Regolazione del rilascio Amylin da coltura coniglio gastrica cellule della mucosa fundica

Regolazione del rilascio Amylin da coltura coniglio gastrica cellule della mucosa fundica
Abstract
sfondo
Amylin (isolotto amiloide polipeptide) è un ormone con ruoli suggerite nella regolazione dell'omeostasi del glucosio, il motore gastrica e funzione secretoria e gastroprotezione. Nel amylin mucosa gastrica è trovato co-localizzato con somatostatina in D-cellule. I fattori che regolano il rilascio Amylin gastrica sono sconosciuti. In questo studio abbiamo studiato la regolazione del rilascio di Amylin da cellule della mucosa gastrica in coltura primaria. Coniglio fundica cellule della mucosa arricchito da D-cellule controcorrente elutriation sono state coltivate per 40 ore. Amylin e la somatostatina rilascio oltre 2 ore in risposta ad agonisti sono stati valutati.
Risultati
rilascio Amylin era significativamente migliorata per l'attivazione della proteina chinasi C con forbolo-12-miristato-13-acetato, ciclasi con forskolin ed elevazione calcio intracellulare con A23187. Colecistochinina (CCK), epinefrina e glucagone-simile peptide-1 (GLP-1) ogni stimolato rilascio Amylin in modo dose-dipendente. Massima rilascio CCK-stimolata era maggiore o epinefrina o GLP-1, anche quando gli effetti di questi ultimi due sono stati arricchiti da isobutylmethylxanthine. rilascio amylin stimolato era significativamente inibita dal carbacolo (dal 51-59%) e octreotide (dal 33-42%). rilascio somatostatina parallelo quello di Amylin.
Conclusioni
Il modello D-cell colta fornisce un mezzo per studiare rilascio Amylin. Amylin secrezione è stimolata da recettore-dipendente e l'attivazione -indipendente di Ca 2 + /proteina chinasi C e adenilato ciclasi percorsi. L'inibizione comporta l'attivazione dei recettori muscarinici e auto-regolamentazione da parte della somatostatina.
Sfondo
Amylin (isolotto amiloide polipeptide) è un peptide di 37-amino prevalentemente espresso nelle isole pancreatiche di Langerhans [1, 2]. Amylin ha anche localizzato attraverso il tratto gastrointestinale [3] e nel cervello [4]. Molti lavori recenti si è concentrata sulla fisiologia del amylin pancreas; il peptide sembra essere co-conservati e co-secreta con insulina in cellule B pancreatiche [5, 6], una parte minore è co-localizzato con la somatostatina in D-cellule pancreatiche [7].
Amylin si crede funzione di omeostasi del glucosio ormone regolazione. Amylin inibisce la sintesi del glicogeno basale e insulino-stimolato nel ratto muscoli scheletrici [8, 9]; inibisce l'insulina, somatostatina e la secrezione di glucagone dalle isole pancreatiche isolate e intatti pancreas perfuso e riduce glucagone post-prandiale e la secrezione di insulina [10-12]. Amylin può anche contribuire al controllo glicemico rallentando lo svuotamento gastrico [13]. Esso Oltre a questi ruoli fisiologici, amilina è creduto a svolgere ruolo importante nella patogenesi del diabete mellito. E 'il componente principale dei depositi di amiloide nelle isole di pazienti con non-insulino dipendente diabete mellito [1, 2] e la carenza di Amylin può contribuire al fallimento del controllo glicemico tipico del diabete insulino-dipendente [14] e in studi su animali Amylin stesso sembra indurre insulino-resistenza [15].
