Espressione di siero miR-20a-5p, let-7 bis, e miR-320a e le loro correlazioni con pepsinogen in gastrite atrofica e cancro gastrico: un caso-controllo study

espressione di siero miR-20a-5p, let-7 bis, e retrovisori 320A e le loro correlazioni con pepsinogen in gastrite atrofica e cancro gastrico: uno studio caso-controllo
Abstract
sfondo
l'identificazione di miRNA seriali mira la stessa proteina gastrica funzionale potrebbe fornire nuovi ed efficaci biomarcatori sierologici per la diagnosi di cancro gastrico (GC). Lo scopo di questo studio era di valutare il potenziale di miR-20a-5p, let-7a e miR-320a nella diagnosi di AG o di GC e la correlazione dei tre miRNA con le molecole bersaglio previsti PGA, PGC e PGA /PGC rapporto.
Metodi
Il totale di 291 pazienti inclusi 103 controlli (cON), 94 con gastrite atrofica (AG) e 94 con GC. I livelli di miRNA di siero sono stati rilevati dal quantitativo inversa reazione a catena della polimerasi trascrizione e Pepsinogeno A (PGA) e C (PGC) sono stati determinati mediante saggi immunoenzimatica.
Risultati
livelli sierici di miR-320a diminuito attraverso i controlli, AG e GC gruppi che erano le cascate di sviluppo GC, mentre non vi erano differenze significative nei livelli di miR-20a-5p e let-7 bis tra i controlli, AG e GC gruppi. Quando stratificato per sesso ed età, siero di espressione di miR-320a è stata inferiore nei pazienti di sesso femminile GC rispetto ai controlli (p = 0.035)
, specialmente nei pazienti di sesso femminile CG età superiore ai 60 anni (p = 0,008)
. Per distinguere i pazienti di sesso femminile CG di età superiore ai 60 anni, l'area sotto la curva ROC per miR-320a era 0,699, e il miglior punto di cut-off è stato 4.76, con una sensibilità del 65,2% e una specificità del 68,2%. Per quanto riguarda le correlazioni tra il miR-20a-5p selezionato, let-7a, miR-320a e PG, abbiamo scoperto che c'erano correlazioni positive tra tutti e tre e il rapporto di PGA /PGC (r = 0,408, 0,255, 0,324; p
= < 0,001, 0,009, 0,001, rispettivamente), ma non vi era alcuna relazione tra l'espressione di siero di miR-20a-5p e la sua PGA prevista del bersaglio, o tra let-7a e miR-320a e la loro prevista del bersaglio PGC . Siero miR-320a era diminuita e PGC è stata aumentata nel gruppo GC rispetto al gruppo di controllo.
Conclusioni
livelli sierici miR-320a erano più bassi nei pazienti di sesso femminile CG di età superiore a 60 rispetto ai controlli, che possono fornire un potenziale marcatore prezioso per la diagnosi di donne anziane con GC. I livelli di siero miR-20a-5p, let-7a e miR-320a sono stati correlati positivamente con PGA /PGC, che può riflettere indirettamente lo stato funzionale della mucosa gastrica.
