Ekspression af serum miR-20a-5p, lad-7a, og miR-320a og deres sammenhænge med pepsinogen i atrofisk gastritis og gastrisk cancer: en case-kontrol undersøgelse

Ekspression af serum miR-20a-5p, lad-7a, og miR-320a og deres sammenhænge med pepsinogen i atrofisk gastritis og gastrisk cancer: en case-kontrol undersøgelse
Abstract
Baggrund
identifikation af serielle miRNA målrette den samme funktionelle gastrisk protein kunne give nye og effektive serologiske biomarkører til diagnosticering af mavekræft (GC). Formålet med denne undersøgelse var at vurdere potentialet af MIR-20a-5p, lad-7a og MIR-320a i diagnosen af ​​AG eller GC og korrelationen af ​​de tre miRNA med deres forudsagte målmolekyler PGA, PGC og PGA /PGC ratio.
Metoder
alt 291 patienter inkluderet 103 kontroller (CON), 94 med atrofisk gastritis (AG) og 94 med GC. Niveauerne af serum miRNA blev påvist ved kvantitativ revers transkription-polymerasekædereaktion og serumpepsinogen A (PGA) og C (PGC), blev bestemt ved enzymkoblet immunosorbentassay.
Resultater Salg Serum MIR-320a niveau faldt gennem de kontroller, AG og GC grupper, som var de kaskader af GC udvikling, mens der ikke var væsentlige forskelle i miR-20a-5p og lad-7a blandt kontrollerne, AG og GC grupper. Når stratificeret efter køn og alder, serum miR-320a udtryk var lavere i kvindelige GC patienter end i kontrollerne (p
= 0,035), især i kvindelige GC patienter over 60 år (p
= 0,008). For at skelne kvindelige GC patienter over 60, området under modtageren opererer karakteristisk kurve for miR-320a var 0,699, og den bedste cut-off punkt var 4,76 med en følsomhed på 65,2% og specificitet på 68,2%. Med hensyn til korrelationer mellem den valgte miR-20a-5p, lad-7a, miR-320a og PG'er, fandt vi, at der var positive korrelationer mellem alle de tre, og forholdet mellem PGA /PGC (r = 0,408, 0,255, 0,324; p
= < 0,001, 0,009, 0,001, henholdsvis), men der var ingen sammenhæng mellem ekspressionen af ​​serum mIR-20a-5p og prognoserne target PGA, eller mellem lad-7a og mIR-320a og deres forudsete mål PGC . Serum miR-320a blev reduceret og PGC blev øget i GC-gruppen sammenlignet med kontrolgruppen.
Konklusioner
Niveauer af serum miR-320a var lavere i kvindelige GC patienter over 60 end i kontrol, hvilket kan give en potentiel værdifuld markør til diagnosticering ældre kvinder med GC. Niveauerne af serum miR-20a-5p, lad-7a og miR-320a var positivt korreleret med PGA /PGC, der indirekte kan afspejle den funktionelle status af maveslimhinden.
