Règlement de l'amyline libération de cellules muqueuses fundiques gastriques de lapin en culture

Règlement de l'amyline libération de cellules muqueuses fundiques gastriques de lapin en culture
Résumé de l'arrière-plan
Amylin (de polypeptide amyloïde des îlots) est une hormone avec des rôles proposés dans la régulation de l'homéostasie du glucose, moteur gastrique et la fonction sécrétoire et gastroprotection. Dans la muqueuse gastrique amyline se trouve co-localisée avec la somatostatine dans les cellules-D. Les facteurs qui régulent la libération d'amyline gastrique sont inconnus. Dans cette étude, nous avons étudié la régulation de l'amyline libération à partir de cellules de la muqueuse gastrique en culture primaire. Lapin cellules de la muqueuse fundique enrichies en cellules D par élutriation à contre-courant ont été cultivées pendant 40 heures. Les résultats de l'amyline et de la libération de somatostatine pendant 2 heures, en réponse à des agonistes ont été évalués.
amyline libération a été considérablement améliorée par l'activation de la protéine kinase C avec du phorbol-12-myristate-13-acétate adénylcyclase forskoline et avec l'élévation de calcium intracellulaire avec l'A23187. Cholécystokinine (CCK), de l'épinéphrine et de glucagon-like peptide-1 (GLP-1) dont chacun a stimulé la libération d'amyline d'une manière dépendante de la dose. Maximal version CCK stimulée était plus grande que soit l'épinéphrine ou GLP-1, même lorsque les effets de ces deux derniers ont été renforcées par isobutylméthylxanthine. la libération d'amyline Stimulé était significativement inhibée par le carbachol (par 51-59%) et l'octréotide (par 33-42%). Somatostatine version parallèle à celle de l'amyline.
Conclusions
Le modèle D-cellule cultivée fournit un moyen d'étudier l'amyline libération. Amyline sécrétion est stimulée par le récepteur et l'activation dépendante de Ca -indépendante 2 + /protéine kinase C et les voies d'adenylate cyclase. Inhibition implique l'activation des récepteurs muscariniques et auto-régulation par la somatostatine.
Contexte
Amylin (de polypeptide amyloïde des îlots) est un peptide de 37 acides aminés principalement exprimé dans les îlots pancréatiques de Langerhans [1, 2]. L'amyline a été également localisée dans tout le tractus gastro-intestinal [3] et dans le cerveau [4]. travaux récents ont porté sur la physiologie de l'amyline pancréatique; le peptide semble être co-stocké et co-sécrétée avec l'insuline dans les cellules B pancréatiques [5, 6], une proportion plus faible est co-localisée avec la somatostatine dans les cellules D-pancréatiques [7].
Amylin est croyait fonction de l'homéostasie du glucose hormone de régulation. Amyline inhibe la synthèse basale et stimulée par l'insuline glycogène dans le muscle squelettique du rat [8, 9]; il inhibe l'insuline, la somatostatine et la sécrétion de glucagon des îlots pancréatiques isolés et intacts du pancréas perfusé et réduit le glucagon post-prandiale et la sécrétion d'insuline [10-12]. Amylin peut également contribuer à un contrôle glycémique en ralentissant la vidange gastrique [13]. Il Outre ces rôles physiologiques, l'amyline est censé jouer un rôle important dans la pathogenèse du diabète sucré. Il est le principal composant des dépôts amyloïdes dans les îlots des patients atteints de diabète non insulinodépendant [1, 2] et l'insuffisance de l'amyline peuvent contribuer à la défaillance d'un contrôle glycémique typique du diabète insulino-dépendant [14] et dans des études animales amyline lui-même semble induire une résistance à l'insuline [15].
