La expresión de miR-20a suero-5p, let-7a, y miR-320a y su correlación con el pepsinógeno en gastritis atrófica y cáncer gástrico: expresión de un study

de casos y controles de suero de miR-20a-5p, let-7a, y miR 320a y su correlación con el pepsinógeno en gastritis atrófica y cáncer gástrico: un estudio de casos y controles
Resumen Antecedentes

la identificación de miRNAs serie orientado a la misma proteína funcional gástrica podría proporcionar biomarcadores serológicos nuevas y eficaces para el diagnóstico de cáncer gástrico (GC). El objetivo de este estudio fue evaluar el potencial de miR-20a-5p, let-7a y miR-320a en el diagnóstico de AG o GC y la correlación de los tres miRNAs con sus moléculas objetivo previsto PGA, PGC y PGA /PGC relación.
Métodos comentario El total de 291 pacientes incluidos 103 controles (cON), 94 con gastritis atrófica (AG) y 94 con GC. Los niveles séricos de miRNAs fueron detectados por reversa cuantitativa reacción en cadena de la polimerasa con transcripción y pepsinógeno sérico A (PGA) y C (PGC) se determinaron mediante ensayos inmunoenzimáticos.
Resultados
nivel sérico de miR-320a se redujo a través los controles, los grupos AG y GC que eran las cascadas de desarrollo GC, mientras que no hubo diferencias significativas en los niveles de miR-20a-5p y let-7a entre los controles, grupos de AG y GC. Cuando se estratificó por sexo y edad, suero expresión de miR-320a fue menor en los pacientes con cáncer gástrico femeninos que en los controles (p = 0,035)
, especialmente en pacientes con cáncer gástrico mujeres mayores de 60 años (p = 0,008)
. Para distinguir los pacientes con GC mujeres mayores de 60 años, el área bajo la curva ROC para el miR-320a era 0,699, y el mejor punto de corte fue de 4,76 con una sensibilidad del 65,2% y una especificidad del 68,2%. En cuanto a las correlaciones entre el miR-20a-5p seleccionado, let-7a, miR-320a y PGs, se encontró que hubo correlaciones positivas entre todos los tres y la relación de PGA /PGC (r = 0,408, 0,255, 0,324; p
= < 0,001, 0,009, 0,001, respectivamente), pero no hubo una relación entre la expresión de miR-20a suero-5p y su PGA prevista del blanco, o entre let-7a y miR-320a y su objetivo predicho PGC . Suero de miR-320a y se redujo PGC se incrementó en el grupo GC en comparación con el grupo control.
Conclusiones
Los niveles de suero de miR-320a fueron menores en los pacientes GC femeninos mayores de 60 años que en los controles, lo que puede proporcionar una potencial valioso marcador para el diagnóstico de las mujeres mayores con GC. Los niveles de suero de miR-20a-5p, let-7a y miR-320a se correlacionaron positivamente con la PGA /PGC, lo que puede reflejar indirectamente el estado funcional de la mucosa gástrica.
Enfermedad Palabras clave
Suero biomarcadores microARN Pepsinogen gástrico antecedentes
es esencial explorar biomarcadores sensibles, específicos y no invasivas de tumores que se pueden utilizar para el diagnóstico precoz, el pronóstico y la recurrencia, la estimación de la previsión. Los microARN (miRNA) son una clase de ARN no codificantes muy conservadas y endógenos 19-24 nucleótidos de longitud, que regulan la expresión de genes diana a nivel post-transcripcional. La acumulación de pruebas indica que miRNAs están involucrados en importantes procesos biológicos relacionados con la proliferación, la apoptosis, la diferenciación, la metástasis, la angiogénesis y la respuesta inmune, mientras que la desregulación de miRNAs puede ser crucial en la iniciación del cáncer, la progresión y el resultado del tratamiento [1, 2]. Recientemente se ha demostrado que el suero o plasma humano contiene grandes cantidades de miRNAs estables, los perfiles de expresión de los cuales podrían potencialmente ser utilizados para identificar varios tipos de cáncer, incluyendo cáncer de próstata, gran linfoma de células B, cáncer de ovario, cáncer de hígado y no . cancerosas se forman pequeñas de pulmón de células [3-7]
