos, H. heilmannii
S.S. skaičius vienam mg skrandžio audinių buvo nustatytas DNR mėginius naudojant H. heilmannii
S.S.-konkretaus kiekybinio RT-PGR. Dėl kartos standartą, dalis ureAB
genų klasterius (1224 BP) iš H. heilmannii
S.S. ASB1 amplifikuoja naudojant pradmenis U430F ir U1735R, kaip aprašyta anksčiau [6]. Standartinė sudarė 10-sulankstomomis skiedinių pradedant 10 8 PGR Amplikonų kiekvienai 10 įxL reakcijos mišinio. Vienas pL išgauti DNR šabloną buvo sustabdytas 10 iL reakcijos mišinio, sudaryto iš 0,25 įxL abiejų pradmenų, esančiose 1224 bp fragmento, kad būtų gauta 212 bp PGR produktą (prasme Gruntas: HH_SP1: 5'-CTT TCT BMT GGT GAA GTG PGS BTK-3 ", Priešprasminis gruntas: HH_RVQ: 5'-GCT GTA CCA GAG GCA ATG TCC ARG-3", atkaitinimo temperatūra 58 ° C) 3,5 pL HPLC vandens ir 5 pL SensiMix ™ SYBR Ne-ROX (Bioline Reagentai Ltd. , Jungtinė Karalystė). Abu standartai ir mėginiai buvo paleisti dviem egzemplioriais dėl CFX96 ™ AT-PGR sistema su C1000 termocikleriu (Bio-Rad, Hercules CA, JAV). Bio-Rad CFX direktorius (versija 1.6) programinė įranga buvo naudojama skaičiuojant ribinius ciklų (CT) k dydžiai ir lydymosi kreivės analizė papildyta DNR. Vidutinėmis vertėmis, dublikatai, buvo naudojamas kiekybinis H. heilmannii
S.S. DNR audinių pavyzdžius.
RNR rengimas ir genų ekspresijos
viso RNR, iš audinių mėginių, buvo išgrynintas naudojant RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Vokietija), pagal gamintojo instrukcijas. Grynumas RNR buvo įrodyta, matuojant absorbcijos santykis 260 nm ir 280 nm su NanoDrop, kurios visais atvejais buvo maždaug 2. RNR koncentracija kiekviename mėginyje buvo koreguojama 1 mikrogramų /mikrol, ir kDNR buvo susintetintas iš karto po to, kai RNR gryninimo naudojant iScript ™ kDNR sintezė Kit (Bio-Rad). Išpilstomi kDNR (1/5 praskiedimas) buvo naudojamas kaip kiekybinės RT-PGR matrica matavimo genų ekspresiją. MRNR ekspresijos lygis skirtingų citokinų (IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17, IFN-γ ir TNF-α), gastrino ir H + /K + ATPazės buvo kiekybiškai. Į namų ruošos genai GAPDH, β-aktino parsisiųsti ir KFRT
buvo įtrauktos kaip pamatiniai genuose. Gruntas sekos yra parodyta 1 [23-28] lentelėje. Visoms tikslinėms genų ir referencinių genų, kad gruntas efektyvumas buvo tarp 1,9 ir 2,1. Reakcijos buvo atlikta 10 iL apimtis yra 1 iL kDNR, 0,05 įxL abiejų pradmenų, 3,9 pL HPLC vandens ir 5 pL SensiMix ™ SYBR No-rox. Eksperimento protokolas PGR reakcijos (40 ciklų) buvo atliekamas su CFX96 ™ RT-PGR sistema su C1000 termocikleriu (Bio-Rad): denatūraciją 15 min 95 ° C temperatūroje, o po to amplifikacijos ciklų, esant 95 ° C temperatūroje 20 s, atkaitinimo esant 60 ° C temperatūroje 30 s ir išplėtimas 73 ° C temperatūroje 30 s. Kontrolės reakcijos be atvirkštinės transkriptazės žingsnio buvo įgyvendintos siekiant neįtraukti DNR užteršimo RNR pavyzdžius. Ne-šablonas kontrolės reakcijos mišiniai buvo įtraukti ir visi mėginiai buvo paleisti du kartus. CT-reikšmės buvo normalizuotas į geometrinio vidurkio CT-vertybes iš 3 Nuoroda genų, po kurių normalizuota iRNR kiekis buvo apskaičiuotas naudojant 2 -ΔΔCt metodas [29] .table 1 Primer poros.
