Regulering av amylin frigjøring fra dyrkede kanin mage fundus slimhinneceller

Regulering av amylin frigjøring fra dyrkede kanin mage fundus slimhinneceller
Abstract
Bakgrunn
Amylin (holme amyloid polypeptid) er et hormon med foreslåtte roller i regulering av glukose homeostase, mage motor og sekretorisk funksjon og gastroprotection. I mageslimhinnen amylin er funnet samlokalisert med somatostatin i D-celler. Faktorene som regulerer mage amylin utgivelsen er ukjent. I denne studien har vi undersøkt regulering av amylin frigjøring fra mage slimhinneceller i primærkultur. Kanin fundisk mukosaceller anriket for D-celler ved motstrøms oppslemming ble dyrket i 40 timer. Amylin og somatostatin frigivelse i løpet av 2 timer i respons til agonister ble vurdert.
Resultater
amylin frigivelse ble betydelig forbedret ved aktivering av proteinkinase C med forbol-12-myristat-13-acetat, adenylatcyklase med forskolin og heving av intracellulær kalsium med A23187. Cholecystokinin (CCK), adrenalin og glukagon-lignende peptid-1 (GLP-1) hver stimulert frigivelse amylin på en doseavhengig måte. Maksimal CCK-stimulert frigivelse var større enn enten adrenalin eller GLP-1, selv når effekten av de to sistnevnte ble forsterket av isobutylmethylxanthine. Stimulert amylin utgivelsen ble betydelig hemmet av karbakol (ved 51-59%) og oktreotid (ved 33-42%). Somatostatin utgivelsen parallelt at av amylin.
Konklusjoner
dyrket D-celle modellen gir et middel for å studere amylin utgivelse. Amylin sekresjon stimuleres av reseptor-avhengig og-uavhengig aktivering av Ca 2 + /protein-kinase C og adenylatcyklase veier. Hemming innebærer aktivering av muskarine reseptorer og auto-regulering av somatostatin.
Bakgrunn
Amylin (holme amyloid polypeptid) er en 37-aminosyre peptid hovedsakelig uttrykt i bukspyttkjertelen holmer av Langerhans [1, 2]. Amylin er også blitt lokalisert gjennom hele mage-tarm-kanalen [3] og i hjernen [4]. Mye nyere arbeid har fokusert på fysiologi av bukspyttkjertelen amylin; peptidet ser ut til å være co-lagret og co-utskilles med insulin i bukspyttkjertelen B-celler [5, 6], er en mindre andel samlokalisert med somatostatin i bukspyttkjertelen D-celler [7].
Amylin antas å funksjon som et hormon som regulerer glukosehomeostase. Amylin inhiberer basal og insulin-stimulert glykogensyntese i skjelettmuskulatur rotte [8, 9]; det hemmer insulin, somatostatin og glukagon sekresjon fra isolerte bukspyttkjertelen holmer og intakt dynket bukspyttkjertelen og det reduserer postprandial glukagon og insulin sekresjon [10-12]. Amylin kan også bidra til glykemisk kontroll ved å senke gastrisk tømming [13]. Det tillegg til disse fysiologiske roller, er amylin antas å spille betydelig rolle i patogenesen til diabetes mellitus. Det er hovedkomponenten av amyloide avleiringer i holmer av pasienter med ikke-insulinavhengig diabetes mellitus [1, 2] og mangel av amylin kan bidra til feil på glykemisk kontroll som er typisk for insulinavhengig diabetes [14] og i dyrestudier amylin selv synes å indusere insulinresistens [15]., En rekke fysiologiske virkninger på mave-tarmkanalen er også blitt beskrevet. Parenteral administrering av amylin har en anorectant effekt [13], i tillegg til å vesentlig redusere gastrisk tømming [16]. En protectant aksjon mot reserpine-, og serotonin-indusert gastropathy har blitt beskrevet [17]. Intravenøs amylin er en potent hemmer av basal, pentagastrin og 2-deoksy-D-glukose stimulert mavesyresekresjon hos rotter [18] og amylin redusert syresekresjon i isolerte mus magen fremstillingen [19]. En stimulerende effekt på serum gastrin har også blitt rapportert, selv om dette kan ha vært sekundært til hemming av syresekresjon [20]. I tråd med disse handlingene amylin-bindingsseter er påvist i rotte gastrisk mucosa fundus [21]. I mage-tarmkanalen amylin virker samtidig lokalisere med andre gastrointestinale peptider. Ved hjelp av in situ hybridisering
, immunfluorescens og immunocytokjemi, Mulder et al
viste at amylin overveiende samlokalisert med somatostatin i D-celler fra rotte og mus antral mucosa og rotte-fundus-mukosa [22]. Et mindretall av amylin samlokalisert til separate bestander av gastrin holdige celler i antrum og PYY holdige celler i fundus. Studier i PDX-en mangelfull mus (som ikke klarer å utvikle G-celler) viste ingen endring i mage amylin uttrykk, bekrefter dominerende uttrykk for amylin innenfor D-celler [23]. Disse dataene viser tilstedeværelse av amylin og amylin reseptorer, kombinert med de farmakologiske effekter, foreslått at amylin kan ha en parakrint og /eller endokrin regulatoriske og patofysiologisk rolle i mageslimhinnen. Men det finnes ingen studier som undersøker involvert i mage amylin sekresjon prosesser. Slike data er en forutsetning for videre forståelse av mage amylin fysiologi. Primære kulturer av mage-og tarm endokrine celler er blitt anvendt for å undersøke den fysiologiske og patofysiologiske kontroll av flere gastrointestinale peptider inkludert gastrin, somatostatin, glukagon-lignende peptid-1 (GLP-1) og cholecystokinin (CCK) [24-30]. Den ko-lokalisering av amylin med somatostatin gjør den gastriske fundus-D-cellepreparat en nyttig modell for å undersøke kontroll av amylin sekresjon på cellenivå.