Nøgleord
Serum microRNA Biomarkør Pepsinogen Gastric sygdom baggrund
Det er vigtigt at udforske følsomme, specifikke og ikke-invasive tumor biomarkører, der kan anvendes til tidlig diagnose, prognose estimering og forudsigelse gentagelse. MikroRNA'er (miRNA) er en klasse af højt konserverede og endogene ikke-kodende RNA'er 19-24 nukleotider lange, som regulerer ekspressionen af ​​målgener ved post-transkriptionel niveau. Akkumulerende beviser indikerer, at miRNA er involveret i vigtige biologiske processer relateret til spredning, apoptose, differentiering, metastase, angiogenese og immunrespons, mens deregulering af miRNA kan være afgørende i kræft initiering, progression og behandlingsresultater [1, 2]. Det har for nylig vist, at humant serum eller plasma indeholder store mængder af stabile miRNA, udtrykket profiler vil kunne potentielt anvendes til at identificere forskellige typer cancer, herunder prostatacancer, storcellet B-celle lymfom, ovariecancer, levercancer og ikke .-lille celle lungekræft [3-7]
miRNA er en del af et komplekst regulatorisk netværk; multiple gener kan reguleres ved en miRNA, men et enkelt gen kan også subtilt reguleret af en gruppe af miRNA [2]. Kun få studier har undersøgt sammenhængen mellem serum miRNA og gastriske sygdomme [8, 9], flere undersøgelser fokuseret på plasma miRNA udtryk [10-12], Liu H et al. identificeret MIR-378 som et serum biomarkør [8], og Liu R et al. udvalgte fem miRNA (MIR-1, -20a, -27a, -34 og -423-5p) som et fingeraftryk til GC diagnose [9]. Men ingen opmærksomhed er blevet betalt til målretning af det samme gen ved serielle miRNA. Imidlertid kunne sådanne undersøgelser bidrage til at klarlægge de fælles funktioner af serielle miRNA målrettet enkelte gener og dermed forbedre vores forståelse af deres roller i gastrisk cancer (GC) og forstadier til sygdomme.
Humane pepsinogens (PG) er inaktive pro-enzymer specifikke fordøjelsesfremmende enzym pepsin, der stammer fra maveslimhinden og kan klassificeres biokemisk og immunokemisk ind PGA og PGC [13, 14]. Tidligere undersøgelser har vist, at PGC ekspression var negativt korreleret med graden af ​​malignitet af maveslimhinden og udvikling af gastriske læsioner [15]. En lav PGA /PGC-område kan anvendes som et serologisk biomarkør for atrofisk gastritis (AG), som er kendt for at være en præcancerøse betingelse [15, 16]. Adskillige miRNA er blevet identificeret af to mål gen-forudsigelse softwarepakker (mikrokosmos Mål og Targetscan Menneskelig), hvoraf nogle målrettede PGA (miR-212, miR-132, miR-20a-5p, miR-93) eller PGC (miR- 662, miR-365, lad-7a, miR-320a). De miRNA tæt knyttet til GC eller andre maligniteter blev udvalgt til videre undersøgelse i den aktuelle undersøgelse. miR-20a-5p, et medlem af miR-17-92 klynge, blev opreguleret i gastrisk, tyk- og pancreas adenokarcinomer in situ
[17-19], væv udtryk for lad-7a blev korreleret med lymfeknude metastaser af GC [20], og miR-320a blev nedreguleret i primær brystcancer og korreleret med invasion og metastase [21-23]. Disse tre miRNA har kun tidligere blevet undersøgt in situ
, og de fleste undersøgelser har fokuseret på deres funktioner; ingen studier har undersøgt deres potentielle roller som serum biomarkører for diagnosticering af GC og præcancer sygdom. Og uanset om de forudsagte funktionelle miRNA (miR-20a-5p, lad-7a og miR-320a) kunne identificeres som biomarkør til diagnosticering af GC og præcancer sygdom? Desuden deres forhold til deres forudsete mål pepsinogen er ukendte.
Denne undersøgelse derfor til formål at vurdere potentialet i miR-20a-5p, lad-7a og miR-320a i diagnosen af ​​GC og korrelationen af ​​de tre miRNA og PGA, PGC og PGA /PGC-forhold. Vi undersøgte serumniveauerne af de tre udvalgte miRNA i GC og dens præcancer tilstand, samt sammenhængen mellem serum MIR-20a-5p og prognoserne target PGA, og mellem serum Lad-7a og MIR-320a og deres forudsete mål PGC . Resultaterne måske identificere flere værdifulde serologiske markører for gastrisk sygdomme til en vis grad, samt give eksperimentelle beviser og reference til at støtte vores videre forståelse af funktionerne af serum miRNA i processen med carcinogenese.