Una varietà di effetti fisiologici sul tratto gastrointestinale sono stati anche descritti. La somministrazione parenterale di amylin ha un effetto anorectant [13], oltre a ridurre significativamente svuotamento gastrico [16]. Un'azione protettivo contro reserpine-, e la serotonina indotta gastropatia è stato descritto [17]. amylin endovenoso è un potente inibitore del basale, pentagastrina e 2-deossi-D-glucosio stimolata la secrezione acida gastrica nel ratto [18] e amylin ridotta secrezione acida nella preparazione del mouse stomaco isolato [19]. Un effetto stimolante sulla gastrina sierica è stata anche riportata, anche se questo può essere secondaria alla inibizione della secrezione acida [20]. In linea con queste azioni sono stati rilevati Amylin-siti di legame nel ratto della mucosa gastrica fundica [21]. All'interno del tratto gastrointestinale amylin sembra di co-localizzare con altri peptidi gastrointestinali. Usando in situ ibridazione
, immunofluorescenza e immunocitochimica, Mulder et al
dimostrato che amylin prevalentemente co-localizzato con la somatostatina nelle cellule D di ratto e nel topo e nel ratto antrale mucosa mucosa fundica [22]. Una minoranza di Amylin co-localizzato alle popolazioni distinte di cellule gastrina contenenti in antro e le cellule PYY contenenti nel fondo. Studi in PDX-1 topi deficienti (che non riescono a sviluppare G-cellule) hanno dimostrato alcuna alterazione nell'espressione Amylin gastrica, confermando espressione predominante di Amylin all'interno di D-cells [23]. Questi dati mostrano la presenza di recettori Amylin e Amylin, accoppiata con gli effetti farmacologici, suggerito che amylin potrebbe avere un paracrino e /o endocrine ruolo regolatore e fisiopatologico nella mucosa gastrica. Tuttavia non ci sono studi che esplorano i processi coinvolti nella secrezione gastrica Amylin. Tali dati sono un prerequisito per una maggiore comprensione della fisiologia gastrica Amylin. colture primarie di cellule endocrine gastriche e intestinali sono stati utilizzati per esaminare il controllo fisiologico e fisiopatologico di diversi peptidi gastrointestinali, tra cui la gastrina, somatostatina, glucagone-like peptide-1 (GLP-1) e colecistochinina (CCK) [24-30]. La co-localizzazione di Amylin con la somatostatina rende la preparazione D-cell fundica gastrica un modello utile per esaminare il controllo della secrezione Amylin a livello cellulare.
In questo studio abbiamo esaminato recettore-dipendente e recettore-indipendenti regolamentazione di Amylin secrezione gastrica colta coniglio cellule della mucosa fundica. Colecistochinina, glucagone-like peptide-1 e adrenalina stimolata rilascio Amylin in modo dose-dipendente e l'agonista del recettore muscarinico carbachol e dei recettori della somatostatina agonista octreotide ha inibito il rilascio Amylin. La somatostatina ed il rilascio Amylin si sono verificati in parallelo.
Risultati
stimolazione del recettore-indipendente rilascio peptide
Valutare inizialmente se il rilascio Amylin potrebbe essere rilevato dalle colture di cellule fundica di coniglio, sono stati utilizzati potenti stimoli dei recettori-indipendenti [ ,,,0],26] il contenuto totale di cellule (TCC) dell'amilina nella preparazione delle cellule in coltura (801 ± 151 fmol /pozzetto) è stato di circa 4 a 5 volte inferiore a quella della somatostatina (3 768 ± 1325 fmol /pozzetto). stimolazione significativa del rilascio Amylin si è verificato con il forbolo estere attivo (forbolo-12-miristato-13-acetato, PMA) che attiva la proteina chinasi C (PKC), attivazione della ciclasi con forskolin e l'elevazione del calcio intracellulare con lo ionoforo A23187 (Figura 1). L'estere forbolo era il più potente stimolante, portando a 8,5 volte aumento del rilascio Amylin (basale rilasciare 2,14 ± 0,8% in aumento di 18,5 ± 1,4% del TCC). Forskolin aumento del rilascio 3.3 volte (rilascio massima 7,2 ± 1,4% del TCC) e A23187 di 1,8 volte (3,8 ± 0,5% TCC), questi erano decisamente meno potente di PMA. Non ci sono state differenze significative tra i modelli di somatostatina e Amylin di sblocco (Fig. 1). Figura 1 stimolazione del recettore-indipendente da Amylin (in alto) e la somatostatina (in basso) da D-cellule in coltura. Le cellule sono state stimolate con forbolo-12-miristato-13-acetato di 100 nM (PMA), forskolina 10 mM (FSK) e A23187 1 pM per 2 ore. Risultati espressi in% del contenuto della cella di peptide rilasciato, media ± SEM, ** P
< 0,01 rispetto al controllo, * P
< 0,05 rispetto al controllo.
