Expresie sérového MIR-20a-5p, nechajte-7a, a mier-320A a ich korelácia s pepsinogénu v atrofickú gastritídu a rakovinou žalúdka: a case-control štúdie

Expresie sérového MIR-20a-5p, nechajte-7a, a mier-320A a ich korelácia s pepsinogénu v atrofickú gastritídu a rakovinou žalúdka: a case-control štúdie
abstraktné
pozadia
identifikáciu sériových miRNA cielia na rovnaký funkčné žalúdočné proteín môže poskytnúť nové a účinné sérologické biomarkery pre diagnostiku rakoviny žalúdka (GC). Cieľom tejto štúdie bolo zhodnotiť potenciál MIR-20a-5p, let-7a a mier-320A v diagnostike AG alebo GC a korelácie troch miRNA s predpokladaných cieľovej molekuly PGA, PGC a PGA /PGC pomer.
Metódy
celkovo 291 pacientov zaradených 103 kontrol (CON), 94 s atrofickú gastritídu (AG) a 94 s GC. boli zistené hladiny v sére miRNA kvantitatívnej reverznej transkripcie-polymerázovej reťazovej reakcie a sérum pepsinogénu A (PGA) a C (PGC) boli stanovené testy ImmunoSorbent s naviazaným enzýmom.
Výsledky
sérové ​​hladiny MIR-320A znížilo kontroly, AG a GC skupiny, ktoré boli kaskády vývoja GC, zatiaľ čo tam neboli žiadne významné rozdiely v úrovni Mir-20a-5p a necháme-7a medzi ovládacími prvkami, AG a GC skupiny. Pri rozdelení podľa pohlavia a veku, sérum MIR-320A výraz bol nižší u pacientok GC než u kontrol (p = 0,035)
, a to najmä u žien GC starších ako 60 rokov (p = 0,008)
. Pre odlíšenie pacientok GC vo veku nad 60 rokov, oblasť pod prijímačom prevádzkové charakteristická krivka pre mier-320A bol 0,699, a najlepšie cut-off bod bol 4,76 sa senzitivitou 65,2% a špecifickosťou 68,2%. Pokiaľ ide o vzťahy medzi vybrané MIR-20a-5p, dajte-7a, MIR-320A a PGS, sme zistili, že tam boli pozitívna korelácia medzi všetkými tromi a pomer PGA /PGC (R = 0,408, 0,255, 0,324, p
= 0,001, 0,009, 0,001, v tomto poradí), ale neexistuje žiadny vzťah medzi expresiou v sére Mir-20a-5p a jeho predpokladané cieľové PGA, alebo medzi rokov-7a a mier-320A a ich predpokladaného ciele PGC , Sérum MIR-320A bola znížená a PGC sa zvýšila v skupine GC v porovnaní s kontrolnou skupinou.
Závery
sérové ​​hladiny MIR-320A boli nižšie u žien starších ako 60 rokov GC než u kontrolnej skupiny, ktoré môžu poskytovať potenciál cenný marker pre diagnostiku starších žien s GC. Hladiny sérového MIR-20a-5p, let-7a a mier-320A sa v pozitívnej korelácii s PGA /PGC, ktorý môže nepriamo odrážať funkčný stav žalúdočnej sliznice.