miRNAs son parte de una red de regulación compleja; múltiples genes se pueden regular por uno de los genes miARN, pero un solo gen también pueden ser reguladas de manera sutil por un grupo de miRNAs [2]. Pocos estudios han investigado la asociación entre miRNAs en suero y las enfermedades gástricas [8, 9], varios estudios se centraron en la expresión de miRNAs en plasma [10-12], Liu H et al. identificado miR-378 como un biomarcador de suero [8], y Liu R et al. seleccionados cinco miRNAs (MIR-1, -20, -27a, -34 y -423-5p) como una huella digital para el diagnóstico de GC [9]. Pero no se ha prestado atención a la orientación del mismo gen por miRNAs de serie. Sin embargo, estos estudios podrían ayudar a clarificar las funciones comunes de miRNAs serie de segmentación genes individuales y así mejorar nuestra comprensión de su papel en el cáncer gástrico (CG) y las enfermedades precancerosas.
Pepsinógenos Humanos (PGs) son inactivos pro-enzimas de la enzima digestiva pepsina específico, que se originan en la mucosa gástrica y pueden ser clasificadas bioquímicamente y inmunoquımicamente en PGA y PGC [13, 14]. Estudios anteriores demostraron que la expresión de PGC se correlacionó negativamente con el grado de malignidad de la mucosa gástrica y el desarrollo de las lesiones gástricas [15]. Una baja relación de PGA /PGC se puede utilizar como un biomarcador serológico de gastritis atrófica (AG), que se sabe que es una condición precancerosa [15, 16]. Varios miRNAs han sido identificadas por dos paquetes de genes diana-predicción de software (Objetivos microcosmos y TargetScan Humano), algunos de los cuales dirigidos PGA (miR-212, miR-132, miR-20a-5p, miR-93) o PGC (miR 662, miR-365, let-7a, miR-320a). El miRNAs estrechamente relacionados con la GC o otros tumores malignos fueron seleccionados para una mayor investigación en el estudio actual. miR-20a-5p, un miembro de la agrupación de miR-17-92, se reguló en gástrico, colorrectal y los adenocarcinomas de páncreas in situ
[17-19], expresión tisular de let-7a se correlacionó con metástasis en los ganglios linfáticos de GC [20], y miR-320a se había reducido regulado en el cáncer de mama primario y se correlacionaron con la invasión y la metástasis [21-23]. Estos tres miRNAs sólo se han investigado previamente in situ
, y la mayoría de los estudios se han centrado en sus funciones; ningún estudio ha investigado sus posibles funciones como biomarcadores en suero para el diagnóstico de GC y la enfermedad precancerosa. Y si los miRNAs funcionales predichos (miR-20a-5p, let-7a y miR-320a) pudieron ser identificadas como un biomarcador para el diagnóstico de la enfermedad precancerosa y GC? Por otra parte, sus relaciones con su pepsinógeno prevista del blanco son desconocidos.
Este estudio, por tanto, tuvo como objetivo evaluar el potencial de miR-20a-5p, let-7a y miR-320a en el diagnóstico de GC y la correlación de los tres miRNAs y PGA, PGC y la relación de PGA /PGC. Se investigaron los niveles en suero de los tres seleccionados miRNAs en GC y su condición precancerosa, así como la correlación entre el suero de miR-20a-5p y su PGA prevista del blanco, y entre el suero let-7a y miR-320a y su objetivo predicho PGC . Los resultados tal vez identifican varios marcadores serológicos valiosos para enfermedades gástricas, en cierta medida, así como proporcionar la evidencia experimental y de referencia para ayudar a nuestro mejor entendimiento de las funciones de miRNAs suero en el proceso de la carcinogénesis.
Métodos Sujetos

