Regulering van amyline vrijlating uit gekweekte konijnen maag fundic mucosale cellen

Regulering van amyline vrijlating uit gekweekte konijnen maag fundic slijmvliescellen
Abstracte achtergrond
Amylin (eilandje amyloïde polypeptide) is een hormoon met de voorgestelde rol in de regulering van de glucose homeostase, maag-motor en secretoire functie en gastroprotection. In het maagslijmvlies amyline blijkt co-gelokaliseerd met somatostatine in D-cellen. De factoren die de maag amyline vrijlating zijn onbekend. In deze studie hebben we de regulering van amyline vrijlating onderzocht vanuit maagslijmvlies cellen in primaire kweek. Konijn fundus mucosale cellen verrijkt voor D-cellen door tegenstroomelutie werden gedurende 40 uur. Amyline en somatostatine afgifte gedurende 2 uur in reactie op agonisten werden beoordeeld.
Resultaten
amyline release was significant verhoogd door activering van eiwitkinase C met forbol-12-myristaat-13-acetaat, adenylaatcyclase met forskoline en verhoging van intracellulaire calcium met A23187. Cholecystokinine (CCK), adrenaline en glucagon-achtige peptide-1 (GLP-1) elke gestimuleerde amyline release in een dosis-afhankelijke wijze. Maximale CCK-gestimuleerde vrijgeving groter dan of epinefrine of GLP-1, zelfs wanneer de effecten van de laatste twee werden versterkt door isobutylmethylxanthine. Amyline gestimuleerde afgifte werd significant geremd door carbachol (met 51-59%) en octreotide (met 33-42%). Somatostatine vrijlating parallel die van amyline.
Conclusies
De gekweekte D-cell-model een middel van het bestuderen van amyline release. Amylin secretie gestimuleerd door receptor-afhankelijke en -onafhankelijke activering van Ca 2 + /proteïne kinase C en adenylaatcyclase trajecten. Remming omvat activering van muscarine receptoren en zelfregulering door somatostatine. Achtergrond
Amylin (islet amyloid polypeptide) is een 37-aminozuur peptide voornamelijk tot expressie in de pancreas eilandjes van Langerhans [1, 2]. Amylin is ook gelokaliseerd door het gehele maagdarmkanaal [3] en in de hersenen [4]. Veel recent werk is gericht op de fysiologie van de pancreas amyline; het peptide lijkt samen opgeslagen samen met uitgescheiden insuline in pancreatische B-cellen [5, 6], een kleiner deel is co-gelokaliseerd met somatostatine in pancreatische D-cellen [7].
Amylin wordt verondersteld functie als hormoon regulerende glucose homeostase. Amylin remt de basale insuline gestimuleerde glycogeen synthese in de rat skeletspieren [8, 9]; het remt insuline, somatostatine en glucagon secretie van geïsoleerde eilandjes van Langerhans en intact perfusie alvleesklier en vermindert postprandiale glucagon en insuline secretie [10-12]. Amylin kan ook bijdragen aan de glykemische controle door het vertragen van de maaglediging [13]. Het Naast deze fysiologische rollen, wordt aangenomen dat amyline belangrijke rol spelen bij de pathogenese van diabetes mellitus. Het is de belangrijkste component van de amyloïde afzettingen in de eilandjes van patiënten met niet-insuline-afhankelijke diabetes mellitus [1, 2] en tekortkomingen van amyline kan het falen van glykemische controle kenmerkend insulineafhankelijke diabetes [14] en in dierproeven bijdragen amyline zelf lijkt insulineresistentie [15] induceren.