Une variété d'effets physiologiques sur le tractus gastro-intestinal ont également été décrites. l'administration parenterale de l'amyline a un effet anorectant [13], en plus de réduire significativement la vidange gastrique [16]. Une action protectrice contre gastropathie réserpine, et induite par la sérotonine a été décrite [17]. amyline intraveineuse est un puissant inhibiteur de la base, la pentagastrine et le 2-désoxy-D-glucose stimule la sécrétion d'acide gastrique chez le rat [18] et l'amyline réduit la sécrétion d'acide dans la préparation d'estomac de souris isolée [19]. Un effet stimulant sur la gastrine sérique a également été signalé, bien que cela ait pu être secondaire à l'inhibition de la sécrétion acide [20]. Conformément à ces actions amyline sites de liaison ont été détectés chez le rat muqueuse gastrique fundique [21]. Dans le amyline tractus gastro-intestinal semble co-localiser avec d'autres peptides gastro-intestinaux. À l'aide d'hybridation in situ et de l'immunofluorescence immunocytochimie, Mulder et al
a montré que amyline essentiellement colocalisé avec la somatostatine dans les cellules D de rat et de souris et de rat muqueuse antrale muqueuse fundique [22]. Une minorité de amyline co-localisée à des populations distinctes de cellules contenant gastrine dans l'antre et les cellules contenant PYY dans le fond. Studies in PDX-1 souris déficientes (qui ne parviennent pas à développer G-cellules) n'a montré aucune altération de l'expression de l'amyline gastrique, ce qui confirme l'expression prédominante de l'amyline dans les cellules-D [23]. Ces données montrant la présence de l'amyline et amyline récepteurs, couplés avec les effets pharmacologiques, a suggéré que l'amyline pourrait avoir un paracrine et /ou endocrinien rôle régulateur et physiopathologique dans la muqueuse gastrique. Cependant, il n'y a pas d'études explorant les processus impliqués dans l'estomac amyline sécrétion. Ces données sont une condition préalable à une meilleure compréhension de l'estomac amyline physiologie. Des cultures primaires de cellules endocrines gastriques et intestinales ont été utilisées pour étudier la régulation physiologique et pathophysiologique de plusieurs peptides gastro-intestinaux, y compris la gastrine, la somatostatine, le glucagon-like peptide-1 (GLP-1) et de la cholécystokinine (CCK) [24-30]. La co-localisation de l'amyline avec somatostatine rend la préparation D-cellulaire fundique un modèle utile pour examiner le contrôle de l'amyline sécrétion au niveau cellulaire.
Dans cette étude, nous avons examiné dépendant du récepteur et le récepteur-régulation indépendante de l'amyline la sécrétion à partir de cellules de la muqueuse fundique de lapin en culture. Cholécystokinine, glucagon-like peptide-1 et de l'épinéphrine stimulée amyline libération d'une manière dépendante de la dose et l'muscariniques agoniste du récepteur carbachol et récepteur de somatostatine agoniste octréotide inhibe la libération d'amyline. Résultats de la somatostatine et amyline libération ont eu lieu en parallèle.
la stimulation des récepteurs-indépendante de la libération du peptide
Pour évaluer d'abord si amyline libération pourrait être détectée à partir de cultures de cellules fundiques de lapin, les stimuli des récepteurs indépendants puissants ont été utilisés [ ,,,0],26] la teneur totale en cellule (TCC) de l'amyline dans la préparation de cellules cultivées (801 ± 151 fmol /puits) était d'environ 4 à 5 fois inférieure à celle de la somatostatine (3 768 ± 1325 fmol /puits). stimulation significative de l'amyline libération est produit par l'ester de phorbol actif (phorbol-12-myristate-13-acétate, le PMA) qui active la protéine kinase C (PKC), l'activation de l'adénylate cyclase avec de la forskoline et l'élévation du calcium intracellulaire avec l'ionophore A23187 (fig 1). L'ester de phorbol était le stimulant le plus puissant, conduisant à 8,5 fois plus en amyline libération (basale release 2.14 ± 0,8% augmentant à 18,5 ± 1,4% du TCC). Forskoline a augmenté libérer 3,3 fois (libération maximale de 7,2 ± 1,4% de la STC) et A23187 de 1,8 fois (3,8 ± 0,5% TCC), ceux-ci ont été nettement moins puissant que PMA. Il n'y avait pas de différences significatives entre les motifs de la somatostatine et l'amyline de presse (Fig. 1). La figure 1 de stimulation des récepteurs indépendants de l'amyline (en haut) et de la somatostatine (en bas) à partir de cellules cultivées D. Les cellules ont été stimulées avec du phorbol-12-myristate-13-acétate d'éthyle à 100 nM (PMA), la forskoline 10 uM (FSK) et A23187 1 uM pendant 2 heures. Les résultats sont exprimés en% du contenu cellulaire de peptide libéré, moyenne ± SEM, ** P
< 0,01 par rapport au témoin, * P
< 0,05 par rapport au témoin.
