Регулирование выпуска амилина из культивируемых кролика желудка фундального клеток слизистой оболочки

Регулирование выпуска амилина из культивируемых кролика желудка фундального клеток слизистой оболочки
Аннотация
фон
Amylin (островок амилоида полипептид) представляет собой гормон, с предложенными ролями в регуляции гомеостаза глюкозы, двигателя желудка и секреторной функции и gastroprotection. В слизистой оболочке желудка амилин обнаруживается колокализуются с соматостатина в D-клетках. Факторы, регулирующие желудка высвобождение амилина неизвестны. В данном исследовании мы исследовали регулирование высвобождения амилина из слизистой оболочки желудка клеток в первичной культуре. Кролик фундальную клетки слизистой оболочки, обогащенные для D-клеток с помощью противотока сепарации культивировали в течение 40 часов. были оценены амилин и соматостатин высвобождение в течение 2-х часов в ответ на агонисты.

Результаты выпуска амилин значительно повышается за счет активации протеинкиназы С с форбол-12-миристат-13-ацетат, аденилатциклазы с форсколина и повышение внутриклеточного кальция с А23187. Холецистокинин (ССК), эпинефрин и глюкагон-подобный пептид-1 (ГПП-1) каждый стимулируется высвобождение амилина в зависимости от дозы образом. Максимальный ССК-стимулированной релиз был больше, чем любой адреналином или GLP-1, даже когда последствия двух последних были пополнены изобутилметилксантина. Стимулированного высвобождения амилин значительно ингибировалась карбахол (на 51-59%) и октреотид (на 33-42%). релиз Соматостатин параллельно, что амилина.
Выводы
Модель культивируют D-клеток обеспечивает средство изучения высвобождения амилина. секреции Amylin стимулируется рецептором-зависимой и -независимый активации Са 2 + /протеинкиназа С и адентилатциклазы путей. Ингибирование включает в себя активацию мускариновых рецепторов и автоматического регулирования соматостатина.
Предпосылки
Amylin (островковых амилоидных полипептида), представляет собой пептид 37-аминокислоты преимущественно экспрессируется в панкреатических островках Лангерганса [1, 2]. Амилина также локализована в желудочно-кишечном тракте [3] и в [4] мозга. Многое недавняя работа была сосредоточена на физиологии поджелудочной железы амилина; пептид по-видимому, со-хранить и совместно секретируется с инсулином в панкреатических В-клеток [5, 6], меньшая часть является колокализуются с соматостатина в панкреатических D-клеток [7].
амилина, как полагают, функционируют как гомеостаз глюкозы гормоном, регулирующим. Амилин подавляет базальную и стимулируемого инсулином синтеза гликогена в скелетной мышце крысы [8, 9]; он ингибирует инсулин, соматостатин и секрецию глюкагона из изолированных островков поджелудочной железы и неповрежденной перфузии поджелудочной железы и снижает постпрандиальной глюкагон и секреции инсулина [10-12]. Amylin может также способствовать гликемический контроль, замедляя опорожнение желудка [13]. Это дополнение к этим физиологической роли, амилин, как полагают, играют важную роль в патогенезе сахарного диабета. Он является основным компонентом отложений амилоида в островках пациентов с инсулиннезависимым сахарным диабетом [1, 2] и дефицит амилина может способствовать провал гликемического контроля типичного инсулинозависимого диабета [14] и в исследованиях на животных сам амилин-видимому, вызывает резистентность к инсулину [15].