een verscheidenheid aan fysiologische effecten op het maagdarmkanaal zijn ook beschreven. Parenterale toediening van amyline heeft een anorectant effect [13], naast aanzienlijke vermindering maaglediging [16]. Een beschermende maatregelen tegen reserpine- en serotonine-geïnduceerde gastropathy is beschreven [17]. Intraveneuze amyline is een krachtige remmer van basale, pentagastrine en 2-deoxy-D-glucose gestimuleerde maagzuursecretie in de rat [18] en amyline verminderde zuursecretie in de maag geïsoleerde muis preparaat [19]. Een stimulerend effect op de serum gastrine is ook gemeld, hoewel dit ondergeschikt aan het zuursecretieremming [20] kan zijn. In overeenstemming met deze acties amyline-bindingsplaatsen aangetroffen in rat gastric fundic slijmvlies [21]. In het maagdarmkanaal amyline lijkt samen lokaliseren met andere gastro-intestinale peptiden. Door in situ hybridisatie
, immunofluorescentie en immunocytochemie, Mulder et al
gebleken dat amyline hoofdzakelijk co-gelokaliseerd met somatostatine in de D-cellen van ratten en muizen en ratten antrale mucosa fundus mucosa [22]. Een minderheid van amyline gecolokaliseerd afzonderlijke populaties van gastrine-bevattende cellen in het antrum en PYY bevattende cellen in de fundus. Studies in PDX-1 deficiënte muizen (die niet aan G-cellen zich ontwikkelen) toonde geen verandering in de maag amyline expressie bevestigt overheersende expressie van amyline in D-cellen [23]. Deze gegevens tonen de aanwezigheid van amyline en amyline receptoren, gekoppeld aan de farmacologische effecten gesuggereerd dat amyline een paracrien en /of endocriene regelsystemen en pathofysiologische rol bij het maagslijmvlies zou kunnen hebben. Er zijn echter geen studies verkennen van de processen die betrokken zijn in de maag amyline secretie. Dergelijke gegevens zijn een voorwaarde voor een beter begrip van de maag amyline fysiologie. Primaire, maag- en endocrine cellen werden gebruikt om de fysiologische en pathofysiologische controle van verschillende gastrointestinale peptiden waaronder gastrine, somatostatine, glucagon-achtige peptide-1 (GLP-1) en cholecystokinine (CCK) [24-30] onderzocht. De co-localisatie van amyline met somatostatine maakt de maag fundus-D-celpreparaat een bruikbaar model voor de beheersing van amyline uitscheiding op cellulair niveau te onderzoeken.
In deze studie hebben we onderzocht receptor-afhankelijke en receptor-onafhankelijke regulering van amyline afscheiding uit gekweekte konijnen maag fundus mucosale cellen. Cholecystokinine, glucagon-achtige peptide-1 en epinefrine gestimuleerde amyline release in een dosis afhankelijke wijze en de muscarine receptor agonist carbachol en somatostatine receptor agonist octreotide geremd amyline release. Somatostatine en amyline vrijlating vond plaats in parallel.
Resultaten
Receptor-onafhankelijke stimulatie van peptide afgifte Belgique Om in eerste instantie beoordelen of amyline vrijlating kon worden gedetecteerd uit de culturen van konijn fundic cellen werden potente receptor-onafhankelijke stimuli gebruikt [ ,,,0],26] de totale celinhoud (TCC) van amyline in de gekweekte celpreparaat (801 ± 151 fmol /putje) ongeveer 4-5-voudig lager dan die van somatostatine (3 768 ± 1325 fmol /putje). Significante stimulatie van amyline vrijgave opgetreden met de actieve forbolester (forbol-12-myristaat-13-acetaat, PMA) die eiwitkinase C (PKC), activering van adenylaatcyclase met forskoline en verhoging van intracellulair calcium met de ionofoor A23187 (Figuur activeert 1). De forbolester was de krachtigste stimulans, wat leidt tot 8,5-voudige toename van amyline afgifte (basale vrijkomen 2,14 ± 0,8% verhoogd tot 18,5 ± 1,4% van TCC). Forskolin verhoogde afgifte 3,3 maal (maximale afgifte 7,2 ± 1,4% van de TCC) en A23187 1,8 maal (3,8 ± 0,5% TCC), die aanmerkelijk minder krachtig dan PMA. Er waren geen significante verschillen tussen de patronen van somatostatine en amyline afgifte (Fig. 1). Figuur 1 receptor-onafhankelijke stimulatie van amyline (boven) en somatostatine (onder) uit gekweekte D-cellen. Cellen werden gestimuleerd met forbol-12-myristaat-13-acetaat 100 nM (PMA), forskoline 10 uM (FSK) en A23187 1 pM gedurende 2 uur. De resultaten uitgedrukt in% van de mobiele inhoud van peptide vrijgegeven, gemiddelde ± SEM, ** P Restaurant < 0,01 versus controle, * P Restaurant < 0,05 versus controle.