Malattia Parole
Siero microRNA Biomarker Pepsinogen gastrico sfondo
e 'essenziale per esplorare biomarcatori sensibili, specifici e non invasive tumorali che possono essere utilizzati per la diagnosi precoce, la prognosi stima, e la previsione di recidiva. I microRNA (miRNA) sono una classe di RNA non codificanti altamente conservate ed endogeni lunghi 19-24 nucleotidi, che regolano l'espressione di geni bersaglio a livello post-trascrizionale. Accumulando prove indicano che miRNA sono coinvolti in importanti processi biologici legati alla proliferazione, l'apoptosi, differenziazione, le metastasi, l'angiogenesi e la risposta immunitaria, mentre la deregolamentazione dei miRNA può essere cruciale in iniziazione cancro, la progressione e il risultato del trattamento [1, 2]. E 'stato recentemente dimostrato che il siero o plasma umano contiene grandi quantità di miRNA stabili, i profili di espressione di cui potrebbero essere utilizzati per identificare i vari tipi di cancro, tra cui il cancro alla prostata, linfoma a grandi cellule B, cancro ovarico, cancro del fegato e non . cancro polmonare delle cellule -piccola [3-7]
miRNA sono parte di una rete di regolamentazione complessa; geni multipli possono essere regolati da uno miRNA, ma un singolo gene può anche essere sottilmente regolato da un gruppo di miRNA [2]. Pochi studi hanno indagato l'associazione tra miRNA sierici e malattie gastriche [8, 9], diversi studi si sono concentrati sul l'espressione miRNA plasma [10-12], Liu H et al. identificato miR-378 come biomarker del siero [8], e Liu R et al. selezionati cinque miRNA (miR-1, -20Â, -27a, -34 e -423-5p) come un'impronta digitale per la diagnosi GC [9]. Ma nessuna attenzione è stata rivolta al target dello stesso gene da miRNA seriali. Tuttavia, tali studi potrebbero contribuire a chiarire le funzioni comuni di miRNA seriali di targeting singoli geni e quindi migliorare la nostra comprensione del loro ruolo nel carcinoma gastrico (GC) e le malattie precancerose.
Pepsinogeno umani (PG) sono inattivi pro-enzimi della specifica la pepsina enzima digestivo, che provengono da mucosa gastrica e può essere classificato biochimicamente e immunochimicamente in PGA e PGC [13, 14]. Studi precedenti hanno mostrato che l'espressione di PGC negativamente correlata con il grado di malignità della mucosa gastrica e lo sviluppo di lesioni gastriche [15]. Un basso rapporto PGA /PGC può essere utilizzato come biomarker sierologica di gastrite atrofica (AG), che è noto per essere una condizione precancerosa [15, 16]. Diversi miRNA sono stati identificati dai pacchetti di due bersaglio geni prevedere software (Obiettivi microcosmo e TargetScan umana), alcuni dei quali mirati PGA (miR-212, miR-132, miR-20a-5p, miR-93) o PGC (retrovisori 662, miR-365, let-7a, miR-320a). I miRNA strettamente legate ai GC o altri tumori maligni sono stati selezionati per ulteriori indagini in questo studio. miR-20a-5p, un membro del cluster miR-17-92, è stato upregulated in gastrica, colon-retto e adenocarcinomi pancreatici in situ
[17-19], espressione del tessuto di let-7 bis è stata correlata con metastasi linfonodali di GC [20], e miR-320a è sceso-regolati nel cancro al seno primario e correlati con l'invasione e metastasi [21-23]. Questi tre miRNA sono state solo precedentemente esaminato in
situ, e la maggior parte degli studi si sono concentrati sulle loro funzioni; nessuno studio ha esaminato i loro ruoli potenziali come biomarcatori sierici per la diagnosi di GC e malattia precancerosa. E se i miRNA funzionali previsti (miR-20a-5p, let-7a e miR-320a) potrebbero essere identificati come un biomarker per la diagnosi di GC e malattia precancerosa? Inoltre, i loro rapporti con la loro pepsinogen prevista del bersaglio sono sconosciuti.
Questo studio ha lo scopo quindi di valutare il potenziale di miR-20a-5p, let-7a e miR-320a nella diagnosi di GC e la correlazione dei tre miRNA e PGA, PGC e PGA rapporto /PGC. Abbiamo studiato i livelli sierici di tre miRNA selezionati in GC e la sua condizione precancerosa, così come la correlazione tra siero di miR-20a-5p e la sua PGA prevista del bersaglio, e tra il siero let-7a e miR-320a e la loro prevista del bersaglio PGC . I risultati forse identificare alcuni marcatori sierologici preziosi per malattie gastriche in una certa misura, oltre a fornire prove sperimentali e riferimento per aiutare la nostra ulteriore comprensione delle funzioni di miRNA siero nel processo di carcinogenesi.
