Rendelet amylin felszabadulását a tenyésztett nyúl gyomor fundus nyálkahártya sejtekben

Szabályozása amilin felszabadulást tenyésztett nyúl gyomor fundus nyálkahártya sejtekben
Abstract
alapon
amylin (szigetsejtek amiioid polipeptid) egy hormon javasolt szerepet szabályozásában glükóz homeosztázis, a gyomor motoros és szekréciós funkciója és gasztroprotektív. A gyomornyálkahártya amilin megtalálható co-lokalizált a szomatosztatin in D-sejtekben. A szabályozó faktorok gyomor amylin kiadás ismeretlen. Ebben a tanulmányban megvizsgáltuk a szabályozás amylin felszabadulás gyomornyálkahártya-sejtek primer kultúra. Nyúl fundális nyálkahártya sejteket dúsított D-sejtek által ellenáramú elutriációs tenyésztettük 40 órán keresztül. Az amylin és a szomatosztatin Release, 2 óra alatt, válaszul agonisták értékelték.
Eredménye
amylin felszabadulását szignifikánsan növeli aktiválja a protein-kináz C-forbol-12-mirisztát-13-acetát, adenilát-cikláz forskolinnal és magassága intracelluláris kalcium és A23187. A kolecisztokinin (CCK), epinefrin és a glukagon-szerű peptid-1 (GLP-1) minden egyes stimulált amylin felszabadulást dózisfüggő módon. Maximális CCK-stimulált felszabadulásának nagyobb volt, mint akár epinefrin vagy GLP-1, akkor is, ha a hatását a két utóbbi arra fokozza izobutil. Stimulált amylin kiadás jelentősen csökkent carbachol (a 51-59%) és octreotid (a 33-42%). A szomatosztatin megjelenése párhuzamba, hogy az amilin.
Következtetések katalógusa A tenyésztett D cellás modell olyan eszközt jelent, tanul amylin kiadás. Az amylin szekréciót stimulálja receptor-függő és -független aktiválását Ca 2 + /protein-kináz C és adenilát-cikláz-utak. Gátlása magában aktiválása muszkarin receptor és auto-szabályozás szomatosztatin.
Alapon
amylin (szigetsejtek amiioid polipeptid) egy 37 aminosavból álló peptid túlnyomórészt az hasnyálmirigy Langerhans [1, 2]. Az amilinről továbbá lokalizálva a tápcsatorna [3] és az agyban [4]. Sokkal munkáira összpontosított fiziológiája hasnyálmirigy amilin; a peptidet úgy tűnik, hogy együtt tárolják és együtt szekretálódik az inzulinnal a hasnyálmirigy B-sejtek [5, 6], kisebb arányban ko-lokalizált a szomatosztatin hasnyálmirigy D-sejtek [7].
Amylin úgy véljük, hogy funkciója, mint a szabályozó hormon glükóz homeosztázis. Az amylin gátolja bazális és az inzulin stimulált glükogén szintézis patkányok vázizom [8, 9]; gátolja az inzulin, szomatosztatin és glukagonelválasztást izolált pancreas szigetekben és ép perfúziós hasnyálmirigy, és csökkenti az étkezés utáni glukagon és az inzulin [10-12]. Az amylin is hozzájárulhatnak a glikémiás kontroll lassításával a gyomor ürülését [13]. Ez amellett, hogy ezeket a fiziológiai szerepeket, amilin úgy véljük, hogy jelentős szerepet játszanak patogenezisében a diabetes mellitus. Ez a fő komponens az amiloid lerakódások a szigetecskék betegek nem inzulinfüggő diabetes mellitus [1, 2] és hiányosság az amylin hozzájárulhat a hiba a glikémiás kontroll jellemző inzulinfüggő diabétesz [14] és állatkísérletekben amylin maga indukálja az inzulin rezisztencia [15].