La stimulation des récepteurs dépendant
études antérieures ont démontré que la CCK est un stimulant puissant de la libération de somatostatine [26]. Cela a été confirmé ici. CCK dose-dépendante stimulée libération d'amyline par les cellules en culture (figure 2). stimulation Maximal, une augmentation de 2,75 fois, 2,1 ± 0,7% la libération basale a augmenté à 5,9 ± 0,8% TCC, a eu lieu avec CCK 10 nM. Un modèle de dose-réponse similaire a été observée pour la libération de somatostatine CCK stimulée bien libération maximale était relativement plus élevé pour la somatostatine (4,4 fois, 1,1 ± 0,1% à 5,2 ± 0,7% TCC) que l'amyline (Figure 2). Figure 2 CCK stimulée par l'amyline (en haut) et la somatostatine (en bas) libération de cellules D-culture. Les cellules cultivées ont été stimulées avec des muqueuses CCK pendant 2 heures. Les résultats sont exprimés en% du contenu cellulaire de peptide libéré, moyenne ± SEM, * P
< 0,05 par rapport au témoin.
L'activation des récepteurs cyclase cyclase couplé soit avec l'épinéphrine ou de glucagon-like peptide-1 a conduit à une légère augmentation dose-dépendante à la fois la somatostatine (augmentation maximale de 1,44 et 1,35 fois respectivement) et amyline libération (1,36 et 1,25 et plier respectivement) (figures 3 et 4). Figure 3: Effet de l'adrénaline sur amyline (en haut) et la somatostatine (en bas) libération de cellules D-culture. Les cellules ont été stimulées avec des concentrations croissantes d'épinéphrine (EPI), en présence ou en l'absence d'isobutylméthylxanthine 100 um (IBMX) pendant 2 heures. Les résultats sont exprimés en% du contenu cellulaire de peptide libéré, moyenne ± SEM, * P
< 0,05 par rapport au témoin.
Figure 4 Effet du glucagon-like peptide-1 sur amyline (en haut) et la somatostatine (en bas) libération de cellules D-culture. Les cellules ont été stimulées avec des concentrations croissantes du glucagon-like peptide-1 (GLP), en présence ou en l'absence d'isobutylméthylxanthine (IBMX à 100 uM) pendant 2 heures. Les résultats sont exprimés en% du contenu cellulaire de peptide libéré, moyenne ± SEM, * P
< 0,05 par rapport au témoin.
Les réponses à l'adrénaline et le GLP-1 ont été améliorées par la co-administration avec le isobutylméthylxanthine inhibiteur de la phosphodiestérase (IBMX) (100 uM). amyline libération basale était de 2,0 ± 0,2% TCC et maximale libération IBMX améliorée de 3,2 ± 0,2% TCC avec de l'épinéphrine à 100 uM et 3,2 ± 0,3% TCC avec GLP-1 à 10 nM. somatostatine libération basale (1,1 ± 0,1% TCC) a augmenté à 2,7 ± 0,1% TCC avec de l'épinéphrine + IBMX et 2,1 ± 0,4% TCC avec GLP-1 + IBMX. Ceux-ci étaient encore beaucoup moins que la libération de CCK stimulée. Il n'y avait pas de différences dans la structure ou le rapport des réponses de la somatostatine et l'amyline (figures 3 et 4).