Metoder
Emner
i alt 291 forsøgspersoner, som fik foretaget gastroskopi eksamener på første Tilknyttede Hospital i Kina Medical University 2004-2011 blev indrulleret i denne undersøgelse. Information om køn, alder og andre faktorer blev opnået ved hjælp af et spørgeskema administreret til hvert emne. Undersøgelsen blev godkendt af Human Ethics Review Committee of China Medical University. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra deltagerne i overensstemmelse med Helsinki-deklarationen og dens senere revision. Alle patienter undergik endoskopisk maveslimhinden biopsi, og de biopsiprøver paraffin-indlejret og farvet med HE farvning for histologisk diagnose som blev diagnosticeret af to erfarne patologer. Sager med minimale overfladiske gastritis blev behandlet som kontrollerne [24]. Den atrofisk gastritis gruppe blev defineret i henhold til histopatologi. De histopatologiske diagnoser indgik let, moderat og sværhedsgrad, og kun den lønklasse af moderat og sværhedsgrad blev indskrevet i denne case-kontrol undersøgelse. Ninety-fire patienter blev histologisk bekræftet gastrisk adenocarcinom tilfælde; 75 kunne klassificeres efter Lauren klassificering, mens 19 ikke kunne. Og blandt de 75 tilfælde [25], 22 af GC sager 75 var den intestinale type, 45 var den diffuse type og 8 var den blandede type. Prøverne i mavekræft gruppe matchet i alder og køn sammensætning med patienter med kontroller og med atrofisk gastritis.
Serum RNA isolation og kvantitativ revers transkription-polymerase kædereaktion (QRT-PCR) assay
Ca. 6 ml veneblod blev opsamlet fra hvert individ. Serum total RNA blev ekstraheret under anvendelse af en fremgangsmåde beskrevet af Liu R et al. [9] med visse modifikationer. Serum blev separeret ved centrifugering ved 3.000 g
i 10 min, efterfulgt af en 15 min med høj hastighed centrifugering ved 12.000 g
helt at fjerne cellerester. Supernatanten serum blev udvundet og opbevaret ved -80 ° C indtil yderligere forarbejdning. Totalt RNA blev ekstraheret fra 200 pi serum ved sur phenol /chloroform oprensning og centrifugering i isopropylalkohol. Hver prøve var alle i 20 pi RNA-fri Hedeselskabet 2O løsning og seks mikroliter totalt RNA blev omvendt transskriberet til cDNA ved hjælp af One Step PrimeScript miRNA cDNA Synthesis Kit (Takara, Dalian, Kina). Real-time PCR blev udført ved hjælp af en miRcute miRNA qPCR afsløring kit (Tiangen, Beijing, Kina) på den termiske variator Dice Real Time System (Takara). For at beregne niveauet for miRNA, syntetisk HSA-miR-20a-5p, HSA-lad-7a og HSA-miR-320a ved kendte koncentrationer (Takara) blev også omvendt-transkriberet og forstærkes. Koncentrationen af ​​hvert miRNA blev derefter beregnet ifølge standardkurven. Alle reaktioner, herunder uden template kontrol, blev kørt i duplikat.
Serum PG og H. pylori
niveauer Salg Serum PG koncentrationer og H.pylori
(HP) niveauer blev bestemt ved enzymkoblet immunosorbent assay (ELISA) med PGA, PGC og H. pylori
ELISA kits (Biohit Co., Ltd., Helsinki, Finland) [16, 26, 27]. Prøverne blev analyseret i tilfældig rækkefølge, blind for histologiske resultater. Hver batch inkluderet kommercielle kontroller og blindede plasma kontroller til vurdering laboratorium variation. Alle plasma kontroller var inden middelværdien ± 2 SDS. Fem procent af alle prøver blev analyseret i to eksemplarer.