Un total de 291 sujetos que se sometieron a exámenes gastroscopia en el primer hospital Afiliado de la Universidad médica de china 2004-2011 se inscribieron en este estudio. Información sobre el género, la edad y otros factores se obtuvo por medio de un cuestionario administrado a cada sujeto. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética Humana de la Universidad de Medicina China. escrito el consentimiento informado se obtuvo de los participantes de conformidad con la Declaración de Helsinki y su posterior revisión. Todos los pacientes fueron sometidos a biopsia endoscópica de la mucosa gástrica, y las muestras de biopsia fueron embebidas en parafina y teñidas por la tinción HE para el diagnóstico histológico que fue diagnosticado por dos patólogos experimentados. Los casos con gastritis superficial mínimos fueron tratados como los controles [24]. El grupo de gastritis atrófica se define de acuerdo con la histopatología. Los diagnósticos histopatológicos se incluyó leve, moderada y la gravedad, y sólo el grado de severidad moderada y se inscribieron en este estudio de casos y controles. Noventa y cuatro pacientes fueron confirmados histológicamente casos de adenocarcinoma gástrico; 75 podrían ser clasificados de acuerdo con la clasificación de Lauren, mientras que 19 no pudieron. Y entre los 75 casos [25], 22 de los casos GC 75 eran del tipo intestinal, 45 eran del tipo difuso y 8 eran del tipo mixto. Las muestras en el grupo de cáncer gástrico emparejado en la composición de edad y sexo con los pacientes con los controles y con gastritis atrófica.
Aislamiento de ARN sérico y la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa cuantitativa (QRT-PCR) de
sangre venosa Aproximadamente 6 ml se recogió de cada sujeto. RNA total en suero se extrajo utilizando un método descrito por Liu R et al. [9] con algunas modificaciones. Se separó el suero por centrifugación a 3.000 g
durante 10 min, seguido por una centrifugación a alta velocidad 15 min a 12.000 g
para eliminar completamente los restos celulares. El suero sobrenadante se recuperó y se almacenó a -80 ° C hasta su posterior procesamiento. ARN total fue extraído de 200 l de suero de fenol purificación de ácido /cloroformo y centrifugación en alcohol isopropílico. Cada muestra fue todo en 20 l ddH libre de ARN 2O solución y seis microlitros de ARN total fue transcrito de forma inversa a cDNA utilizando un solo paso PrimeScript miARN síntesis de cDNA Kit (Takara, Dalian, China). PCR en tiempo real se realizó utilizando un kit de detección miRcute miARN qPCR (Tiangen, Pekín, China) en el Sistema termociclador dados en Tiempo Real (Takara). Para el cálculo de los niveles de los miRNAs, hsa-miR-20a-5p sintética, hsa-let-7a y hsa-miR-320a a concentraciones conocidas (Takara) fueron también transcripción inversa y amplificado. La concentración de cada miRNA continuación se calculó de acuerdo con la curva estándar. Todas las reacciones, incluidos los controles sin molde, se realizaron por duplicado.
Suero PG y H. pylori
niveles
Las concentraciones séricas de PG y de H. pylori
niveles (HP) se determinaron mediante ligado a enzimas (ELISA) con PGA, PGC y H. pylori
kits ELISA (Biohit Co., Ltd., Helsinki, Finlandia) [16, 26, 27]. Las muestras fueron analizadas en un orden aleatorio, ciego a los resultados histológicos. Cada lote incluye controles comerciales y controles de plasma cegados para evaluar la variación de laboratorio. Todos los controles de plasma estaban dentro de los medios ± 2 desviaciones estándar. El cinco por ciento de todas las muestras fueron analizadas por duplicado.
El análisis estadístico Francia El registro 10 de los miARN número de copias representaba los niveles de los miRNAs, y las diferencias en los niveles de miARN entre los grupos, así como en el análisis de estratificación se compararon por análisis de varianza de una sola vía. Las curvas ROC (ROC) y el área bajo la curva ROC (AUC) se utilizaron para evaluar los efectos de diagnóstico de los miRNAs y determinar puntos de corte adecuados. Medianas concentraciones séricas de PG se compararon entre los tres grupos, así como en el análisis de la estratificación mediante pruebas Kruskal-Wallis H. coeficiente de correlación de Pearson se utilizó para estimar la correlación entre las concentraciones de miRNAs y PG. El gráfico de dispersión era representar el análisis de correlación entre los niveles séricos de miARN y la relación de PGA /PGC, y entre los niveles de la PGA y PGC. Todos los análisis estadísticos se realizaron con el paquete estadístico SPSS 17.0 (SPSS Inc., Chicago, EE.UU.). Una de dos caras p
valor < 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
Resultados
Datos demográficos de los sujetos de estudio
Los 291 sujetos incluidos 103 controles, 94 pacientes con AG y 94 con GC. Como se muestra en la Tabla 1, no hubo diferencias significativas en cuanto a sexo (p = 0,948
), la edad (p = 0,654
) y H. pylori
estado de infección (p = 0,580
) entre los tres groups.Table 1 Características de los sujetos del estudio
variables
control
gastritis atrófica
el cáncer gástrico
n = 103