a különböző fiziológiai hatást a gyomor-bél traktusban is leírtak. A parenterális beadás az amylin van anorectant hatás [13], továbbá, hogy jelentősen csökkenjen a gyomor kiürülését [16]. A védőhatást ellen reserpine-, és szerotonin-indukált gyomorbaj leírták [17]. Intravénás amylin egy potens inhibitora a bazális, pentagasztrin és a 2-dezoxi-D-glükóz stimulált gyomorsav-szekréciót a patkány [18] és amylin csökkentett savkiválasztás az izolált egér gyomor készítmény [19]. A stimuláns hatása a szérum gasztrin is beszámoltak, bár ez lehetett másodlagos a savszekréció gátlása [20]. Összhangban ezen intézkedések amylin-kötőhelyek észlelték patkány gyomor fundus nyálkahártyában [21]. A gyomor-bél traktus amylin tűnik, hogy együtt lokalizálni más gasztrointesztinális peptidek. In situ
hibridizáció, immunfluoreszcencia és immuncitokémia, Mulder és munkatársai
azt mutatta, hogy az amilin túlnyomórészt co-lokalizált a szomatosztatin, a D-sejtek patkány és egér antrális nyálkahártya és patkány fundus nyálkahártyából [22]. A kisebbségi amilin co-lokalizált különálló populációjához gasztrin-tartalmú sejtek a antrum, és PYY-tartalmú sejtek a fundus. Tanulmányok PDX-1-deficiens egerekben (amely nem fejlődnek G-sejtek) nem mutatott változást a gyomor amilin kifejezés, megerősítve túlnyomó kifejeződése amilin belül a D-sejtek [23]. Ezek az adatok jelenlétére mutat amylin és amylin receptorokhoz, párosulva a farmakológiai hatásokat, azt javasolta, hogy az amilin lehet, hogy egy parakrin és /vagy endokrin szabályozási és kórélettani szerepet játszik a gyomor nyálkahártyáját. Azonban nincsenek tanulmányokat folyamatokat gyomor amylin elválasztást. Ezek az adatok előfeltételei további megértését gyomor amylin fiziológia. Primer tenyészetek gyomor- és bél endokrin sejteket használták, hogy megvizsgálja a fiziológiai és patofiziológiai ellenőrzése számos gasztrointesztinális peptidek, beleértve a gasztrin, szomatosztatin, glükagon-szerű peptid-1 (GLP-1) és a kolecisztokinin (CCK) [24-30]. A co-lokalizációja amilin szomatosztatin teszi a gyomor fundus D-cell készítmény hasznos modellt, hogy vizsgálja meg az irányítást amilin váladék a sejtszintű.
Ebben a tanulmányban azt vizsgáltuk receptor-függő és a receptor-független szabályozása amylin elválasztást tenyésztett nyúl gyomor fundus nyálkahártya sejtekben. A kolecisztokinin, glukagon-szerű peptid-1 és az epinefrin által stimulált amylin felszabadulást dózisfüggő módon, és a muszkarin receptor agonista carbachol és szomatosztatin receptor agonista oktreotid gátolta amilin kiadás. Szomatosztatin és amylin kiadás párhuzamosan történt. Katalógusa Eredmények katalógusa receptor független stimulálása peptid felszabadulását katalógusa Annak értékelésére, hogy kezdetben amylin kiadás lehetett kimutatni a kultúrák nyúl fundus sejtek hatásos receptor független ingerek használták [ ,,,0],26] a teljes sejt-tartalom (TCC) az amylin, a tenyésztett sejt készítmény (801 ± 151 fmol /üreg) mintegy 4-5-szer alacsonyabb, mint a szomatosztatin (3 768 ± 1325 fmol /lyuk). Szignifikáns stimulálását amilin Release történt az aktív forbol-észter (forbol-12-mirisztát-13-acetát, PMA), amely aktiválja a protein kináz C (PKC) aktiválása adenilát-cikláz forskolinnal és az intracelluláris kalcium a ionofor A23187 (ábra 1). A forbol-észter volt a leghatásosabb stimuláns, ami 8,5-szeres növekedést amylin Release (bazális engedje 2,14 ± 0,8% növekvő 18,5 ± 1,4% -a TCC). Forskolin fokozott felszabadulása 3,3-szeres (maximális kibocsátás 7,2 ± 1,4% -a TCC) és A23187 1,8-szeres (3,8 ± 0,5% TCC), ezek lényegesen kevésbé hatásos, mint a PMA. Nem volt szignifikáns különbség a minták szomatosztatin és amylin kiadás (1.). Ábra 1 receptor-független stimulációja amylin (felső) és a szomatosztatin (alul) a tenyésztett D-sejtekben. Sejteket stimulálunk forbol-12-mirisztát-13-acetát 100 nM (PMA), forskolin 10 uM (FSK) és A23187 1 uM 2 órán át. Eredmények% -ában fejezzük cella tartalma felszabaduló peptid, átlag ± SEM, ** p
< 0,01 vs. kontroll * P katalógusa < 0,05 vs..