Statistisk analyse
log 10 af de miRNA kopi nummer repræsenterede niveauer af miRNA, og forskelle i niveauet af miRNA blandt grupper såvel som i lagdeling analyse blev sammenlignet ved envejs variansanalyse. Receiver Operating Characteristic (ROC) kurver og arealet under ROC-kurven (AUC) blev anvendt til at evaluere de diagnostiske virkninger af miRNA og at bestemme passende Inddelingen. Medianer serum PG-koncentrationer blev sammenlignet blandt de tre grupper samt i lagdeling analyse under anvendelse Kruskal-Wallis H tests. Pearsons korrelationskoefficient blev anvendt til at estimere sammenhængen mellem miRNA og PG-koncentrationer. Scatter plot var repræsentere korrelationsanalysen mellem serum miRNA niveauer og PGA /PGC forhold, og mellem PGA og PGC niveauer. Alle statistiske analyser blev udført ved anvendelse af SPSS 17.0 software (SPSS Inc. Chicago, USA). En to-sidet p
værdi < 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.
Resultater
demografi forsøgspersonerne
De 291 forsøgspersoner omfattede 103 kontroller, 94 patienter med AG og 94 med GC. Som det fremgår af tabel 1, var der ingen signifikante forskelle i køn (p
= 0,948), alder (p
= 0,654) og H. pylori
infektioner status (p
= 0.580) blandt tre groups.Table 1 Karakteristik af forsøgspersonerne
Variabler
Kontrol
atrofisk gastritis
mavekræft
n = 103

n = 94
n = 94
Køn
Mand
65 (63,1%)
61 (64,9%)
59 (62,8%)
Female
38 (36,9%)
33 (35,1%)
35 (37,2%)
P
= 0,948
Alder (år)
Mean
59,1 ± 10,6
60,4 ± 11,2
60,2 ± 11,1
Rækkevidde
23-80
28-83
27-80
P
= 0,654
H.pylori
infektionsstatus
HP-
60 (58,3%)
48 (51,1%)
53 (56,4%)
Hp +
43 (41,7%)
46 (48,9%)
41 (43,6%)
P
= 0.580
Korrelationer mellem udtryk for serum miRNA og mavesygdomme
Der var ingen signifikante forskelle i niveauerne af miR- 20a-5p og lad-7a blandt kontrollerne, AG og GC-grupper (p
= 0,581, 0,445, henholdsvis), men miR-320a-niveauer faldt gradvist mellem de forskellige grupper (4,99 ± 0,46 vs. 4,94 ± 0,45 vs. 4,90 ± 0,44, p
= 0,152, tabel 2) .table 2 Niveauer af serum miRNA (middel ± SD), PG (median ± SD) mellem forskellige gastrisk sygdomsgrupper
Variabler

CON
AG
GC
P- Drømmeholdet værdi
miR-20a-5p
3,77 ± 0,74
3,84 ± 0,69
3,83 ± 0,68
0,581
Mand
3,80 ± 0,77
3,90 ± 0,73
3,88 ± 0,78
0,59
Female
3,72 ± 0,69
3,73 ± 0,60
3,75 ± 0,47
0,855
lad-7a
3,72 ± 0,34
3,77 ± 0,29
3,75 ± 0,28
0,445
Mand
3,72 ± 0,31
3,78 ± 0,32
3,77 ± 0,28
0,367
Female
3,71 ± 0,39
3,76 ± 0,24
3,72 ± 0,28
0,93
miR-320a
4,99 ± 0,46
4,94 ± 0,45
4,90 ± 0,44
0,152
Mand
5,03 ± 0,49
5,01 ± 0,46
5,00 ± 0,42
0,76
kvindelige
4,93 ± 0,40
4,81 ± 0,39
4,73 ± 0,43
0,035 *
PGA
146,3 ± 101,5
111,0 ± 85,4
130,1 ± 107,1
0,044 §
PGC
