Die Expression von Serum miR-20a-5P, let-7a und miR-320a und deren Korrelationen mit Pepsin in atrophische Gastritis und Magenkrebs: eine Fall-Kontroll-Studie

Die Expression von Serum miR-20a-5P, let-7a und miR-320a und deren Korrelationen mit Pepsin in atrophische Gastritis und Magenkrebs: eine Fall-Kontroll-Studie
Zusammenfassung
Hintergrund
Die Identifizierung der Serien miRNAs die gleiche funktionelle Magen-Protein Targeting könnten neue und wirksame serologische Biomarker für die Diagnose von Magenkrebs (GC) bereitzustellen. Das Ziel dieser Studie war es, das Potenzial von miR-20a-5P zu bewerten, let-7a und miR-320a bei der Diagnose von AG oder GC und die Korrelation der drei miRNAs mit ihren vorhergesagten Zielmoleküle PGA, PGC und PGA /PGC Verhältnis.
Methoden
Die insgesamt 291 Patienten 103 Kontrollen einbezogen (CON), 94 mit atrophischen Gastritis (AG) und 94 mit GC. Die Serumspiegel von miRNAs wurden durch quantitative reverse Transkription-Polymerase-Kettenreaktion und Serum-Pepsinogen A (PGA) und C (PGC) festgestellt wurden durch Enzym-linked Immunosorbent-Assays bestimmt.
Ergebnisse
Serum miR-320a Niveau verringert durch die Kontrollen, AG und GC-Gruppen, die die Kaskaden von GC Entwicklung waren, während es keine signifikanten Unterschiede in den Niveaus von miR-20a-5P waren und let-7a bei den Kontrollen, AG und GC-Gruppen. Wenn nach Geschlecht und Alter geschichtet, Serum miR-320a war Ausdruck niedriger bei weiblichen GC-Patienten als in der Kontrollgruppe (p = 0,035
), vor allem bei weiblichen GC Patienten, die älter als 60 Jahre (p = 0,008
). Für weibliche GC Patienten im Alter von über 60 zu unterscheiden, die Fläche unter der Empfänger Kennlinie für miR-320a Betrieb war 0,699, und der beste Cut-off Punkt war 4,76 mit einer Sensitivität von 65,2% und eine Spezifität von 68,2%. die Korrelationen betreffend zwischen dem ausgewählten miR-20a-5p, let-7a, miR-320a und PGs, fanden wir, dass es eine positive Korrelation zwischen allen drei, und das Verhältnis von PGA /PGC (r = 0.408, 0.255, 0.324 waren; p
= < 0,001, 0,009, 0,001), aber es gab zwischen der Expression von Serum-miR-20a-5P und seine vorhergesagte Ziel PGA keine Beziehung oder zwischen let-7a und miR-320a und ihre vorhergesagte Ziel PGC . Serum miR-320a verringert wurde und PGC wurde in der GC-Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe erhöht.
Schlussfolgerungen
Serumspiegel von miR-320a niedriger waren bei weiblichen GC Patienten, die älter als 60 ist als in der Kontrollgruppe, die ein zur Verfügung stellen kann Potenzial wertvolle Marker für mit GC älteren Frauen zu diagnostizieren. Die Serumspiegel von miR-20a-5P, let-7a und miR-320a positiv mit PGA /PGC korreliert wurden, die indirekt die funktionelle Status der Magenschleimhaut widerspiegeln.
Schlüsselwörter Serum microRNA Biomarker Pepsinogen Magenerkrankung Hintergrund
Es ist wichtig, empfindlich, spezifisch und nicht-invasive Tumor Biomarker zu untersuchen, die für die Früherkennung, Abschätzung Prognose verwendet werden kann, und Prognose Rezidiv. MicroRNAs (miRNAs) sind eine Klasse von hochkonservierten und endogenen nicht-kodierenden RNAs 19-24 Nukleotide lang, die die Expression von Zielgenen in der post-transkriptioneller Ebene zu regulieren. Akkumulieren Daten zeigen, dass miRNAs sind in wichtigen biologischen Prozessen beteiligt Zusammenhang mit Proliferation, Apoptose, Differenzierung, Metastasierung, Angiogenese und Immunantwort, während Deregulierung der miRNAs kann in Krebs Initiation, Progression und Behandlungsergebnis [1, 2] entscheidend sein. Es wurde vor kurzem, dass das menschliche Serum oder Plasma enthält große Mengen an stabilen miRNAs gezeigt wurde, werden die Expressionsprofile von denen potentiell verwendet werden könnten verschiedene Arten von Krebs, einschließlich Prostatakrebs, großzelligen B-Zell-Lymphom, Eierstockkrebs, Leberkrebs und nicht zu identifizieren . -small kleinzelligem Lungenkrebs [3-7]
miRNAs sind Teil eines komplexen regulatorischen Netzwerks; multiple Gene können durch eine miRNA reguliert werden, sondern ein einziges Gen auch durch eine Gruppe von miRNAs fein reguliert werden kann [2]. Nur wenige Studien haben den Zusammenhang zwischen Serum miRNAs und Magenerkrankungen untersucht [8, 9], mehrere Studien konzentrierten sich auf die Plasma-miRNAs Ausdruck [10-12], Liu H et al. miR-378 als Serum Biomarker identifiziert [8] und Liu R et al. fünf ausgewählten miRNAs (miR-1, -20, -27a, -34 und -423-5p) wie ein Fingerabdruck für die GC-Diagnose [9]. Aber keine Aufmerksamkeit wurde durch serielle miRNAs Targeting des gleichen Gens bezahlt. Allerdings könnten solche Untersuchungen helfen, die gemeinsamen Funktionen von seriellen miRNAs Targeting einzelner Gene und damit verbessern unser Verständnis ihrer Rolle bei Magenkrebs (GC) und präkanzerösen Erkrankungen zu klären.