Stimolazione del recettore-dipendente
Studi precedenti hanno dimostrato che la CCK è un potente stimolante del rilascio di somatostatina [26]. Ciò è stato confermato qui. CCK dose-dipendente stimolato rilascio amylin dalle cellule in coltura (Figura 2). stimolazione massima, un aumento di 2,75 volte, 2,1 ± 0,7% rilascio basale è aumentata al 5,9 ± 0,8% TCC, si è verificato con CCK 10 nM. Un simile modello dose-risposta è stata osservata per il rilascio somatostatina CCK-stimolata sebbene rilascio massimo era relativamente elevato per la somatostatina (4,4 volte, 1,1 ± 0,1% a 5,2 ± 0,7% TCC) rispetto amylin (Figura 2). Figura 2 amylin CCK-stimolata (in alto) e rilasciare somatostatina (inferiore) da D-cellule coltivate. cellule della mucosa coltivate sono state stimolate con CCK per 2 ore. Risultati espressi in% del contenuto della cella di peptide rilasciato, media ± SEM, * P
< 0,05 rispetto al controllo.
Attivazione dei recettori accoppiati ciclasi-ciclasi sia con epinefrina o di glucagone-like peptide-1 ha portato ad una dose-dipendente piccolo aumento sia della somatostatina (aumento massimo 1,44 e 1,35 volte, rispettivamente) e il rilascio Amylin (1.36 e 1,25 e raggruppare rispettivamente) (figure 3 e 4). Figura 3 Effetto di adrenalina su Amylin (in alto) e il rilascio della somatostatina (in basso) da D-cellule in coltura. Le cellule sono state stimolate con concentrazioni crescenti di epinefrina (EPI) in presenza o assenza di isobutylmethylxanthine 100 pM (IBMX) per 2 ore. Risultati espressi in% del contenuto della cella di peptide rilasciato, media ± SEM, * P
< 0,05 rispetto al controllo.
Figura 4 Effetto del glucagone-like peptide-1 su Amylin (in alto) e il rilascio della somatostatina (in basso) da D-cellule in coltura. Le cellule sono state stimolate con concentrazioni crescenti di glucagone-like peptide-1 (GLP) in presenza o assenza di isobutylmethylxanthine 100 pM (IBMX) per 2 ore. Risultati espressi in% del contenuto della cella di peptide rilasciato, media ± SEM, * P
< 0,05 rispetto al controllo.
Le risposte a epinefrina e GLP-1 sono stati arricchisce di co-somministrazione con il isobutylmethylxanthine inibitore della fosfodiesterasi (IBMX) (100 micron). rilascio amylin basale era 2,0 ± 0,2% TCC e massima IBMX-aumento del rilascio 3,2 ± 0,2% TCC con adrenalina a 100 micron e 3,2 ± 0,3% TCC con GLP-1 a 10 nM. Basale rilascio della somatostatina (1,1 ± 0,1% TCC) è aumentato a 2,7 ± 0,1% TCC con epinefrina + IBMX e 2,1 ± 0,4% TCC con GLP-1 + IBMX. Questi erano ancora significativamente inferiore a rilascio CCK-stimolata. Non ci sono state differenze nel modello o il rapporto di somatostatina e Amylin risposte (figure 3 e 4).