Receptor-afhankelijke stimulatie
Eerdere studies hebben aangetoond dat CCK een krachtige stimulans somatostatine afgifte [26]. Dit werd hier bevestigd. CCK dosisafhankelijk gestimuleerde vrijgeving van amyline uit de gekweekte cellen (figuur 2). Maximale stimulatie, een 2,75-voudige verhoging, 2,1 ± 0,7% basale afgifte verhoogd tot 5,9 ± 0,8% TCC opgetreden bij CCK 10 nM. Een soortgelijke dosisrespons patroon werd gezien CCK-gestimuleerde afgifte somatostatine hoewel maximale afgifte was relatief hoger somatostatine (4,4-voudig, 1,1 ± 0,1% tot 5,2 ± 0,7% TCC) dan amyline (figuur 2). Figuur 2 CCK-gestimuleerde amyline (boven) en somatostatine (onder) afgifte uit gekweekte D-cellen. Gekweekte mucosale cellen werden gestimuleerd met CCK gedurende 2 uur. De resultaten uitgedrukt in% van de mobiele inhoud van peptide vrijgegeven, gemiddelde ± SEM, * P Restaurant < 0,05 versus controle.
Activering van adenylaat cyclase-gekoppelde receptoren met ofwel epinefrine of glucagon-achtige peptide-1 leidde tot een dosisafhankelijke kleine toename van zowel somatostatine (maximale toename 1,44 en 1,35 respectievelijk een factor) en amyline afgifte (1,36 en 1,25 respectievelijk vouwen) (figuren 3 en 4). Figuur 3 Effect van epinefrine aan amyline (boven) en somatostatine (onder) afgifte uit gekweekte D-cellen. Cellen werden gestimuleerd met toenemende concentraties van epinefrine (EPI) in aanwezigheid of afwezigheid van 100 uM isobutylmethylxanthine (IBMX) gedurende 2 uur. De resultaten uitgedrukt in% van de mobiele inhoud van peptide vrijgegeven, gemiddelde ± SEM, * P Restaurant < 0,05 versus controle.
Figuur 4 Effect van glucagon-achtige peptide-1 op amyline (boven) en somatostatine (onder) afgifte uit gekweekte D-cellen. Cellen werden gestimuleerd met toenemende concentraties van glucagon-achtige peptide-1 (GLP) in aanwezigheid of afwezigheid van 100 uM isobutylmethylxanthine (IBMX) gedurende 2 uur. De resultaten uitgedrukt in% van de mobiele inhoud van peptide vrijgegeven, gemiddelde ± SEM, * P Restaurant < 0,05 versus controle. Ondernemingen De reacties op epinefrine en GLP-1 werd verhoogd door gelijktijdige toediening van de fosfodiësterase remmer isobutylmethylxanthine (IBMX) (100 uM). Basale amyline vrijlating was 2,0 ± 0,2% TCC en maximaal IBMX-verbeterde versie 3,2 ± 0,2% TCC met epinefrine bij 100 uM en 3,2 ± 0,3% TCC met GLP-1 bij 10 nM. Basale somatostatine afgifte (1,1 ± 0,1% TCC) steeg tot 2,7 ± 0,1% TCC met epinefrine + IBMX en 2,1 ± 0,4% TCC met GLP-1 + IBMX. Deze waren nog steeds aanzienlijk minder dan-CCK gestimuleerd release. Er waren geen verschillen in het patroon of de verhouding van somatostatine en amyline reacties (figuren 3 en 4).