Menschen pepsinogens (PGs) sind inaktive Proenzyme des spezifische Verdauungsenzym Pepsin, das von der Magenschleimhaut stammen und biochemisch und immunochemisch in PGA und PGC klassifiziert werden können [13, 14]. Frühere Studien zeigten, dass PGC-Expression negativ mit dem Grad der Bösartigkeit der Magenschleimhaut und die Entwicklung von Magenläsionen [15] korreliert. Eine niedrige PGA /PGC-Verhältnis kann als ein serologischer biomarker der atrophischen Gastritis (AG) verwendet werden, von dem bekannt ist eine Präkanzerose zu sein [15, 16]. Mehrere miRNAs wurden durch zwei Zielgen-Vorhersage von Softwarepaketen (Mikrokosmos Ziele und TargetScan Mensch), von denen einige gezielte PGA (miR-212, miR-132, miR-20a-5P, miR-93) oder PGC (Mir- identifiziert 662, miR-365, let-7a, miR-320a). Die miRNAs in engem Zusammenhang mit GC oder anderen bösartigen Erkrankungen wurden zur weiteren Untersuchung in der aktuellen Studie ausgewählt. miR-20a-5P, ein Mitglied der miR-17-92 Cluster wurde in Magen-, Darm- und Pankreasadenokarzinomen in situ
upregulated [17-19], Gewebeexpression von let-7a wurde mit Lymphknotenmetastasen korreliert von GC [20], und miR-320a wurde herunterreguliert in primären Brustkrebs und korreliert mit der Invasion und Metastasierung [21-23]. Diese drei miRNAs sind bisher nur in situ
untersucht worden, und die meisten Studien haben sich auf ihre Funktionen fokussiert; keine Studien haben ihre potentielle Rolle als Serum Biomarker für die Diagnose von GC und präkanzerösen Krankheit untersucht. Und ob die vorhergesagten funktionellen miRNAs (miR-20a-5P, let-7a und miR-320a) könnten als Biomarker für die Diagnose von GC und präkanzerösen Erkrankung identifiziert werden? Darüber hinaus ihre Beziehungen zu ihren vorhergesagten Ziel pepsinogen unbekannt sind. Diese Studie hat daher das Potenzial von miR-20a-5P zu bewerten, let-7a und miR-320a bei der Diagnose von GC und die Korrelation der miRNAs drei gerichtet
und PGA, PGC und PGA /PGC-Verhältnis. Wir untersuchten die Serumspiegel der drei ausgewählten miRNAs in GC und seine Präkanzerose, sowie die Korrelation zwischen Serum-miR-20a-5P und seine vorhergesagte Ziel PGA und zwischen Serum-let-7a und miR-320a und ihre vorhergesagte Ziel PGC . Die Ergebnisse vielleicht mehrere wertvolle serologische Marker für Magenerkrankungen zu einem gewissen Grad zu identifizieren, sowie die Bereitstellung von experimentellen Nachweis und Referenz unser weiteres Verständnis der Funktionen von Serum miRNAs in den Prozess der Karzinogenese zu unterstützen.
Methoden
Themen
insgesamt 291 Personen, die 2004 bis 2011 Gastros Untersuchungen im ersten Affiliated Hospital der China Medical University unterzogen wurden in die Studie eingeschlossen. Informationen über Geschlecht, Alter und anderen Faktoren wurde mittels eines Fragebogens zu jedem Patienten verabreicht erhalten. Die Studie wurde von der Human Ethics Review Committee of China Medical University genehmigt. Eine schriftliche Einverständniserklärung wurde von den Teilnehmern in Übereinstimmung mit der Deklaration von Helsinki und seine spätere Revision erhalten. Alle Patienten wurden endoskopische Magen-Schleimhaut-Biopsie und die Biopsie-Proben wurden in Paraffin eingebettet und gefärbt durch HE für die histologische Diagnose Färbung, die durch zwei erfahrene Pathologen diagnostiziert wurde. Fälle mit minimalen oberflächlichen Gastritis wurden als Kontrollen [24] behandelt. Die atrophische Gastritis Gruppe wurde nach Histopathologie definiert. Die Histopathologie Diagnosen enthalten war gering, mittel und Schwere, und nur den Grad der gemäßigten und Schwere in diesem Fall-Kontroll-Studie aufgenommen wurde. Ninety-vier Patienten wurden histologisch Adenokarzinom des Magens Fälle bestätigt; 75 könnte nach Lauren Klassifikation eingestuft werden, während 19 konnte nicht. Und unter den 75 Fällen, [25], 22 der 75 Fälle waren die GC intestinalen Typ, 45 waren die diffuse Art und 8 waren die Mischtyp. Die Proben in der Gruppe Magenkrebs abgestimmt im Alter und Geschlecht Zusammensetzung bei Patienten mit Kontrollen und mit atrophischer Gastritis.
