Expressão de soro de miR-20a-5p, deixe-7a e miR-320a e suas correlações com pepsinogen na gastrite atrófica e câncer gástrico: um estudo caso-controle study

expressão de soro de miR-20a-5p, deixe-7a e miR- 320a e suas correlações com pepsinogen na gastrite atrófica e câncer gástrico: um estudo de caso-controle da arte abstracta
Fundo
a identificação de miRNAs de série visando a mesma proteína gástrica funcional poderia fornecer novas e eficazes biomarcadores sorológicos para o diagnóstico de câncer gástrico (GC). O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial de miR-20a-5p, deixe-7a e miR-320a no diagnóstico de AG ou GC ea correlação dos três miRNAs com suas moléculas alvo previstos PGA, PGC e PGA /PGC ratio.
Métodos
O total de 291 pacientes incluídos 103 controles (CON), 94 com gastrite atrófica (AG) e 94 com o GC. Os níveis séricos de miARNs foram detectados por reacção quantitativa reversa cadeia de polimerase e pepsinogénios no soro A (PGA) e C (PGC) foram determinadas por ensaios de imunoabsorção enzimática.

Resultados O nível sérico de miR-320a diminuída através os controles, AG e GC grupos que eram as cascatas de desenvolvimento GC, enquanto que não houve diferenças significativas nos níveis de miR-20a-5p e deixe-7a entre os controles, AG e GC grupos. Quando estratificados por sexo e idade, soro expressão de miR-320a foi menor nos pacientes GC sexo feminino do que nos controles (p = 0,035)
, especialmente em pacientes do sexo feminino GC com idade superior a 60 anos (p = 0,008)
. Para distinguir pacientes GC sexo feminino com idade acima de 60 anos, a área sob a curva ROC para miR-320a foi 0,699, eo melhor ponto de corte foi 4,76 com sensibilidade de 65,2% e especificidade de 68,2%. Em relação às correlações entre o miR-20a-5p selecionado, deixe-7a, miR-320a e PGs, descobrimos que houve correlações positivas entre todos os três ea proporção de PGA /PGC (r = 0,408, 0,255, 0,324; p
= < 0,001, 0,009, 0,001, respectivamente), mas não houve relação entre a expressão de soro de miR-20a-5p e sua PGA alvo previsto, ou entre deixá-7a e miR-320a e seu alvo previsto PGC . Soro de miR-320a foi diminuída e PGC foi aumentada no grupo GC em comparação com o grupo de controlo.

Conclusões Os níveis de soro de miR-320a foram menores em pacientes do sexo feminino GC mais de 60 anos do que em controlos, o que pode proporcionar um potencial marcador valioso para o diagnóstico de mulheres mais velhas com GC. Os níveis de soro de miR-20a-5p, deixe-7a e miR-320a foram positivamente correlacionados com PGA /PGC, o que pode refletir indiretamente o estado funcional da mucosa gástrica.
Doença Palavras-chave
Serum microRNA Biomarcador Pepsinogen gástrica fundo
é essencial para explorar biomarcadores sensíveis, específicos e não-invasivo de tumores que podem ser utilizadas para um diagnóstico precoce, o prognóstico, estimar e recorrência de previsão. Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de RNAs não-codificantes altamente conservadas e endógenos 19-24 nucleotídeos de comprimento, que regulam a expressão de genes-alvo ao nível pós-transcricional. Acumulando evidência indica que miARNs estão envolvidas em processos biológicos importantes relacionadas com a proliferação, apoptose, diferenciação, metástase, angiogénese e resposta imunitária, ao passo que a desregulação de miARN pode ser crucial na iniciação do cancro, a progressão e resultado do tratamento [1, 2]. Foi recentemente demonstrado que o soro ou plasma humano contém grandes quantidades de miARNs estáveis, os perfis de expressão de que poderia potencialmente ser usadas para identificar vários tipos de cancro, incluindo o cancro da próstata, do linfoma de células B grandes, o cancro do ovário, cancro do fígado e não . câncer de pulmão de células -pequeno [3-7]
miRNAs são parte de uma rede de regulação complexa; múltiplos genes pode ser regulada por um miARN, mas um único gene podem também ser subtilmente regulada por um grupo de miARNs [2]. Poucos estudos investigaram a associação entre miRNAs soro e doenças gástricas [8, 9], vários estudos voltados para a expressão miRNAs plasma [10-12], Liu H et al. identificada miR-378 como um biomarcador de soro [8], e R Liu et al. selecionados cinco miRNAs (miR-1, -20, -27a, -34 e -423-5p) como uma impressão digital para o diagnóstico GC [9]. Mas nenhuma atenção tem sido dada a segmentação do mesmo gene por miRNAs em série. No entanto, esses estudos podem ajudar a esclarecer as funções comuns de miRNAs série de segmentação genes individuais e, assim, melhorar a nossa compreensão dos seus papéis em câncer gástrico (GC) e as doenças pré-cancerosas.