Metodi
Soggetti
Un totale di 291 soggetti sottoposti a esami gastroscopia nel primo ospedale affiliato di China Medical University 2004-2011 sono stati arruolati in questo studio. Informazioni su sesso, età e altri fattori è stata ottenuta per mezzo di un questionario somministrato ad ogni soggetto. Lo studio è stato approvato dal Comitato Etico Review umana della Cina Medical University. Consenso informato scritto è stato ottenuto dai partecipanti in conformità con la Dichiarazione di Helsinki e la sua revisione in seguito. Tutti i pazienti sono stati sottoposti endoscopica biopsia della mucosa gastrica, e le campioni bioptici sono stati inclusi in paraffina e colorate da SE colorazione per la diagnosi istologica che è stata diagnosticata da due patologi esperti. I casi con gastrite superficiale minimi sono stati trattati come i controlli [24]. Il gruppo di gastrite atrofica è stato definito in base al istopatologia. Le diagnosi istopatologia è stato incluso lieve, moderata e la gravità, e solo il grado di moderata e la gravità è stato iscritto in questo studio caso-controllo. Novantaquattro pazienti sono stati istologicamente confermati casi di adenocarcinoma gastrico; 75 potrebbero essere classificati secondo la classificazione Lauren, mentre il 19 non poteva. E tra i 75 casi [25], 22 dei 75 casi CG erano il tipo intestinale, 45 erano il tipo diffuso e 8 erano del tipo misto. I campioni in gruppo cancro gastrico abbinato nella composizione per età e sesso con i pazienti con controlli e con gastrite atrofica. Isolamento
Siero dell'RNA e reazione a catena della polimerasi di trascrizione inversa-quantitativa (qRT-PCR)
sangue circa 6 ml venosa è stato raccolto da ciascun soggetto. RNA sierico totale è stato estratto utilizzando un metodo descritto da Liu R et al. [9] con alcune modifiche. Siero è stato separato per centrifugazione a 3000 g per 10 min
, seguita da una centrifugazione ad alta velocità 15 min a 12.000 g
per rimuovere completamente detriti cellulari. Il siero supernatante è stato recuperato e conservato a -80 ° C fino ad ulteriore lavorazione. L'RNA totale è stato estratto da 200 microlitri di siero di acido fenolo /cloroformio e purificazione centrifugazione in alcool isopropilico. Ogni campione è stato tutto in 20 microlitri-RNA libero DDH 2O soluzione e sei microlitri di RNA totale è stato retrotrascritto a cDNA utilizzando One Step PrimeScript miRNA cDNA Synthesis Kit (Takara, Dalian, Cina). Real-time PCR è stata effettuata utilizzando un kit di rilevamento miRcute miRNA qPCR (Tiangen, Pechino, Cina) sul Thermal Cycler Dice vero e proprio sistema Time (Takara). Per calcolare i livelli dei miRNA, sintetico HSA-miR-20a-5p, HSA-let-7a e HSA-miR-320a a concentrazioni note (Takara) sono stati anche retrotrascritto e amplificato. La concentrazione di ogni miRNA stato quindi calcolato secondo la curva standard. Tutte le reazioni, compresi i controlli non-modello, sono stati eseguiti in duplicato.
Siero PG e H. pylori
livelli
Le concentrazioni sieriche di PG e H. pylori
livelli (HP) sono stati determinati enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) con PGA, PGC e H. pylori
kit ELISA (Biohit Co, Ltd, Helsinki, Finlandia) [16, 26, 27]. I campioni sono stati analizzati in ordine casuale, ciechi ai risultati istologici. Ogni lotto comprendeva controlli commerciali e controlli di plasma in cieco per valutare la variazione di laboratorio. Tutti i comandi al plasma erano entro la media ± 2 DS. Il cinque per cento di tutti i campioni sono stati dosati in duplicato.