различные физиологические эффекты на желудочно-кишечный тракт, также описаны. Парентеральное введение амилина имеет эффект anorectant [13], в дополнение к значительному сокращению опорожнение желудка [16]. Действие защищающее против reserpine- и серотонина-индуцированной гастропатии было описано [17]. Внутривенное амилин является мощным ингибитором базальную, пентагастрина и 2-дезокси-D-глюкоза стимулированную секрецию желудочной кислоты у крыс [18] и амилин уменьшенный секрецию кислоты в изолированном препарате желудка мышей [19]. Стимулятор действие на сывороточный гастрин также сообщалось, хотя это может быть вторичным по отношению к ингибированию секреции кислоты [20]. В соответствии с этими действиями амилина сайты связывания были обнаружены в крыс желудка фундальном слизистой оболочки [21]. В пределах амилина желудочно-кишечного тракта, как представляется, ко-локализуются с другими желудочно-кишечными пептидами. Использование in-situ
гибридизационного, иммунофлюоресценции и иммуногистохимии, Малдер и др
показали, что амилин преимущественно колокализуются с соматостатина в D-клетках крыс и антрального слизистой оболочки мыши и крысы фундальном слизистой оболочке [22]. Меньшая часть амилина колокализуются для разделения популяций гастрина-содержащих клеток в антральном и PYY клеток, содержащих в глазном дне. Исследования, проведенные в PDX-1 дефицитных мышей (которые не разработают G-клеток) не было выявлено никаких изменений в желудочном экспрессии амилина, подтвердив доминирующую экспрессию амилина внутри D-клеток [23]. Эти данные, показывающие присутствие амилина и Рецепторы амилина, в сочетании с фармакологическими эффектами, Предполагают, что амилин может иметь паракринной и /или эндокринных регулирующую и патофизиологическую роль в слизистой оболочке желудка. Однако нет никаких исследований, изучают процессы, связанные с секрецией амилина желудка. Такие данные являются предпосылкой для дальнейшего понимания желудочной амилина физиологии. Первичные культуры желудочных и кишечных эндокринных клеток были использованы для изучения физиологических и патофизиологических контроль над несколькими желудочно-кишечных пептидов, включая гастрин, соматостатин, глюкагон-подобный пептид-1 (GLP-1) и холецистокинин (CCK) [24-30]. Совместная локализация амилина с соматостатин делает желудочного фундальный подготовки D-Cell полезную модель для изучения контроль секреции амилина на клеточном уровне.
В этом исследовании мы рассмотрели рецептор-зависимые и рецептор-независимое регулирование амилина секреция из культивируют кролика желудка фундального клеток слизистой оболочки. Холецистокинин, глюкагон-подобный пептид-1 и эпинефрин стимулируется высвобождение амилина в зависимости от дозы и мускариновых рецепторов агонист рецептора карбахол и агонист соматостатина октреотид блокировали амилина. Соматостатин и высвобождение амилина произошли параллельно.
Результаты
Receptor независимый от стимуляции пептид высвобождения
На начальном этапе оценки, может ли высвобождение амилина быть обнаружены из культур кролика фундального клеток использовали мощные раздражители рецептор-независимый [ ,,,0],26] общее содержание клеток (ТСС) амилина в препарате культуры клеток (801 ± 151 фмоль /лунку) примерно от 4 до 5 раз ниже, чем у соматостатина (3 768 ± 1 325 фмоль /лунку). Значительное стимулирование выпуска амилина произошло с активным форболовым эфиром (форбол-12-миристат-13-ацетат, РМА), который активирует протеинкиназы С (ПКС), активации аденилатциклазы с форсколина и повышение внутриклеточного кальция с ионофором А23187 (рис 1). Форболовый эфир был самым мощным стимулятором, что приводит к 8,5-кратному увеличению выпуска амилина (базально-релиз 2,14 ± 0,8% с увеличением до 18,5 ± 1,4% ТСС). Forskolin увеличил выпуск в 3,3 раза (максимальное высвобождение 7,2 ± 1,4% от TCC) и А23187 в 1,8 раза (3,8 ± 0,5% ТСС), они были заметно менее мощными, чем PMA. Там не было никаких существенных различий между моделями соматостатина и амилина выпуска (рис. 1). Рисунок 1 Рецептор-независимая стимуляция амилина (сверху) и соматостатина (снизу) из культивируемых D-клеток. Клетки стимулировали форбол-12-миристат-13-ацетат 100 нМ (PMA), 10 мкМ форсколина (FSK) и А23187 1 мкМ в течение 2-х часов. Результаты, выраженные в% от содержания клеток пептида выпущен, среднее значение ± SEM, ** P &
л; 0,01 по сравнению с контролем, * P
&л; 0,05 по сравнению с контролем.
Рецептор-зависимый стимуляция
Предыдущие исследования показали, что ССК является мощным стимулятором высвобождения соматостатина [26]. здесь Это было подтверждено. ССК дозозависимо стимулировали высвобождение амилина из культивированных клеток (рисунок 2). Максимальная стимуляция, увеличение 2,75 раза, 2,1 ± 0,7% базальный высвобождение увеличилась до 5,9 ± 0,8% TCC, произошло с ССК 10 нМ. Аналогичная картина реакции от дозы наблюдалось для CCK-стимулированного высвобождения соматостатина, хотя максимальный выпуск был относительно выше для соматостатина (в 4,4 раза, 1,1 ± 0,1% до 5,2 ± 0,7% ТСС), чем амилин (рисунок 2). Рисунок 2 ССК-стимулированных амилин (верхняя часть) и соматостатин (снизу) высвобождение из культивируемых D-клеток. Культивируемые клетки слизистой оболочки стимулировали CCK в течение 2-х часов. Результаты, выраженные в% от содержания клеток пептида выпущен, среднее значение ± SEM, * P
&л; 0,05 по сравнению с контролем.