n = 94
n = 94
Sexo Masculino

65 (63,1%)
61 (64,9%)
59 (62,8%)
Mujer
38 (36,9%)
33 (35,1%)
35 (37,2%)
P = 0,948

Edad (años) guía Mean
59,1 ± 10,6 60,4 ± 11,2

60.2 ± 11.1
Gama
23-80
28-83 27-80

P = 0,654

H. pylori
estado de infección por HP

60 (58,3%)
48 (51,1%)
53 (56,4%)
Hp +
43 (41,7%)
46 (48,9%)
41 (43,6%) guía
P = 0,580
las correlaciones entre la expresión de miRNAs en suero y las enfermedades gástricas
No hubo diferencias significativas en los niveles de miR niveles 20a-5p y let-7a entre los controles, AG y grupos GC (p = 0,581
, 0,445, respectivamente), pero el miR-320a disminuyeron gradualmente entre los diferentes grupos (4,99 ± 0,46 vs. 4,94 ± 0,45 vs. 4,90 ± 0,44, p = 0,152
, Tabla 2) .Tabla 2 Niveles de miRNAs en suero (media ± dE), PG (mediana ± dE) entre los diferentes grupos de enfermedades gástricas
variables

CON
AG
GC
P-
valor
miR-20a-5p
3,77 ± 0,74 3,84 ±
0,69 3,83 ± 0,68

0,581
Hombre
3,80 ± 0,77 3,90 ± 0,73

3,88 ± 0,78 0,59

Mujer
3,72 ± 0,69
3,73 ± 0,60 3,75 ± 0,47

0.855
let-7a
3,72 ± 0,34 3,77 ± 0,29

3,75 ± 0,28 0,445

Hombre
3,72 ± 0,31
3,78 ± 0,32 3,77 ± 0,28

0,367
Mujer
3,71 ± 0,39 3,76 ± 0,24

3,72 ± 0,28 0,93

miR-320a
4,99 ± 0,46 4,94 ± 0,45

4,90 ± 0,44 0,152

Hombre
5,03 ± 0,49 5,01 ± 0,46

5,00 ± 0,42 0,76

Mujer
4,93 ± 0,40 4,81 ± 0,39

4,73 ± 0,43 0,035 *

PGA
146,3 ± 101,5 111,0 ± 85,4

130,1 ± 107,1 0,044
§
PGC
19,2 ± 17,6 14,0 ± 12,2

23,1 ± 23,0
0.003 §
PGA /PGC
9,52 ± 4,85 9,52 ± 5,23

7,86 ± 5,46 0,039
§
P *

: GC vs
de control; P
§
: diferencia entre los tres grupos. CONTRA: Los casos con gastritis superficial mínima fueron tratados como los controles; AG: gastritis atrófica; GC:.
Cáncer gástrico La estratificación por sexo y edad demostró que la expresión de miR-320a fue menor en los pacientes con cáncer gástrico femeninos que en los controles (p = 0,035)
, y la diferencia fue especialmente significativa en pacientes con cáncer gástrico femeninos mayores de 60 años año, en comparación con los controles (p = 0,008
) (Tabla 3). El AUC de miR-320a para la detección de pacientes con cáncer gástrico mujeres mayores de 60 años era de 0.699. El mejor punto de corte fue de 4,76, con una sensibilidad del 65,2% (95% IC = 45,8-84,7%) y una especificidad del 68,2% (IC del 95% = 48,7-87,6%). Tenemos también el análisis de nuestros datos en el H. pylori
la estratificación, pero no había ninguna diferencia entre ninguno de los grupos, como se muestra en la Tabla 3 4.Table análisis Estratificación del nivel de miR-320a en suero entre los diferentes grupos de enfermedades gástricas (media ± SD )
miARN
CON (n) guía empresas AG (n) guía empresas GC (n)
P
valor
miR-320a
Hombre
≥60
5,02 ± 0,44 (27): perfil del 4,96 ± 0,43 (28) 4,99 ± 0,46
(26)
0,796 Hotel < 60
5,03 ± 0,53 (38)
5,05 ± 0,49 (33) 5,01 ± 0,39
(33)
0,859
Mujer
≥60
4,98 ± 0,46 (22) 4,77 ± 0,39
(24)
4,63 ± 0,41 (23)
0,008 * Hotel < 60
4,88 ± 0,31 (16) 4,91 ±
0,39 (9)
4,92 ± 0,42 (12)
0,774
P *

: GC vs
de control. n significa el número de muestra de cada subgrupo.
Tabla 4 niveles de expresión de miRNAs en suero (media ± DE), PG (mediana ± DE) entre los diferentes grupos de enfermedades gástricas cuando estratificado por H. pylori
variables