Gruntai
seka (5 '→ 3')
citokinai
IL-1β FW23
GGC AGG TGG TAT CGC TBS TC
IL 1β RV23
ŠMC CTT GGA ttt GAC TTC TA
IL-5 FW
AGA GAA GTG TGG CGA GGA GAG ACG
IL-5 RV
PPK ggg CAA TCC CTT CAT CGG
IL-6 FW
CAA AGC PVG AGC CAT TBS GAG pervežimas IL-6 RV pervežimas Persijos PGS CCG TCT GTG AKTAS CCA GTT TCT CK
IL-10 FW
GGT TGC CAA Persijos TTA TBS GA
IL-10 R.
GCT GCA TTC TGA ggg TCT TC
IL-12p40 FW
GAA ACG ACC TCC ACC AAA GT
IL-12p40 R.
CAT TCT ggg AKTAS GGA BMK TA
IL-17 FW23
AGC TCC AGA GGC BMT CGG AC
IL-17 RV23
AGG ACC AGG ATC TCT TCG TG
IFN-γ FW24
CCA TGA ACG CTA CAC aktas GCA TC
IFN-γ RV24
GAA GTA GAA aga GAC ​​AAT CTG G
TNF-α FW23
GCT BMK CCA GAA GTC GGC G
TNF-alfa RV23 pervežimas CTT GGT "GGT TGG GTA CGA CA
gastrinas
gastrinas FW25
gcc CTG GAA CCG CAA CA
gastrinas RV25
TTC TTG GAA AGG TCT GCT TTG A.
H + /K + ATPazės ( parietalinės ląstelės)
ATP4b FW
ggg GGT AAC CTT Gag acc TGA TG
ATP4b R.
ARG ARG BLSK CTT TCC GAA GTG PVG
pagalbos genai
GAPDH FW26
AAC GGC PPK GTC ARG GCT GAG AAC G
GAPDH RV26
CAA CAT AKTAS CGG CAC CGG CAT cG
HPRT FW27
BTK ATG GAA TGA TTA TGG ACA apie G
HFRT RV27
AGC TGA GAG ATC ATC TCC ACC AAT
β-aktino FW28
CCA AGG CCA ACC GCG AGA TGA, C
β-aktino RV28
AGG GTA CAT GGT "GGT Persijos Persijos AGA, C
Primer poros naudojamas matavimo rodomi mRNR ekspresijos lygis IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17, IFN-gama, TNF-, gastrino ir H + /K + ATFazės. Į namų ruošos genai GAPDH, β-aktino parsisiųsti ir KFRT
buvo įtrauktos kaip pamatiniai genų.
Statistinė analizė
normalumo ir dispersijos vienodumą Duomenys buvo analizuojami naudojant Šapiro-Wilk normalios testą ir Levene testą vienalytiškumo dispersijų. Gastritas balai, kolonizacija talpa ir ATPazės ir gastrinas genų ekspresijos buvo palyginti tarp skirtingų užkrėstų grupių ir kontrolės, naudojant Kruskall-Wallis analizės, po Mann-Whitney U
testą. Citokinų išraiška ir KI67 teigiamų ląstelių skaičius buvo analizuojami dispersinė analizė su Bonferroni post hoc testą. Skirtumai buvo laikomi statistiškai reikšmingas, kai p ≤ 0,05
. SPSS Statistics 21 programinė įranga (IBM) buvo naudojami visų analizių.
Rezultatai
infekcija virulentiniu H. heilmannii
S.S. padermės sužadina Ertmė dominuojantis lėtinis aktyvus gastritas
visų kontrolinių gyvūnų skrandžio parodė normalų histomorphology (1a pav.) Uždegimas infekuotų H. heilmannii
S.S. smiltpelėms skrandžio padermės ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 ir ASB14 buvo pažymėta lėtinį aktyvų gastritas su formavimo Limfocitinio suvestinius rodiklius plonų sluoksnių Propria ir submucosa iš skrandžio antralinėje dalyje (1b paveikslas). Gleivinės storis buvo šiek tiek padidėjo ir buvo aptikta tik keletas neutrofilai. Priešingai, H. heilmannii
S.S. padermės ASB7 ir ASB9 nesukėlė aiškų antralinių uždegimą ir tik nežymiai padidėjęs limfocitų ląstelių skaičius buvo stebimas plonų sluoksnių Propria iš skrandžio (1c paveikslas) antralinėje dalyje. Iš viso H. heilmannii
S.S. infekuotų smiltpelės, tik ribotas uždegimo požymiai buvo aptikta skrandžio (Papildoma failų 1) dugno. Į antralinių uždegimas balai kiekvienam gyvūnui rodomi 2d pav. Nustatytas statistiškai reikšmingas skirtumas tarp uždegimo balai už smiltpelėms užkrėstų ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 ir ASB14 palyginti su kontroline grupe, buvo įrodytas (Mann-Whitney U testas
, P.