Receptor-függő stimuláció
Korábbi tanulmányok azt mutatták, hogy a CCK egy erős stimuláns szomatosztatin kiadás [26]. Ezt megerősítette itt. CCK dózisfüggően stimulálta felszabadulását amilin a tenyésztett sejtekből (2. ábra). Maximális stimulálása, a 2,75-szeres növekedést, 2,1 ± 0,7% bazális kiadás emelkedett 5,9 ± 0,8% TCC, előfordult CCK 10 nM. Esetében hasonló dózis válasz minta volt látható a CCK-stimulált szomatosztatin Release bár maximális kibocsátás viszonylag magasabb volt a szomatosztatin (4,4-szeres, 1,1 ± 0,1% -ról 5,2 ± 0,7% TCC), mint amylin (2. ábra). 2. ábra CCK-stimulált amylin (felső) és a szomatosztatin (alsó) felszabadulást tenyésztett D-sejtekben. Tenyésztett nyálkahártya sejteket stimulálunk a CCK 2 órán át. Eredmények% -ában fejezzük cella tartalma felszabaduló peptid, átlag ± SEM, * p
< 0,05 vs..
Aktiválása adenilát-cikláz-kapcsolt receptorok akár epinefrin vagy glukagon-szerű peptid-1 vezetett dózisfüggő kis növekedése mind a szomatosztatin (maximális növekedés 1,44 és 1,35 szeresére) és amylin Release (1,36 és 1,25 szeresére) (3. és 4. ábra). 3. ábra hatása epinephrin amylin (fent) és a szomatosztatin (alsó) kiadás tenyésztett D-sejtek. Sejteket növekvő koncentrációjú epinefrin (EPI) jelenlétében vagy távollétében izobutil 100 pM (IBMX) 2 órán át. Eredmények% -ában fejezzük cella tartalma felszabaduló peptid, átlag ± SEM, * p
< 0,05 vs..
4. ábra hatása glukagon-szerű peptid-1-on amilin (felső) és a szomatosztatin (alsó) felszabadulást tenyésztett D-sejtekben. A sejteket növekvő koncentrációival stimulált glukagon-szerű peptid-1 (GLP) jelenlétében vagy távollétében izobutil 100 pM (IBMX) 2 órán át. Eredmények% -ában fejezzük cella tartalma felszabaduló peptid, átlag ± SEM, * p
< 0,05 vs..
A válaszok adrenalin és a GLP-1 fokozni együttes adása a foszfodiészteráz-inhibitor izobutil (IBMX) (100 mm). Bazális amylin kiadás 2,0 ± 0,2% TCC és maximális IBMX javított kiadás 3,2 ± 0,2% TCC és adrenalin 100 nM és 3,2 ± 0,3% TCC GLP-1 10 nM. Basal szomatosztatin kiadás (1,1 ± 0,1% TCC) emelkedett 2,7 ± 0,1% TCC az adrenalin + IBMX és 2,1 ± 0,4% TCC GLP-1 + IBMX. Ezek még mindig jóval kevesebb, mint a CCK-stimulált. Nem volt különbség a minta vagy arányát szomatosztatin és amylin válaszok (3. és 4. ábra). Katalógusa gátló szabályozása amylin kiadás katalógusa Kezelés a szomatosztatin analóg octreotid termelt csekély, de nem szignifikáns csökkenése mindkét bazális amylin ( 14% -kal), és a bazális szomatosztatin (18% -kal) elválasztás (5. ábra). Carbachol nem volt nyilvánvaló hatása sem a bazális amylin vagy szomatosztatin szekréció (5. ábra). CCK-stimulált amilin Release szignifikánsan gátolta octreotid (42% -kal), és a muszkarin-agonistát, karbacholt (51% -kal). Hasonlóképpen epinefrin (a IBMX) stimulált amilin Release gátolta a 33% -ot az oktreotid és a 59% -os karbakol (mindkettő p
< 0,05). Amint a 6. ábrán látható, hasonló mintát volt látható a szomatosztatin kiadás. 5. ábra hatása octreotid és carbachol a bazális amylin és szomatosztatin felszabadulást tenyésztett D-sejtek. D-sejteket stimuláltunk oktreotid 10 nM (TOT) vagy carbachol 100 pM (CBH) 2 órán keresztül és felszabadulását az amylin és szomatosztatin értékelni. Eredmények% -ában fejezzük cella tartalma felszabaduló peptid, átlag ± SEM.