CON
AG
GC
P-
valor
HP-
miR-20a-5p
3,83 ± 0,71 3,88 ± 0,59

3,85 ± 0,70 0,926

Hombre
3,84 ± 0,72 3,90 ± 0,59

3,89 ± 0,34 0,931

Mujer
3,82 ± 0,71 3,86 ± 0,60

3,75 ± 0,53 0,881

let-7a
3,74 ± 0,31 3,81 ± 0,31

3,76 ± 0,25
0.505
Hombre
3,73 ± 0,31 3,84 ± 0,34

3,77 ± 0,25 0,36

Mujer
3,76 ± 0,30 3,76 ± 0,28

3,74 ± 0,27
0,972
miR-320a
5,02 ± 0,48 4,90 ± 0,45

4,91 ± 0,47 0,311

Hombre
5,03 ± 0,50 4,97 ± 0,48

4,98 ± 0,44 0,813

mujer
4,99 ± 0,44 4,81 ± 0,41

4,74 ± 0,50 0,216

PGA
134.99 ± 92.27 96.78 ± 76.05

141.99 ± 125.80
0,056
PGC
15.13 ± 13.67 10.37 ± 9.02

23.15 ± 25.11
0,001
PGA /PGC
10,66 ± 4,81
11.00 ± 6.04 9.17 ± 6.28

0,22
Hp +
miR-20a-5p
3,69 ± 0,78 3,79 ± 0,79

3,81 ± 0,66 0,743

Hombre
3,75 ± 0,86 3,90 ± 0,31

3,86 ± 0,82 0,785

Mujer
3,62 ± 0,66 3,53 ± 0,55

3,74 ± 0,43 0,542

let-7a
3,68 ± 0,38 3,74 ± 0,27

3,74 ± 0,31 0,661

Hombre
3,70 ± 0,31 3,73 ± 0,30

3,77 ± 0,33
0.717
mujer
3,66 ± 0,48 3,75 ± 0,18

3,70 ± 0,28 0,795

miR-320a
4,95 ± 0,44 4,98 ± 0,45

4,89 ± 0,40 0,634

Hombre
5,01 ± 0,49 5,05 ± 4,59

5,05 ± 0,46 0,961

Mujer
4,87 ± 0,36 4,81 ± 0,38

4,72 ± 0,36 0,471

PGA
162.15 ± 112.44
125.81 ± 92.66
114.74 ± 75.23
0,058
PGC
24.82 ± 20.80 17.86 ±
13.95
23.10 ± 20.16
0,182
PGA /PGC
7,91 ± 4,49 7,97 ± 3,70