Pepsinogênios Humanos (PGs) estão inativos pró-enzimas do pepsina enzima digestiva específica, que se originam a partir da mucosa gástrica e podem ser classificadas bioquimicamente e imunoquimicamente em PGA e PGC [13, 14]. Estudos anteriores mostraram que a expressão PGC foi negativamente correlacionado com o grau de malignidade da mucosa gástrica e o desenvolvimento das lesões gástricas [15]. Uma baixa relação de PGA /PGC pode ser utilizado como um biomarcador serológica de gastrite atrófica (AG), que é conhecido por ser uma condição pré-cancerosa [15, 16]. Vários miRNAs foram identificados por pacotes de dois-alvo preditores de genes de software (Targets microcosmo e TargetScan Humana), alguns dos quais direcionados PGA (miR-212, miR-132, miR-20a-5p, miR-93) ou PGC (miR- 662, miR-365, deixe-7a, miR-320a). Os miRNAs estreitamente relacionadas com a GC ou outras doenças malignas foram selecionados para uma investigação mais aprofundada no estudo atual. miR-20a-5p, um membro do cluster miR-17-92, foi regulada em gástrico, colo-rectal e adenocarcinomas pancreáticos in situ
[17-19], expressão tecidual de deixá-7a foi correlacionada com metástases em linfonodos de GC [20], e miR-320a foi regulada no cancro da mama primário e correlacionada com a invasão e metástase [21-23]. Estes três miRNAs só foram previamente investigados em
situ, ea maioria dos estudos concentraram-se em suas funções; nenhum estudo investigou os seus papéis potenciais como biomarcadores séricos para o diagnóstico de GC e as doenças pré-cancerosas. E se o miARNs funcionais previstas (miR-20a-5p, let-7a e miR-320a) pode ser identificado como um biomarcador para o diagnóstico de doença pré-cancerosa CG e? Além disso, suas relações com o seu pepsinogen alvo previsto são desconhecidos.
Este estudo, portanto, teve como objetivo avaliar o potencial de miR-20a-5p, deixe-7a e miR-320a no diagnóstico de GC ea correlação dos três miRNAs e PGA, PGC e PGA rácio /PGC. Foram investigados os níveis séricos dos três miARNs seleccionados em GC e a sua condição pré-cancerosa, assim como a correlação entre os níveis séricos de miR-20a-5p e sua PGA alvo previsto, e entre o soro let-7a e miR-320a e o seu objectivo previsto PGC . Os resultados talvez identificar vários marcadores serológicos valiosos para doenças gástricas, em certa medida, bem como o fornecimento de evidências experimentais e de referência para auxiliar ainda mais a nossa compreensão das funções dos miARNs de soro no processo da carcinogénese.