Régulation inhibitrice de l'amyline libération
traitement avec l'octréotide analogue de la somatostatine a produit de petites mais non significatives réductions à la fois l'amyline basale ( de 14%) et de la somatostatine de base (18%), la sécrétion (Figure 5). Carbachol n'a eu aucun effet évident sur la base soit de l'amyline ou de sécrétion de somatostatine (figure 5). la libération d'amyline stimulée par la CCK a été inhibée de manière significative par l'octréotide (42%) et le carbachol agoniste muscarinique (51%). De même l'épinéphrine (avec IBMX) stimulés amyline la libération a été inhibée de 33% par octréotide et 59% par le carbachol (à la fois P
< 0,05). Comme le montre la figure 6, un schéma similaire a été observée avec la libération de somatostatine. Figure 5 Effet de l'octréotide et carbachol sur amyline et la somatostatine basale libération de cellules D-culture. les cellules ont été stimulées avec D octréotide soit 10 nM (OPO) ou 100 pM de carbachol (CBH) pendant 2 heures et la libération de somatostatine et d'amyline évalués. Les résultats sont exprimés en% du contenu cellulaire de peptide libéré, moyenne ± SEM.
Figure 6 Effets inhibiteurs d'octréotide et de carbachol sur amyline stimulée par un agoniste (en haut) et la somatostatine (en bas) de presse. les cellules-D ont été stimulées avec soit 10 nM de CCK ou de l'adrénaline avec les deux isobutylméthylxanthine 100 uM (EPI), en combinaison avec l'octréotide 10 nM (OPO) ou 100 pM de carbachol (CBH) pendant 2 heures. Les résultats sont exprimés en% du contenu cellulaire de peptide libéré, moyenne ± SEM, * P
< Rapport de 0,05 libération stimulée par un agoniste par rapport pertinent.
Cette étude est la première à examiner la libération de l'amyline de la muqueuse gastrique au niveau cellulaire. Les résultats ont démontré que l'amyline est non seulement stocké dans les cellules de la muqueuse gastrique, mais aussi que des agonistes physiologiques putatifs régulée libération du peptide. Des études antérieures ont localisé l'amyline à l'estomac en utilisant Northern blot [31, 32], immunocytochimie [33], radioimmunoessai [3] et de la situ hybridation [22], mais la libération d'amyline gastrique n'a pas été démontré précédemment.
la majorité des amyline fundique semble être localisée avec la somatostatine dans les cellules D [22] par conséquent, nous avons utilisé le modèle de lapin D-cellule cultivée pour enquêter sur les agents de contrôle de la libération cellulaire de l'amyline et pour le comparer à la somatostatine sécrétion.
des études initiales ont été réalisées avec des agents puissants connus pour activer directement le peptide de sécrétion à partir des cellules endocrines d'une manière récepteur indépendant [26] les esters de phorbol (par exemple, une PMA) d'activer directement la protéine kinase C dans la couche interne de la membrane cellulaire; à son tour, active les processus cellulaires nécessaires à l'exocytose. PMA était un puissant stimulant à la fois la somatostatine et l'amyline sécrétion. Le ionophore de calcium A23187, ce qui augmente les niveaux de calcium intracellulaire ([Ca 2 +] i]) a également stimulé la libération d'amyline, même si elle était nettement moins puissant que PMA. Ceci est similaire aux réponses observées chez antrale humaine [26] et D-cellules fundiques canine [30] où il est de croire la hausse [Ca 2 +] i est principalement facilitante plutôt que de stimuler directement la sécrétion. L'activation directe de l'adénylate cyclase avec de la forskoline a également stimulé l'amyline libération. Par conséquent, les premières études ont montré que la libération d'amyline peut être stimulée par l'activation de l'une des deux principales voies de signalisation intracellulaire connus pour améliorer la sécrétion de peptides. Ayant déterminé que ces voies ont été actives, nous avons exploré les agents physiologiques qui pourraient stimuler la sécrétion amyline d'une manière dépendante du récepteur.