< 0,05, pav 2d). 1 pav H & El dažymo A Smiltpelės skrandžio antralinėje dalyje. Normalus histologija iš klastotė-užsėti neigiama kontrolė gyvūnų (A) antralinėje dalyje. Aiškus limfocitų infiltracija plonų sluoksnių Propria ir submucosa su limfinių folikulų (rodyklės) formavimas dėl smiltpelės pasėta H. heilmannii
S.S. antralinėje dalyje ASB1 (b). Nestiprus ir nesant Limfocitinio infiltracija (rodyklės) su plonų sluoksnių Propria esant smiltpelės pasėta H. heilmannii
S.S. antralinėje dalyje ASB7 (C). Baras = 30 mkm.
2 pav kolonizavimas talpa, H. heilmannii S.S. atmainos ir skrandžio uždegimas rezultatas po eksperimentinės infekcijos. Kolonizavimas talpa rodoma kaip log10 vertybių H. heilmannii
S.S. bakterijos per mg audinio, aptinkamas kartu su kiekybinės RT-PCR į dugno (a) ir antralinėje dalyje (c), skrandžio ir dvylikapirštės žarnos (b). buvo nustatyti rezultatai yra mažesnė už radimo ribą (prisijungti 2.39 bakterijas vienam mg audinio), kaip buvo įmetė 0. antralinių uždegimas (D) nuo 0 iki 4 (0: ne infiltracija su mononukleininėje ir /ar polimorfonuklearinių ląstelės, 1: lengvas difuzinis infiltracija mononukleininėje ir /arba polimorfonuklearinių ląstelės arba vienas mažas (50-200 ląstelės) bendra uždegiminių ląstelių buvimas; 2: vidutinio difuzinis infiltracija mononukleininėje ir /ar polimorfonuklearinių ląstelių ir /ar 2-4 uždegiminių agregatų akivaizdoje 3: pažymėti difuzinis infiltracija vienabranduolėse ir /arba polimorfonuklearinių ląstelių ir /arba ne mažiau kaip penkerius uždegiminių agregatų akivaizdoje 4: difuzinis infiltracija didelių regionų su dideliais suvestinių mononukleininėje ir /ar polimorfonuklearinių ląstelių) .Individual smiltpelės yra vaizduojamas kaip skaičiai visame vidurkis ( linijos). palyginti su kontrolinių gyvūnų statistikos reikšmingi skirtumai rodo * (Mann-Whitney U testas
, P.
< 0,05)
kolonizavimas talpa, H. heilmannii
S.S.. padermės skrandžio ir dvylikapirštės žarnos pervežimas aptikimas, H. heilmannii
S.S. DNR su kiekybiniais RT-PGR metu 9 savaites po infekcijos atskleidė aukšto lygio kolonizaciją ASB1, ASB2, ASB3 ir ASB6 skrandyje (2a pav-C). Priešingai, kolonizacija ASB7, ASB11, ASB13 ir ASB14 buvo siauresnė, o ASB9 nebuvo aptikta skrandžio (2a pav-C). Apskritai, kolonizacija pajėgumai dugno (2a pav) buvo mažesnis nei Ertmė (2c pav) visų tirtų padermių ir mažiausią skaičių bakterijų buvo aptikta dvylikapirštės žarnos (2b pav.) Be to, aišku, asociacija buvo pastebėtas tarp kolonizacijos talpa H. heilmannii
S.S. atmainos ir skrandžio uždegimas balai skrandžio antralinėje dalyje (pav 2C-D).