Métodos
assuntos
Um total de 291 indivíduos submetidos a exames de endoscopia gástrica no primeiro Hospital Afiliado da China Medical University 2004-2011 foram incluídos neste estudo. Informação sobre sexo, idade e outros factores foi obtida por meio de um questionário administrada a cada indivíduo. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da China University Medical Review Humano. consentimento informado por escrito foi obtido dos participantes de acordo com a Declaração de Helsínquia e da sua revisão posterior. Todos os pacientes foram submetidos à endoscopia biópsia da mucosa gástrica, e as amostras de biópsia foram incluídos em parafina e corados pela coloração HE para diagnóstico histológico que foi diagnosticado por dois patologistas experientes. Casos com gastrite superficiais mínimas foram tratados como os controles [24]. O grupo gastrite atrófica foi definida de acordo com a histopatologia. Os diagnósticos histopatológicos foi incluído ligeira, moderada e gravidade, e só o grau de moderado e gravidade foi incluídos neste estudo de caso-controle. Noventa e quatro pacientes foram confirmados histologicamente casos de adenocarcinoma gástrico; 75 poderiam ser classificados de acordo com a classificação de Lauren, enquanto 19 não podia. E entre os 75 casos [25], 22 dos 75 casos GC eram do tipo intestinal, 45 eram do tipo difuso e 8 eram do tipo misto. As amostras do grupo câncer gástrico combinado na composição etária e sexo com pacientes com controles e com gastrite atrófica. Isolamento
RNA sérico e reação em cadeia de polimerase reversa quantitativa ensaio (qRT-PCR)
sangue Aproximadamente 6 ml venoso foi coletado de cada sujeito. ARN total no soro foi extraído utilizando um método descrito por Liu R et al. [9], com algumas modificações. O soro foi separado por centrifugação a 3000 g durante 10 min
, seguido por uma centrifugação de 15 minutos a alta velocidade a 12000 g
para remover completamente os detritos celulares. O soro sobrenadante foi recuperado e armazenado a -80 ° C até posterior processamento. O ARN total foi extraído a partir de 200 ul de soro através de purificação de fenol ácido /clorofórmio e centrifugação em álcool isopropílico. Cada amostra foi tudo em 20 mL livre de RNA DDH 2O solução e seis microlitros de RNA total foi reverso-transcrito para cDNA usando One Step PrimeScript miRNA cDNA Synthesis Kit (Takara, Dalian, China). PCR em tempo real foi realizado utilizando um kit de detecção de miARN miRcute qPCR (Tiangen, Pequim, China) na Cycler Térmico Dados real do sistema do tempo (Takara). Para calcular os níveis dos miARNs, HSA-miR-20a-5p sintético, HSA-let-7a e HSA-miR-320a em concentrações conhecidas (Takara) foram também sujeitos a transcrição reversa e amplificado. A concentração de cada miARN foi em seguida calculada de acordo com a curva padrão. Todas as reações, incluindo controles não-modelo, foram realizados em duplicado.
Soro PG e H. pylori
níveis
concentrações séricas de PG e H.pylori
níveis (HP) foram determinados pela enzima ligada immunosorbent assay (ELISA) com PGA, PGC e H. pylori
kits de ELISA (Biohit Co., Ltd., Helsínquia, Finlândia) [16, 26, 27]. As amostras foram doseadas de modo aleatório, cego para os resultados de histologia. Cada lote incluiu controles comerciais e controles de plasma cegos para avaliar a variação de laboratório. Todos os controles de plasma estavam dentro dos médios ± 2 SDs. Cinco por cento de todas as amostras foram ensaiadas em duplicado. A análise estatística