Kľúčové
Serum microRNA biomarkery pepsinogénu žalúdočné choroba pozadie
je nevyhnutné, aby preskúmala citlivé, špecifické a neinvazívnych nádorových biomarkerov, ktoré môžu byť použité na včasnú diagnostiku, odhadovať prognózu, a predpovedanie opakovanie. MikroRNA (miRNA) sú trieda vysoko konzervovaných a endogénnymi nekódovacích RNA 19-24 nukleotidov, ktoré regulujú expresiu cieľových génov na posttranskripční úrovni. Hromadia sa dôkazy naznačujú, že miRNA sú zapojené do dôležitých biologických procesov spojených s proliferácie, apoptózy, diferenciácie, metastáz, angiogenézy a imunitnej odpovede, zatiaľ čo deregulácia miRNA môžu byť rozhodujúce pri začatí rakoviny, priebehu a výsledku liečby [1, 2]. V poslednej dobe bolo preukázané, že ľudské sérum alebo plazma obsahuje veľké množstvo stabilných miRNA, expresné profily, ktoré by mohli byť použité na identifikáciu rôznych typov rakoviny, vrátane rakoviny prostaty, veľký B-bunkového lymfómu, rakoviny vaječníkov, rakoviny pečene a non . -Malá karcinómu pľúc [3-7]
miRNA sú súčasťou komplexnej regulačné siete; viac gény môžu byť regulované jedným miRNA, ale jediný gén môže byť tiež jemne regulovaná skupinou miRNA [2]. Niekoľko štúdií skúmali súvislosť medzi sére miRNA a žalúdočných chorôb [8, 9] Niekoľko štúdií zameraných na expresiu plazmatické miRNA [10-12], Liu H et al. identifikované MIR-378 ako v sére biomarkeru [8], a Liu R et al. Vybrané päť miRNA (MIR-1, -20a, -27a, -34 a -423-5p) ako odtlačok prsta pre GC diagnózu [9]. Ale žiadna pozornosť bola venovaná zacielenie rovnakého génu sériovými miRNA. Avšak, tieto štúdie by mohli prispieť k objasneniu základných funkcií sériových miRNA zameraných na jednotlivé gény a tým zlepšiť naše porozumenie ich úloha v karcinómu žalúdka (GC) a prekancerózne ochorení.
Ľudských pepsinogens (PG) sú neaktívne prekurzory enzýmov špecifické tráviaci enzým pepsín, ktoré pochádzajú z žalúdočnej sliznice a môžu byť klasifikované biochemicky a imunochemicky do PGA a PGC [13, 14]. Predchádzajúce štúdie ukázali, že PGC expresie bola v negatívnej korelácii so stupňom malignity žalúdočnej sliznice a vývoji žalúdočných lézií [15]. PGA /PGC nízky pomer môže byť použitý ako biomarker sérologické atrofickej gastritídy (AG), ktorý je známy, že je prekancerózne stav [15, 16]. Niekoľko miRNA boli identifikované softvérové ​​balíky dva cieľový gén-predpovedanie (mikrokozmos Ciele a TargetScan človeka), z ktorých niektoré cielené PGA (MIR-212, MIR-132, MIR-20a-5p, mier-93) alebo PGC (spätných 662, mier-365, let-7a, mier-320A). Tieto miRNA tesne spojené s GC alebo iných malignít boli vybrané pre ďalšie vyšetrovanie v tejto štúdii. MIR-20a-5p, člen klastra MIR-17-92, bola up-regulovaná v žalúdku, hrubého čreva a pankreasu adenokarcinóme in situ
[17-19], tkanivové expresie rokov-7a korelovala s lymfatických uzlín z GC [20], a mier-320A bol down-regulované v primárneho karcinómu prsníka a v korelácii s inváziu a metastázy [21-23]. Tieto tri miRNA ešte len už boli skúmané in situ
, a väčšina štúdií sa zameriava na ich funkcie; žiadne štúdie skúmali ich potenciálnej úlohy ako séra biomarkerov pre diagnostiku GC a prekancerózne choroby. A nech predpokladaných funkčné miRNA (MIR-20a-5p, nechajte-7a a mier-320A) by mohol byť identifikovaný ako biomarkeru pre diagnostiku GC a prekancerózne choroby? Navyše, ich vzťahy s ich predpokladané cieľové pepsinogénu nie sú známe.
Táto štúdia preto cieľom bolo zhodnotiť potenciál MIR-20a-5p, dajte-7a a MIR-320A v diagnostike GC a koreláciu troch miRNA a PGA, PGC a PGA /PGC pomer. Skúmali sme sérové ​​hladiny troch vybraných miRNA v GC a jeho prekancerózne stav, ako aj vzťah medzi sére MIR-20a-5p a jeho predpokladané cieľové PGA, a medzi sérom rokov-7a a mier-320A a ich predpokladaná cieľová PGC , Výsledky možno identifikovať niekoľko cenných sérologických markerov pre žalúdočných ochorení, do určitej miery, ako aj poskytovanie experimentálne dôkazy a odkaz na podporu svojej ďalšej pochopenie funkcie séra miRNA v procese karcinogenézy.