6,16 ± 3,57 0,06

Las correlaciones entre la expresión de miRNAs en suero y su predijo moléculas diana PG
Para el análisis de asociación, de expresión de miR-20a-5p no se correlaciona con los niveles de PGA (r = 0,110, p = 0,269
), y let-7a y miR-320a no se correlacionaron con el PGC niveles (r = -0.162, -0.102; p = 0,102
, 0,306, respectivamente), pero todos fueron positivamente correlacionado con la relación de PGA /PGC (r = 0,408, 0,255, 0,324; p =
< 0,001, 0,009, 0,001, respectivamente) (Figura 1). Cuando se compara la miRNAs estudiados y las moléculas PG objetivo previsto con los controles, hemos encontrado niveles séricos en pacientes PGA GC disminuyeron (130,1 ± 107,1 vs 146,3 ± 101,5, p = 0,276
) se incrementaron, y PGC niveles en pacientes con cáncer gástrico (23,1 ± 23,0 frente a 19,2 ± 17,6 p = 0,174
), aunque las diferencias no fueron significativas. Se disminuyó la relación de PGA /PGC en el grupo GC (7,86 ± 5,46 vs. 9,52 ± 4,85, p = 0,039
, Tabla 2), con un coeficiente de correlación de 0,727 (Figura 1). En comparación con los controles, se redujeron los niveles séricos de miR-320a (4,90 ± 0,44 vs. 4,99 ± 0,46, p = 0,153
) y los niveles de PGC de suero se incrementaron en el grupo GC (23,1 ± 23,0 vs. 19,2 ± 17,6 p
= 0,174), mostrando tendencias aparentemente opuestas, aunque las diferencias no fueron significativas (Tabla 2). Figura gráfico de trama 1 de dispersión. Figura 1-A - C. El gráfico de dispersión de los niveles séricos de miARN y sus correlaciones con relación PGA /PGC del grupo de control. A. miR-20a-5p; B. let-7a; C. miR-320a. Figura 1-D. El gráfico de dispersión de la correlación entre los niveles séricos de la PGA y PGC. Todo el gráfico de dispersión mostró el análisis de asociación de las variantes entre los ejes x e y.
Discusión
hallazgos recientes han presentado miRNAs de suero /plasma como biomarcadores potenciales para varias condiciones de enfermedad, incluyendo los cánceres humanos [28-31]. Sin embargo, los estudios de miRNAs en suero en relación con las enfermedades gástricas se han limitado, y se ha prestado atención a los miRNAs en serie de segmentación del mismo gen. Sobre la base de una serie de miRNAs predicho por el software bioinformático para apuntar a la PGA y /o PGC, se seleccionaron miR-20a-5p, let-7a y miR-320a en estudio. Se investigó el potencial de miR-20a-5p, let-7a y miR-320a en el diagnóstico de AG o GC y la correlación de los tres miRNAs con sus moléculas objetivo previsto PGA, PGC y la relación de PGA /PGC. La expresión de miR-320a fue menor en los pacientes de edad avanzada GC mujeres que en los controles, lo que sugiere que el miR-320a puede resultar un marcador útil para el diagnóstico de las mujeres mayores con GC. miR-20a-5p, let-7a y miR-320a, se correlacionó positivamente con la relación de PGA /PGC, lo que podría reflejar indirectamente el estado funcional de la mucosa gástrica.
Varios estudios han identificado miRNAs alteraciones específicas de tumor en el plasma /suero de pacientes con cáncer, y han demostrado el potencial de circulación miRNAs como nuevos biomarcadores no invasivos para la detección del cáncer [12, 32]. Los resultados de nuestro estudio indicaron que no hubo diferencias en el suero de miR-20a-5p y dejar-7a niveles entre los controles, grupos AG y GC, mientras que la expresión de miR-320a cayó a través de los controles, grupos AG y GC. Los niveles séricos de miR-320a fueron menores en los pacientes GC femeninos que en los controles, y esta diferencia fue más acentuada