of the log 10 das miARN número de cópias representados os níveis dos miARNs, e as diferenças nos níveis de miARN entre os grupos bem como em a análise de estratificação foram comparados por análise unidireccional da variância. Curvas receiver operating characteristic (ROC) e a área sob a curva ROC (AUC) foram utilizados para avaliar os efeitos de diagnóstico dos miARNs e para determinar pontos de corte adequadas. Medianas concentrações séricas PG foram comparados entre os três grupos, bem como na análise estratificação por meio de testes de Kruskal-Wallis H. coeficiente de correlação de Pearson foi utilizado para estimar a correlação entre miRNAs e concentrações PG. O gráfico de dispersão era representar a análise de correlação entre os níveis de miRNA do soro e PGA rácio /PGC, e entre os níveis PGA e PGC. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando SPSS 17.0 (SPSS Inc. Chicago, EUA). A frente e verso p
valor < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Resultados
Demografia dos sujeitos do estudo
Os 291 pacientes incluídos 103 controles, 94 pacientes com AG e 94 com GC. Como mostrado na Tabela 1, não houve diferenças significativas em termos de sexo (p = 0,948
), idade (p = 0,654
) e H.pylori
estado de infecção (p = 0,580
) entre três groups.Table 1 Características dos sujeitos do estudo
Variáveis ​​
Controle
gastrite atrófica
o câncer gástrico
n = 103

n = 94
n = 94
Sexo Masculino

65 (63,1%)
61 (64,9%)
59 (62,8%)
Feminino
38 (36,9%)
33 (35,1%)
35 (37,2%)
P
= 0,948
Idade (anos)
Média
59,1 ± 10,6
60,4 ± 11,2
60.2 ± 11.1
Faixa
23-80
28-83
27-80
P
= 0,654
H.pylori
estado de infecção
HP-
60 (58,3%)
48 (51,1%)
53 (56,4%)
Hp +
43 (41,7%)
46 (48,9%)
41 (43,6%)
P
= 0,580
correlações entre a expressão dos miRNAs no soro e doenças gástricas
Não houve diferenças significativas nos níveis de miR- níveis 20a-5p e deixe-7A entre os controles, AG e grupos GC (p = 0,581
, 0,445, respectivamente), mas miR-320a diminuiu gradualmente entre os diferentes grupos (4,99 ± 0,46 vs 4,94 ± 0,45 vs. 4,90 ± 0,44, p = 0,152
, Tabela 2) .table 2 níveis de miRNAs no soro (média ± SD), PG (média ± DP) entre os diferentes grupos de doenças gástricas
Variáveis ​​

CON
AG
GC
P-
valor
miR-20a-5p
3,77 ± 0,74
3,84 ± 0,69
3,83 ± 0,68
0,581
Masculino
3,80 ± 0,77
3,90 ± 0,73
3,88 ± 0,78
0,59
Feminino
3,72 ± 0,69
3,73 ± 0,60
3,75 ± 0,47
0,855
deixá-7a
3,72 ± 0,34
3,77 ± 0,29
3,75 ± 0,28
0,445
Masculino
3,72 ± 0,31
3,78 ± 0,32
3,77 ± 0,28
0,367
Feminino
3,71 ± 0,39
3,76 ± 0,24
3,72 ± 0,28
0,93
miR-320a
4,99 ± 0,46
4,94 ± 0,45
4,90 ± 0,44
0,152
Masculino
5,03 ± 0,49
5,01 ± 0,46
5,00 ± 0,42
0,76
feminino
4,93 ± 0,40
4,81 ± 0,39
4,73 ± 0,43
0,035 *
PGA
146,3 ± 101,5
111,0 ± 85,4
130,1 ± 107,1
0,044 §
PGC
19,2 ± 17,6
14,0 ± 12,2
23,1 ± 23,0
0,003 §
PGA /PGC
9,52 ± 4,85
9,52 ± 5,23
7,86 ± 5,46
0,039 §
P
*
: GC vs
Controle; P
§
: diferença entre os três grupos. CON: Casos com gastrite superficial mínima foram tratados como os controles; AG: gastrite atrófica; GC:. Câncer gástrico
estratificação por sexo e idade mostraram que a expressão de miR-320a foi menor nos pacientes GC sexo feminino do que nos controles (p = 0,035)
, ea diferença foi especialmente significativa em pacientes do sexo feminino GC mais de 60 anos anos, em comparação com os controles (p
= 0,008) (Tabela 3). A AUC do miR-320a para detectar pacientes GC fêmeas com idade superior a 60 anos era de 0,699. O melhor ponto de corte foi 4,76, com uma sensibilidade de 65,2% (IC 95% = 45,8-84,7%), e uma especificidade de 68,2% (IC 95% = 48,7-87,6%). Nós também a análise nossos dados na H. pylori
estratificação, mas não houve diferença entre qualquer dos grupos, como mostrado na Tabela 3 Estratificação 4.Table análise do nível sérico de miR-320a entre os diferentes grupos de doenças gástricas (média ± SD )
miRNA
CON (n)
AG (n)
GC (n)
P-
valor
miR-320a
Masculino
≥60
5,02 ± 0,44 (27)
4,96 ± 0,43 (28)
4,99 ± 0,46 (26)
0,796 Art < 60
5,03 ± 0,53 (38)
5,05 ± 0,49 (33)
5,01 ± 0,39 (33)
0,859
Feminino
≥60
4,98 ± 0,46 (22)
4,77 ± 0,39 (24)
4,63 ± 0,41 (23)
0,008 * Art < 60
4,88 ± 0,31 (16)
4,91 ± 0.39 (9)
4,92 ± 0,42 (12)
0,774
P
*
: GC vs
de controle. n significa o número da amostra de cada subgrupo.
