Regulatioun vun amylin Fräiloosse vu cultured Kanéngchen gastric fundic mucosal cells

Regulatioun vun amylin Fräiloosse vu cultured Kanéngchen gastric fundic mucosal Zellen VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Amylin (islet amyloid polypeptide) en Hormon mat recommendéiert Rollen vun der Regulatioun vun Zocker ass homeostasis, gastric Motorik an secretory Funktioun an gastroprotection. An der amylin gastric mucosa ass Co-en der mat somatostatin vun D-Zellen fonnt. D'Punkte ginn gastric amylin release Regulatioun onbekannt. An dëser Etude hu mir d'Regulatioun vun amylin Fräiloosse vu gastric mucosal Zellen am primäre Kultur ze propagéieren. Kanéngchen fundic mucosal Zellen beräichert fir D-Zellen vun counterflow elutriation sech cultured fir 40 Stonnen. Amylin an somatostatin release iwwer 2 Stonnen an Äntwert ze agonists évaluéieren goufen. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Amylin release war vun Aktivéierung vun FAQ kinase C mat bor-12-myristate-13-acetate, adenylate cyclase mat forskolin an Héicht bedeitend verstäerkt vun intracellular Kalzium mat A23187. Cholecystokinin (CCK), epinephrine an Glukagon-wëll peptide-1 (GLP-1) all stimuléiert amylin release zu enger Portioun-ofhängeg täteg. Bäschten CCK-stimuléiert release war méi wéi entweder epinephrine oder GLP-1, och wann d'Auswierkunge vun der Streeliicht vun isobutylmethylxanthine verstäerkt goufen. Stimuléiert amylin release war vun carbachol (vun 51-59%) an octreotide (vun 33-42%) bedeitend inhibited. Somatostatin release paralleled déi vun amylin. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung D'cultured D-Zell Modell e Mëttel vun ënnersicht amylin release gëtt. Amylin secretion ass vun receptor-ofhängeg an -independent Aktivatioun vun Ca stimuléiert 2 + /FAQ kinase C an adenylate cyclase Weeër. Inhibition implizéiert Aktivatioun vun muscarinic kenne an auto-Regulatioun vun somatostatin. VerfÜgung Background VerfÜgung Amylin (islet amyloid polypeptide) ass e 37-Aminosaier peptide Kannerbetreiung an der pancreatic Schëff vun Langerhans ausgedréckt [1, 2]. Amylin huet och uechter d'gastrointestinal TRACT [3] an am Gehir en der goufen [4]. Vill rezent Wierk huet op der Physiologie vun pancreatic amylin do; der peptide ebenfalls mat Insulin am pancreatic B-Zellen [5, 6], e klengen Deel ass Co-en der mat somatostatin zu pancreatic D-Zellen [7] Co-gespäichert a Co-secreted gin. VerfÜgung Amylin ass ugeholl Funktioun als Zocker homeostasis Hormon Regulatioun. Amylin bremst basal an Insulin-stimuléiert Glucogène Sythese zu Grenzwäerter Vullen Muskel [8, 9]; et bremst Insulin, somatostatin an Glukagon secretion aus isoléiert pancreatic Schëff a intakt perfused Bauchspaicheldrüs an et verklengert Post-prandial Glukagon an Insulin secretion [10-12]. Amylin kann och duerch bewegt gastric emptying [13] zu glycemic Kontroll bedeelegen. Et Zousätzlech zu dësen gestallt Rollen, amylin ass gegleeft bedeitend Roll an der pathogenesis vun Zockerkrank ze spillen. Et ass de grousse Volet vun der amyloid Dépôten an de Schëff vu Patienten mat Net-Insulin ofhängeg Zockerkrank [1, 2] an hunn vun amylin kann den Echec vun glycemic Kontroll typesch Insulin-ofhängeg