Metódy
Predmety
celkom 291 pacientov, ktorí podstúpili vyšetrenie gastroskopia v prvom Affiliated nemocnice Čínske lekárskej univerzity od roku 2004 do roku 2011 boli zaradení do tejto štúdie. Informácie o pohlavie, vek a ďalšie faktory, bola získaná prostredníctvom dotazníka, podanej každému subjektu. Štúdia bola schválená Výborom pre preskúmanie ľudskej etiky Číny lekárskej univerzity. Písomný informovaný súhlas bol získaný od účastníkov v súlade s Helsinskou deklaráciou a jej neskoršie revízie. Všetci pacienti podstúpili endoskopické žalúdočnej sliznice biopsie a biopsie boli parafínových a zafarbené HE farbením pre histologickej diagnóze, ktorá bola diagnostikovaná dvoma skúsenými patológov. Prípady s minimálnymi povrchovými žalúdka boli považované za kontrol [24]. Atrofovaného gastritída skupina bola definovaná podľa histopatológie. Histopatológie diagnózy bol zahrnutý mierne, stredné a závažnosť, a iba mierny stupeň závažnosti a bol prijatý v tomto case-control štúdie. Deväťdesiat štyri pacienti boli histologicky potvrdené žalúdočné prípadov adenokarcinóm; 75 by mohli byť klasifikované podľa klasifikácie Laurena, zatiaľ čo 19 nemohol. A medzi 75 prípadov [25], 22 prípadov 75 GC boli črevné typ, 45 bolo difúzny typ a 8 bol zmiešaný typ. Vzorky v žalúdku skupine rakoviny uzavreté na veku a pohlavia kompozície s pacientmi s ovládacími prvkami a s atrofickej gastritídy, izolácie.
Sérum RNA a kvantitatívne reverznej transkripcie-polymerázovej reťazovej reakcie (QRT-PCR) Test
Približne 6 ml žilnej krvi bolo odobratých od každého jedinca. Sérum Celková RNA bola extrahovaná za použitia metódy opísanej Liu R et al. [9] s určitými úpravami. Sérum sa oddelí odstredením pri 3000 g počas 10 minút
, nasleduje 15 min na vysokorýchlostné centrifugáciou pri 12000 g
úplne odstránenie bunkového odpadu. Supernatant sérum bolo získané a skladované pri -80 ° C do ďalšieho spracovania. Celková RNA bola extrahovaná z 200 ul séra od fenol /chloroformom a čistenie kyseliny odstreďovaním v izopropylalkoholu. Každá vzorka bol to všetko v 20 ul RNA bez DDH 2O riešenia a šesť mikrolitrov celkovej RNA bola reverzne transkribovaných do cDNA pomocou jeden krok PrimeScript miRNA cDNA Synthesis Kit (Takara, Dalian, Čína). Real-time PCR bola vykonaná s použitím detekčnej súpravy miRcute miRNA qPCR (Tiangen, Peking, Čína) na termocykléra Dice systém reálneho času (TAKARA). Pre výpočet úrovne na miRNA, syntetické HSA-MIR-20a-5p, HSA-let-7a a HSA-MIR-320A pri známych koncentráciách (Takara) boli tiež reverzne transkribovaných a amplifikovaná. Koncentrácia každej miRNA potom bola vypočítaná podľa štandardnej krivky. Všetky reakcie, vrátane kontrol bez-šablón, vykonávali v duplikátu.
Sérum PG a H. pylori
úrovňou
Sérové ​​koncentrácie PG a H. pylori
úrovne (HP) boli stanovené enzým viazaný ImmunoSorbent assay (ELISA) s PGA, PGC a H. pylori
ELISA súprav (Biohit Co., Ltd., Helsinki, Fínsko) [16, 26, 27]. Vzorky boli testované v náhodnom poradí, slepí k výsledkom histologických. Každá šarža zahrnuté kontroly obchodnej a zaslepený ovládacích prvkov v plazme posúdiť laboratórnej variantu. Všetky ovládacie prvky v plazme boli v rámci priemer ± 2 SDS. Päť percent všetkých vzoriek boli testované v duplikátoch.