Remmende regeling van amyline afgifte
Behandeling met de somatostatine analoog octreotide geproduceerde kleine, maar niet-significante daling van zowel basale amyline ( met 14%) en basale somatostatine (met 18%) uitscheiding (Figuur 5). Carbachol had geen duidelijk effect op basale of amyline of somatostatine-uitscheiding (Figuur 5). CCK-gestimuleerde amyline release was significant geremd door octreotide (met 42%) en de muscarine agonist carbachol (met 51%). Evenzo epinefrine (met IBMX) gestimuleerde amyline vrijlating werd geremd door 33% van octreotide en 59% door carbachol (beide P Restaurant < 0,05). Zoals getoond in figuur 6, werd een vergelijkbaar patroon waargenomen met somatostatine release. Figuur 5 Effect van octreotide en carbachol op basale amyline en somatostatine afgifte uit gekweekte D-cellen. D-cellen werden gestimuleerd met ofwel 10 nM octreotide (OCT) of carbachol 100 uM (CBH) gedurende 2 uur en afgifte van amyline en somatostatine beoordeeld. Resultaten uitgedrukt als% van de celinhoud peptide bezit, gemiddelde ± SEM.
Figuur 6 Remmende effecten van octreotide en carbachol op-agonist gestimuleerde amyline (boven) en somatostatine (onder) release. D-cellen werden gestimuleerd met ofwel CCK 10 nM of epinefrine isobutylmethylxanthine met zowel 100 pM (EPI) bij octreotide 10 nM (OCT) of carbachol 100 uM (CBH) gedurende 2 uur. De resultaten uitgedrukt in% van de mobiele inhoud van peptide vrijgegeven, gemiddelde ± SEM, * P Restaurant < 0,05 versus relevante-agonist gestimuleerde release.
Discussion
Dit is de eerste studie om de vrijlating van amyline van maagslijmvlies op cellulair niveau te onderzoeken. Resultaten toonden dat amyline niet alleen in maagslijmvlies cellen werd opgeslagen, maar ook die voor vermeende fysiologische agonisten gereguleerde afgifte van het peptide. Eerdere studies hebben gelokaliseerd amyline de maag via Northern blotting [31, 32], immunocytochemie [33], radioimmunoassay [3] en in situ hybridisatie
[22] maar de afgifte van maag amyline is nog niet eerder aangetoond.
de meerderheid van de maag fundic amyline lijkt te worden gelokaliseerd met somatostatine binnen D-cellen [22] Daarom hebben we de gekweekte konijnen D-cell-model gebruikt om de agenten het regelen van cellulaire vrijlating van amyline te onderzoeken en om deze te vergelijken met somatostatine secretie.
Initiële studies werden uitgevoerd met krachtige middelen waarvan bekend rechtstreeks activeren peptide secretie van endocriene cellen in een receptor-onafhankelijke wijze [26] forbolesters (bijvoorbeeld PMA) direct activeert proteïne kinase C in de binnenlaag van het celmembraan; Dit op zijn beurt activeert de cellulaire processen die nodig zijn voor exocytose. PMA was een krachtige stimulans van beide somatostatine en amyline secretie. De calcium A23187, waarvan het gehalte aan intracellulair calcium verhoogt ([Ca 2 +] i]) gestimuleerd amyline release, hoewel het aanzienlijk minder krachtig dan PMA. Dit is vergelijkbaar met de responsen waargenomen bij menselijke antrale [26] en honden fundus D-cellen [30] waarbij het geloven de stijging van [Ca 2 +] i hoofdzakelijk faciliterende dan direct stimuleren secretie. Directe activatie van adenylaatcyclase met forskoline gestimuleerde ook amyline release. Daarom is de eerste studies aangetoond dat amyline afgifte kan worden gestimuleerd door activering van een van de twee belangrijkste intracellulaire signaalroutes bekend peptide secretie verhogen. Hebben vastgesteld dat deze trajecten actief waren, onderzochten we welke fysiologische agentia kunnen stimuleren amyline secretie in een receptor-afhankelijke wijze.