6. ábra gátló hatása oktreotid és carbachol on agonista-stimulált amylin (felső) és a szomatosztatin (alsó) felszabadulást. D-sejteket stimuláltunk CCK 10 nM vagy adrenalin együtt izobutil mindkét 100 pM (EPI) kombinálva oktreotid 10 nM (TOT) vagy carbachol 100 pM (CBH) 2 órán át. Eredmények% -ában fejezzük cella tartalma felszabaduló peptid, átlag ± SEM, * p
< 0,05 vs. vonatkozó agonista-stimulált. Katalógusa Vita katalógusa Ez az első tanulmány, amely megvizsgálja a kibocsátás amylin származó gyomornyálkahártya a sejtek szintjén. Eredmények igazolták, hogy az amilin nem csak tároljuk gyomornyálkahártya sejtekben, de azt is, hogy a feltételezett fiziológiai agonisták szabályozott felszabadulását a peptid. Korábbi tanulmányok már lokalizált amylin, hogy a gyomorban a Northern blot [31, 32], immunhisztokémia [33], radioimmunoassay [3] és az in situ hibridizáció katalógusa [22], de a kiadás gyomor amilin nem bizonyították korábban.
a legtöbb gyomor fundus amylin úgy tűnik, hogy lokalizált szomatosztatin belül a D-sejtek [22] Ezért az általunk használt a tenyésztett nyúl D-sejt modell, hogy vizsgálja meg az ügynökök szabályozására celluláris felszabadulását amylin és összehasonlítani ezt a szomatosztatin szekréció.
a kezdeti vizsgálatokat végeztek hatásos szerek ismert, hogy közvetlenül aktiválja peptid szekréciót endokrin sejteket egy receptor-független módon [26], hogy a forbol-észterek (mint a PMA) közvetlenül aktiválja a protein kináz C a belső réteg a sejtmembrán; ez viszont aktiválja a sejtszintű folyamatokat szükséges exocitózisban. PMA potens stimuláns mind a szomatosztatin és amylin váladék. A kalcium-ionofor A23187, ami növeli a szintjét sejten belüli kalcium ([Ca 2 +] i]) is ösztönözte amilin kiadás, bár ez lényegesen kevésbé hatásos, mint a PMA. Ez hasonló a válaszok láthatók emberi antrális [26] és a kutya fundus D-sejtek [30], ahol ez úgy vélik, a nő az [Ca 2 +] i elsősorban facilitatív helyett közvetlenül stimuláló szekréciót. Közvetlen Az adenilát cikláz aktiválása forskolinnal is stimulált amilin kiadás. Ezért a kezdeti vizsgálatok kimutatták, hogy az amilin kiadás fokozta az aktiválását vagy a két fő jelátviteli utak ismert, hogy fokozza peptid szekréció. Miután megállapították, hogy ezek a pályák aktívak voltak, feltártuk amely fiziológiai szerek képes serkenteni amylin szekréciót egy receptor-függő módon.