Regolazione inibitorio di Amylin rilascio
Il trattamento con la somatostatina octreotide ha prodotto piccole ma non significative riduzioni sia Amylin basale ( del 14%) e la somatostatina basale (18%) secrezione (Figura 5). Carbachol aveva alcun effetto evidente su entrambi amylin basali o secrezione somatostatina (Figura 5). rilascio amylin CCK-stimolata era significativamente inibita dal octreotide (del 42%) e la carbacolo agonista muscarinico (del 51%). Allo stesso modo epinefrina (con IBMX) -stimulated rilascio Amylin è stata inibita del 33% entro il octreotide e il 59% da carbacolo (sia P
< 0,05). Come mostrato in figura 6, un modello simile è stato visto con rilascio somatostatina. Figura 5 Effetto di octreotide e carbachol su basale Amylin e la somatostatina liberazione dalla D-cellule in coltura. D-cellule sono state stimolate con o octreotide 10 nM (OCT) o carbachol 100 pM (CBH) per 2 ore e il rilascio di amylin e somatostatina valutato. I risultati espressi come% del contenuto della cella di peptide rilasciato, media ± SEM.
Figura 6 Effetti inibitori di octreotide e carbacolo su Amylin agonisti-stimolata (in alto) e il rilascio della somatostatina (in basso). D-cellule sono state stimolate con o CCK 10 nm o epinefrina con isobutylmethylxanthine entrambi i 100 micron (EPI) in combinazione con octreotide 10 nM (OCT) o carbachol 100 micron (CBH) per 2 ore. Risultati espressi in% del contenuto della cella di peptide rilasciato, media ± SEM, * P
< 0.05 vs relativo rilascio agonista-stimolata.
Discussione
Questo è il primo studio per esaminare il rilascio di amylin dalla mucosa gastrica a livello cellulare. I risultati hanno dimostrato che amylin non solo è stato immagazzinato in cellule della mucosa gastrica, ma anche che gli agonisti fisiologici putativi regolata rilascio del peptide. Studi precedenti hanno localizzato Amylin allo stomaco con Northern blotting [31, 32], immunocitochimica [33], radioimmunologico [3] e in situ ibridazione
[22], ma il rilascio di amylin gastrica non è stata dimostrata in precedenza.
la maggior parte dei gastrica Amylin fundica sembra essere localizzato con la somatostatina nel D-cells [22] Perciò abbiamo usato il modello di coniglio D-cell colta per indagare gli agenti che controllano il rilascio cellulare di Amylin e confrontare questo alla somatostatina secrezione.
studi iniziali sono stati eseguiti con agenti potenti noti per attivare direttamente la secrezione di peptide da cellule endocrine in maniera indipendente dal recettore [26] esteri del forbolo (tale PMA) attivare direttamente la proteina chinasi C nello strato interno della membrana cellulare; Questo a sua volta attiva i processi cellulari necessari per esocitosi. PMA è stato un potente stimolante sia di somatostatina e Amylin secrezione. Il ionoforo del calcio A23187, che aumenta i livelli di calcio intracellulare ([Ca 2 +] i]) anche stimolato rilascio Amylin, anche se era molto meno potente di PMA. Questo è simile alle risposte visto in antrale umana [26] e canini fundica D-cellule [30] in cui è credere l'aumento del [Ca 2 +] i è principalmente facilitativo piuttosto che stimolando direttamente la secrezione. attivazione diretta di ciclasi con forskolin anche stimolato rilascio Amylin. Pertanto gli studi iniziali hanno dimostrato che il rilascio amylin potrebbe essere stimolata dall'attivazione di una delle due principali vie di segnalazione intracellulare noti per aumentare la secrezione del peptide. Avendo deciso che queste vie erano attivi, abbiamo esplorato la quale gli agenti fisiologici potrebbero stimolare la secrezione di Amylin in maniera recettore-dipendente.