Cholécystokinine-8 a provoqué une augmentation dépendante de la dose dans l'amyline et la sécrétion de somatostatine. CCK est connu pour être un puissant in vitro
stimulant de la libération de somatostatine de cellules D antrales et fundiques [26, 30, 34]. Une dose-réponse similaire a été observée pour l'amyline, bien que l'augmentation globale a été légèrement supérieure pour la somatostatine que amyline. D'autres études seront nécessaires pour déterminer si cela représente un bassin séparé de la somatostatine spécifiquement sécrétée après stimulation par la CCK. les cellules D fundiques semblent exprimer les deux CCK-1 (CCK A) et CCK-2 (gastrine /CCK B) des récepteurs [35]. L'activation de ces récepteurs déclenche l'activation de la phospholipase C, la libération de diacylglerol et inositol 1,4,5-triphosphate et d'élévation ultérieure de [Ca 2 +] i et l'activation de la PKC, conduisant à la libération du peptide [36 ]. Ces résultats sont cohérents avec les résultats pour le A23187 et stimulation par PMA. Par conséquent, il apparaît que la CCK peut agir comme un stimulant physiologique de l'amyline libération.
Épinéphrine et GLP-1 a produit de petites augmentations de dose-dépendante de l'amyline et de sécrétion de somatostatine. Cet effet pourrait être améliorée par la co-traitement avec l'inhibiteur de phosphodiesterase IBMX, qui inhibe la dégradation de l'AMPc et amplifie les réponses générées par des récepteurs couplés à l'adénylate cyclase. Cependant, les réponses étaient encore nettement moins que ceux observés avec l'activation du Ca de la voie 2 + /PKC soit par la CCK ou PMA. Des différences similaires dans les sensibilités ont été décrites dans antrale humaine [26] et fundique canine [30] D des cellules.
Les influences inhibitrices prédominantes décrites jusqu'ici sur les cellules D-fundiques sont des agonistes muscariniques [37, 38] et l'autorégulation par lui-même [39, 40] somatostatine. Les réponses présentées ici sont en accord avec les données sur la libération de somatostatine de cellules D canin fundiques [30, 37]. En revanche, les récepteurs muscariniques sont stimulatrice de cellules D antrales [41], ce qui reflète probablement une différence spécifique de la fonction. L'étude actuelle a confirmé les actions inhibitrices tant du octréotide somatostatine-analogique et muscariniques agoniste carbachol contre la libération de somatostatine. Une inhibition similaire de la libération d'amyline stimulée a été vu. Ceci suggère que l'inhibition in vivo
amyline libération implique entrée parasympathique et régulation autocrine par la somatostatine.
Dans toutes les conditions étudiées somatostatine et amyline ont été sécrétés en parallèle, comme on peut s'y attendre si elles sont co-stockées dans des granules sécrétoires. L'insuline et amyline sont co-sécrété par les cellules ß pancréatiques, la sécrétion se produit normalement en parallèle [42-44], mais la sécrétion différentielle a été rapportée dans des modèles expérimentaux de diabète sucré [45, 46]. D'autres études seront nécessaires pour définir davantage la relation entre la sécrétion et les actions de l'amyline gastrique et la somatostatine. Dans les îlots pancréatiques isolés les deux peptides semblent avoir un rôle coopératif dans la régulation de la sécrétion de peptide: imunoneutralisation combiné de l'amyline et la somatostatine a donné lieu à une plus grande amélioration de l'insuline et la sécrétion de glucagon que la neutralisation des seuls [10]. Il sera intéressant d'examiner si des résultats similaires sont observés avec des fonctions gastriques.