19,2 ± 17,6
14,0 ± 12,2
23,1 ± 23,0
0,003 §
PGA /PGC
9,52 ± 4,85
9,52 ± 5,23
7,86 ± 5,46
0,039 §
P
*
: GC vs
Kontrol; P
§
: forskel mellem de tre grupper. CON: Tilfælde med minimal overfladisk gastritis blev behandlet som kontrol; AG: atrofisk gastritis; GC:. Mavekræft
Stratificering efter køn og alder viste, at miR-320a udtryk var lavere i kvindelige GC patienter end i kontrollerne (p
= 0,035), og forskellen var især markant i kvindelige GC patienter ældre end 60 år sammenlignet med kontroller (p
= 0,008) (tabel 3). AUC miR-320a til påvisning af kvindelige GC patienter over 60 var 0,699. Den bedste cut-off punkt var 4,76, med en følsomhed på 65,2% (95% CI = 45,8-84,7%), og en specificitet på 68,2% (95% CI = 48,7-87,6%). Vi har også analyse vores data i H.pylori
lagdeling, men der var ingen forskel mellem nogen af ​​grupperne som vist i tabel 4.Table 3 Lagdeling analyse af serum MIR-320a plan mellem forskellige gastriske sygdomsgrupper (middel ± SD )
miRNA Vejviser CON (n)
AG (n)
GC (n)
P-
værdi
miR-320a
Mand
≥60
5,02 ± 0,44 (27)
4,96 ± 0,43 (28)
4.99 ± 0,46 (26)
0,796
< 60
5,03 ± 0,53 (38)
5,05 ± 0,49 (33)
5,01 ± 0,39 (33)
0,859
Female
≥60
4,98 ± 0,46 (22)
4,77 ± 0,39 (24)
4,63 ± 0,41 (23)
0,008 *
< 60
4,88 ± 0,31 (16)
4,91 ± 0,39 (9)
4,92 ± 0,42 (12)
0,774
P
*
: GC vs
Control. n betyder prøven antallet af hver undergruppe.
Tabel 4 Expression niveauer af serum miRNA (gennemsnit ± SD), PG (median ± SD) mellem forskellige gastrisk sygdomsgrupper når stratificeret af Helicobacter pylori status
Variabler

CON
AG
GC
P- Drømmeholdet værdi
HP-
miR-20a-5p
3,83 ± 0,71
3,88 ± 0,59
3,85 ± 0,70
0,926
Mand
3,84 ± 0,72
3,90 ± 0,59
3,89 ± 0,34
0,931
kvindelige
3.82 ± 0,71
3,86 ± 0,60
3,75 ± 0,53
0,881
lad-7a
3,74 ± 0,31
3,81 ± 0,31
3,76 ± 0,25
0,505
Mand
3,73 ± 0,31
3,84 ± 0,34
3,77 ± 0,25
0,36
Female
3,76 ± 0,30
3,76 ± 0,28
3,74 ± 0,27
0,972
miR-320a
5,02 ± 0,48
4,90 ± 0,45
4,91 ± 0,47
0,311
Mand
5,03 ± 0,50
4,97 ± 0,48
4,98 ± 0,44
0,813
Female
4,99 ± 0,44
4,81 ± 0,41
4,74 ± 0,50
0,216
PGA
134,99 ± 92,27
96,78 ± 76,05
141,99 ± 125,80
0,056
PGC
15.13 ± 13,67
10.37 ± 9.02
23,15 ± 25,11
0,001
PGA /PGC
10,66 ± 4,81
11.00 ± 6.04
9.17 ± 6.28
0,22
Hp +
miR-20a-5p
3,69 ± 0,78
3,79 ± 0,79
3,81 ± 0,66
0,743
Mand
3,75 ± 0,86
3,90 ± 0,31
3,86 ± 0,82
0,785
Female
3,62 ± 0,66
3,53 ± 0,55
3,74 ± 0,43
0,542
lad-7a
3,68 ± 0,38
3,74 ± 0,27
3,74 ± 0,31
0,661
Mand
3,70 ± 0,31
3,73 ± 0,30
3,77 ± 0,33
0,717
Female
3,66 ± 0,48
3,75 ± 0,18
3,70 ± 0,28
0,795
miR-320a
4,95 ± 0,44
4,98 ± 0,45
4,89 ± 0,40
0,634
Mand
5,01 ± 0,49
5,05 ± 4,59
5,05 ± 0,46
0,961
Female
4,87 ± 0,36
4,81 ± 0,38
4,72 ± 0,36
0,471
PGA
162,15 ± 112,44
125,81 ± 92,66