Активации аденилатциклазы-рецепторов, сопряженных с любой эпинефрина или глюкагон-подобный пептид-1 приводило к зависимому от дозы небольшого увеличения как соматостатин (максимальное увеличение на 1,44 и 1,35 раза соответственно) и выпуска амилина (1,36 и 1,25 раза соответственно и) (3 и 4). Рисунок 3 Влияние адреналина на амилина (вверху) и соматостатина (внизу) освобождения из культивируемых D-клеток. Клетки стимулировали с увеличением концентраций адреналина (EPI), в присутствии или в отсутствие 100 мкМ изобутилметилксантина (IBMX) в течение 2-х часов. Результаты, выраженные в% от содержания клеток пептида выпущен, среднее значение ± SEM, * P
&л; 0,05 по сравнению с контролем. Рисунок 4
Влияние глюкагон-подобный пептид-1 на амилина (вверху) и соматостатина (внизу) освобождения из культивируемых D-клеток. Клетки стимулировали с возрастающими концентрациями глюкагон-подобного пептида-1 (GLP), в присутствии или в отсутствие 100 мкМ изобутилметилксантина (IBMX) в течение 2-х часов. Результаты, выраженные в% от содержания клеток пептида выпущен, среднее значение ± SEM, * P
&л; 0,05 по сравнению с контролем.
Ответов на эпинефрина и GLP-1, были пополнены совместного введения с ингибитором фосфодиэстеразы изобутилметилксантина (IBMX) (100 мкМ). Базальный релиз амилин составило 2,0 ± 0,2% TCC и максимальная IBMX повышенной выпуск 3,2 ± 0,2% TCC с адреналином при 100 мкМ и 3,2 ± 0,3% TCC с GLP-1 в концентрации 10 нМ. Базальный релиз соматостатина (1,1 ± 0,1% TCC) увеличилась до 2,7 ± 0,1% TCC с адреналином + IBMX и 2,1 ± 0,4% TCC с GLP-1 + IBMX. Они по-прежнему значительно меньше, чем CCK-стимулированного высвобождения. Там не было никаких различий в характере или соотношении соматостатина и амилина ответов (рисунки 3 и 4).
Ингибирующее регулирование выпуска амилина
Лечение с помощью аналогов соматостатина октреотида производятся небольшие, но не значительное снижение как базальной амилина ( на 14%) и базальных соматостатина (на 18%) секреции (рисунок 5). Carbachol не имели никакого очевидного влияния ни на базальной амилина или секреции соматостатина (рисунок 5). ССК-стимулированных высвобождение амилина значительно подавляется октреотид (на 42%) и мускариновых агониста карбахол (на 51%). Аналогично эпинефрин (с IBMX) -stimulated выпуск амилин подавлялось на 33% по октреотида и 59% карбахолина (как P &
ЛТ; 0,05). Как показано на рисунке 6, аналогичная картина была замечена с выпуском соматостатина. Рисунок 5. Влияние октреотида и карбахолина на базальной амилина и соматостатина высвобождения из культивируемых D-клеток. D-клетки стимулировали либо октреотид 10 нМ (OCT) или карбахол 100 мкМ (CBH) в течение 2 часов и выпуска амилина и соматостатин оцененной. Результаты выражали как% от содержания клеток пептида выпущен, среднее значение ± SEM.
Рисунок 6 ингибирующие эффекты октреотида и карбахолина на агонистом-стимулированных амилина (сверху) и соматостатина (внизу) выпуска. D-клетки стимулировали либо ССК 10 нМ или эпинефрин с изобутилметилксантина как 100 мкМ (EPI) в комбинации с октреотида 10 нМ (OCT) или карбахол 100 мкМ (CBH) в течение 2-х часов. Результаты, выраженные в% от содержания клеток пептида выпущен, среднее значение ± SEM, * P
&л; 0,05 по сравнению с агонистом соответствующего-стимулированного высвобождения.