Colecistochinina-8 ha prodotto un aumento dose-dipendente della Amylin e somatostatina secrezione. CCK è noto per essere un potente in vitro
stimolante di rilascio somatostatina da celle D antrali e fundica [26, 30, 34]. Una risposta dose simile è stato osservato per Amylin, anche se l'incremento complessivo è stato leggermente superiore per la somatostatina di Amylin. saranno necessari ulteriori studi per determinare se questo rappresenta un pool separato di somatostatina specificamente secreto dopo stimolazione con CCK. Fundica D-cellule sembrano esprimere sia i (CCK A) e CCK-2 (gastrina /CCK B) recettori 1-CCK [35]. L'attivazione di questi recettori determinerà l'attivazione della fosfolipasi C, il rilascio di diacylglerol e inositolo 1,4,5-trifosfato e la conseguente elevazione del [Ca 2 +] ie attivazione della PKC, che porta al rilascio del peptide [36 ]. Questi risultati sono coerenti con i risultati per la stimolazione A23187 e PMA. Quindi sembra che CCK può agire come stimolante fisiologico del rilascio di Amylin.
Epinefrina e GLP-1 ha fornito piccoli aumenti dose-dipendente di Amylin e la secrezione di somatostatina. Questo effetto potrebbe essere rafforzata da co-trattamento con l'inibitore della fosfodiesterasi IBMX, che inibisce la ripartizione cAMP e amplifica le risposte generate da recettori accoppiati dell'adenilato ciclasi. Tuttavia le risposte sono state ancora significativamente meno che quelli osservati con l'attivazione del Ca 2 + percorso /PKC da una CCK o PMA. Differenze simili nelle sensibilità sono state descritte in antrale umana [26] e fundica canino [30] D-cellule.
Le influenze inibitorie predominanti descritti finora durante il D-cellule fundica sono agonisti muscarinici [37, 38] e autoregolazione da parte somatostatina stessa [39, 40]. Le risposte qui riportati sono in linea con i dati sul rilascio di somatostatina da D-cellule fundica canine [30, 37]. Al contrario, i recettori muscarinici sono stimolatori per antrali D-cellule [41], probabilmente riflette una differenza specifica nella funzione. L'attuale studio ha confermato le azioni inibitorie sia del octreotide somatostatina-analogico e muscarinici agonista carbachol contro il rilascio della somatostatina. Un simile inibizione del rilascio di Amylin stimolata è stato visto. Ciò suggerisce che in vivo
inibizione del rilascio di Amylin coinvolge ingresso parasimpatico e regolazione autocrina dalla somatostatina.
In tutte le condizioni studiate somatostatina e Amylin stati secreti in parallelo, come può essere previsto se sono co-memorizzati in granuli secretori. Insulina e Amylin vengono co-secreta dalle cellule beta pancreatiche, la secrezione di solito si verifica in parallelo [42-44], ma la secrezione differenziale è stata riportata in modelli sperimentali di diabete mellito [45, 46]. saranno necessari ulteriori studi per definire ulteriormente il rapporto tra la secrezione e le azioni di Amylin gastrica e la somatostatina. In isole pancreatiche isolate le due peptidi sembrano avere un ruolo cooperativo nella regolazione della secrezione del peptide: combinato imunoneutralisation di Amylin e somatostatina portato a una maggiore valorizzazione di insulina e glucagone la secrezione di neutralizzazione da solo [10]. Sarà interessante verificare se risultati simili sono visti con le funzioni gastriche.