Analisi statistica
Il registro 10 dei miRNA copia numero rappresentato i livelli dei miRNA, e le differenze nei livelli di miRNA tra i gruppi così come in l'analisi stratificazione sono stati confrontati da analisi della varianza ad una via. Receiver operating characteristic curve (ROC) e l'area sotto la curva ROC (AUC) sono stati utilizzati per valutare gli effetti di diagnosi dei miRNA e di determinare adeguati punti di cut-off. Mediane concentrazioni sieriche PG sono stati confrontati tra i tre gruppi così come nell'analisi stratificazione utilizzando test di Kruskal-Wallis H. coefficiente di correlazione di Pearson è stato utilizzato per stimare la correlazione tra miRNA e concentrazioni PG. Il grafico a dispersione era rappresentare l'analisi di correlazione tra i livelli sierici di miRNA e PGA rapporto /PGC, e tra i livelli PGA e PGC. Tutte le analisi statistiche sono state effettuate utilizzando SPSS 17.0 software (SPSS Inc. Chicago, USA). A due lati valore p
< 0.05 è stato considerato statisticamente significativo.
Risultati
Demografia dei soggetti dello studio
I 291 soggetti inclusi 103 controlli, 94 pazienti con AG e 94 con GC. Come indicato nella tabella 1, non vi erano differenze significative in termini di genere (p = 0,948
), età (p = 0,654
) e H. pylori
stato di infezione (p = 0.580
) Tra tre groups.Table 1 Caratteristiche dei soggetti di studio
variabili
controllo
gastrite atrofica
cancro gastrico
n = 103

n = 94
n = 94
genere
Maschio
65 (63,1%)
61 (64,9%)
59 (62,8%)
femminile
38 (36,9%)
33 (35,1%)
35 (37,2%)
P = 0,948

Età (anni)
media
59,1 ± 10,6
60,4 ± 11,2
60.2 ± 11.1
Gamma
23-80
28-83
27-80
P = 0.654

H. pylori
stato di infezione
HP-
60 (58,3%)
48 (51,1%)
53 (56,4%)
Hp +
43 (41,7%)
46 (48,9%)
41 (43,6%)
P = 0.580

correlazioni tra l'espressione dei miRNA nel siero e le malattie gastriche
non ci sono state differenze significative nei livelli di retrovisori livelli 20a-5p e let-7 bis tra i controlli, AG e gruppi GC (p = 0,581
, 0,445, rispettivamente), ma miR-320A è diminuito gradualmente tra i diversi gruppi (4,99 ± 0,46 vs 4,94 ± 0,45 vs 4,90 ± 0,44, p = 0,152
, tabella 2) .table 2 livelli di miRNA sieriche (media ± SD), PG (mediana ± DS) tra le malattie differenti gruppi gastrici
Variabili

CON
AG
GC
P-
valore
miR-20a-5p
3.77 ± 0.74
3.84 ± 0.69
3.83 ± 0.68
0.581
Maschio
3,80 ± 0,77
3.90 ± 0.73
3.88 ± 0.78
0.59
femminile
3.72 ± 0.69
3.73 ± 0.60
3,75 ± 0,47
0.855
let-7 bis
3.72 ± 0.34
3,77 ± 0,29
3,75 ± 0,28
0.445
Maschio
3.72 ± 0.31
3,78 ± 0,32
3,77 ± 0,28
0.367
femminile
3.71 ± 0.39
3.76 ± 0.24
3,72 ± 0,28
0.93
miR-320a
4.99 ± 0.46
4.94 ± 0.45
4,90 ± 0,44
0,152
Maschio
5.03 ± 0.49
5.01 ± 0.46
5.00 ± 0.42
0,76
Female
4.93 ± 0.40
4,81 ± 0,39
4,73 ± 0,43
0,035 *
PGA
146,3 ± 101,5
111.0 ± 85.4
130.1 ± 107.1
0.044 §
PGC
19,2 ± 17,6
14,0 ± 12,2
23,1 ± 23,0
0.003 §
PGA /PGC
9,52 ± 4,85