Cholecystokinin-8 produceerde een dosisafhankelijke toename van amyline en somatostatine secretie. CCK is bekend als een krachtige in vitro stimulerende
somatostatine afgifte uit antrale en fundus D-cellen [26, 30, 34] zijn. Een soortgelijke dosisrespons werd gezien amyline, hoewel de totale toename was iets groter voor somatostatine dan amyline. Nader onderzoek is nodig om te bepalen of dit een apart somatostatine specifiek uitgescheiden na stimulatie met CCK. Fundus D-cellen blijken zowel de CCK-1 (CCK A) en CCK-2 (gastrine /CCK B) -receptoren [35] te drukken. Activering van deze receptoren leidt tot de activatie van fosfolipase C, uitzetten van diacylglerol en inositol 1,4,5-trifosfaat en daaropvolgende verhoging van [Ca 2 +] i en activering van PKC, waardoor neuropeptidevrijgave [36 ]. Deze resultaten zijn consistent met de resultaten voor A23187 en PMA stimulatie. Derhalve blijkt dat CCK kan optreden als fysiologische stimulans van amyline release.
Epinefrine en GLP-1 geproduceerd kleine dosis-afhankelijke toename van amyline en somatostatine secretie. Dit effect kan worden verhoogd door gelijktijdige behandeling met fosfodiësterase remmer IBMX, die cAMP afbraak remt en versterkt responsen gegenereerd door adenylaatcyclase gekoppelde receptoren. Maar de reacties waren nog steeds aanzienlijk minder dan die werden gezien bij de activering van de Ca 2 + /PKC pathway door ofwel CCK of PMA. Soortgelijke verschillen in de gevoeligheden zijn beschreven in humane antrale [26] en honden fundus [30] D-cellen. Ondernemingen De overheersende remmende invloeden tot nu toe beschreven op fundus D-cellen muscarinische agonisten [37, 38] en door autoregulatie somatostatine zelf [39, 40]. De reacties hier vermeld zijn in overeenstemming met de gegevens op somatostatine vrijlating uit de honden fundic D-cellen [30, 37]. Daarentegen, muscarine receptoren stimulerend om antrale D-cellen [41], waarschijnlijk als gevolg van een verschil in specifieke functie. De huidige studie bevestigde de remmende werking van zowel de somatostatine-analoog octreotide en muscarine agonist carbachol tegen somatostatine release. Een vergelijkbare remming van gestimuleerde amyline release was waargenomen. Dit suggereert dat in vivo
remming van amyline afgifte omvat parasympathische invoer en autocriene regulering door somatostatine.
Onder alle omstandigheden bestudeerd somatostatine en amyline werden uitgescheiden in parallel, zoals kan worden verwacht, als ze gelijktijdig opgeslagen in secretorische granules. Insuline en amyline zijn co-uitgescheiden door pancreas β-cellen, secretie optreedt normaliter parallel [42-44], maar differentieel secretie is gemeld bij experiment modellen van diabetes mellitus [45, 46]. Nader onderzoek is nodig om de relatie tussen de secretie en acties van maag amyline en somatostatine verder te definiëren. In geïsoleerde pancreatische eilandjes verschijnen beide peptiden een coöperatieve rol in het reguleren peptide secretie hebben: gecombineerde imunoneutralisation van amyline en somatostatine geleid tot een grotere verhoging van insuline en glucagon secretie dan neutralisatie van de afzonderlijke [10]. Het zal interessant zijn om te onderzoeken of we gelijkaardige resultaten worden gezien met de maag functies.