en las mujeres de mayor edad, mayores de 60 años, lo que sugiere que el miR-320a puede ser un nuevo biomarcador para el diagnóstico clínico de GC con especificidad población. Los estudios de miR-320a hasta la fecha se han limitado a sus papeles en la regulación de las funciones fisiológicas de la barrera sangre-cerebro [33], y en colangiocarcinoma intrahepático [34, 35], cáncer de colon [36] y la leucemia infantil [37]. A lo mejor de nuestro conocimiento, el estudio actual es el primero en informar que el miR-320a podría actuar como un biomarcador de suero de GC, especialmente en las mujeres mayores. Aunque algunos estudios han investigado sus mecanismos, algunos han informado de una relación entre su PGC prevista del blanco y el género, mientras que otros informaron de que la relación de PGA /PGC se relaciona con la edad, pero sólo en las mujeres [38, 39]. El software también ha predicho que el miR-320a se dirige al receptor gamma relacionado con el estrógeno (http://​www.​targetscan.​org/​cgi-bin/​targetscan/​mamm_​31/​targetscan.​cgi?​species=​Human&​gid=​&​mir_​c=​&​mir_​nc=​&​mirg=​hsa-miR-320). Estas líneas de evidencia sugieren que todos los miR-320a puede desempeñar un papel importante en el desarrollo de GC en las mujeres, y podría reflejar indirectamente el estado funcional de la mucosa gástrica. Su uso como un biomarcador estaría asociado con las ventajas de no invasión, bajo coste y mayor estabilidad. Sin embargo, se necesitan más estudios en muestras más grandes para aclarar sus mecanismos y verificar su uso como biomarcador en las mujeres mayores con GC. Por supuesto, los cambios de miRNAs tal vez no sólo relacionadas con los cambios de las condiciones de la función de la mucosa gástrica, pero también relacionado con otros factores, por anemia ejemplos [40], el estímulo de la microorganismo patógeno como H.pylor
[41 ] i, algunas proteínas implicadas en la vía de procesamiento de miRNAs como Drosha, Dicer y Argonaute [42, 43]. Los otros factores relacionados deben ser considerados en los estudios adicionales en el futuro.
Los niveles séricos de PGA y PGC parecen estar relacionados con cantidades glandulares y celulares de la mucosa gástrica, y también reflejan indirectamente la función de secretario del corpus y /o gástrica gástrica cavidad. PGA es secretada por el cuerpo gástrico y el ángulo gástrico, mientras que PGC se secreta de todo el estómago, incluyendo el corpus, el ángulo y el antro. Una disminución en la proporción de la PGA /PGC refleja el desarrollo de lesiones atróficas en la mucosa gástrica [16], y una baja relación de PGA /PGC se relaciona con un riesgo elevado de GC [38, 44, 45]. Por tanto, este se ha utilizado como un parámetro eficaz para la detección de individuos con alto riesgo de GC en la población, y puede ser un biomarcador clínicamente útil de GC y las enfermedades precancerosas tales como AG [16, 38, 46, 47]. Broutet et al. informó que si bien PGC se secreta a partir de diferentes sitios en el estómago, que estaba relacionado con la PGA; mientras PGA aumentó rápidamente, PGC varió ligeramente, y el coeficiente de correlación alcanzó 0,75 [38]. El presente estudio también calculó un coeficiente de correlación entre la PGA y PGC de 0.727. Esta relación puede explicar por qué la relación de PGA /PGC refleja el estado funcional de la mucosa gástrica con mayor precisión que sea PGA o PGC solo. Nuestro estudio no encontró ninguna relación entre la expresión de miR-20a-5p y PGA, let-7a y PGC, o miR-320a y PGC, pero hubo correlaciones positivas entre cada una de las tres y la relación de PGA /PGC que ya era conocida como un biomarcador útil para el diagnóstico de la enfermedad, y los miRNAs fueron estudiadas simultáneamente con la conocida relación de PGA /PGC sugiriendo su potencial como biomarcadores útiles para el diagnóstico de la enfermedad.