Обсуждение
Это первое исследование с целью изучить высвобождение амилина из слизистой оболочки желудка на клеточном уровне. Результаты показали, что амилин не только сохраняется в клетках слизистой оболочки желудка, но также, что предполагаемые физиологические агонисты регулируется высвобождение пептида. Предыдущие исследования локализованы амилин в желудок с помощью нозерн-блоттинга [31, 32], иммуноцитохимия [33], радиоиммуноанализ [3] и Ситу
гибридизация [22], но выхода желудочного амилина в не было продемонстрировано ранее.
большинство желудка фундальном амилина по-видимому, локализованы с соматостатина в D-клеток [22] Поэтому мы использовали модель культивируемых кролика D-клеток для исследования агентов, контролирующих клеточный высвобождение амилина и сравнить это с соматостатина секреции.
Первые исследования были выполнены с мощными агентами, известными непосредственно активировать секрецию пептида из эндокринных клеток способом, рецептор-независимый [26] форболовыми эфиры (такие РМА) непосредственно активировать протеинкиназу с во внутреннем слое клеточной мембраны; это, в свою очередь активизирует клеточные процессы, необходимые для экзоцитоза. PMA был мощным стимулятором как соматостатин и амилина секреции. Ионофор кальция А23187, который повышает уровень внутриклеточного кальция ([Са 2 +] <суб> я]) также стимулировали амилин выпуск, хотя он был значительно менее мощным, чем PMA. Это похоже на ответы, наблюдаемые в человеческом антраля [26] и собачьих фундального D-клеток [30], где считают, что рост [Са 2 +] <суб> я в основном содействующий, а не непосредственно стимулируя секрецию. Прямая активация аденилатциклазы с форсколина также стимулировали высвобождение амилина. Поэтому первоначальные исследования показали, что высвобождение амилина может быть стимулировано путем активации любого из двух основных внутриклеточных сигнальных путей, известных для усиления секреции пептида. Определив, что эти пути были активны, мы исследовали физиологические агенты, которые могли бы стимулировать секрецию амилин таким образом, рецептор-зависимой.
Холецистокинин-8 произвели дозозависимое увеличение секреции амилина и соматостатина. ССК, как известно, является сильным в пробирке
стимулятором высвобождения соматостатина из антрального и фундального D-клеток [26, 30, 34]. Аналогичный ответ был замечен доза для амилина, хотя прирост в целом был немного больше, чем для соматостатина амилина. Дальнейшие исследования будут необходимы, чтобы определить, является ли это отдельный пул соматостатина специально секретируется после стимуляции ССК. Фундальный D-клетки экспрессируют оба ССК-1 (ССК <суб> A) и ССК-2 (гастрина /CCK <суб> B) рецепторов [35]. Активация этих рецепторов вызывает активацию фосфолипазы С, выпуск diacylglerol и инозитол-1,4,5-трифосфата и последующим повышением [Са 2 +] <суб> I и активация PKC, что приводит к пептидной высвобождения [36 ]. Эти результаты согласуются с результатами для А23187 и ФМА стимуляции. Поэтому представляется, что ССК может выступать в качестве физиологического стимулятора высвобождения амилина.
Эпинефрина и ГПП-1 изготовляет стрелковое дозозависимое увеличение секреции амилина и соматостатин. Этот эффект может быть повышена за счет совместного лечения с ингибитором фосфодиэстеразы IBMX, который ингибирует распад цАМФ и усиливает ответы, генерируемые аденилатциклазы связанных рецепторов. Однако ответы были все еще значительно меньше, что наблюдаемые при активации Ca 2 + /ПКС затрагивающего пути либо CCK или РМА. Подобные различия в чувствительности, были описаны в человеческом антральном [26] и собачьей фундальную [30] D-клеток.
Преобладающими тормозные влияния, описанные до сих пор на фундального D-клетки являются мускариновые агонисты [37, 38] и ауторегуляции по соматостатина себя [39, 40]. Ответы, описанные здесь, находятся в соответствии с данными о выпуске соматостатина из собачьих фундального D-клеток [30, 37]. В противоположность этому, мускариновые рецепторы являются стимулирующими к антральных D-клеток [41], вероятно, отражает определенную разницу в функции. Настоящее исследование подтвердило ингибирующие действия как соматостатин-аналога октреотида и мускаринового агониста карбахолина против высвобождения соматостатина. Аналогичное торможение стимулированного высвобождения амилина был замечен. Это говорит о том, что в естественных условиях
ингибирования высвобождения амилина включает парасимпатическую ввод и аутокринную регулирование соматостатином.