Virulent H. heilmannii
S.S. štamai gali sukelti skrandžio antralinių epitelinių ląstelių proliferaciją
rezultatai skrandžio epitelio ląstelių proliferaciją balais skrandžio antralinėje dalyje rodomi 3c pav. Žymiai didesnis skaičius KI67 teigiamų proliferuojančias epitelio ląstelių buvo vertinamas atsižvelgiant į ASB1- ir ASB6 užsikrėtę smiltpelėms antralinėje dalyje, palyginti su kontroline grupe (ANOVA, p
< 0,05, pav 3a-B). Skaičiai KI67 teigiamų ląstelių buvo vidutiniškai padidėjo ASB2-, ASB3-, ASB11-, ASB13- ir ASB14 infekuotų smiltpelėms, nors nėra statistiškai reikšmingas. H. heilmannii
S.S. padermės ASB7 ir ASB9 nebuvo sukelti skrandžio epitelio ląstelių proliferaciją padidėjimą. Be to, gerokai didesni numeriai proliferuojančias epitelio ląstelių buvo įrodytas su ASB1-, ASB2- ir ASB6 užsikrėtę smiltpelėms antralinėje dalyje, palyginti su užsikrėtusių ASB7 ir ASB9 smiltpelėms (ANOVA, p
< 0,05). 3 pav Skrandžio antralinių epitelio ląstelių proliferacija. KI67 dažymo A smiltpelės pasėta H. heilmannii
S.S. antralinėje dalyje ASB1 (b) rodo didesnį skaičių proliferuojančias epitelio ląstelių, palyginti su placebu užsėti neigiama kontrolė gyvūnų (A). Iš epitelio ląstelių proliferaciją lygis buvo nustatytas suskaičiavus KI67 teigiamų epitelio ląsteles 5 atsitiktinai pasirinktą High Power laukai skrandžio duobes lygio (Didinimas: 400 ×) į iš Smiltpelės skrandžio (c) antralinėje dalyje. Vidutiniai numeriai KI67-teigiamų ląstelių yra parodyta kiekvienam eksperimento grupės. Reikšmingi skirtumai tarp H. heilmannii pervežimas S.S.-užsėti ir kontrolinių gyvūnų žymimos * (ANOVA, p pervežimas < 0,05). Reikšmingų skirtumų, lyginant su ASB7 ir ASB9 užsėti grupių nurodė + ir # atitinkamai (ANOVA, p pervežimas < 0,05).
Atsižvelgiant į visa H. dugno heilmannii
SS-užsikrėtę smiltpelėms, epitelio ląstelių proliferacija lygis buvo žymiai didesnis, palyginti su kontrolinių gyvūnų (Papildoma failų 2).
citokinų genų ekspresijos skrandyje reaguojant į H. heilmannii
ss infekcija
vietinio kompiuterio imuninio atsako link H. heilmannii
S.S. infekcija buvo būdingas matavimo mRNR ekspresijos lygį IFN-gama, IL-1β, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17 ir TNF-alfa, atsižvelgiant į smiltpelėms skrandį. Rezultatai parodyta 2 lentelėje ir 4.Table 2 pav statistinės analizės mRNR ekspresijos lygį.
Ertmė
dugnas
IL-1β
IFN-γ

H + /K + ATPazės

gastrinas
reiškia CT-Ctrefa
p-VALUE mlrd
vidutinis CT-Ctref
p reikšmė
Vidutinis CT-Ctref
p-reikšmė
Vidutinis CT-Ctref
p-reikšmė
ASB1
6,92 ± 0,29 *
0,031
6,87 ± 0,60
1,000
3,70 ± 2,11 *
0,050
7,20 ± 1,68
0,101
ASB2
7,48 1,42
0,231
± 8,15 ± 1,26
1,000
2,42 5,01
± 0,513
5,94 ± 2,49 *
0,050
ASB3
6,55 ± 0,80 *
0,008
7,54 0,37
± 1,000
3,49 ± 2,28 *
0,050 ASB6
1.17
0,101
7,71 ± 6,12 ± 0,67 *
0,001 *
0,050
5,33 ± 2,39 *
0,025 ASB7 pervežimas 10,25 ± 0,37