Rilascio post-prandiale di CCK intestinale e GLP-1 inibizione svuotamento gastrico e la secrezione acida [13, 47]. Questi effetti sono però da meditare almeno in parte attraverso intermedi rilasciati dal D-cell piuttosto che inibendo direttamente la cellula parietale acido secernenti [48]. Si credeva che la somatostatina era il solo intermedio, ma i risultati di questo studio suggeriscono che la regolamentazione paracrina da Amylin di parietali, ECL- e di altre cellule endocrine può avere un ruolo nelle risposte integrative ai pasti. L'inibizione amylin indotta di istamina rilasciata dal ratto segmenti delle mucose fundica in vitro
era mediata attraverso aumento del rilascio della somatostatina [19], ma con un antagonista del recettore della somatostatina selettivo Rossowski et al
mostrato in vivo
in ratti che un porzione delle azioni acido inibitori sia amylin e la relativa adrenomedullin peptide erano somatostatina-indipendente [49]. I ruoli specifici di Amylin nella fisiologia gastrica richiedono ulteriori chiarimenti, ma questi dati suggeriscono che amylin rilasciato a livello locale è direttamente in grado di regolare le funzioni della mucosa.
Le risposte di adrenalina e carbachol suggeriscono che innervazione autonomica può regolare la secrezione di Amylin. Il saldo complessivo in vivo
sarebbero poi dipenderà dalla relativa all'ingresso dei sistemi adrenergici muscarinici e stimolatori inibitori, combinato con endocrino e paracrino locale e fattori possibilmente luminali circolanti.
Conclusione
Questo studio descrive la caratterizzazione iniziale di i fattori che regolano il rilascio Amylin gastrica. Abbiamo dimostrato che il rilascio amylin può essere stimolato dalla stimolazione del recettore-dipendente di una delle Ca 2 + /PKC e ciclasi /percorsi campo e che fisiologicamente rilevanti peptidi e mediatori neurali possono migliorare rilascio Amylin. Questo supporta l'ipotesi che amylin potrebbero modulo funzione della mucosa gastrica. Questo studio conferma che le culture a breve termine di cellule arricchite da elutriation forniranno un modello per esplorare il rilascio fisiopatologico di Amylin gastrica e fornire un percorso di comprendere ulteriormente il ruolo di Amylin nella regolazione del motore gastrica e funzione secretoria.
Metodi
Materiali
Matrigel è stato ottenuto da universale Biologicals (Londra, UK), octreotide da Novartis (Surrey, UK) e F12 di Ham /mezzo di coltura di Dulbecco modificato Eagle (50:50, v: v), glutammina, Hanks salina bilanciata soluzione e siero fetale di vitello sono stati acquistati da Gibco (Paisley, UK). Solfatate colecistochinina-8 (CCK), GLP-1 umano e tutti gli altri reagenti sono stati ottenuti da Sigma (Poole, UK). Isolamento
cellulare e cultura
Colture primarie di coniglio gastrica cellule della mucosa fundica arricchito da D-cellule erano ottenuto come precedentemente descritto [39, 48]. Brevemente, conigli mucosa fundica stato sottoposto a EDTA sequenziale e collagenasi digestione. La sospensione cellulare risultante è stata arricchita per D-cellule elutatriation controcorrente utilizzando un rotore standard Beckman JE 5,0 come precedentemente descritto. La frazione arricchita D-cellulare è stato risospeso in terreno di coltura completo (F12 di Ham modificato medio /Dulbecco Eagle cultura (50:50, v: v), contenente 2 mM glutammina, 10 mM HEPES pH 7,4, 0,22% NaHCO 3, 10% di vitello siero fetale, 1 mg /l idrocortisone, 8 mg /l di insulina, 100 mg /l di penicillina, 100 mg /l gentamicina, 100 mg /l di streptomicina) e coltivate su Matrigel rivestite 24 piastre di coltura tissutale e [50] con una densità di 1 × 10 6 cellule /pozzetto per 40 ore in atmosfera al 5% di CO 2, 95% aria a 37 ° C.