Tabela 4 níveis de expressão de miRNAs no soro (média ± SD), PG (média ± DP) entre os diferentes grupos de doenças gástricas quando estratificados por estado H.pylori
Variáveis ​​

CON
AG
GC
P-
valor
HP-
miR-20a-5p
3,83 ± 0,71
3,88 ± 0,59
3,85 ± 0,70
0,926
Masculino
3,84 ± 0,72
3,90 ± 0,59
3,89 ± 0,34
0,931
feminino
3,82 ± 0,71
3,86 ± 0,60
3,75 ± 0,53
0,881
deixá-7a
3,74 ± 0,31
3,81 ± 0,31
3,76 ± 0,25
0,505
Masculino
3,73 ± 0,31
3,84 ± 0,34
3,77 ± 0,25
0,36
Feminino
3,76 ± 0,30
3,76 ± 0,28
3,74 ± 0,27
0,972
miR-320a
5,02 ± 0,48
4,90 ± 0,45
4,91 ± 0,47
0,311
Masculino
5,03 ± 0,50
4,97 ± 0,48
4,98 ± 0,44
0,813
Feminino
4,99 ± 0,44
4,81 ± 0,41
4,74 ± 0,50
0,216
PGA
134,99 ± 92,27
96,78 ± 76,05
141,99 ± 125,80
0,056
PGC
15,13 ± 13,67
10,37 ± 9,02
23,15 ± 25,11
0,001
PGA /PGC
10,66 ± 4,81
11,00 ± 6,04
9,17 ± 6,28
0,22
Hp +
miR-20a-5p
3,69 ± 0,78
3,79 ± 0,79
3,81 ± 0,66
0,743
Homem
3,75 ± 0,86
3,90 ± 0,31
3,86 ± 0,82
0,785
Feminino
3,62 ± 0,66
3,53 ± 0,55
3,74 ± 0,43
0,542
deixe-7a
3,68 ± 0,38
3,74 ± 0,27
3,74 ± 0,31
0,661
Masculino
3,70 ± 0,31
3,73 ± 0,30
3,77 ± 0,33
0,717
Feminino
3,66 ± 0,48
3,75 ± 0,18
3,70 ± 0,28
0,795
miR-320a
4,95 ± 0,44
4,98 ± 0,45
4,89 ± 0,40
0,634
Masculino
5,01 ± 0,49
5,05 ± 4,59
5,05 ± 0,46
0,961
Feminino
4,87 ± 0,36
4,81 ± 0,38
4,72 ± 0,36
0,471
PGA
162,15 ± 112,44
125,81 ± 92,66
114,74 ± 75,23
0,058
PGC
24,82 ± 20,80
17,86 ± 13.95
23,10 ± 20,16
0,182
PGA /PGC
7,91 ± 4,49
7,97 ± 3,70
6,16 ± 3,57
0,06
correlações entre a expressão dos miRNAs no soro e sua previu moléculas PG-alvo
Para a análise de associação, expressão de miR-20a-5p não se correlacionou com a PGA níveis (r = 0,110, p = 0,269
), e deixe-7a e miR-320a não se correlacionaram com PGC níveis (r = -0,162, -0,102; p
= 0,102, 0,306, respectivamente), mas todos foram positivamente correlacionados com a proporção de PGA /PGC (r = 0,408, 0,255, 0,324; p =
< 0,001, 0,009, 0,001, respectivamente) (Figura 1). Quando comparados os miRNAs estudados e as moléculas PG-alvo previstas com controles, encontramos níveis PGA soro em pacientes do GC foram diminuiu (130,1 ± 107,1 vs 146,3 ± 101,5, p
= 0,276), e PGC níveis em pacientes do GC foram aumentadas (23,1 ± 23,0 vs 19,2 ± 17,6 p
= 0,174), embora as diferenças não foram significativas. A /rácio PGC PGA no grupo GC foi diminuída (7,86 ± 5,46 vs 9,52 ± 4,85, p = 0,039
, Tabela 2), com um coeficiente de correlação de 0,727 (Figura 1). Comparados com os controles, os níveis séricos de miR-320a foram diminuídos (4,90 ± 0,44 vs 4,99 ± 0,46, p = 0,153
) e níveis séricos PGC foram aumentados no grupo GC (23,1 ± 23,0 vs 19,2 ± 17,6 p
= 0,174), mostrando tendências aparentemente opostas, embora as diferenças não foram significativas (Tabela 2). Figura gráfico lote 1 Scatter. Figura 1-A - C. O gráfico de dispersão dos níveis séricos de miRNA e suas correlações com PGA rácio /PGC do grupo controle. A. miR-20a-5p; B. deixá-7a; C. miR-320a. Figura 1-D. O gráfico de dispersão da correlação entre os níveis séricos de PGA e PGC. Todo o gráfico de dispersão mostrou a análise de associação das variantes entre x e eixo y.