Postprandiale release van intestinale CCK en GLP-1 remmen maaglediging en zuursecretie [13, 47]. Deze effecten zijn echter te worden nagedacht ten minste gedeeltelijk via intermediairen afgegeven uit de D-cellen in plaats van door direct remmen van de zuur-afscheidende pariëtale cellen [48]. Men geloofde dat somatostatine was de enige tussentijdse maar de resultaten van deze studie suggereren dat paracriene regulering van amyline van pariëtale ECL- en andere endocriene cellen kunnen een rol spelen bij de integratieve reactie op maaltijden. De amyline geïnduceerde remming van histamine vrijkomt uit rat fundic mucosale segmenten in vitro
via toegenomen somatostatine vrijkomen [19], maar het gebruik van een selectieve somatostatine receptor antagonist Rossowski et al
toonde in vivo
werd bemiddeld in ratten die een gedeelte van het zuur-remmende werkingen van zowel amyline en de gerelateerde peptide adrenomedullin waren somatostatine-onafhankelijke [49]. De specifieke rol van amyline gastrische fysiologie vereisen nadere toelichting maar suggereren deze gegevens dat lokaal bezit amyline rechtstreeks kan reguleren mucosale functies. Ondernemingen De reacties op epinefrine en carbachol suggereren dat autonome innervatie de afscheiding van amyline kan reguleren. Het algemene evenwicht in vivo
zou dan afhangen van de relatieve inbreng van de remmende muscarine en stimulerende adrenerge systemen, gecombineerd met circulerende endocriene en lokale paracriene en eventueel luminale factoren.
Conclusie Inloggen Deze studie beschrijft de eerste karakterisering van de factoren die de maag amyline release. We hebben aangetoond dat amyline afgifte kan worden gestimuleerd door receptor-afhankelijke stimulatie van een van de Ca 2 + /PKC en adenylaatcyclase /cAMP afbraak en die fysiologisch relevante peptiden en neurale mediatoren kunnen verbeteren amyline release. Dit ondersteunt de hypothese dat amyline kan maagslijmvlies functie module. Deze studie bevestigt dat op korte termijn celkweken verrijkt door elutriatie als voorbeeld kan dienen voor het verkennen van de pathofysiologische release van de maag amyline en een route van verdere begrijpen van de rol van amyline bij de regulatie van de maag motor en secretoire functie.
Methods
Materials
Matrigel werd verkregen van Universal Biologicals (Londen, UK), octreotide van Novartis (Surrey, Verenigd Koninkrijk) en F12 Ham's /Dulbecco's gemodificeerd Eagle's kweekmedium (50:50, v: v), glutamine, Hanks gebalanceerde zout oplossing en foetaal kalfsserum werden gekocht bij Gibco (Paisley, UK). Gesulfateerde cholecystokinine-8 (CCK), humaan GLP-1 en alle andere reagentia werden verkregen van Sigma (Poole, UK).
Cel isolatie en kweek
Primaire kweken van konijnen maag fundus mucosale cellen verrijkt voor D-cellen verkregen zoals eerder is beschreven [39, 48]. In het kort werd konijn fundus mucosa sequentieel EDTA en collagenase digestie. De verkregen celsuspensie werd verrijkt D-cellen door tegenstroom elutatriation behulp van een Beckman JE 5,0 standaard rotor zoals eerder beschreven. De D-cellen verrijkte fractie werd opnieuw gesuspendeerd in compleet kweekmedium (Ham's F12 /Dulbecco's gemodificeerd Eagle's kweekmedium (50:50, v: v), bevattende 2 mM glutamine, 10 mM HEPES pH 7,4, 0,22% NaHCO 3, 10% foetaal kalfserum, 1 mg /l hydrocortison, 8 mg /l insuline, 100 mg /l penicilline, 100 mg /l gentamicine, 100 mg /l streptomycine) en gekweekt op Matrigel beklede 24 putjes weefselkweekplaten [50] bij een dichtheid van 1 x 10 6 cellen /putje gedurende 40 uur in een atmosfeer van 5% CO 2, 95% lucht bij 37 ° C. Laat
Studies
Gekweekte cellen werden gewassen 3 tijden in afgiftemedium (Earl's gebalanceerde zoutoplossing bevattende 0,1% runderserumalbumine, 10 mM HEPES pH 7,4) dood en niet-hechtende cellen te verwijderen. Nog eens 1 ml afgiftemedium werd toegevoegd met testwater agonisten en cellen geïncubeerd gedurende 2 uur bij 37 ° C in een atmosfeer van 5% CO 2, 95% lucht. Na de afgifteperiode, werd het geconditioneerde medium gecentrifugeerd en afgezogen om niet-hechtende cellen te verwijderen. Totale cellulaire inhoud van peptide werd geëxtraheerd door koken in 1 ml van gedestilleerd water. Geconditioneerde medium en celextracten werden opgeslagen bij -70 ° C tot geanalyseerd op peptidegehalte [30].