114,74 ± 75,23
0,058
PGC
24,82 ± 20,80
17,86 ± 13.95
23,10 ± 20,16
0,182
PGA /PGC
7,91 ± 4,49
7,97 ± 3,70
6.16 ± 3,57
0,06
Korrelationer mellem udtryk for serum miRNA og deres forudsagt target PG molekyler
for foreningen analyse blev miR-20a-5p udtryk ikke korreleret med PGA-niveauer (r = 0,110, p
= 0,269), og lad-7a og miR-320a blev ikke korreleret med PGC niveauer (r = -0,162, -0,102; p
= 0,102, 0,306, henholdsvis), men de blev alle positivt korreleret med PGA /PGC forhold (r = 0,408, 0,255, 0,324; p
= < 0,001, 0,009, 0,001, henholdsvis) (figur 1). Sammenlignet de studerede miRNA og de forudsagte mål PG molekyler med kontroller, fandt vi serum PGA niveauer i GC patienter blev nedsat (130,1 ± 107,1 vs. 146,3 ± 101,5, s
= 0,276) blev, og PGC niveauer i GC patienter steget (23,1 ± 23,0 vs. 19,2 ± 17,6 p
= 0,174), men forskellene var ikke signifikante. PGA /PGC-forholdet i GC-gruppen blev nedsat (7,86 ± 5,46 vs. 9,52 ± 4,85, p
= 0,039, tabel 2), med en korrelationskoefficient på 0,727 (figur 1). Sammenlignet med kontroller, blev serum miR-320a niveauer faldt (4,90 ± 0,44 vs. 4,99 ± 0,46, p
= 0,153) og serum PGC niveauer blev forøget i GC-gruppen (23,1 ± 23,0 vs. 19,2 ± 17,6 p
= 0,174), viser tilsyneladende modsatrettede tendenser, selvom forskellene ikke var signifikante (tabel 2). Figur 1 Scatter plot graf. Figur 1-A - C. Scatter plot af serum miRNA niveauer, og deres sammenhænge med PGA /PGC-forholdet fra kontrolgruppen. A. miR-20a-5p; B. lad-7a; C. MIR-320a. Figur 1-D. Scatter plot af sammenhængen mellem serum PGA og PGC niveauer. Alle scatter plot viste foreningen analyse af varianterne mellem x og y-aksen.
Diskussion Nyt fund har præsenteret serum /plasma miRNA som potentielle biomarkører for flere sygdomstilstande, herunder humane kræftformer [28-31]. Men undersøgelser af serum miRNA i relation til gastrisk sygdomme været begrænset, og ingen opmærksomhed er blevet betalt til miRNA serielt rettet mod samme gen. Baseret på en række miRNA forudsagt af bioinformatik software til at målrette til PGA og /eller PGC valgte vi miR-20a-5p, lad-7a og miR-320a til yderligere undersøgelse. Vi undersøgte potentialet af MIR-20a-5p, lad-7a og MIR-320a i diagnosen af ​​AG eller GC og korrelationen af ​​de tre miRNA med deres forudsagte målmolekyler PGA, PGC og PGA /PGC-forhold. Udtrykket af miR-320a var lavere hos ældre kvindelige GC patienter end i kontrollerne, tyder på, at miR-320a kan vise sig en værdifuld markør til diagnosticering ældre kvinder med GC. miR-20a-5p, lad-7a og miR-320a var positivt korreleret med PGA /PGC ratio, der indirekte kunne afspejle den funktionelle status af maveslimhinden.