Kolecisztokinin-8 termelt dózisfüggő növekedését amylin és szomatosztatin szekréció. CCK ismert, hogy egy hatásos in vitro
stimuláns szomatosztatin felszabadulást antrális és fundus D-sejtek [26, 30, 34]. Esetében hasonló dózis válasz volt látható a amilin, bár a teljes növekmény volt kissé nagyobb szomatosztatin mint amilin. További vizsgálatok szükségesek annak megállapítására, hogy ez azt jelenti, külön medence szomatosztatin kifejezetten kiválasztódik stimulációt követően CCK. Fundus D-sejtek jelennek kifejezni mind a CCK-1 (CCK A) és a CCK-2 (gasztrin /CCK B) receptorok [35]. Ezen receptorok aktivációja váltja ki a foszfolipáz C aktiválását, felszabadulását diacylglerol és inozit-1,4,5-trifoszfát és az azt követő magassági [Ca 2 +] i és aktiválását PKC, ami a peptid felszabadulását [36 ]. Ezek az eredmények összhangban vannak az eredmények A23187 és PMA stimuláció. Ezért úgy tűnik, hogy a CCK működhet, fiziológiás stimuláns amylin kiadás.
Adrenalin és a GLP-1 termelt kis dózisfüggő emelkedését amylin és szomatosztatin elválasztást. Ez a hatás fokozható együttes kezelés foszfodieszteráz inhibitor IBMX, amely gátolja a cAMP lebontását és erősíti által generált válaszokat adenilát-cikláz kapcsolt receptorok. Ugyanakkor a válaszok még mindig jelentősen kevesebb, mint amilyeneket aktiválásával a Ca 2 + /PKC útvonal bármelyik CCK vagy PMA. Hasonló különbségek az érzékenység írtak le humán antrális [26] és a kutya fundus [30] D-cells.
A domináns gátló hatások eddig leírt on fundus D-sejtek olyan muszkarin agonisták [37, 38] és autoreguláció által szomatosztatin magát [39, 40]. A válaszok itt közölt összhangban vannak az adatok a szomatosztatin felszabadulás kutya fundus D-sejtek [30, 37]. Ezzel szemben a muszkarinos receptorok stimuláló hatású antrális D-sejtek [41], ami valószínűleg egy bizonyos különbség függvényében. A jelenlegi tanulmány megerősítette a gátló hatása mind a szomatosztatin-analóg octreotid és a muszkarinos agonista carbachol elleni szomatosztatin kiadás. A hasonló gátlását stimulált amylin kiadás volt látható. Ez arra utal, hogy in vivo a
gátlása amilin kiadás magában paraszimpatikus bemeneti és autokrin szabályozás szomatosztatin.
Minden körülmények között vizsgálták a szomatosztatin és amylin arra szekretált párhuzamosan, amint az várható, ha azok együttes tárolt szekréciós granulátumok. Az inzulin és az amilin vannak együtt szekretálódik a hasnyálmirigy β-sejtek, szekréció általában bekövetkezik párhuzamosan [42-44], de eltérés szekréció leírták kísérletben modell a diabetes mellitus [45, 46]. További vizsgálatok szükségesek a további közötti kapcsolat meghatározása a váladék és akciók a gyomor amylin és szomatosztatin. Izolált hasnyálmirigy-szigetecskék a két peptidet úgy tűnik, hogy egy kooperatív szerepet szabályozásában peptid szekréció: kombinált imunoneutralisation az amylin és a szomatosztatin eredményezett nagyobb fokozása inzulin és a glukagon szekréció mint semlegesítése akár önmagában [10]. Érdekes lesz megvizsgálni, hogy hasonló eredmények láthatók a gyomor funkcióit.