Libération post-prandiale de la CCK intestinale et GLP-1 inhibent la vidange gastrique et la sécrétion d'acide [13, 47]. Ces effets sont cependant à méditèrent au moins en partie via des intermédiaires libérés du D-cellulaire plutôt que par inhibition directe de la cellule pariétale acide sécrétant [48]. On croyait que la somatostatine était le seul intermédiaire, mais les résultats de l'étude suggèrent que la régulation paracrine par amyline pariétal, ECL- et d'autres cellules endocrines peut avoir un rôle dans les réponses d'intégration aux repas. L'inhibition de l'histamine induite par l'amyline de rat libéré de la muqueuse fundique segments
in vitro a été véhiculée par une augmentation libération de somatostatine [19], mais en utilisant un antagoniste des récepteurs de la somatostatine sélective Rossowski et al
montré in vivo chez le rat
que partie des actions acide inhibitrices des deux amyline et le peptide adrénomédulline connexe étaient somatostatine indépendant [49]. Les rôles spécifiques de l'amyline dans la physiologie gastrique méritent d'être élucidées, mais ces données suggèrent que l'amyline publié localement est directement capable de réguler les fonctions des muqueuses.
Les réponses à l'épinéphrine et carbachol suggèrent que innervation autonome peut réguler la sécrétion de l'amyline. Le solde global in vivo
serait alors dépendre de l'entrée relative des systèmes adrénergiques muscariniques et stimulateurs inhibitrices, combiné avec le système endocrinien et paracrine locale et les facteurs éventuellement luminal circulants.
Conclusion
Cette étude décrit la caractérisation initiale des les facteurs qui régulent la libération d'amyline gastrique. Nous avons démontré que l'amyline libération peut être stimulée par la stimulation des récepteurs dépendant soit du Ca 2 + /PKC et adénylcyclase /voies d'AMPc et que des peptides physiologiquement pertinents et les médiateurs neuronaux peuvent améliorer l'amyline libération. Cela soutient l'hypothèse que l'amyline peut le module fonction de la muqueuse gastrique. Cette étude confirme que les cultures à court terme des cellules enrichies par élutriation fournira un modèle pour explorer la libération physiopathologique de l'amyline gastrique et fournir une voie de comprendre davantage le rôle de l'amyline dans la régulation du moteur gastrique et la fonction sécrétoire.
Méthodes
Matériaux de Matrigel a été obtenu à partir de Universal Biologicals (Londres, Royaume-Uni), octréotide de Novartis (Surrey, Royaume-Uni) et F12 de Ham /Eagle modifié la culture du milieu de Dulbecco (50:50, v: v), glutamine, Hanks sel équilibrée et une solution de sérum de veau foetal ont été achetés chez Gibco (Paisley, UK). Sulfatées cholécystokinine-8 (CCK), le GLP-1 humain et tous les autres réactifs ont été obtenus auprès de Sigma (Poole, Royaume-Uni). Isolement
cellulaire et cultures primaires de la culture de lapin gastrique cellules muqueuses fundiques enrichies en cellules-D étaient obtenu comme décrit précédemment [39, 48]. En bref, le lapin muqueuse fundique de l'EDTA a été soumis à une digestion séquentielle et de la collagénase. La suspension cellulaire résultante a été enrichie pour les cellules D elutatriation par contre-courant en utilisant un rotor Beekman type MJE 5,0 comme décrit précédemment. La fraction enrichie en D-cellulaire a été remis en suspension dans un milieu de culture complet (/milieu de F12 de Ham modifié par Dulbecco Eagle culture (50:50, v: v), contenant de la glutamine 2 mM, HEPES 10 mM pH 7,4, 0,22% de NaHCO 3, 10% de sérum de veau foetal, 1 mg /l d'hydrocortisone, 8 mg /l d'insuline, 100 mg /l de pénicilline, 100 mg /l de gentamicine, 100 mg /l de streptomycine) et mises en culture sur Matrigel revêtues de 24 puits des plaques de culture de tissus [50] à une densité de 1 x 10 6 cellules /puits pendant 40 heures dans une atmosphère de 5% de CO 2, 95% d'air à 37 ° C.