9.52 ± 5.23
7.86 ± 5.46
0,039 §
P
*
: GC vs
di controllo; P
§
: differenza tra i tre gruppi. CON: I casi con il minimo gastrite superficiale sono stati trattati come i controlli; AG: gastrite atrofica; GC:. Cancro gastrico
stratificazione per sesso ed età ha mostrato che l'espressione di miR-320a è stata inferiore nei pazienti di sesso femminile GC rispetto ai controlli (p = 0,035)
, e la differenza è stata particolarmente significativa nei pazienti di sesso femminile CG di età superiore a 60 anni, rispetto ai controlli (p = 0,008
) (Tabella 3). L'AUC di miR-320a per la rilevazione di pazienti di sesso femminile di età superiore ai GC 60 è stato 0.699. Il miglior punto di cut-off è stato 4,76, con una sensibilità del 65,2% (95% CI = 45,8-84,7%), e una specificità del 68,2% (95% CI = 48,7-87,6%). Abbiamo anche l'analisi dei nostri dati nella H. pylori
stratificazione, ma non vi era alcuna differenza tra uno dei gruppi come mostrato nella Tabella 4.Table analisi 3 stratificazione dei livelli sierici di miR-320a tra i diversi gruppi di malattie gastriche (media ± DS )
miRNA
CON (n)
AG (n)
GC (n)
P-
valore
miR-320a
Maschio
≥60
5.02 ± 0.44 (27)
4.96 ± 0.43 (28)
4.99 ± 0.46 (26)
0,796
< 60
5.03 ± 0.53 (38)
5.05 ± 0.49 (33)
5.01 ± 0.39 (33)
0,859
femminile
≥60
4.98 ± 0.46 (22)
4,77 ± 0,39 (24)
4,63 ± 0,41 (23)
0.008 *
< 60
4.88 ± 0.31 (16)
4,91 ± 0.39 (9)
4,92 ± 0,42 (12)
0,774
P
*
: GC vs
controllo. n significa il numero del campione di ogni sottogruppo.
Tabella 4 livelli di espressione di miRNA nel siero (media ± SD), PG (mediana ± DS) tra i diversi gruppi di malattie gastriche quando stratificata in base allo stato H. pylori
Variabili

CON
AG
GC
P-
valore
HP-
miR-20a-5p
3.83 ± 0.71
3.88 ± 0.59
3,85 ± 0,70
0,926
Maschio
3.84 ± 0.72
3.90 ± 0.59
3.89 ± 0.34
0,931
Female
3.82 ± 0.71
3.86 ± 0.60
3.75 ± 0.53
0.881
let-7 bis
3.74 ± 0.31
3.81 ± 0.31
3.76 ± 0.25
0,505
Maschio
3.73 ± 0.31
3,84 ± 0,34
3.77 ± 0.25
0,36
femminile
3.76 ± 0.30
3,76 ± 0,28
3.74 ± 0.27
0.972
miR-320a
5.02 ± 0.48
4.90 ± 0.45
4,91 ± 0,47
0,311
Maschio
5,03 ± 0,50
4.97 ± 0.48
4.98 ± 0.44
0,813
femminile
4.99 ± 0.44
4.81 ± 0.41
4.74 ± 0.50
0,216
PGA
134.99 ± 92.27
96.78 ± 76.05
141.99 ± 125.80
0,056
PGC
15.13 ± 13.67
10.37 ± 9.02
23.15 ± 25.11
0.001
PGA /PGC
10.66 ± 4.81
11.00 ± 6.04
9.17 ± 6.28
0,22
Hp +
miR-20a-5p
3.69 ± 0.78
3.79 ± 0.79
3.81 ± 0.66
0,743
Maschio
3.75 ± 0.86
3.90 ± 0.31
3.86 ± 0.82
0,785
femminile
3.62 ± 0.66
3.53 ± 0.55
3.74 ± 0.43
0.542
let-7 bis
3.68 ± 0.38
3.74 ± 0.27
3.74 ± 0.31
0,661
Maschio
3.70 ± 0.31
3.73 ± 0.30
3,77 ± 0,33
0.717
femminile
3.66 ± 0.48
3.75 ± 0.18
3,70 ± 0,28
0.795
miR-320a
4.95 ± 0.44
4.98 ± 0.45
4.89 ± 0.40
0,634
maschi | 5.01 ± 0.49
5.05 ± 4.59
5.05 ± 0.46
0,961
femminile
4,87 ± 0,36
4.81 ± 0.38
4.72 ± 0.36
0.471
PGA
162.15 ± 112.44
125.81 ± 92.66
114.74 ± 75.23
0,058
PGC
24.82 ± 20.80
17,86 ± 13.95