7,99 ± 0,90
1,000
2,23 ± 1,99
1.000
7,98 ± 0,52
1,000 ASB9
9,03 ± 2,54
1,000
8,55 ±
0,45 ± 2,51
0,724
1.54
0.180
7,12 ± 0,71
1,000
0,79 ± 0,03
0,564
8,11 ± 1,58
1,000
ASB11
7.47 ± 0,15
0,499
10,45 ± 0,95 *
0,004
1,32 ± 1,45
0,248
1,25
0,289
7,67 ± ASB13
7,72 ± 1,17
0,523
9.54 ± 1.55 *
0,044
3,80 ± 0,34
0,083
8,10 ± 0,93
0,456
ASB14
7.07 ± 0,52
0,054
8.51 ± 0,97
1,000
3,81 ± 3,11
0,127
7,77 ± 2,96
0,881
Neigiama kontrolė
9.71 1.13
± - CR.LT 7,08 0,65
± - CR.LT 0,15 1,82
± - CR.LT 8,70 ± 0,62 -
Rodomas statistinė analizė IL-1β, IFN-gama ir H + /K + ATPazės iRNR išraiška Ertmė ir gastrinas iRNR išraiškos atsižvelgiant į Smiltpelės skrandžio dugno ties 9 savaites po eksperimentinės infekcijos. Citokinų išraiška buvo analizuojami dispersinė analizė su Bonferroni post hoc testą. H + /K + ATPazės ir gastrinas genų ekspresijos buvo palyginti tarp skirtingų užkrėstų grupių ir kontrolės, naudojant Kruskall-Wallis analizės, po Mann-Whitney U
testą. Skirtumai buvo laikomi statistiškai reikšmingas, kai p ≤ 0,05
. SPSS Statistics 21 programinė įranga (IBM) buvo naudojamas visų analizių
vidutinis CT-Ctref:. Už kiekvieną eksperimentinės grupės, iš normalizuotų CT-vertybes ± standartinis nuokrypis vidutinis rodomi
BP
-Pridėtinės. : tikslios p
k dydžiai pateikiami
* Statistiškai reikšmingi skirtumai lyginant su neužteršto kontrolinės grupės (p pervežimas ≤ 0,05)
4 pav iRNR raiškos lygį citokinų IL-1β ir IFN.. gama į skrandį antralinėje dalyje. Citokinų iRNR raiška lygiai dugno ir antralinėje dalyje skrandžio išnagrinėjo kiekybinio RT-PGR. Ekspresijos lygis IL-1β (a) ir IFN-gama (b) antralinėje dalyje yra parodyta. Duomenys pateikiami kaip lenkimo pokyčių genų ekspresijos normalizuotais prie 3 etaloninių genų ir, lyginant su neigiamu kontroliniu grupė, kuri yra laikoma 1. duomenys yra parodyta, kaip priemonių + standartinis nuokrypis. Reikšmingų skirtumų raiškos lygiu tarp inokuliuoti grupių ir neigiamos kontrolinės grupės žymimos * p
< 0,05 (ANOVA).
PRO-uždegiminių citokinų IL-1β yra stipriai slopina skrandžio rūgšties sekreciją [30] ir vaidina svarbų vaidmenį ūminės fazės uždegimo [31]. Išraiška IL-1β buvo iki reguliuojama atsižvelgiant į infekuotų H. heilmannii
S.S. smiltpelėms skrandžio antralinėje dalyje ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 ir ASB14, palyginti su neigiamų kontrolinių gyvūnų (4a pav.) Dėl smiltpelėms užkrėstų ASB7 ir ASB9 iki reguliavimą IL-1β buvo pastebėtas ne.
Th1 citokinų IFN-gama, parašo žymeklį į Th1 poliarizacijos atsakas [24, 32], eksponuojami sumažėjo išraiška Ertmė infekuotų ASB11 ir ASB13 (4b pav) smiltpelėms, palyginti su kontrolinės grupės gyvūnais.
jokių reikšmingų skirtumų išraiška tarp užsikrėtusių ir pseudo-užsėti smiltpelėms galima pastebėti IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p40, IL-17 ir TNF-α.