Diabetis [14] an an Déier Studien bäidroen amylin schéngt sech Insulin Resistenz zu induce [15]. VerfÜgung a ville gestallt Auswierkungen op d'gastrointestinal TRACT hunn och beschriwwe ginn. Parenteral Administratioun vun amylin huet en anorectant Effekt [13], nieft vill gastric emptying reduzéieren [16]. A protectant Aktioun géint reserpine-, an serotonin-entschlof gastropathy huet beschriwwe ginn [17]. Intravenous amylin ass eng mächtegst inhibitor vun basal, pentagastrin an 2-deoxy-D-Zocker gastric Seier secretion an der Grenzwäerter [18] an amylin reduzéiert Seier secretion an der isoléiert Maus Mo. Opbereedung [19] stimuléiert. A stimulant Effekt op serum gastrin huet och gemellt ginn, obwuel dëst zu der inhibition vun Seier secretion Secondaire gewiescht kann [20]. An hält mat deenen Aktiounen amylin-verbindlech Siten goufen zu Grenzwäerter gastric fundic mucosa [21] fonnt. An der amylin gastrointestinal TRACT ebenfalls mat anere gastrointestinal peptides fir Co-localize. Mat Hëllef vun situ VerfÜgung hybridisation, immunofluorescence an immunocytochemistry, Mulder et al VerfÜgung zougedréckt datt amylin Kannerbetreiung mat somatostatin Co-en der an der D-Zellen vun Grenzwäerter a Maus antral mucosa a Grenzwäerter fundic mucosa [22]. Eng Minoritéit vun amylin Co-en der ze trennen Populatiounen vun gastrin-haltege Zellen am antrum an PYY-haltege Zellen am fundus. Studien an PDX-1 erhéijen Mais (déi versoen G-Zellen ze entwéckelen) Gewise kee Verfall vun gastric amylin Ausdrock confirméiert, predominant Ausdrock vun amylin bannent D-Zellen [23]. Dës Donnéeë der Präsenz vun amylin an amylin kenne, zesummen mat der pharmacological Auswierkungen weist, datt amylin hutt vläicht e paracrine an /oder endocrine reglementaresche an pathophysiological Roll an der gastric mucosa. Mä et gi keng Studien d'Prozesser Équipe an gastric amylin secretion lassleeën. Esou Donnéeë sinn eng Viraussetzung fir weider Versteesdemech vun gastric amylin Physiologie besat. Primärschoul Kulturen vun gastric an intestinal endocrine Zellen hunn d'Fro gestallt an pathophysiological Kontroll vun e puer gastrointestinal peptides dorënner gastrin, somatostatin, Glukagon-wëll peptide-1 (GLP-1) an cholecystokinin (CCK) [24-30] ënnersicht geheescht. De Co-Lokalisatioun vun amylin mat somatostatin mécht de gastric fundic D-Zell Virbereedung engem nëtzlech Model der Kontroll vun amylin secretion um bewosst Niveau ze iwwerpréifen. VerfÜgung An dëser Etude hu mir iwwerpréift receptor-ofhängeg an receptor-onofhängeg Regulatioun vun amylin secretion aus cultured Kanéngchen gastric fundic mucosal Zellen. Cholecystokinin, Glukagon-wëll peptide-1 an epinephrine stimuléiert amylin release zu enger Portioun ofhängeg Manéier an d'muscarinic receptor agonist carbachol an somatostatin receptor agonist octreotide inhibited amylin release. Somatostatin an amylin release Accident zu parallel. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Receptor-onofhängeg Stimulatioun vun peptide release VerfÜgung Fir Ufank evaluéieren, ob amylin Verëffentlechung vun de Kulturen vun Kanéngchen fundic Zellen, mächtegst receptor-onofhängeg stimuli sech nogewise konnt ginn [ ,,,0],26] d'total Zell Inhalt (tcc) vun amylin an der cultured Zell Virbereedung (801 ± 151 fmol /gutt) war ongeféier 4 bis 5-fantastesch niddreg wéi déi vun somatostatin (3 768 ± 1325 fmol /gutt). Grouss Stimulatioun vun amylin Verëffentlechung geschitt mat der aktiver bor Ester (bor-12-myristate-13-acetate, PMA) déi FAQ kinase C (PKC), Aktivatioun vun adenylate cyclase mat forskolin an Héicht vun intracellular Kalzium mat der ionophore A23187 (Dorënner activéiert 1). D'bor Ester huet d'mächtegst stimulant, bis 8,5 fantastesch Erhéijung vun amylin release Haaptfiguren (basal 2,14 ± 0,8% bis 18.5 ± 1,4% vun tcc waarden release). Forskolin release fräi 3,3 fantastesch (Bäschten release 7,2 ± 1,4% vun tcc) an A23187 vun 1,8 fantastesch (3,8 ± 0,5% tcc), dës huet mat Ofstand manner mächtegst wéi PMA. Do ware keng grouss Ënnerscheeder tëscht de Musteren vun somatostatin an amylin release (Figebam. 1). Figur 1 Receptor-onofhängeg Stimulatioun vun amylin (uewen) a somatostatin (ënnen) aus cultured D-Zellen. Zellen sech mat bor-12-myristate-13-acetate 100 nm (PMA), forskolin 10 μM (FSK) an A23187 1 μM fir 2 Stonnen stimuléiert. Resultater wéi% vun Zell Inhalt vun peptide ausgedréckt Hit, mengen ± Sem, ** P VerfÜgung &Si besteet; 0,01 vs. Kontroll, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05 vs. Kontroll. VerfÜgung Receptor-ofhängeg Stimulatioun VerfÜgung virdrun Etuden bewisen hunn, datt CCK engem mächtegst stimulant vun somatostatin Fräiloossung ass [26]. Dëst war hei confirméiert. CCK Portioun-dependently release vun amylin aus der cultured Zellen stimuléiert (Dorënner 2). Bäschten Stimulatioun, engem 2.75 fantastesch Augmentatioun, 2.1 ± 0,7% basal release fräi ze 5.9 ± 0,8% tcc, Priedegt mat CCK 10 nm. Eng ähnlech Portioun Äntwert Muster war fir CCK-stimuléiert somatostatin release gesinn obwuel Bäschten release relativ héich fir somatostatin war (4,4 fantastesch, 1,1 ± 0,1% bis 5.2 ± 0,7% tcc) wéi amylin (Dorënner 2). Figur 2 CCK-stimuléiert amylin (uewen) a somatostatin (ënnen) Fräiloosse vu cultured D-Zellen. Cultured mucosal Zellen sech fir 2 Stonnen mat CCK stimuléiert. Resultater wéi% vun Zell Inhalt vun peptide ausgedréckt Hit, mengen ± Sem, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05 vs. Kontroll. VerfÜgung Activatiounscode vun adenylate cyclase-Koppel kenne mat entweder epinephrine oder Glukagon-wëll peptide-1 Nerve enger Portioun-ofhängeg kleng Erhéijung vun béiden somatostatin (Bäschten Erhéijung 1,44 an 1,35 fantastesch bzw.) an amylin release (1.36 an 1,25 a fantastesch bzw.) (Sauerdall 3 a 4). Figur 3 Effekt vun epinephrine op amylin (uewen) a somatostatin (ënnen) Fräiloosse vu cultured D-Zellen. Zellen sech mat waarden Konzentratioune vun epinephrine (EPI) an d'Presenz oder Feele vun isobutylmethylxanthine 100 μM (IBMX) fir 2 Stonnen stimuléiert. Resultater wéi% vun Zell Inhalt vun peptide ausgedréckt Hit, mengen ± Sem, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05 vs. Kontroll. VerfÜgung 4 Effekt vun Glukagon-wëll peptide-1 Dorënner op amylin (uewen) a somatostatin (ënnen) Fräiloosse vu cultured D-Zellen. Zellen sech mat waarden Konzentratioune vun Glukagon-wëll peptide-1 (GLP) an d'Presenz oder Feele vun isobutylmethylxanthine 100 