23.10 ± 20.16
0,182
PGA /PGC
7.91 ± 4.49
7,97 ± 3,70
6.16 ± 3.57
0,06
correlazioni tra l'espressione dei miRNA nel siero e la loro del teorico bersaglio molecole PG
Per l'analisi di associazione, di espressione di miR-20a-5p non era correlata con i livelli di PGA (r = 0.110, p = 0.269
), e let-7 bis e miR-320a non erano correlati con PGC livelli (r = -0,162, -0,102; p = 0,102
, 0,306, rispettivamente), ma erano tutti positivamente correlata con il rapporto di PGA /PGC (r = 0,408, 0,255, 0,324; p =
< 0,001, 0,009, 0,001, rispettivamente) (Figura 1). Rispetto i miRNA studiati e le molecole bersaglio PG previsti con controlli, abbiamo trovato i livelli di PGA sierico nei pazienti CG sono diminuiti (130.1 ± 107.1 vs 146.3 ± 101.5, p = 0,276
) sono stati aumentati, e PGC livelli in pazienti GC (23.1 ± 23.0 vs 19.2 ± 17.6 p
= 0,174), anche se le differenze non erano significative. Il rapporto segnale /rumore PGC PGA nel gruppo GC è diminuita (7,86 ± 5,46 vs 9,52 ± 4,85, p = 0,039
, tabella 2), con un coefficiente di correlazione di 0,727 (Figura 1). Rispetto ai controlli, i livelli sierici di miR-320A sono diminuiti (4,90 ± 0,44 vs 4,99 ± 0,46, p = 0,153
) e livelli di PGC siero sono stati aumentati nel gruppo GC (23,1 ± 23,0 vs 19,2 ± 17,6 p
= 0,174), mostrando tendenze apparentemente opposte, ma le differenze non erano significative (Tabella 2). Figura 1 Scatter grafico trama. Figura 1-A - C. Il grafico a dispersione dei livelli di miRNA nel siero e le loro correlazioni con PGA /rapporto di PGC da gruppo di controllo. A. miR-20a-5p; B. let-7 bis; C. miR-320a. Figura 1-D. Il grafico a dispersione della correlazione tra i livelli sierici PGA e PGC. Tutto il grafico a dispersione ha mostrato l'analisi di associazione delle varianti tra assi X e Y
. Discussione
Recenti scoperte hanno presentato miRNA siero /plasma come potenziali biomarcatori per diverse patologie, tra cui tumori umani [28-31]. Tuttavia, gli studi di miRNA siero in relazione alle malattie gastriche sono stati limitati, e nessuna attenzione è stata posta al miRNA in serie di targeting lo stesso gene. Sulla base di una serie di miRNA previsti dal software di bioinformatica per indirizzare a PGA e /o PGC, abbiamo selezionato miR-20a-5p, let-7a e miR-320a per ulteriori studi. Abbiamo studiato il potenziale di miR-20a-5p, let-7a e miR-320a nella diagnosi di AG o di GC e la correlazione dei tre miRNA con le molecole bersaglio previsti PGA, PGC e PGA rapporto /PGC. L'espressione del miR-320a è stata inferiore nei pazienti di sesso femminile CG più anziani rispetto ai controlli, suggerendo che miR-320a può risultare un marker utile per la diagnosi di donne anziane con GC. miR-20a-5p, let-7a e miR-320a sono stati positivamente correlata con il rapporto segnale /rumore PGC PGA, che potrebbe riflettere indirettamente lo stato funzionale della mucosa gastrica.