Peptide meting
Somatostatine concentraties werden bepaald door radioimmunoassay (RIA) met antiserum K2, zoals eerder [39] beschreven. Helft van de maximale remming van de binding trad op bij 2 fmol /buis en de intra-assay en inter-assay variatie waren 7% en 8% procent. Amyline concentraties werden bepaald door directe ELISA (schiereiland Laboratories, Belmont, CA, USA) volgens de instructies van de fabrikant. De test heeft een bereik van 0,04-2 ng /ml, en intra-assay en inter-testvariatie van < 5% en < 14% respectievelijk. Het antilichaam gebruikt heeft 100% kruisreactiviteit met amyline en amyline-amide, maar < 1% kruisreactiviteit met CGRP en verwaarloosbare reacties met andere biologisch actieve peptiden. Alle proefmonsters van een enkel preparaat dieren werden getest in dezelfde RIA of in statistische analyse
Peptide afgifte gedurende de 2 uur ELISA.
Werd uitgedrukt als het percentage van het totale cel (TCC) van dat peptide. Elke experimentele voorwaarde werd in tweevoud getest en de resultaten van een enkel preparaat dier werden als N = 1. De resultaten worden uitgedrukt als het gemiddelde ± SEM van 3-6 afzonderlijke preparaten dier. Elke 24 goed plaat opgenomen altijd controle (basaal) putten en positieve stimulerende middelen. Neuropeptidevrijgave door stimulerende vergeleken met de basale vrijgave van de desbetreffende 24 wells plaat. Enkele factoren variantieanalyse en gepaarde t-test van Student werd gebruikt om significantie te bepalen. Een p
waarde van < 0,05 werd beschouwd als significant Nederlands Lijst van afkortingen
CCK.
Cholecystokinine
ECL-:
enterochromaffiene-achtige


GLP-1:
glucagon-like peptide-1
IAPP:
eilandje amylioid polypeptide
IBMX:
isobutylmethylxanthine
PKC:
proteïne kinase C
PMA:
phorbol-12-myristaat -13-acetaat, TCC, totale celinhoud.
verklaringen
Dankwoord
Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door een opleiding Medical Research Council beurs voor ILPB.
Sommige van de gegevens werden gepresenteerd in abstracte vorm op de United European Gastroenterology Week in Birmingham 1997.
Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan ​​de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12899_2003_47_MOESM2_ESM.jpeg Authors' 12899_2003_47_MOESM1_ESM.jpeg Auteurs originele bestand voor figuur 2 12899_2003_47_MOESM3_ESM.jpeg Authors 'originele bestand voor figuur 3 12899_2003_47_MOESM4_ESM.jpeg Authors' oorspronkelijke bestand voor originele bestand figuur 4 12899_2003_47_MOESM5_ESM.jpeg Authors 'voor figuur 5 'originele bestand voor figuur 6 Authors' 12899_2003_47_MOESM6_ESM.jpeg Auteurs Bijdragen
ILPB bedacht en ontwierp de studie, uitgevoerd de cel isolement, cultuur, afgifte-experimenten, immunoassays en schreef ontwerp en de definitieve versie van het manuscript. De late JC bedacht de studie en co-schreef de eerste manuscript ontwerp.

• Risicofactoren voor diepte van infiltratie in de gedifferentieerde depressieve vroege maagcarcinoom: een eerste analyse
• Differentiële genexpressie in muizen maagfundus ontbreekt interstitiële cellen van Cajal