Štatistická analýza
protokolu 10 z miRNA počtu kópií predstavovali úrovne na miRNA, a rozdiely v úrovni miRNA medzi skupinami, ako aj v analýza rozvrstvenie sa porovnali pomocou jednocestnej analýzy rozptylu. Prijímač prevádzkové charakteristiky (ROC) krivky a oblasť pod ROC krivkou (AUC) boli použité pre vyhodnotenie diagnostické účinky miRNA a stanoviť zodpovedajúce cut-off body. Mediány PG koncentrácie v sére boli porovnané medzi týmito troma skupinami, ako aj v rámci analýzy vrstvovým plnením použitie Kruskal-Wallis H testy. Pearsonov korelačný koeficient bol zvyknutý na odhad korelácia medzi miRNA a koncentráciou PG. Rozptyl plot bol predstavujú analýzy korelácie medzi sérové ​​hladiny miRNA a PGA /PGC pomeru, a medzi jednotlivými úrovňami PGA a PGC. Všetky štatistické analýzy boli vykonané pomocou SPSS 17.0 software (SPSS Inc. Chicago, USA). Obojstranná p
hodnota < 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú.
Výsledky
Demografia študijných predmetov
291 subjektov zahrnutých 103 kontrol, 94 pacientov s AG a 94 s GC. Ako je uvedené v tabuľke 1, tam neboli žiadne významné rozdiely z hľadiska pohlavia (p = 0,948
), vek (p
= 0,654) a H. pylori
stavu infekcie (p = 0,580
) medzi tromi groups.Table 1 Charakteristika študijných predmetov
premenné
Control
atrofickú gastritídou
rakovinou žalúdka
n = 103

n = 94
n = 94
rodovej rovnosti
Muž
65 (63,1%)
61 (64,9%)
59 (62,8%)
Žena
38 (36,9%)
33 (35,1%)
35 (37,2%)
P
= 0,948
vek (roky)
Mean
59,1 ± 10,6
60,4 ± 11,2
60,2 ± 11,1
Rozsah
23-80
28-83
27-80
P
= 0,654
H. pylori
zdravotný štatút
HP-
60 (58,3%)
48 (51,1%)
53 (56,4%)
Hp +
43 (41,7%)
46 (48,9%)
41 (43,6%)
P
= 0,580
korelácia medzi expresiou miRNA v sére a žalúdočných chorôb
neboli zistené žiadne významné rozdiely v úrovni spätných 20a-5p a nechajte-7a medzi ovládacími prvkami, AG a GC skupín (p = 0,581
, 0,445, príslušne), ale MIR-320A úrovne medzi rôznymi skupinami (4,99 ± 0,46 vs. 4,94 ± 0,45 vs. postupne znižoval 4,90 ± 0,44, p = 0,152
, tabuľka 2) .Table 2 Hladiny séra miRNA (priemer ± SD), PG (medián ± SD) medzi rôznymi žalúdočného ochorenia skupín
premenné

CON
AG
GC
P-
hodnota
MIR-20a-5P
3,77 ± 0,74
3,84 ± 0,69
3,83 ± 0,68
0,581
Muž
3,80 ± 0,77
3,90 ± 0,73
3,88 ± 0,78
0,59
Žena
3,72 ± 0,69
3,73 ± 0,60
3,75 ± 0,47
0,855
rokov-7a
3,72 ± 0,34
3,77 ± 0,29
3,75 ± 0,28
0,445
Muž
3,72 ± 0,31
3,78 ± 0,32
3,77 ± 0,28
0,367
Žena
3,71 ± 0,39
3,76 ± 0,24
3,72 ± 0,28
0,93
MIR-320A
4,99 ± 0,46
4,94 ± 0,45
4,90 ± 0,44
0,152
Male
5,03 ± 0,49
5,01 ± 0,46
5,00 ± 0,42
0,76
žena
4,93 ± 0,40
4,81 ± 0,39
4,73 ± 0,43
0,035 *
PGA
146,3 ± 101,5
111,0 ± 85,4