Diversi studi hanno identificato tumore-specifici miRNA alterazioni nel plasma /siero dei pazienti affetti da cancro, e hanno dimostrato il potenziale di miRNA che circola come nuovi biomarcatori non invasivi per lo screening del cancro [12, 32]. I risultati del nostro studio hanno indicato differenze nel siero miR-20a-5p e lasciate-7a livelli tra i controlli, AG e GC gruppi, mentre l'espressione di miR-320a è caduto nel corso dei controlli, AG e GC gruppi. I livelli sierici di miR-320A erano più bassi nei pazienti di sesso femminile GC rispetto ai controlli, e questa differenza è stato particolarmente marcato nelle donne anziane, di età superiore ai 60 anni, suggerendo che miR-320a può essere un nuovo biomarker per la diagnosi clinica GC con la specificità della popolazione. Studi di miR-320a ad oggi sono stati limitati al suo ruolo nel regolare le funzioni fisiologiche della barriera emato-encefalica [33], in colangiocarcinoma intraepatico [34, 35], il cancro del colon [36] e la leucemia infantile [37]. Per quanto a nostra conoscenza, questo studio è il primo a riferire che miR-320a potrebbe fungere da biomarker del siero di GC, soprattutto nelle donne anziane. Anche se pochi studi hanno indagato i meccanismi, alcuni hanno riportato una relazione tra la sua PGC prevista del bersaglio e di genere, mentre altri hanno riferito che il rapporto segnale /rumore PGC PGA era correlata all'età, ma solo nelle donne [38, 39]. Software ha anche previsto che miR-320a si rivolge il recettore gamma estrogeno-correlati (http://​www.​targetscan.​org/​cgi-bin/​targetscan/​mamm_​31/​targetscan.​cgi?​species=​Human&​gid=​&​mir_​c=​&​mir_​nc=​&​mirg=​hsa-miR-320). Queste linee di evidenza suggeriscono che tutti miR-320a può giocare un ruolo importante nello sviluppo di GC nelle donne, e potrebbe indirettamente riflettere lo stato funzionale della mucosa gastrica. Il suo uso come biomarker sarebbe associato con i vantaggi di non-invasione, basso costo e maggiore stabilità. Tuttavia, sono necessari ulteriori studi in campioni più grandi di chiarire i suoi meccanismi e verificare il suo uso come biomarker nelle donne più anziane con GC. Naturalmente, i cambiamenti di miRNA forse non solo connessi con i cambiamenti di condizioni funzionali della mucosa gastrica, ma anche in relazione ad altri fattori, per esempio l'anemia [40], lo stimolo di microrganismo patogeno come H.pylor
[41 ] i, alcune proteine ​​coinvolte nella via di elaborazione miRNA come Drosha, Dicer e Argonaute [42, 43]. Gli altri fattori relativi devono essere considerati negli ulteriori studi in futuro
. I livelli sierici di PGA e PGC sembrano essere correlato alla quantità ghiandolari e cellulari della mucosa gastrica, e anche riflettono indirettamente la funzione segretario del corpus e /o gastrico gastrico antro. PGA è secreto dal corpus gastrica e l'angolo gastrico, mentre il PGC è secreta da tutto lo stomaco, tra cui il corpus, l'angolo e antro. Una diminuzione del rapporto segnale /rumore PGC PGA riflette lo sviluppo di lesioni atrofiche sulla mucosa gastrica [16], e un basso rapporto segnale /rumore PGC PGA è connesso ad un elevato rischio di GC [38, 44, 45]. Questo è stato quindi utilizzato come parametro efficace per lo screening individui ad alto rischio di GC nella popolazione, e può essere un biomarker clinicamente utile di GC e malattie precancerose quali AG [16, 38, 46, 47]. Broutet et al. ha riferito che, sebbene PGC è stata secreta da diversi siti nello stomaco, è stato legato al PGA; mentre PGA è aumentato rapidamente, PGC variato un po ', e il coefficiente di correlazione raggiunto 0.75 [38]. L'attuale studio anche calcolato un coefficiente di correlazione tra PGA e PGC di 0,727. Questa relazione potrebbe spiegare perché il rapporto PGA /PGC riflette lo stato funzionale della mucosa gastrica con maggiore precisione rispetto sia PGA o PGC da solo. Il nostro studio ha trovato alcuna relazione tra l'espressione di miR-20a-5p e PGA, let-7a e PGC, o miR-320a e PGC, ma c'erano correlazioni positive tra ciascuno dei tre e il rapporto segnale /rumore PGC PGA che era già noto come biomarker utile per la diagnosi della malattia, e le miRNA studiati erano sincrono con il noto PGA /rapporto PGC che suggerisce il loro potenziale come biomarcatori utili per la diagnosi della malattia.