Serum RNA-Isolierung und quantitative reverse Transkription-Polymerase-Kettenreaktion (qRT-PCR) Test
Etwa 6 ml venöses Blut wurde von jedem Subjekt gesammelt. Serum-Gesamt-RNA wurde unter Verwendung eines Verfahrens, beschrieben von Liu et al R extrahiert. [9] mit einigen Modifikationen. Serum wurde 10 min durch Zentrifugation bei 3000 g
abgetrennt, gefolgt von einer 15 min Hochgeschwindigkeits-Zentrifugation bei 12.000 g
vollständig Zelltrümmer zu entfernen. Der Überstand Serum wurde bei -80 ° C bis zur weiteren Verarbeitung zurückgewonnen und gespeichert. Gesamt-RNA wurde aus 200 &mgr; l des Serums durch Säure Phenol /Chloroform-Reinigung und Zentrifugation in Isopropylalkohol extrahiert. Jede Probe war alles in 20 ul RNA-freie ddH 2 O-Lösung und sechs Mikroliter der Gesamt-RNA wurde revers transkribiert in cDNA One Step PrimeScript miRNA cDNA-Synthese-Kits (Takara, Dalian, China) verwendet wird. Real-time PCR wurde unter Verwendung eines miRcute miRNA qPCR-Nachweis-Kit (Tiangen, Beijing, China) auf dem Thermocycler Dice Echtzeit-System (Takara) durchgeführt. Um die Pegel der miRNAs, synthetische HSA- miR-20a-5p, HSA-let-7a und HSA- miR-320a in bekannten Konzentrationen (Takara) berechnen wurden revers transkribiert und amplifiziert. Die Konzentration jedes miRNA wurde dann entsprechend der Standardkurve berechnet. Alle Reaktionen, einschließlich No-Template-Kontrollen wurden doppelt durchgeführt.
Serum PG und H. pylori
Ebenen
Serum PG Konzentrationen und H.pylori
(HP) wurden durch enzymgekoppelte bestimmt Immuno-Assay (ELISA) mit PGA, PGC und H.pylori
ELISA-Kits (Biohit Co., Ltd., Helsinki, Finnland) [16, 26, 27]. Die Proben wurden in zufälliger Reihenfolge, blind für Histologie Ergebnisse untersucht. Jede Charge enthalten handelsübliche Kontrollen und verblendet Plasma Kontrollen Labor Variation zu beurteilen. Alle Plasma Kontrollen waren innerhalb der Mittelwert ± 2 SD. Fünf Prozent aller Proben wurden doppelt getestet.
Statistische Analyse
Der log 10 der miRNA-Kopienzahl repräsentiert die Pegel der miRNAs und Unterschiede in der Höhe der miRNA zwischen den Gruppen als auch in die Schichtung Analyse wurden durch Einwegvarianzanalyse verglichen. Empfänger wurden Charakteristik (ROC) Kurven und die Fläche unter der ROC-Kurve (AUC) arbeitet, verwendet die diagnostischen Auswirkungen der miRNAs zu bewerten und geeignete Cut-off-Punkte zu bestimmen. Mediane Serum PG-Konzentrationen wurden unter den drei Gruppen sowie in der Schichtungsanalyse mittels Kruskal-Wallis H-Tests verglichen. Pearson-Korrelationskoeffizient wurde verwendet, um die Korrelation zwischen miRNAs und PG-Konzentrationen abzuschätzen. Das Streudiagramm war die Korrelationsanalyse zwischen den Serum miRNA Ebenen und PGA /PGC-Verhältnis und zwischen PGA und PGC Ebenen darstellen. Alle statistischen Analysen wurden mit SPSS 17.0 Software (SPSS Inc. Chicago, USA) durchgeführt. Eine zweiseitige p
Wert < 0,05 wurde als statistisch signifikant betrachtet.
Ergebnisse

• Stickoxid-ein endogener Inhibitor der Magensäure-Sekretion in isolierten menschlichen Magen glands
• CD44 /CD24 Expression bei rezidivierendem Magenkrebs: eine retrospektive analysis