μM (IBMX) fir 2 Stonnen stimuléiert. Resultater wéi% vun Zell Inhalt vun peptide ausgedréckt Hit, mengen ± Sem, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05 vs. Kontroll. VerfÜgung D'Äntwerte epinephrine an GLP-1 waren déi Co-Administratioun mat der phosphodiesterase inhibitor isobutylmethylxanthine (IBMX) (100 μM) verstäerkt. Basal amylin release war 2.0 ± 0,2% tcc an Bäschten IBMX-verstäerkte release 3,2 ± 0,2% tcc mat epinephrine um 100 μM an 3,2 ± 0.3% tcc mat GLP-1 op 10 nm. Basal somatostatin release (1,1 ± 0,1% tcc) fräi ze 2,7 ± 0,1% tcc mat epinephrine + IBMX an 2.1 ± 0,4% tcc mat GLP-1 + IBMX. Dës goufen nach vill manner wéi CCK-stimuléiert release. Do ware keng Ennerscheeder an der Muster oder Verhältnis vun somatostatin an amylin Äntwerte (Sauerdall 3 a 4). VerfÜgung Inhibitory Regulatioun vun amylin release VerfÜgung Prefabrizéierten mat der somatostatin analog octreotide produzéiert kleng mee Net-relevant Kierzunge souwuel basal amylin ( vun 14%) an basal somatostatin (vun 18%) secretion (Dorënner 5). Carbachol hu keng kloer Effekt op entweder basal amylin oder somatostatin secretion (Dorënner 5). CCK-stimuléiert amylin release war vill vun octreotide (vun 42%) inhibited an der muscarinic agonist carbachol (vun 51%). Den Zerfall epinephrine (mat IBMX) -stimulated amylin release vun 33% vun octreotide an 59% vun carbachol inhibited war (souwuel P VerfÜgung &Si besteet; 0,05). Als zu Figur 6 gewisen, war en ähnleche Muster mat somatostatin release gesinn. Figur 5 Effekt vun octreotide an carbachol op basal amylin an somatostatin Fräiloosse vu cultured D-Zellen. D-Zellen sech mat entweder octreotide stimuléiert 10 nm (Okt) oder carbachol 100 μM (CBH) fir 2 Stonnen an der Fräisetzung vu amylin an somatostatin évaluéieren. Resultater ausgedréckt als% vun Zell Inhalt vun peptide Hit, ± Sem heeschen. VerfÜgung 6 Inhibitory Auswierkunge vun octreotide an carbachol op agonist-stimuléiert amylin (uewen) a somatostatin (ënnen) release Dorënner. D-Zellen sech mat entweder CCK 10 nm oder epinephrine mat isobutylmethylxanthine souwuel 100 μM (EPI) a Kombinatioun mat octreotide 10 nm (Okt) oder carbachol 100 μM (CBH) fir 2 Stonnen stimuléiert. Resultater wéi% vun Zell Inhalt vun peptide ausgedréckt Hit, mengen ± Sem, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05 vs. relevant agonist-stimuléiert release. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung Dëst ass déi éischt Etude der Verëffentlechung vun amylin aus gastric mucosa um bewosst Niveau ze iwwerpréifen. Resultater bewisen, dass amylin net nëmmen zu gastric mucosal Zellen awer och, datt putative gestallt agonists reegelen release vun der peptide gespäichert gouf. Virdrun Studien hunn amylin fir de Mo en der Hëllef Northern blotting [31, 32], immunocytochemistry [33], radioimmunoassay [3] an an situ VerfÜgung hybridisation [22] awer d'Verëffentlechung vun gastric amylin gouf virdrun net bewisen.
d'Majoritéit vun gastric fundic amylin ebenfalls mat somatostatin bannent d-Zellen en der gin [22] Dofir hu mir de cultured Kanéngchen d-Zell Modell benotzt d'Agenten kontrolléieren bewosst release vun amylin ze ermëttelen an dëser secretion ze vergläichen somatostatin.