Considerando H. pylori
è un importante fattore ambientale nello stomaco che è anche una classe Icarcinogen definita dalla Organizzazione mondiale della sanità (OMS), che l'analisi dei tre miRNA nella stratificazione HP tra le diverse malattie gastriche, ma ha trovato alcuna differenza. Sia che H. pylori
e /o di altri fattori ambientali influenzano questa associazione ha bisogno di più studi su campioni più grandi in futuro.
C'era qualche limitazione nel nostro studio. In primo luogo, i miRNA selezionati potranno funzionalmente bersaglio PGA /C e /o, almeno, era solo la prova dal software bioinformazione, sono necessarie alcune prove per gli esperimenti più funzionali. In secondo luogo, la correlazione di espressione nel tessuto dei miRNA e la sua proteina prevista del bersaglio è necessario per ulteriori indagini. In terzo luogo, la correlazione tra miRNA espressione e caratteristiche clinico-patologici di pazienti con cancro gastrico, come ad esempio la classificazione di Borrmann, modello di crescita, stadio TNM, la profondità di invasione e metastasi linfonodali, et al. non sono stati ulteriormente analizzati a causa di informazioni biopsia limitata mancante. In quarto luogo, la fonte di controlli non è stata la popolazione normale, ma con una gastrite superficiale minima secondo la diagnosi patologica, e la gastrite è stato anche appartiene una cascata di sviluppo GC.
Conclusione
In conclusione, abbiamo dimostrato che il siero retrovisori 320A livelli erano inferiori in pazienti CG femmine di età superiore a 60 rispetto ai controlli, e possono quindi rappresentare un indicatore importante per la diagnosi GC in questo gruppo. E i livelli di miR-20a-5p, let-7a e miR-320a sono stati correlati positivamente con PGA /rapporto di PGC, che potrebbe riflettere indirettamente lo stato funzionale della mucosa gastrica.
Note
Qian Xu, Qi- Guan Dong contribuito in maniera uguale a questo lavoro
Abbreviazioni
miRNA:.
microRNA
PG:
Pepsinogen

PGA:
Pepsinogen Un
PGC:
Pepsinogeno C
qRT-PCR:
quantitativa trascrizione inversa reazione a catena della polimerasi
ELISA:
Enzyme saggio di immunoassorbimento
curva ROC:
curva ROC

AUC:
L'area sotto la curva
nt:
nucleotide
cDNA :
DNA complementare
AG:
gastrite atrofica
GC:.
cancro gastrico


Dichiarazioni
Ringraziamenti
Questo lavoro è sostenuto da finanziamenti del programma di ricerca di base chiave nazionale della Cina (973 Programma Rif. 2010CB529304), la National Science Foundation naturale della Cina (Rif No.31200968), e la Fondazione di Scienza e Tecnologia nella provincia di Liaoning (Rif. 2.011.225,002 mila).
Autori 'presentato originali dei file per le immagini
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autori
YY concepito e progettato questo studio e rivisto il manoscritto. QG-D è stato responsabile per l'esperimento ed eseguito l'interpretazione dei dati. QX coinvolto nella scrittura della carta e la revisione del manoscritto critica per importante contenuto intellettuale. LP-S partecipato alla progettazione dello studio in parte. CY-H eseguita l'analisi statistica. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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