130,1 ± 107,1
0,044 §
PGC
19,2 ± 17,6
14,0 ± 12,2
23,1 ± 23,0
0,003 §
PGA /PGC
9,52 ± 4,85
9,52 ± 5,23 7,86
± 5,46
0,039 §
P
*
: GC vs
riadenia; P
§
: rozdiel medzi týmito troma skupinami. CON: Prípady s minimálnym povrchné zápal žalúdka boli považované za kontrol; AG: atrofickú gastritídu; GC :. Rakovina žalúdka
rozvrstvenie podľa pohlavia a veku ukázalo, že mier-320A expresie bola nižšia u žien ako u kontrol GC (p = 0,035)
, a rozdiel bol obzvlášť významné u žien starších ako 60 GC rokov, v porovnaní s kontrolami (p = 0,008
) (tabuľka 3). AUC MIR-320A pre detekciu pacientky GC staršie ako 60 rokov bol 0,699. Najlepšie cut-off bod bol 4,76, s citlivosťou 65,2% (95% CI = 45,8 - 84,7%), a špecifickosťou 68,2% (95% CI = 48,7 - 87,6%). Máme tiež analýza naše dáta v H. pylori
stratifikácia, ale tam bol žiadny rozdiel medzi niektorú zo skupín, ako je uvedené v tabuľke 4.Table 3 stratifikácia analýzu séra hladiny MIR-320A medzi rôznymi skupinami žalúdočných ochorení (priemer ± SD )
miRNA
CON (n)
AG (n)
GC (n)
P-
hodnota
MIR-320A
Muž
≥60
5,02 ± 0,44 (27)
4,96 ± 0,43 (28)
4,99 ± 0,46 (26)
0,796 Hotel < 60
5,03 ± 0,53 (38)
5,05 ± 0,49 (33)
5,01 ± 0,39 (33)
0,859
Žena
≥60
4,98 ± 0,46 (22)
4,77 ± 0,39 (24)
4,63 ± 0,41 (23)
0,008 * Hotel < 60
4,88 ± 0,31 (16)
4,91 ± 0.39 (9)
4,92 ± 0,42 (12)
0,774
P
*
GC vs
Control. n znamená číslo vzorky každej podskupiny.
Tabuľka 4 úrovne expresie v sére miRNA (priemer ± SD), PG (stredná hodnota ± SD) medzi rôznymi skupinami žalúdočných ochorení, pri rozdelení podľa stavu H. pylori
Premenné

CON
AG
GC
P-
hodnota
HP-
MIR-20a-5P
3,83 ± 0,71
3,88 ± 0,59
3,85 ± 0,70
0,926
Male
3,84 ± 0,72
3,90 ± 0,59
3,89 ± 0,34
0,931
žena
3,82 ± 0,71
3,86 ± 0,60
3,75 ± 0,53
0,881
rokov-7a
3,74 ± 0,31
3,81 ± 0,31
3,76 ± 0,25
0,505
Muž
3.73 ± 0,31
3,84 ± 0,34
3,77 ± 0,25
0,36
Žena
3,76 ± 0,30
3,76 ± 0,28
3,74 ± 0,27
0,972
MIR-320A
5,02 ± 0,48
4,90 ± 0,45
4,91 ± 0,47
0,311
Male
5,03 ± 0,50
4,97 ± 0,48
4,98 ± 0,44
0,813
Žena
4,99 ± 0,44
4,81 ± 0,41
4,74 ± 0,50
0,216
PGA
134.99 ± 92.27
96.78 ± 76.05
141.99 125.80 ± 0,056
PGC
15,13 ± 13,67
10,37 ± 9,02
23,15 ± 25,11
0,001
PGA /PGC
10,66 ± 4,81
11,00 ± 6,04
9,17 ± 6,28
0,22
Hp +
MIR-20a-5P
3,69 ± 0,78
3,79 ± 0,79
3,81 ± 0,66
0,743
Muž
3,75 ± 0,86
3,90 ± 0,31
3,86 ± 0,82
0,785
Žena
3,62 ± 0,66
3,53 ± 0,55
3,74 ± 0,43
0,542
let-7a
3,68 ± 0,38
3,74 ± 0,27
3,74 ± 0,31
0,661
Muž
3,70 ± 0,31
3,73 ± 0,30
3,77 ± 0,33
0,717
Žena
3,66 ± 0,48
3,75 ± 0,18
3,70 ± 0,28
0,795
MIR-320A
4,95 ± 0,44
4,98 ± 0,45
4,89 ± 0,40
0,634
Muž
5.01 ± 0.49
5,05 ± 4,59
5,05 ± 0,46
0,961
Žena
4,87 ± 0,36
4,81 ± 0,38