Ufanksniveau Studien huet mat mächtegst Agenten standing direkt peptide secretion aus endocrine Zellen zu engem receptor-onofhängeg Manéier [26] bor Kris géinge verschlëmmeren (wéi enger PMA) direkt aktivéieren FAQ kinase C am zentrale Layer vun der Zell Membran aktivéieren bekannt fir; dëst am Tour activéiert der bewosst Prozesser fir exocytosis néideg. PMA war e mächtegst stimulant souwuel somatostatin an amylin secretion. D'Kalzium ionophore A23187, deen Niveau vun intracellular Kalzium ([Ca 2 +] i]) hëlt och amylin release stimuléiert, obwuel et vill manner mächtegst wéi PMA war. Dat ass ähnlech wéi d'Äntwerte vun der Mënschheet antral [26] an canine fundic D-Zellen gesinn [30] wou et ass d'Fëllement vun gleewen [Ca 2 +] i ass haaptsächlech facilitative amplaz direkt secretion stimuléiert. Direkt Aktivéierung vun adenylate mat forskolin cyclase och stimuléiert amylin release. Dofir den initial Etuden bewisen, dass amylin release vun Aktivéierung vun entweder vun den zwee Haaptgrënn intracellular sécher Weeër bekannt stimuléiert ginn hätt peptide secretion ze verbesseren. Nodeems sech datt dës Weeër aktiv waren, lant mer déi Fro gestallt Agenten amylin secretion zu engem receptor-ofhängeg Manéier stimuléieren konnt. VerfÜgung Cholecystokinin-8 enger Portioun-ofhängeg Erhéijung vun amylin an somatostatin secretion produzéiert. CCK ass bekannt engem mächtegst kënschtlech VerfÜgung stimulant vun somatostatin Fräiloosse vu antral an fundic D-Zellen ze ginn [26, 30, 34]. Eng ähnlech Portioun Äntwert war fir amylin gesinn, obwuel de globale increment minimal méi grouss fir somatostatin wéi amylin war. Weider Studie wäert waren ze bestëmmen, ob dat eng separat Pool vu somatostatin duerstellt speziell folgenden Stimulatioun mat CCK secreted. Fundic D-Zellen schéngen ausdrécklech souwuel d'CCK-1 (CCK A) an CCK-2 (gastrin /CCK B) kenne [35]. Aktivatioun vun deene kenne kontrolléiert an der Aktivatioun vun phospholipase C, release vun diacylglerol an inositol 1,4,5-trisphosphate a Kierzunge Héicht vun [Ca 2 +] i an Aktivéierung vun PKC, flénke peptide release [36 ]. Des Resultater sinn konsequent mat de Resultater fir A23187 an PMA Stimulatioun. Dofir schéngt et, datt CCK als gestallt stimulant vun amylin release Akt kann. VerfÜgung Epinephrine an GLP-1 produzéiert kleng Dosis-ofhängeg Erhéijunge amylin an somatostatin secretion. Dësen Effekt kéint mat der phosphodiesterase inhibitor IBMX, déi Decompte Camp vum Co-Behandlung gestäerkt ginn bremst a verstäerkt duerch adenylate cyclase Koppel kenne generéiert Äntwerte. Allerdéngs goufen d'Äntwerte nach vill manner, dass déi mat Aktivatioun vun der Ca gesin 2 + /PKC Passerelle vun entweder CCK oder PMA. Ähnlech Differenzen an der Sensibilitéite vun de Mënscherechter antral [26] an canine fundic [30] D-Zellen. VerfÜgung D'predominant inhibitory Afloss beschriwwen also wäit iwwert fundic D-Zellen sinn muscarinic agonists [37, 38] an autoregulation goufen beschriwwen somatostatin selwer [39, 40]. D'Äntwerte hei gemellt gi mat den Daten op somatostatin Fräiloosse vu canine