При всех условиях изучали соматостатин и амилин, секретируемый параллельно, как можно ожидать, если они совместно хранятся в секреторных гранулах. Инсулин и амилин совместно, секретируемый из панкреатических бета-клеток, секреции обычно происходит параллельно [42-44], но дифференциальная секреция сообщалось в эксперименте моделях сахарного диабета [45, 46]. Дальнейшие исследования будут необходимы для дальнейшего определения взаимосвязи между секрецией и действиями желудочной амилина и соматостатин. В изолированных панкреатических островках эти два пептида, как представляется, кооперативную роль в регуляции секреции пептид: комбинированный imunoneutralisation амилина и соматостатина приводит к большему повышению секреции инсулина и глюкагона, чем нейтрализации либо только [10]. Будет интересно изучить ли аналогичные результаты наблюдаются при желудочных функций.
Постпрандиальной выпуск кишечника ССК и GLP-1 ингибируют опорожнение желудка и секрецию кислоты [13, 47]. Эти эффекты, хотя быть медитировал, по меньшей мере, частично с помощью промежуточных продуктов, высвобожденных из D-клетки, а не непосредственно ингибирующих кислотно-секретирующих париетальных клеток [48]. Считалось, что соматостатин был единственным промежуточным, но результаты данного исследования позволяют предположить, что паракринная регулирование амилина теменной, ECL- и другие эндокринные клетки могут играть определенную роль в интегративных ответов на питание. Амилин-индуцированное ингибирование гистамина высвобождается из крыс фундального слизистых оболочек сегментов в пробирке
опосредуется за счет увеличения выпуска соматостатина [19], но с использованием антагониста селективного рецептора соматостатина Rossowski и др
показали в естественных условиях
у крыс, что часть кислотно-ингибирующее действие обоих амилина и родственного пептида адреномедуллина были соматостатин-независимой [49]. Конкретные роли амилина в физиологии желудка требует дальнейшего разъяснения, но эти данные свидетельствуют о том, что локально выпущен амилин непосредственно способен регулировать функции слизистых оболочек.
Ответов на адреналином и карбахолина позволяют предположить, что вегетативная иннервация может регулировать секрецию амилина. Общий баланс в естественных условиях
будет тогда зависеть от относительного ввода ингибирующих мускариновые и стимулирующего адренергических систем, в сочетании с циркулирующим эндокринную и местный паракринной и, возможно, факторы, в его стенке.
Заключение
Данное исследование описывает первоначальную характеристику факторы, регулирующие желудка высвобождение амилина. Мы показали, что высвобождение амилина можно стимулировать рецептор-зависимой стимуляции либо Са 2 + /ПКС и аденилатциклаза /цАМФ пути и что физиологически соответствующие пептиды и нервные медиаторы могут повысить амилин высвобождения. Это подтверждает гипотезу о том, что амилин может модуль желудка функцию слизистых оболочек. Это исследование подтверждает, что краткосрочные культуры клеток, обогащенных отмучивания будет служить моделью для изучения патофизиологического высвобождения желудка амилина и обеспечить путь дальнейшего понимания роли амилина в регуляции желудочного двигательную и секреторную функции.
Методы
материалы
Матригель была получена из Универсального Biologicals (Лондон, Великобритания), октреотид от Novartis (графство Суррей, Великобритания) и F12 Хама /модифицированной культуральной среде Игла Дульбекко (50:50, об: об), глутамин, Hanks Balanced соли раствора и фетальной телячьей сыворотки были закуплены у фирмы Gibco (Paisley, UK). Сульфатная холецистокинин-8 (ССК), человеческий GLP-1, и все другие реагенты получали от фирмы Sigma (Poole, UK). Изоляция
клеток и культура
Первичные культуры кролика желудка фундального клеток слизистой оболочки, обогащенных для D-клетки полученный, как описано ранее [39, 48]. Если коротко, то кролик фундальную слизистая подвергали последовательным ЭДТА и коллагеназы. Полученную клеточную суспензию обогащен D-клеток с помощью противоточного elutatriation с использованием стандартного ротора Beckman JE 5.0, как описано выше. D-клеток, обогащенной фракции ресуспендировали в полной культуральной среде (F12 Хэма /модифицированную культуральную среду Дульбекко Игла (50:50, по объему), содержащий 2 мМ глутамина, 10 мМ HEPES, рН 7,4, 0,22% раствором NaHCO <суб> 3, 10% фетальной телячьей сыворотки, 1 мг /л гидрокортизона, 8 мг /л инсулина, 100 мг /л пенициллина, 100 мг /л гентамицина, 100 мг /л стрептомицина) и культивировали на матригелем 24-луночных планшетах культуры ткани [50] при плотности 1 × 10 6 клеток /лунку в течение 40 часов в атмосфере 5% CO <суб> 2, 95% воздуха при 37 ° C.