4,72 ± 0,36
0,471
PGA
162,15 ± 112,44
125,81 ± 92,66
114,74 ± 75,23
0,058
PGC
24,82 ± 20,80
17,86 ± 13,95
23,10 ± 20,16
0,182
PGA /PGC
7,91 ± 4,49
7,97 ± 3,70
6,16 ± 3,57
0,06
korelácia medzi expresiou miRNA v sére a ich predpovedal cieľovej PG molekuly
Pre analýzu pridružení, MIR-20a-5P expresie nebola korelované s PGA úrovniach (r = 0,110, p = 0,269)
, a nech-7a a mier-320A neboli korelované s PGC úrovne (r = -0,162, -0,102; p
= 0,102, 0,306, v tomto poradí), ale všetky boli pozitívnu koreláciu s PGA /PGC pomer (r = 0,408, 0,255, 0,324, p
= 0,001, 0,009, 0,001, v danom poradí) (obrázok 1). Pri porovnaní skúmanej miRNA a predpokladané cieľové PG molekuly s ovládacími prvkami, zistili sme sérové ​​hladiny PGA u pacientov GC boli znížené (130,1 ± 107,1 vs. 146,3 ± 101,5, p
= 0,276) a PGC hladiny u pacientov GC boli zvýšené (23,1 ± 23,0 vs. 19,2 ± 17,6 p
= 0,174), aj keď rozdiely neboli štatisticky významné. PGA /PGC pomer v skupine GC bola znížená (7,86 ± 5,46 vs 9,52 ± 4,85, p = 0,039
, tabuľka 2), s koeficientom korelácie 0,727 (obrázok 1). V porovnaní s kontrolnou skupinou, sérové ​​hladiny MIR-320A boli znížené (4,90 ± 0,44 vs. 4,99 ± 0,46, p = 0,153
) a sérové ​​hladiny PGC boli v skupine GC zvýšil (23,1 ± 23,0 vs. 19,2 ± 17,6 p
= 0,174), čo ukazuje zrejme opačné tendencie, aj keď rozdiely neboli štatisticky významné (tabuľka 2). Obrázok 1 bodový graf graf. Obrázok 1-A - C. Rozptyl Dej sérové ​​hladiny miRNA a ich korelácia s PGA /PGC pomeru z kontrolnej skupiny. A. MIR-20a-5p; B. rokov-7a; C. MIR-320A. Obrázok 1-D. Rozptyl Dej korelácia medzi sére PGA a PGC. Všetky bodový diagram ukázala analýza Asociácie variantov medzi x a osi y.
Diskusia
Nové poznatky boli prezentované v sére /plazme miRNA ako potenciálny biomarkery pre niekoľko chorobných stavov, vrátane ľudských nádorov [28-31]. Avšak štúdie séra miRNA vo vzťahu k chorobám žalúdka boli obmedzené, a žiadna pozornosť bola venovaná miRNA sériovo zameraných na rovnaký gén. na sériu miRNA predpovedal Bioinformatic softvér založený zamerať na PGA a /alebo PGC sme vybrali Mir-20a-5p, Let-7a a Mir-320A pre ďalšie štúdium. Skúmali sme potenciál MIR-20a-5p, let-7a a mier-320A v diagnostike AG alebo GC a korelácie troch miRNA s predpokladaných cieľovej molekuly PGA, PGC a PGA /PGC pomer. Expresie MIR-320A bol u starších pacientok GC nižšia ako u kontrolnej skupiny, čo naznačuje, že mier-320A môže byť cenným markeru pre diagnostiku starších žien s GC. MIR-20a-5p, let-7a a mier-320A boli pozitívne koreluje s PGA /PGC pomere, ktorý by mohol nepriamo odrážať funkčný stav žalúdočnej sliznice.