Discussão
descobertas recentes têm apresentado miRNAs de soro /plasma como potenciais biomarcadores para várias condições de doença, incluindo cânceres humanos [28-31]. No entanto, estudos de miRNAs no soro em relação às doenças gástricas têm sido limitados, e nenhuma atenção tem sido dada à miRNAs alvo em série do mesmo gene. Com base em uma série de miRNAs preditos pelo software de bioinformática para alvejar a PGA e /ou PGC, foram selecionados miR-20a-5p, deixe-7a e miR-320a para um estudo mais aprofundado. Nós investigamos o potencial de miR-20a-5p, deixe-7a e miR-320a no diagnóstico de AG ou GC ea correlação dos três miRNAs com suas moléculas alvo previstos PGA, PGC e PGA rácio /PGC. A expressão de miR-320a foi menor nos pacientes do sexo feminino GC mais velhos do que nos controles, sugerindo que miR-320a pode ser um marcador valioso para o diagnóstico de mulheres mais velhas com GC. miR-20a-5p, let-7a e miR-320a foram positivamente correlacionados com a proporção de PGA /PGC, o que pode indirectamente reflecte o estado funcional da mucosa gástrica.
Diversos estudos identificaram alterações miARNs específicos de tumores no plasma /soro de pacientes com câncer, e têm mostrado o potencial dos miRNAs circulantes como novos biomarcadores não invasivos para o rastreio do cancro [12, 32]. Os resultados do nosso estudo indicou não haver diferenças no soro miR-20a-5p e deixe-7A níveis entre os controles, grupos AG e GC, enquanto que a expressão de miR-320a caíram ao longo dos controles, AG e GC grupos. Níveis séricos de miR-320a foram menores nos pacientes GC fêmeas do que nos controles, e esta diferença foi especialmente acentuado em mulheres mais velhas, com idade superior a 60, o que sugere que miR-320a pode ser um novo biomarcador para o diagnóstico clínico GC com especificidade população. Estudos de miR-320a até à data têm sido limitada aos seus papéis na regulação das funções fisiológicas da barreira sangue-cérebro [33], e em colangiocarcinoma intra-hepática [34, 35], o cancro do cólon [36] e leucemia infantil [37]. Para o melhor de nosso conhecimento, o presente estudo é o primeiro a relatar que miR-320a poderia atuar como um biomarcador de soro de GC, especialmente em mulheres mais velhas. Embora poucos estudos investigaram os seus mecanismos, algumas pessoas relataram uma relação entre a sua PGC-alvo previsto e sexo, enquanto outros relataram que o quociente PGA /PGC foi relacionada com a idade, mas apenas em mulheres [38, 39]. O software também previu que o miR-320a tem como alvo o receptor gama relacionada com estrogénio (http://​www.​targetscan.​org/​cgi-bin/​targetscan/​mamm_​31/​targetscan.​cgi?​species=​Human&​gid=​&​mir_​c=​&​mir_​nc=​&​mirg=​hsa-miR-320). Estas linhas de evidência sugerem que o miR-320a pode desempenhar um papel importante no desenvolvimento de GC em mulheres, e pode, indirectamente, reflectem o estado funcional da mucosa gástrica. A sua utilização como um biomarcador seria associada com as vantagens da não-invasão, baixo custo e maior estabilidade. No entanto, mais estudos são necessários em amostras maiores para esclarecer seus mecanismos e verificar a sua utilização como um biomarcador em mulheres mais velhas com GC. Naturalmente, as mudanças de miARNs talvez não apenas relacionadas com as alterações de condições de função da mucosa gástrica, mas também relacionada com alguns outros factores, por exemplo a anemia [40], o estímulo de microrganismos patogénicos tais como H.pylor
[41 ] i, algumas proteínas envolvidas na via de processamento de miRNAs como Drosha, Dicer e Argonaute [42, 43]. Os outros fatores relacionados devem ser consideradas nos estudos adicionais no futuro.