Relâchez cellules cultivées de études ont été lavées 3 fois dans le milieu de libération (solution saline équilibrée de Earl contenant 0,1% d'albumine de sérum bovin, 10 mM HEPES, pH 7,4) pour éliminer les cellules mortes et non adhérentes. on a encore ajouté 1 ml de milieu de libération contenant des agonistes de test et les cellules ont été incubées pendant 2 heures à 37 ° C dans une atmosphère de 5% de CO 2, 95% d'air. Après la période de libération, le milieu conditionné a été aspiré et centrifugé pour éliminer les cellules non-adhérentes. La teneur totale cellulaire du peptide a été extrait par ebullition dans 1 ml dans de l'eau distillée. Les milieux conditionnés et des extraits cellulaires ont été stockés à -70 ° C jusqu'à l'analyse pour la teneur en peptide [30].
mesure des concentrations de peptides
somatostatine ont été évalués par dosage radio-immunologique (RIA) avec un antisérum K2, comme décrit précédemment [39]. inhibition demi-maximale de la liaison a eu lieu à 2 fmol /tube et l'intra-essai et la variation inter-essai étaient de 7% et 8% pour cent respectivement. Les concentrations Amylin ont été mesurées par ELISA direct (Penninsula Laboratories, Belmont, CA, USA), selon les instructions du fabricant. L'essai a une gamme de 0.04-2 ng /ml, et intra-essai et inter-essai variation de < 5% et < 14%, respectivement. L'anticorps utilisé a 100% de réactivité croisée avec l'amyline et d'amyline-amide, mais < 1% de réactivité croisée avec le CGRP et la réaction négligeable avec d'autres peptides biologiquement actifs. Tous les échantillons expérimentaux d'une préparation animale unique ont été analysés dans le même RIA ou l'analyse ELISA. De statistique
Peptide libération au cours de la période de 2 heures a été exprimée en pourcentage de la teneur totale de la cellule (TCC) de ce peptide. Chaque condition expérimentale a été testée en double exemplaire et les résultats d'une préparation unique animal était considéré comme N = 1. Les résultats sont exprimés par la moyenne ± ETM de 3-6 préparations animales distinctes. Chaque plaque 24 puits toujours inclus le contrôle (basales) puits et stimulants positifs. Peptide libération par les stimulants a été comparée à la libération basale sur la plaque et pertinente 24. Une analyse de la variance et le test t apparié de Student ont été utilisés pour déterminer la signification. Une valeur de P <
; 0,05 a été considérée comme significative
Liste des abréviations
CCK:.
Cholécystokinine
ECL-:
enterochromaffin-like


GLP-1:
glucagon-like peptide-1
IAPP:
polypeptide îlot amylioid
IBMX:
isobutylméthylxanthine
PKC:
protéine kinase C
PMA:
phorbol-12-myristate -13-acétate, la STC, le contenu total de cellules.
Déclarations de
Remerciements Ce travail a été soutenu en partie par une bourse de formation du Conseil de la recherche médicale pour ILPB.
Certains des données ont été présentées sous forme de résumé à la semaine United European Gastroenterology à Birmingham 1997.
les auteurs de fichiers originaux soumis pour les images
Voici les liens vers les auteurs originaux soumis fichiers pour les images. de fichier d'origine pour la figure 1 12899_2003_47_MOESM2_ESM.jpeg Auteurs Auteurs 12899_2003_47_MOESM1_ESM.jpeg fichier d'origine pour la figure 2 Auteurs 12899_2003_47_MOESM3_ESM.jpeg de fichier d'origine pour la figure 3 Auteurs 12899_2003_47_MOESM4_ESM.jpeg de fichier original pour le fichier d'origine de la figure 4 Auteurs 12899_2003_47_MOESM5_ESM.jpeg pour la figure 5 de fichier d'origine pour la figure 6 Auteurs Auteurs 12899_2003_47_MOESM6_ESM.jpeg Contributions
ILPB conçu et développé l'étude, réalisée l'isolement cellulaire, de la culture, des expériences de libération, immunoessais et écrit versions préliminaire et finale du manuscrit. La fin de JC conçu l'étude et co-écrit le premier projet de manuscrit.

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