Niekoľko štúdií identifikované nádorovo špecifické miRNA zmeny v plazme /v sére pacientov s nádorovým ochorením, a ukázali potenciál cirkulujúcich miRNA ako nové neinvazívne biomarkerov pre skríning rakoviny [12, 32]. Výsledky našej štúdie naznačujú žiadne rozdiely v sére Mir-20a-5p a necháme-7a úrovne medzi ovládacími prvkami, AG a GC skupiny, zatiaľ čo MIR-320A výraz padli v priebehu kontrol, AG a GC skupiny. Sérové ​​hladiny MIR-320A boli u pacientok GC nižšie ako u kontrolnej skupiny, a tento rozdiel bol obzvlášť výrazný u starších žien vo veku nad 60 rokov, čo naznačuje, že mier-320A môže byť nové klinické biomarker pre diagnostiku GC s populačným špecifickosti. Štúdia MIR-320A k dnešnému dňu boli obmedzené na svoje role pri regulácii fyziologických funkcií hematoencefalickou bariérou [33], a v intrahepatálneho cholangiocarcinoma [34, 35], rakoviny hrubého čreva [36] a detskej leukémie [37]. Podľa našich najlepších vedomostí, aktuálne štúdie je prvá, ktorá uvádza, že mier-320A by mohol pôsobiť ako sérový biomarker GC, a to najmä u starších žien. Aj keď len málo štúdií sa zaoberalo jeho mechanizmy, niektoré uvádzajú vzťah medzi jej predpokladaného cieľovej PGC a pohlavia, zatiaľ čo iné uvádzajú, že /PGC pomer PGA bola závislá na veku, ale len u žien [38, 39]. Softvér tiež predpovedal, že mier-320A sa zameriava na gama receptor estrogénu, súvisiace (http://​www.​targetscan.​org/​cgi-bin/​targetscan/​mamm_​31/​targetscan.​cgi?​species=​Human&​gid=​&​mir_​c=​&​mir_​nc=​&​mirg=​hsa-miR-320). Tieto línie dôkazov všetky naznačujú, že mier-320A môže hrať dôležitú úlohu vo vývoji GC u žien, a môže nepriamo odrážať funkčný stav žalúdočnej sliznice. Jeho použitie ako biomarker by byť spojené s výhodami non-invázie, nízke náklady a vyššiu stabilitu. Je však potrebné ďalšie štúdie vo väčších vzoriek, ktoré majú objasniť jej mechanizmy a overí jeho využitie ako biomarkeru u starších žien s GC. Samozrejme, zmeny miRNA možno nielen súvisiace so zmenami podmienok žalúdočných funkcie slizníc, ale aj v súvislosti s niektorými ďalšími faktormi, pre príklady anémia [40], stimulačné patogénnych mikroorganizmov, ako H. pylori
[41 ] i niektoré proteíny podieľajúce sa na spracovanie miRNA dráhy ako Drosha, Dicer a Argonauti [42, 43]. Medzi ďalšie faktory súvisiace by sa mali zohľadniť v ďalších štúdiách v budúcnosti.
Hladiny PGA a PGC sa zdajú byť v súvislosti s žalúdočnej sliznice žliaz a bunkových množstvo, a tiež nepriamo odráža funkciu Secretary žalúdočné korpusu a /alebo žalúdočných Antrum. PGA je vylučovaný z žalúdka korpusu a žalúdočné uhla, zatiaľ čo PGC je vylučovaný z celého žalúdka, vrátane corpus, uhol a antra. Pokles /PGC pomere PGA odráža vývoj atrofickej lézií na žalúdočnú sliznicu [16], a PGA /PGC nízky pomer súvisí s vysokým rizikom GC [38, 44, 45]. Tento bol preto použitý ako účinný parametra pre skríning jedincov s vysokým rizikom GC v populácii a môže byť klinicky užitočná biomarker GC a prekanceróznych ochorenia, ako je AG [16, 38, 46, 47]. Broutet et al. že hoci PGC sa vylučuje z rôznych miest v žalúdku, je v spojení s PGA; zatiaľ čo PGA prudko vzrástol, PGC mierne líšili, a korelačný koeficient dosiahol 0,75 [38]. Súčasná štúdia tiež vypočítať korelačný koeficient medzi PGA a PGC z 0,727. Tento vzťah môže vysvetliť, prečo je PGA /PGC pomer odráža funkčný stav žalúdočnej sliznice presnejšie ako jeden PGA alebo PGC samotného. Naša štúdia zistila, žiadny vzťah medzi expresiou MIR-20a-5p a PGA, nechajte-7a a PGC, alebo Mir-320A a PGC, ale tam boli pozitívna korelácia medzi každým z troch a PGA /PGC pomere, ktorý bol už známy ako užitočný biomarkeru pre diagnostiku ochorení a sledovaných miRNA boli synchrónne so známym PGA /PGC pomere naznačuje ich potenciál ako užitočné biomarkerov pre diagnostiku ochorení.