Considerando H. pylori
es un factor ambiental importante en el estómago que es también un Icarcinogen clase definida por la Organización Mundial de la Salud (OMS), que el análisis de los tres miRNAs en la estratificación de HP entre las diferentes enfermedades gástricas, pero no encontró ninguna diferencia. Ya sea H. pylori
y /u otros factores ambientales afectan a esta asociación necesita más estudios en muestras más grandes en el futuro.
Hay era una cierta limitación en nuestro estudio. En primer lugar, los seleccionados miRNAs pueden dirigen funcionalmente PGA /C y /o al menos era única prueba por el software de bioinformática, son necesarias algunas pruebas para los experimentos funcionales adicionales. En segundo lugar, la correlación de expresión en el tejido de miRNAs y se necesita su proteína diana predicho para análisis adicionales. En tercer lugar, la correlación de la expresión de miRNAs y las características clínico-patológicas de los pacientes con cáncer gástrico, tales como la clasificación de Borrmann, patrón de crecimiento, el estadio TNM, la profundidad de la invasión y metástasis en los ganglios linfáticos, et al. No se analizaron adicionalmente debido a la información limitada biopsia faltante. En cuarto lugar, la fuente de controles no fue la población normal, pero con una gastritis superficial mínima de acuerdo con el diagnóstico patológico, y la gastritis era también pertenece una cascada de desarrollo de GC.
Conclusión
En conclusión, hemos demostrado que el suero miR 320a niveles fueron más bajos en los pacientes GC femeninos mayores de 60 años que en los controles, y por lo tanto pueden representar un marcador útil para el diagnóstico de GC en este grupo. Y los niveles de miR-20a-5p, let-7a y miR-320a se correlacionaron positivamente con la relación de PGA /PGC, lo que podría reflejar indirectamente el estado funcional de la mucosa gástrica.
Notas
Qian Xu, Qi- Guan Dong contribuido igualmente a esta labor
abreviaciones
miARN:.
microARN
PG:
Pepsinogen

PGA:
pepsinógeno A
PGC:
pepsinógeno C
QRT-PCR:
cuantitativa reacción en cadena de la polimerasa de transcripción
ELISA: Read enzimoinmunoensayo
curva ROC:
curva de eficacia diagnóstica

AUC: Francia El área bajo la curva
nt:
nucleótidos
ADNc :
ADN complementario
AG:
gastritis atrófica
GC:. El cáncer gástrico

Declaraciones

Agradecimientos
Este trabajo es apoyado por subvenciones del Programa Nacional de Investigación básica clave de China (973 Programa de ref. 2010CB529304), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Ref No.31200968), y la Fundación de Ciencia y Tecnología en la provincia de Liaoning (Ref no. 2011225002).
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autores
YY concebido y diseñado este estudio y revisó el manuscrito. QG-D fue responsable para el experimento y se realizó la interpretación de datos. QX involucrado en la redacción del documento y la revisión manuscrito críticamente importante para el contenido intelectual. LP-S participó en el diseño del estudio, en parte. CY-H realizó el análisis estadístico. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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