Adskillige undersøgelser har identificeret tumor-specifikke miRNA ændringer i plasma /serum af kræftpatienter, og har vist potentialet af cirkulerende miRNA som nye ikke-invasive biomarkører for kræftscreening [12, 32]. Resultaterne af vores undersøgelse viste ingen forskelle i serum miR-20a-5p og lad-7a niveauer blandt kontrollerne, AG og GC grupper, mens miR-320a udtryk faldt igennem kontrollerne, AG og GC grupper. Serum miR-320a var lavere i kvindelige GC patienter end i kontrollerne, og denne forskel var særlig markant i ældre kvinder, i alderen over 60, hvilket tyder på, at miR-320a kan være en ny klinisk biomarkør for GC diagnose med befolkningen specificitet. Studier af miR-320a til dato har været begrænset til sine roller i reguleringen af ​​de fysiologiske funktioner i blod-hjerne-barrieren [33], og i intrahepatisk cholangiocarcinom [34, 35], tyktarmskræft [36] og børneleukæmi [37]. Så vidt vi ved, er nuværende undersøgelse er den første til at rapportere, at MIR-320a kunne fungere som et serum biomarkør for GC, især i ældre kvinder. Skønt få studier har undersøgt dens mekanismer, har nogle rapporteret en sammenhæng mellem prognoserne mål PGC og køn, mens andre rapporterede, at PGA /PGC-forholdet var relateret til alder, men kun i kvinder [38, 39]. Software har også forudsagt, at MIR-320a målretter østrogen-relaterede receptor gamma (http://​www.​targetscan.​org/​cgi-bin/​targetscan/​mamm_​31/​targetscan.​cgi?​species=​Human&​gid=​&​mir_​c=​&​mir_​nc=​&​mirg=​hsa-miR-320). Disse rækker af beviser alle antyder, at MIR-320a kan spille en vigtig rolle i udviklingen af ​​GC hos kvinder, og kunne indirekte afspejler den funktionelle tilstand af maveslimhinden. Dets anvendelse som en biomarkør ville være forbundet med fordelene ved ikke-invasion, lave omkostninger og højere stabilitet. Der er dog behov for yderligere undersøgelser i større prøver at afklare dens mekanismer og kontrollere dets anvendelse som biomarkør i ældre kvinder med GC. Selvfølgelig ændringerne i miRNA måske ikke kun relateret til ændringerne i maveslimhinden funktion betingelser, men også relateret til nogle andre faktorer, for eksempel blodmangel [40], stimulus af patogene mikroorganisme såsom H.pylor
[41 ] i nogle proteiner involveret i miRNA processeringsvej ligesom drosha, Dicer og Argonaute [42, 43]. De øvrige faktorer i forbindelse bør overvejes i de videre undersøgelser i fremtiden.
Serum PGA og PGC niveauer synes at være relateret til maveslimhinden kirtel og cellulære mængder, og også indirekte afspejler sekretær funktion af gastriske corpus og /eller gastrisk antrum. PGA udskilles fra den gastriske corpus og gastrisk vinkel, mens PGC udskilles fra al maven, herunder corpus, vinkel og antrum. Et fald i PGA /PGC-forhold afspejler udviklingen af ​​atrofiske læsioner på maveslimhinden [16], og en lav PGA /PGC-forholdet er relateret til en høj risiko for GC [38, 44, 45]. Dette er derfor blevet anvendt som en effektiv parameter til screening individer med høj risiko for GC i populationen, og kan være en klinisk nyttig biomarkør for GC og præcancerøse sygdomme, såsom AG [16, 38, 46, 47]. Broutet et al. rapporterede, at selv om PGC blev udskilt fra forskellige steder i maven, blev det relateret til PGA; mens PGA steg hurtigt, PGC varieret lidt, og korrelationskoefficienten nåede 0,75 [38]. Den aktuelle undersøgelse også beregnet en korrelationskoefficient mellem PGA og PGC af 0,727. Dette forhold kan forklare, hvorfor PGA /PGC forhold afspejler den funktionelle status af maveslimhinden mere præcist end både PGA eller PGC alene. Vores undersøgelse viste ingen sammenhæng mellem ekspressionen af ​​MIR-20a-5p og PGA, lad-7a og PGC, eller MIR-320a og PGC, men der var positive korrelationer mellem hver af de tre og PGA /PGC-forhold, som allerede var kendt som et nyttigt biomarkør for sygdomsdiagnose, og de undersøgte miRNA var synkron med den kendte PGA /PGC forhold tyder deres potentiale som nyttige biomarkører for sygdomsdiagnose.