parietalinių ląstelių H + /K + ATPazės iRNR raiška žemyn reguliuojama reaguojant į kolonizacijos su H. heilmannii
SS
jokios aiškios praradimą pakauškaulio ląstelių gali būti regimos imunohistocheminį dažymo į dugno ir H. antralinėje dalyje heilmannii
SS-užsikrėtę smiltpelėms, palyginti su sveikų kontrolės (duomenys neparodyti). Tačiau kiekybinis AT-PGR parodė aiškų sumažėjimą skrandžio H + /K + ATPazės išraiška iš smiltpelėms užsikrėtusių ASB1, ASB3 ir ASB6 (5 paveiksle ir lentelėje 2) antralinėje dalyje. Palyginti su kontrolinių gyvūnų su iRNR ekspresijos lygį nustatytų 1,0, vidutinis santykinis išraiška buvo 0,09 ± 2,11 ASB1-, 0,10 ± 2.28 už ASB3- ir 0,24 ± 1,99 už ASB6 užsikrėtę smiltpelėms, atitinkamai. Nėra reikšmingų pokyčių išraiška buvo vertinama atsižvelgiant į H. heilmannii
S.S. infekuotų smiltpelėms dugno. 5 pav mRNR raiškos lygis H + /K + ATPazės į skrandžio antralinėje dalyje. Vandenilio kalio ATPazės iRNR raiška lygis skrandyje išnagrinėjo kiekybinio RT-PGR. H + /K + ATPazės mRNR išraiška lygis antralinėje dalyje yra parodyta. Duomenys pateikiami kaip lenkimo pokyčių genų ekspresijos normalizuotais prie 3 etaloninių genų ir, lyginant su neigiamu kontroliniu grupė, kuri yra laikoma 1. duomenys yra parodyta, kaip priemonių + standartinis nuokrypis. Reikšmingų skirtumų raiškos lygiu tarp inokuliuoti grupių ir neigiamos kontrolinės grupės žymimos * p
≤ 0,05 (Mann-Whitney U
testas).
Virulent H. heilmannii
S.S. padermių sukelti padidėjusį gastrino išraišką dugno
peptidas hormonas gastrino stimuliuoja skrandžio rūgšties išsiskyrimą, parietalinėse ląstelėse. Trikdžių savo išraiška gali lemti hypergastrinemia. Iš Gastrino išraiška buvo labai iki reguliuojama į infekuotų ASB2 ir ASB6 ne 9 savaites po infekcijos (6 pav ir 2 lentelė) smiltpelėms dugno. Palyginti su kontrolinės grupės gyvūnais, vidutinis santykinis išraiška buvo 6.79 ± 2.49 už ASB2- ir 10.35 ± 2.39 už ASB6 užsikrėtę smiltpelėms. Atsižvelgiant į skrandį antralinėje dalyje, ne iki-reguliavimo gastrinas išraiška buvo aptikta. Skaičius 6 mRNR išraiška lygis gastrino skrandžio dugno. Gastrino mRNR raiškos lygis į skrandį buvo tiriama, jų kiekybinė RT-PGR. Rodomas išraiška lygis dugno. Duomenys pateikiami kaip lenkimo pokyčių genų ekspresijos normalizuotais prie 3 etaloninių genų ir, lyginant su neigiamu kontroliniu grupė, kuri yra laikoma 1. duomenys yra parodyta, kaip priemonių + standartinis nuokrypis. Reikšmingų skirtumų raiškos lygiu tarp inokuliuoti grupių ir neigiamos kontrolinės grupės žymimos * p
≤ 0,05 (Mann-Whitney U testas)
.
Diskusijų
čia 9 savaitėms po užkrėtimo, lėtinė aktyvi gastritas į skrandį antralinėje dalyje buvo pastebėtas smiltpelėms eksperimentiškai užsikrėtusių 7 iš 9 H. heilmannii
ss išbandyti šiame tyrime padermės (ASB1, ASB2, ASB3, ASB6, ASB11, ASB13 ir ASB14). Plono sluoksnio Propria ir submucosa buvo masiškai infiltruotų su limfocitais, todėl limfinių folikulų formavimuisi. H. heilmannii
S.S. kamienai buvo daugiausia aptikta antralinėje dalyje ir mažesniu mastu į dugno ir dvylikapirštės žarnos. Be užsikrėtusių NHPH žmonėms, kolonizacija ir uždegimas, taip pat daugiausia pasitaiko skrandžio [5, 33-35] antralinėje dalyje. Tai patvirtina, kad Mongolijos smiltpelės yra tinkamas modelis studijuoti, H. heilmannii
S.S. infekcinę ligą žmonėms, nes taip pat buvo rodomas H. suis
[19] ir H. pylori
[20, 21]. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Genomo sekos analizė Helicobacter pylori padermių, susijusių su skrandžio opų ir skrandžio cancer
• Antimikrobinis aktyvumas, ūmus toksiškumas ir citoprotekciniu poveikis Crassocephalum vitellinum (. Benth) S. Moore ekstraktas žiurkės etanolio-HCl skrandžio opa modelis