Освободить Исследования
культивируемые клетки были промыты 3 раз в среду высвобождения (сбалансированный солевой раствор Эрла, содержащей 0,1% бычий сывороточный альбумин, 10 мМ HEPES, рН 7,4) для удаления мертвых и не прилипшие клетки. Еще 1 мл среды высвобождения добавляли содержащий агонисты испытания и клетки инкубировали в течение 2-х часов при температуре 37 ° С в атмосфере 5% CO <суб> 2, 95% воздуха. После того, как период высвобождения, кондиционированную среду отсасывают и центрифугируют для удаления не прилипшие клетки. Общую клеточную содержание пептида экстрагируют кипячением в 1 мл в дистиллированной воде. Кондиционированные среды и клеточные экстракты хранили при -70 ° C до проведения анализа на содержание пептидов [30]. Измерение
Пептид
концентрации соматостатина были оценены с помощью радиоиммуноанализа (RIA) с антисывороткой K2, как описано ранее [39]. Половина максимального ингибирования связывания произошла на 2 фмоль /трубки и внутри анализа и между анализами вариации составили 7% и 8% процентов соответственно. Концентрации амилина были измерены с помощью прямого ELISA (PENNINSULA Laboratories, Belmont, CA, США), в соответствии с инструкциями производителя. Анализ имеет диапазон 0.04-2 нг /мл, и внутри анализа и вариации между анализами из &л; 5% и ≪ 14% соответственно. Антитело, используемое имеет 100% перекрестную реактивность с амилин и амилин-амида, но и ЛТ; 1% перекрестной реактивности с CGRP и незначительной реакции с другими биологически активными пептидами. Все экспериментальные образцы из одного препарата на животных анализировали в то же RIA или ELISA.
Статистический анализ
высвобождения пептида в течение 2-часового периода была выражена как процент от общего содержания клеток (TCC) этого пептида. Каждое экспериментальное условие было испытано в двух экземплярах и результаты одного препарата на животных были расценены как N = 1. Результаты выражены в виде среднего значения ± SEM из 3-6 отдельных препаратов на животных. Каждый 24-луночный планшет всегда включен контроль (базальной) скважин и положительные стимуляторы. релиз Пептид стимуляторы сравнивали с базальной выпуска на соответствующей 24-луночного планшета. Односторонний дисперсионный анализ и парного Т-тест Стьюдента были использованы для определения значимости. А П
значение &л; 0,05 рассматривался как значительный
Список сокращений
ССК:.
Холецистокинин


ECL-:
Энтерохромаффинная как
<Ьг>
GLP-1:
глюкагон-подобный пептид-1


МАПП:
островок amylioid полипептид


IBMX:
изобутилметилксантина


PKC:
протеинкиназа С


PMA:
форбол-12-миристат -13-ацетат, TCC, общее содержание клеток.


декларациях
Подтверждения
Эта работа была частично поддержана по учебной стипендии Совета по медицинским исследованиям для ILPB.
Некоторые из данные были представлены в абстрактной форме в Объединенной Европейской гастроэнтерологической неделе в Бирмингеме 1997
авторов оригинальные представленные файлы для изображений изображения Ниже приведены ссылки на авторов оригинальных представленных файлов для изображений. 'Исходный файл для фигурного 1 12899_2003_47_MOESM2_ESM.jpeg Авторского 12899_2003_47_MOESM1_ESM.jpeg авторов исходного файла для Рисунок 2 12899_2003_47_MOESM3_ESM.jpeg Авторского исходного файла для Рисунок 3 12899_2003_47_MOESM4_ESM.jpeg Авторского исходного файла для исходного файла Рисунок 4 12899_2003_47_MOESM5_ESM.jpeg Авторского на рисунке 5 "исходный файл для Рисунок 6 Выводы авторов 12899_2003_47_MOESM6_ESM.jpeg Вклад авторов
ILPB задуман и разработан исследование, выполнили изоляцию клеток, культуру, эксперименты по выпуску, иммунологических и написал проект и окончательную версию рукописи. Покойный JC задумывал исследование и соавтором первой рукописи проекта.

• Факторы риска для глубины проникновения в дифференцированной депрессии раннего рака желудка: предварительн…
• Дифференциальная экспрессия генов в мышиной желудка глазного дна не хватает интерстициальные клетки экспре…