betragtning H. pylori
er en vigtig miljøfaktor i maven, som er også en klasse Icarcinogen defineret af World Health Organization (WHO), vi analyse af de tre miRNA i HP lagdeling mellem forskellige mavesygdomme, men fandt ingen forskel. Hvorvidt H.pylori
og /eller andre miljømæssige faktorer påvirker denne forening har brug for flere undersøgelser i større prøver i fremtiden.
Der var nogle begrænsninger i vores undersøgelse. For det første kan de udvalgte miRNA funktionelt målrette PGA /C og /eller i det mindste var eneste bevis ved Bioinformation software, er der behov for nogle beviser for yderligere funktionelle eksperimenter. For det andet, og der er behov korrelation af udtryk i vævet af miRNA prognoserne målprotein til yderligere undersøgelse. For det tredje korrelationen af ​​miRNA ekspression og klinisk-patologiske karakteristika af patienter med gastrisk cancer, såsom BORRMANN klassifikation, vækstmønster, TNM stadie, invasion dybde og lymfeknudemetastaser, et al. blev ikke yderligere analyseret på grund af biopsi-begrænset information mangler. For det fjerde kilden til kontroller ikke var den normale befolkning, men med en minimal overfladisk gastritis ifølge den patologisk diagnose, og gastritis var også hører en kaskade af GC udvikling.
Konklusion
Afslutningsvis vi demonstreret, at serum miR- 320a var lavere i kvindelige GC patienter over 60 end i kontrollerne, og kan således udgøre en værdifuld markør til diagnosticering GC i denne gruppe. Og niveauerne af miR-20a-5p, lad-7a og miR-320a var positivt korreleret med PGA /PGC ratio, der indirekte kunne afspejle den funktionelle status af maveslimhinden.
Notes
Qian Xu, Qi- Guan Dong bidrog ligeligt til dette arbejde
Forkortelser
miRNA:.
microRNA
PG:
Pepsinogen

PGA:
Pepsinogen A
PGC:
Pepsinogen C
QRT-PCR:
kvantitativ revers transkription polymerasekædereaktion
ELISA:
Enzyme linked immunosorbent assay
ROC kurve:
Receiver opererer karakteristisk kurve

AUC:
Arealet under kurven
nt:
nukleotid
cDNA :
komplementær DNA
AG:
atrofisk gastritis
GC:.
mavekræft


erklæringer
Tak
Dette arbejde er støttet af tilskud fra National Key Basic Research Program Kina (973 Program Sagsnr. 2010CB529304), National Natural Science Foundation of China (Ref No.31200968), og Fonden for Videnskab og Teknologi i Liaoning-provinsen (ref nr. 2011225002).
Forfattere 'oprindelige indsendt filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 12907_2012_129_MOESM1_ESM.pdf Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12907_2012_129_MOESM2_ESM.doc Forfatternes oprindelige fil til figur 2 konkurrerende interesser
Alle forfatterne læst og godkendt den endelige manuskript, og ikke har en kommerciel eller anden forening, der kan udgøre en interessekonflikt .
Forfattere bidrag
YY udtænkt og designet denne undersøgelse og revideres manuskriptet. QG-D var ansvarlig for eksperimentet og udførte data fortolkning. QX involveret i at skrive papir og revidere manuskriptet kritisk for vigtige intellektuelle indhold. LP-S deltaget i udformningen af ​​det delvis undersøgelse. CY-H udførte den statistiske analyse. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Nitrogenoxid-en endogen inhibitor af mavesyresekretion hos isolerede humane gastriske glands
• CD44 /CD24 ekspression i tilbagevendende gastrisk cancer: en retrospektiv analysis