Os níveis séricos de PGA e PGC parece estar relacionada às quantidades glandulares e celulares da mucosa gástrica, e também, indiretamente, refletem a função de secretário do corpus e /ou gástrica gástrico antro. PGA é segregada a partir do corpo gástrico e o ângulo gástrica, enquanto PGC é secretado a partir de todo o estômago, incluindo o corpo, ângulo e antro. Uma diminuição na proporção de PGA /PGC reflecte o desenvolvimento de lesões atróficas na mucosa gástrica [16], e um rácio baixo de PGA /PGC está relacionada com um risco elevado de GC [38, 44, 45]. Isto tem, por conseguinte, sido utilizada como um parâmetro eficaz para o rastreio de indivíduos em risco elevado de GC na população, e pode ser um biomarcador clinicamente útil de GC e doenças pré-cancerosas, tais como AG [16, 38, 46, 47]. Broutet et ai. relataram que, embora PGC foi segregada a partir de diferentes locais do estômago, que estava relacionado com PGA; enquanto PGA aumentou rapidamente, PGC variou ligeiramente, eo coeficiente de correlação atingiu 0,75 [38]. O presente estudo também calculou um coeficiente de correlação entre PGA e PGC de 0,727. Esta relação pode explicar por que a razão de PGA /PGC reflecte o estado funcional da mucosa gástrica mais precisamente do que qualquer um sozinho de PGA ou PGC. Nosso estudo não encontrou nenhuma relação entre a expressão de miR-20a-5p e PGA, deixe-7a e PGC, ou miR-320a e PGC, mas houve correlações positivas entre cada um dos três ea relação PGA /PGC que já era conhecido como um biomarcador útil para o diagnóstico da doença, e os miARNs estudadas foram síncrona com o PGA relação conhecida /PGC sugerindo o seu potencial como biomarcadores úteis para o diagnóstico da doença. Considerando
H. pylori
é um factor ambiental importante no estômago que é também um Icarcinogen classe definida pela Organização Mundial da Saúde (OMS), que a análise das três miRNAs na estratificação HP entre as doenças gástricas diferentes, mas não encontraram nenhuma diferença. Se H.pylori
e /ou outros fatores ambientais afetam essa associação precisa de mais estudos em amostras maiores no futuro.
Havia alguma limitação em nosso estudo. Em primeiro lugar, os miARN alvo seleccionadas pode funcionalmente PGA /C e /ou, pelo menos, foi apenas prova pelo software bioinformação, são necessárias algumas evidências para as experiências funcionais adicionais. Em segundo lugar, a correlação da expressão no tecido da miARN alvo e a sua proteína predita é necessária para uma investigação mais aprofundada. Em terceiro lugar, a correlação de expressão miRNAs e características clínico-patológicas de pacientes com câncer gástrico, como a classificação de Borrmann, padrão de crescimento, estágio TNM, profundidade de invasão e metástase linfonodal, et al. Não foram ainda analisados ​​por causa da informação limita-biópsia em falta. Em quarto lugar, a fonte de controlos não foi a população normal, mas com um gastrite superficial mínima de acordo com o diagnóstico patológico, e gastrite foi também pertence uma cascata de desenvolvimento de GC.

Conclusão Em conclusão, foi demonstrado que o soro miR- 320a níveis foram menores em pacientes do sexo feminino com idades de GC superior a 60 do que em controlos, e pode, assim, representar um marcador de valor para o diagnóstico de GC neste grupo. E os níveis de miR-20a-5p, deixe-7a e miR-320a foram positivamente correlacionados com PGA rácio /PGC, o que poderia refletir indiretamente o estado funcional da mucosa gástrica.
Notas
Qian Xu, Qi- Guan Dong contribuiu igualmente para este trabalho
abreviações
miRNA:.
microRNA
PG:
Pepsinogen

PGA:
Pepsinogen A
PGC:
Pepsinogen C
qRT-PCR:
quantitativa RT-PCR
ELISA:
ensaio imunoenzimático indireto
curva ROC:
curva ROC

AUC:
A área sob a curva
nt:
nucleotídeo
cDNA :
DNA complementar
AG:
gastrite atrófica
GC:.
O câncer gástrico


Declarações
Agradecimentos
Este trabalho é apoiado por bolsas do Programa de Pesquisa chave básica Nacional da China (973 Programa rEF. 2010CB529304), a National Science Foundation Natural da China (Ref No.31200968), ea Fundação de Ciência e Tecnologia na província de Liaoning (REF 2011225002.).
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dos autores
YY concebido e desenhado este estudo e revisão do manuscrito. QG-D foi responsável pela experiência e realizada a interpretação dos dados. QX envolvido em escrever o papel e revisão manuscrito crítica do conteúdo intelectual. LP-S participou no desenho do estudo em parte. CY-H realizada a análise estatística. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

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