fundic D-Zellen an hält [30, 37]. Am Géigesaz, sinn muscarinic kenne stimulatory zu antral D-Zellen [41], wahrscheinlech engem spezifeschen Ënnerscheed zu Funktioun bidden. Déi aktuell Etude confirméiert inhibitory Aktiounen vun béid der somatostatin-analog octreotide an muscarinic agonist carbachol géint somatostatin release. Eng ähnlech inhibition vun stimuléiert amylin release huet gesinn. Dëst deit drophin, datt zu VIVO VerfÜgung inhibition vun amylin release parasympathetic Input an autocrine Regulatioun vun somatostatin bënnt. VerfÜgung Ënnert all Konditiounen studéiert somatostatin an amylin waren an parallel secreted, wéi erwaart ginn wann se zu secretory granules Co-gespäichert sinn. Insulin an amylin sinn Co-secreted aus pancreatic β-Zellen, secretion existeiert normalerweis an parallel [42-44] mee Ënnerscheed secretion huet an Experimenter Modeller vun Zockerkrank [45, 46] gemellt ginn. Weider Studie wäert waren ze wäit der Relatioun tëscht der secretion an Aktiounen vun gastric amylin an somatostatin definéieren. An eenzele pancreatic Schëff schéngen déi zwee peptides zu Regulatioun peptide secretion engem Co-grënnen Roll ze hunn: kombinéiert imunoneutralisation vun amylin an somatostatin schéinen grouss Opléisung vun Insulin an Glukagon secretion wéi neutralization vun lwwerzegong eleng [10]. Et wäert interessant ginn ze iwwerpréifen, ob ähnleche Resultater mat gastric Funktiounen gesi sinn. VerfÜgung Post-prandial release vun intestinal CCK an GLP-1 inhibit gastric emptying an Seier secretion [13, 47]. Dës Effekter sinn wann op d'mannst zu engem Deel via intermediates vun der D-Zell Verëffentlechung meditated gin anstatt déi direkt de Seier-secreting parietal Zell inhibiting [48]. Et gouf gegleeft, datt somatostatin den eenzege Tëscherapport war awer d'Resultater vun der aktueller Etude weist dass paracrine Regulatioun vun amylin vun parietal, ECL- an aner endocrine Zellen kann eng Roll an der integrative Äntwerte Iessen hunn. D'amylin-entschlof inhibition vun histamine aus Grenzwäerter fundic mucosal Segmenter kënschtlech Verëffentlechung VerfÜgung war via fräi somatostatin release mediated [19] awer eng selektiv somatostatin receptor neien Rossowski et al VerfÜgung zougedréckt a VIVO VerfÜgung an deër andeems datt e Deel vun der Seier-inhibitory Aktiounen vun béid amylin an den entspriechende Logbicher adrenomedullin peptide sech somatostatin-onofhängeg [49]. Déi spezifesch Rollen vun amylin zu gastric Physiologie Chinesen weider Opkläerungsaarbecht mä dës Donnéeën hindeit, datt lokalen Verëffentlechung amylin vu Regulatioun mucosal Funktiounen direkt kapabel ass. VerfÜgung d'Äntwerte epinephrine an carbachol hindeit datt autonomic innervation der secretion vun amylin regléieren kann. Déi gesamt Gläichgewiicht an VIVO VerfÜgung géif dann op der famill Input vun der inhibitory muscarinic an stimulatory adrenergic Systemer hänken, kombinéiert mat endocrine a lokal paracrine libre an eventuell luminal Facteuren. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Dës Etude beschreift den initial characterization vun de Facteuren Regulatioun gastric amylin release. Mir bewisen hunn, dass amylin Fräisetzung kënnen duerch receptor-ofhängeg Stimulatioun vun entweder vun der Ca 2 + /PKC an adenylate cyclase /Camp Weeër an déi physiologically relevant peptides a Mä mediators kann amylin release stimuléiert ginn verbesseren. Dëst ënnerstëtzt d'Hypothes, datt gastric mucosal Funktioun kann Modul amylin. Dës Etude dé kuerzfristeg Kulturen vu duerch elutriation beräichert Zellen e Modell gëtt de pathophysiological release vun gastric amylin an déi e Wee vun weider Versteesdemech der Roll vun amylin zu Regulatioun vun gastric Motorik an secretory Funktioun. VerfÜgung Methode fir lassleeën
spontan VerfÜgung Matrigel war vun Universal Biologicals (London, UK), octreotide aus Novartis (Surrey, UK) an Ham d'F12 /Dulbecco d'geännert Eagle d'Kultur mëttelfristeg kritt (50:50, v: v), glutamine, Hanks equilibréiert Salz Léisung an an et Kallef serum sech aus Gibco (Paisley, UK) kaaft. Sulphated cholecystokinin-8 (CCK), Mënsch GLP-1 an all aner reagents sech aus Fläch kritt (Poole, UK). VerfÜgung Zell Isolatioun a Kultur VerfÜgung primär Kulturen vun Kanéngchen gastric fundic mucosal fir D-Zellen beräichert Zellen sech kritt wéi virdrun beschriwwen [39, 48]. Kuerz, war fundic mucosa Kanéngchen zu mi héich an collagenase unzereegen ënnerworf. Déi doraus resultéierend Zell Ophiewe war fir D-Zellen vun counterflow elutatriation beräichert engem Beckman JE 5.0 Standard Rotor benotzt wéi virdru beschriwwen. Den D-Zell beräichert Ëmwandlung war an komplett Kultur mëttelfristeg (Ham d'F12 /Dulbecco d'geännert Eagle d'Kultur mëttelfristeg resuspended (50:50, v: v), mat 2 mm glutamine, 10 mm HEPES pH 7.4, 0,22% NaHCO 3, 10% an et Kallef serum, 1 mg /l hydrocortisone, 8 mg /l Insulin, 100 mg /l penicillin, 100 mg /l gentamicin, 100 mg /l streptomycin) an cultured op Matrigel-Beschichtete 24 gutt Otemschwieregkeeten Kultur Placke [50] op eng Dicht vun 1 × 10 6 Zellen /gutt fir 40 Stonnen an eng Atmosphär vu 5% CO 2, 95% Loft bei 37 ° C. VerfÜgung Ënnersich VerfÜgung Cultured Zellen Netflix sech gewäsch 3 Mol am release mëttelfristeg (Earl d'equilibréiert Salz Léisung 0,1% Bovine serum albumin, 10 mm HEPES pH 7.4 wouvun) doud an net-Operstéiungszeen Zellen ze läschen. Eng weider 1 ml vun release mëttelfristeg war mat Test agonists an Zellen fir 2 Stonnen op 37 ° C an eng Atmosphär vu 5% CO 2, 95% Loft incubated notéiert. No der Verëffentlechung Period, war d'bedingt Medien aspirated an ze protégéieren Net-Operstéiungszeen Zellen centrifuged. Total bewosst Inhalt vun peptide war vun kachen an 1 ml zu destilléiert Waasser ofgebaut. Bedingt Medien a Zell dovu ware bei -70 ° C gespäichert bis fir peptide Inhalt assayed [30]. VerfÜgung Peptide Miessung VerfÜgung Somatostatin Konzentratioune sech duerch radioimmunoassay (Neiwahlen) mat antiserum K2 évaluéieren, wéi virdrun [39] beschriwwen. Halschent-Bäschten inhibition vun bindend Priedegt 2 fmol /Rouer an der Zollformalitéiten-assay an inter-assay Variant huet 7% an 8% Prozent bzw.. Amylin