Étkezés utáni megjelenése bél CCK és GLP-1 gátolja a gyomor kiürítése és a savszekréciót [13, 47]. Ezek a hatások, bár meg kell meditált legalább részben keresztül intermedierek szabadul fel a D-sejt helyett közvetlenül gátolják a sav-szekretáló parietális sejt [48]. Azt hitték, hogy a szomatosztatin volt az egyedüli közbenső de az eredmények a jelenlegi tanulmány arra utal, hogy parakrin szabályozás által amilin parietális, ECL- és egyéb endokrin sejtek szerepe van az integratív válaszok ételeket. Az amilin-indukált gátlásának hisztamin szabadul patkány fundus nyálkahártya szegmensek in vitro
ben közvetíti fokozott szomatosztatin kiadás [19], de egy szelektív szomatosztatin receptor antagonista Rossowski munkatársai
kimutatta in vivo
patkányokban, hogy a részét a sav-gátló intézkedések egyaránt amylin és a kapcsolódó peptid adrenomedullin voltak szomatosztatin-független [49]. A konkrét szerepét amylin a gyomor élettanának igényel további vizsgálatokat, de ezek az adatok arra utalnak, hogy a lokálisan felszabaduló amilin közvetlenül képes szabályozni nyálkahártya funkciók.
A válaszok adrenalin és carbachol arra utalnak, hogy vegetatív beidegzése képes szabályozni a váladék a amylin. Az általános egyensúly in vivo katalógusa aztán függvénye bemeneti gátló muszkarin és serkentő adrenerg rendszer, együtt keringő endokrin és parakrin helyi és esetleg lumen tényezők. Katalógusa Következtetés katalógusa A tanulmány leírja a kezdeti jellemzése a szabályozó faktorok gyomor amylin kiadás. Kimutattuk, hogy az amilin Release stimulálható receptor-függő stimuláció vagy a Ca 2 + /PKC és adenilát-cikláz /cAMP útvonalakat, és hogy fiziológiailag releváns peptidek és a neurális mediátorok javíthatja amilin kiadás. Ez alátámasztja azt a feltételezést, hogy amilin esetleg modul gyomornyálkahártya-funkciót. Ez a tanulmány megerősíti, hogy a rövid távú sejtkultúrák gazdagodott elutriálás példaként szolgál, hogy felfedezzük a kórélettani megjelenése gyomor amylin és egy útvonal további szerepének megértése amylin szabályozásában gyomor motoros és szekretoros funkció. Katalógusa Módszerek
anyagok
Matrigel kapunk Universal Biologicals (London, Egyesült Királyság), oktreotid a Novartis (Surrey, UK) és a Ham-féle F12 /Dulbecco által módosított Eagle-féle táptalajt (50:50, v: v), glutamin, Hanks kiegyenlített só oldat és magzati borjúszérumot cégtől vásároltuk Gibco (Paisley, UK). Szulfáthamu kolecisztokinin-8 (CCK), humán GLP-1 és az összes többi reagenst a Sigma cégtől (Poole, Egyesült Királyság).
Sejtek elkülönítésre és kultúra
primer tenyészeteit nyúl gasztrikus fundális nyálkahártya sejtekben dúsított D-sejteket korábban ismertetett módon nyerhetjük [39, 48]. Röviden, a nyúl fundus nyálkahártyából vetjük alá, szekvenciális EDTA és kollagenáz emésztést. Az így kapott sejtszuszpenziót dúsított D-sejtek által ellenáramú elutatriation Beckman JE 5.0 szabvány forgórész az előzőekben leírt. A D-sejt dúsított frakciót újra felszuszpendáltuk komplett tápközegben (Ham-féle F12 /Dulbecco által módosított Eagle-féle táptalajt (50:50, v: v), amely 2 mmol glutamint, 10 mM HEPES pH = 7,4, 0,22% NaHCO 3, 10% magzati borjú szérumot, 1 mg /l hidrokortizon, 8 mg /l inzulint, 100 mg /l penicillint, 100 mg /l gentamicin, 100 mg /l sztreptomicin) és tenyésztjük Matrigel bevont 24 mérőhelyes szövettenyésztő lemezeken [50] sűrűségben 1 × 10 6 sejt /mérőhely 40 órán atmoszférában, 5% CO 2, 95% levegő, 37 ° C-on.