Vzhľadom k tomu, H. pylori
je dôležitým činiteľom v žalúdku, ktorý je tiež trieda Icarcinogen definovaná Svetovou zdravotníckou organizáciou (WHO), my analýza tri miRNA v rozvrstvení HP medzi rôznymi žalúdočných chorôb, ale našiel žiadny rozdiel. Či H. pylori stroje a /alebo iné faktory prostredia ovplyvňujú toto združenie potrebuje viac štúdií vo väčších vzorkách v budúcnosti.
Došlo k určitému obmedzeniu v našej štúdii. Po prvé, vybrané miRNA môžu funkčne zamerať PGA /C a /alebo aspoň len dôkaz o bioinformačnú softvér, je potrebný nejaký dôkaz pre ďalšie funkčné pokusy. Po druhé, korelácia expresie v tkanive miRNA a jeho predpokladané cieľový proteín je nutný pre ďalšie vyšetrovanie. Po tretie, korelácia miRNA expresie a klinicko-charakteristiky pacientov s rakovinou žalúdka, ako je napríklad triedenie Borrmann je, charakteru rastu, TNM štádiu, hĺbku invázie a metastáz lymfatických uzlín, et al. neboli ďalej analyzované kvôli informácií biopsiou obmedzenej chýba. Po štvrté, je zdrojom kontrol nebola normálne populáciu, ale s minimálne povrchové gastritída podľa patologické diagnóze a gastritída tiež patrí kaskádu vývoja GC.
Záver
Na záver sme ukázali, že sérum spätných 320A hladiny boli nižšie u žien GC nad 60 rokov ako u kontrolnej skupiny, a môžu tak predstavujú cenný značku pre diagnostiku GC v tejto skupine. A hladiny MIR-20a-5p, nechajte-7a a mier-320A boli pozitívne korelované s PGA /PGC pomere, čo by mohlo nepriamo odrážať funkčný stav žalúdočnej sliznice.
Notes
Qian Xu, Qi- Guan Dong prispelo rovnakou mierou k tejto práci
Skratky
miRNA :.
microRNA
PG:
pepsinogénu

PGA:
pepsinogénu
PGC:
pepsinogénu C
QRT-PCR:
kvantitatívne reverznej transkripcie PCR
ELISA:
Enzyme linked ImmunoSorbent assay
ROC krivka:
prijímač pracujúci charakteristiku

AUC:
plocha pod krivkou
nt:
nukleotidov
cDNA :
komplementárna DNA
AG:
atrofická gastritída
GC :.
karcinóm žalúdka


deklarácia
Poďakovanie
Táto práca je podporená dotácií z Národného Key základného výskumu programu Číny (973 Program ref. 2010CB529304), Národná prírodná Science Foundation of China (Ref No.31200968) a Nadácia pre vedu a technológie v provincii Liao-ning (pozri č. 2011225002).
Autori ďalej len "pôvodné predložený súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na pôvodné predložených súborov autorov pre obrázky. "Pôvodný súbor pre Obrázok 1 12907_2012_129_MOESM2_ESM.doc autorského 12907_2012_129_MOESM1_ESM.pdf autorov pôvodného súboru na obrázku 2 protichodnými záujmami
Všetci autori čítať a schváli záverečnú rukopis, a nemajú svojej obchodnej alebo inej združenia, ktoré by mohli predstavovať konflikt záujmov príspevkov.
autorov
YY pochopil a navrhol túto štúdiu a revidoval rukopis. QG-D bol zodpovedný za experiment a vykonáva interpretáciu dát. QX zapojený do písania papier a revíziu rukopis kriticky dôležitý intelektuálneho obsahu. LP-S sa podieľala na návrhu štúdie čiastočne. CY-H vykonal štatistickej analýzy. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Oxid dusnatý-an endogénna inhibítor sekrécie žalúdočnej kyseliny v izolovaných ľudských žalúdočných žliaz
• CD44 /CD24 expresie v opakujúce sa rakoviny žalúdka: retrospektívnu analysis