Konzentratioune goufen duerch direkt Elisa (Penninsula Laboratoiren, Belmont, CA, USA) gemooss ginn, laut der Producteure kritt. D'assay huet eng Rei vun 0.04-2 Dummeldéng /ml, an Zollformalitéiten-assay an inter-assay Variant vu &Si besteet; 5% an &Si besteet; 14% ofginn. D'antibody benotzt huet 100% Kräiz ofbaubar mat amylin an amylin-amide mee &Si besteet; 1% Kräiz ofbaubar mat CGRP an negligible Reaktioun mat anere biologically aktiv peptides. All experimentell Echantillon vun engem eenheetlechen Déier Virbereedung sech an der selwechter Neiwahlen oder Elisa assayed. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung Peptide release während der 2-Stonn Period war wéi de Prozentsaz vun den insgesamt Zell Inhalt (tcc) vu dass peptide ausgedréckt. All experimentell Zoustand war am zweete a Resultater vun enger eenzeger Déier Virbereedung getest goufen als N = 1 Resultater wéi déi heeschen ± Sem vun 3-6 trennen Déier Preparatiounen ausgedréckt ginn. All 24 gutt zappen abegraff ëmmer Kontroll (basal) Wells a positiv stimulants. Peptide release vun stimulants war am Verglach zu der basal release op der relevant 24 gutt zappen. One-Manéier Analyse vun Varianz an Student d'vläit T-Test huet benotzt Bedeitung ze bestëmmen. A P VerfÜgung Wäert vu &Si besteet; 0,05 war als groussen Deel zur VerfÜgung Lëscht vun den Ofkierzungen VerfÜgung CCK:. VerfÜgung cholecystokinin
ECL-: VerfÜgung enterochromaffin-wëll VerfÜgung
zu GLP-1: VerfÜgung Glukagon-wëll peptide-1
IAPP: VerfÜgung islet amylioid polypeptide
IBMX: VerfÜgung isobutylmethylxanthine
PKC: VerfÜgung FAQ kinase C
PMA: VerfÜgung bor-12-myristate -13-acetate, tcc, total Zell Inhalt.
Deklaratioune VerfÜgung Arbeschterlidder VerfÜgung Dës Aarbecht am Kader vun ILPB vun engem Medical Fuerschungen Training Gemeinschaft ënnerstëtzt gouf. Verschiddener vun der VerfÜgung Date goufen "zur VerfÜgung hei sinn d'Auteuren d'Linken original deposéiert Fichieren fir Biller" proposéiert original Dateien fir Biller an mythologesch Form op der United Europäescher Gastroenterology Week zu Birmingham 1997 VerfÜgung Auteuren presentéiert. 12899_2003_47_MOESM1_ESM.jpeg Auteuren 'original Datei fir Figur 1 12899_2003_47_MOESM2_ESM.jpeg Auteuren' original Datei fir Figur 2 12899_2003_47_MOESM3_ESM.jpeg Auteuren 'original Datei fir Figur 3 12899_2003_47_MOESM4_ESM.jpeg Auteuren' original Datei fir Figur 4 original Datei '12899_2003_47_MOESM5_ESM.jpeg Auteuren fir Figur 5 12899_2003_47_MOESM6_ESM.jpeg Auteuren 'original Datei fir Figur 6 Auteuren' Contributiounen VerfÜgung ILPB empfaang an der Etude entworf, standing der Zell Isolatioun, Kultur, release Experimenter, immunoassays a geschriwwen Projet an final Versioune vun der mëttelalterlech Handschrëft. De spéiden JC empfaang der Etude a Co-geschriwwen d'éischt eng mëttelalterlech Handschrëft Projet. VerfÜgung

• Risiko Facteure fir Déift vu einfach an de fréie gastric carcinoma ënnerscheet depriméiert: eng virleefeg analysis
• Ënnerscheed Gentherapie Ausdrock vun der murine gastric fundus interstitial Zellen vun Cajal subtil