Rilasciare Studi
cellule in coltura sono stati lavati 3 volte in media di rilascio (soluzione salina bilanciata di Earl contenente 0,1% di albumina sierica bovina, 10 mM HEPES pH 7.4) per rimuovere le cellule morte e non aderenti. Un ulteriore 1 ml di terreno di rilascio è stato aggiunto contenente agonisti di prova e le cellule incubate per 2 ore a 37 ° C in atmosfera al 5% di CO 2, 95% di aria. Dopo il periodo di rilascio, i media condizionata è stato aspirato e centrifugato per rimuovere le cellule non aderenti. Totale contenuto cellulare di peptide è stato estratto mediante bollitura in 1 ml di acqua distillata. mezzi condizionata estratti cellulari sono stati conservati a -70 ° C fino a quando analizzati per i contenuti peptide [30]. misurazione
Peptide
concentrazioni della somatostatina è stata effettuata dal radioimmunologico (RIA) con antisiero K2, come descritto in precedenza [39]. l'inibizione di mezza massimo vincolante è verificato a 2 fmol /tubo e l'intra-saggio e la variazione inter-saggio erano rispettivamente il 7% e l'8% per cento. Le concentrazioni Amylin sono stati misurati con ELISA diretta (penisola Laboratories, Belmont, CA, USA), secondo le istruzioni del produttore. Il test ha una gamma di 0.04-2 ng /ml, e intra-saggio e la variazione inter-saggio di < 5% e < 14% rispettivamente. L'anticorpo utilizzato ha il 100% reattività crociata con Amylin e Amylin-ammide ma < 1% di reattività crociata con CGRP e la reazione trascurabile con altri peptidi biologicamente attivi. Tutti i campioni sperimentali da un singolo animale preparato sono stati dosati nella stessa RIA o ELISA Analisi statistica.
Rilascio Peptide durante il periodo di 2 ore è stata espressa come percentuale del contenuto totale di cellule (TCC) di detto peptide. Ogni condizione sperimentale è stato provato in duplicato e deriva da un unico preparato animali erano considerati N = 1. I risultati sono espressi come media ± SEM di 3-6 preparazioni animali separati. Ogni piatto ben 24 incluso sempre il controllo pozzi (basale) e stimolanti positivi. rilascio del peptide da stimolanti è stato confrontato con il rilascio basale alla relativa 24 pozzetti. analisi della varianza ad una via e paired t-test di Student sono stati utilizzati per determinare il significato. Un valore di p
di < 0.05 è stato considerato come significativo
Elenco delle abbreviazioni
CCK:
colecistochinina
ECL-:
enterocromaffini simile

GLP-1:
glucagone-like peptide-1
IAPP:
isolotto amylioid polipeptide
IBMX:
isobutylmethylxanthine
PKC:
proteina chinasi C
PMA:
forbolo-12-miristato -13-acetato, TCC, contenuto totale delle cellule.
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto in parte da una borsa di formazione Medical Research Council per ILPB.
Alcuni dei dati sono stati presentati in forma astratta in occasione della settimana United European Gastroenterology di Birmingham 1997.
autori fascicoli presentati originali per
di seguito sono riportati i link ai degli autori fascicoli presentati originali per immagini. 'file originale per la figura 1 12899_2003_47_MOESM2_ESM.jpeg Autori 12899_2003_47_MOESM1_ESM.jpeg autori file originale per la figura 2 12899_2003_47_MOESM3_ESM.jpeg Autori file originale per la figura 3 12899_2003_47_MOESM4_ESM.jpeg Autori file originale per il file originale figura 4 12899_2003_47_MOESM5_ESM.jpeg degli autori per la figura 5 'file originale per la figura 6 autori 12899_2003_47_MOESM6_ESM.jpeg Autori Contributi
ILPB ideato e progettato lo studio, effettuato l'isolamento delle cellule, la cultura, esperimenti di rilascio, saggi immunologici e scrisse progetto e le versioni finali del manoscritto. Il defunto JC concepito lo studio e co-scritto la prima stesura del manoscritto.

• Fattori di rischio per la profondità di infiltrazione nella differenziata depresso precoce carcinoma gastrico: una prima analisi
• l'espressione genica differenziale nel fondo gastrico murino privo di cellule interstiziali di espressione genica Cajal