Release Studies
tenyésztett sejteket megmostuk 3- Times Release közegben (Earl-féle kiegyensúlyozott sóoldat, amely 0,1% szarvasmarha szérum albumin, 10 mM HEPES, pH = 7,4), hogy eltávolítsuk halott és nem tapadt sejteket. Egy további 1 ml kioldó közeget adunk, amely teszt-agonisták és a sejteket 2 órán át inkubáltuk 37 ° C hőmérsékleten olyan atmoszférában, 5% CO 2, 95% levegő. Megjelenése után időszakban, a kondicionált tápközeget leszívtuk, és centrifugáljuk, hogy eltávolítsuk a nem-tapadó sejteket. A teljes celluláris tartalmát peptidet extraháljuk forralva 1 ml desztillált vízben. A kondicionált tápközeg és a sejt extraktumokat tároltuk -70 ° C hőmérsékleten tároltuk a vizsgálatig peptid-tartalom [30].
Peptide mérés
szomatosztatin koncentrációkat értékelték radioimmunoassay (RIA) antiszérummal K2, a korábban leírtak szerint [39]. Fél-maximális kötődés gátlása történt 2 fmol /cső és a intra-assay és inter-assay variációs voltak 7% és 8% százalék. Az amilin koncentráció mérése közvetlen ELISA-val (félsziget Laboratories, Belmont, CA, USA) szerint a gyártó utasításait. Az assay egy sor 0,04-2 ng /ml, és intra-assay és inter-assay variációs < 5% és < 14% -kal. A használt antitest 100% keresztreaktivitást amylin és az amylin-amid de < 1% keresztreaktivitást CGRP és elhanyagolható reakció egyéb biológiailag aktív peptidek. Az összes kísérleti mintát egyetlen állat készítmény vizsgáltuk ugyanabban a RIA vagy ELISA-val.
Statisztikai analízis
peptid felszabadulásának alatt a 2 órás időtartam alatt fejeztük a százalékos aránya a teljes sejt-tartalom (TCC) az említett peptid. Mindegyik kísérleti körülményt duplikátumban és az eredményeket egyetlen állat készítmény tekintették N = 1. Az eredményeket átlag ± SEM 3-6 különálló állati készítmények. Minden egyes 24-lyukú lemezen mindig benne kontroll (bazális) kutak és pozitív stimulánsok. Peptid felszabadulásának a stimulánsok összehasonlították a bazális Release a megfelelő 24-lyukú lemezen. Egytényezős varianciaanalízissel és Student-féle kétmintás t-tesztet alkalmaztunk, hogy meghatározzák jelentősége. A P katalógusa érték < 0.05 jelentősnek tekinthető. Katalógusa rövidítések jegyzéke katalógusa CCK: katalógusa cholecystokinint
ECL-: katalógusa enterokromaffinszerű katalógusa
katalógusa GLP-1: katalógusa glukagon-szerű peptid-1
IAPP: katalógusa szigetecske amylioid polipeptid
IBMX: katalógusa izobutil
PKC: katalógusa protein kináz C
PMA: katalógusa forbol-12-mirisztát -13-acetát, TCC, sejt teljes tartalmát.
nyilatkozatok katalógusa Köszönetnyilvánítás katalógusa Ezt a munkát részben támogatta a Medical Research Council képzési ösztöndíj ILPB.
Néhány adatokat bemutatott absztrakt formában az Egyesült Európai Gastroenterology Week in Birmingham 1997. katalógusa Szerzők eredeti beküldötteknek képeket
alábbiakban a linkeket a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 12899_2003_47_MOESM1_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájlt az 1. ábra szerinti 12899_2003_47_MOESM2_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 2. ábrán 12899_2003_47_MOESM3_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 3. ábra 12899_2003_47_MOESM4_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 4. ábra 12899_2003_47_MOESM5_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 5. ábra 12899_2003_47_MOESM6_ESM.jpeg a szerzők eredeti fájl 6. ábra a szerzők hozzájárulásai katalógusa ILPB terveztek és a vizsgálatot végzett a sejtek elkülönítésre, a kultúra, a felszabadulás kísérletekben, immunoassay és írt tervezetét és végleges változatát a kézirat. A néhai JC fogant a tanulmány társszerzője az első kézirat tervezetét. Katalógusa

• Rizikófaktorai mélység beszivárgás a differenciált depressziós korai gyomorrák: előzetes elemzés
• Differenciális génexpresszió az egér gyomor fundus hiányzik intersticiális sejtek Cajal