I dette studiet har vi undersøkt reseptor-avhengig og reseptor-uavhengig regulering av amylin sekresjon fra kultivert kanin mage fundus slimhinneceller. Cholecystokinin, glukagon-lignende peptid-1 og adrenalin stimulert frigivelse amylin på en doseavhengig måte, og den muskariniske reseptor agonist carbachol og somatostatin-reseptoragonist oktreotid hemmet amylin frigivelse. Somatostatin og amylin utgivelse skjedd parallelt.
Resultater
Receptor uavhengig stimulering av peptidfrigjøring
Til å begynne vurdere om amylin utgivelsen kunne påvises fra kulturer av kanin fundic celler, ble potente reseptor-uavhengig stimuli brukes [ ,,,0],26] den totale celleinnhold (TCC) av amylin i den dyrkede cellepreparat (801 ± 151 fmol /brønn) var omtrent 4 til 5 ganger lavere enn den for somatostatin (3 768 ± 1325 fmol /brønn). Signifikant stimulering av amylin frigivelse forekom med den aktive forbolester (forbol-12-myristat-13-acetat, PMA) som aktiverer protein kinase C (PKC), aktivering av adenylatsyklase med forskolin og heving av intracellulært kalsium med ionoforen A23187 (figur 1). Den forbolester var den mest potente sentralstimulerende, fører til 8,5 ganger økning i amylin frigjøring (basal slipper 2,14 ± 0,8% øke til 18,5 ± 1,4% av TCC). Forskolin økt frigjøre 3,3 ganger (maksimal frigivelse 7,2 ± 1,4% av TCC) og A23187 med 1,8 ganger (3,8 ± 0,5% TCC), disse var merkbart mindre potent enn PMA. Det var ingen signifikante forskjeller mellom de mønstre av somatostatin og amylin frigjøring (Fig. 1). Figur 1 Receptor-uavhengig stimulering av amylin (øverst) og somatostatin (nederst) fra dyrkede D-celler. Celler ble stimulert med forbol-12-myristat-13-acetat 100 nM (PMA), forskolin 10 pM (FSK) og A23187 1 uM i 2 timer. Resultater uttrykt i% av celleinnholdet av peptid utgitt, gjennomsnitt ± SEM, ** P
< 0,01 vs. kontroll, * P
< 0,05 vs. kontroll.
Receptor avhengig stimulering
Tidligere studier har vist at CCK er en potent sentralstimulerende av somatostatin meldingen [26]. Dette ble bekreftet her. CCK doseavhengig stimulert frigivelse av amylin fra de dyrkede celler (figur 2). Maksimal stimulering, en 2,75 ganger økning, økte 2,1 ± 0,7% basal utslipp til 5,9 ± 0,8% TCC, skjedde med CCK 10 nM. En lignende dose-responsmønster ble observert for CCK-stimulert frigivelse somatostatin selv om maksimal frigivelse var forholdsvis høyere for somatostatin (4,4 ganger, 1,1 ± 0,1% til 5,2 ± 0,7% TCC) enn amylin (figur 2). Figur 2 CCK-stimulert amylin (øverst) og somatostatin (nederst) slipper fra dyrkede D-celler. Dyrkede slimhinne celler ble stimulert med CCK i 2 timer. Resultater uttrykt i% av celleinnholdet av peptid utgitt, gjennomsnitt ± SEM, * P
< 0,05 vs. kontroll.
Aktivering av adenylatcyklase-koblede reseptorer med enten adrenalin eller glukagon-lignende peptid-1 førte til en doseavhengig liten økning i både somatostatin (maksimal økning 1,44 og 1,35 ganger respektivt) og amylin frigivelse (1,36 og 1,25 og brett henholdsvis) (figur 3 og 4). Figur 3 Effekt av adrenalin på amylin (øverst) og somatostatin (nederst) slipper fra dyrkede D-celler. Celler ble stimulert med økende konsentrasjoner av epinefrin (EPI) i nærvær eller fravær av isobutylmethylxanthine 100 uM (IBMX) i 2 timer. Resultater uttrykt i% av celleinnholdet av peptid utgitt, gjennomsnitt ± SEM, * P
< 0,05 vs. kontroll.
Figur 4 Effekt av glukagon-lignende peptid-1 på amylin (øverst) og somatostatin (nederst) slipper fra dyrkede D-celler. Celler ble stimulert med økende konsentrasjoner av glukagon-lignende peptid-1 (GLP) i nærvær eller fravær av isobutylmethylxanthine 100 um (IBMX) i 2 timer. Resultater uttrykt i% av celleinnholdet av peptid utgitt, gjennomsnitt ± SEM, * P
< 0,05 vs. kontroll.
Svarene på adrenalin og GLP-1 ble forsterket ved samtidig behandling med fosfodiesterasehemmer isobutylmethylxanthine (IBMX) (100 mm). Basal amylin utgivelse var 2,0 ± 0,2% TCC og maksimal IBMX forbedret utgivelsen 3,2 ± 0,2% TCC med adrenalin på 100 mikrometer og 3,2 ± 0,3% TCC med GLP-1 ved 10 nM. Basal somatostatin frigjøring (1,1 ± 0,1% TCC) økte til 2,7 ± 0,1% TCC med adrenalin + IBMX og 2,1 ± 0,4% TCC med GLP-1 + IBMX. Dette var likevel betydelig mindre enn CCK-stimulert utgivelse. Det var ingen forskjeller i mønster eller forholdet av somatostatin og amylin responser (figurene 3 og 4).
Inhibitory regulering av amylin frigivelse
Behandling med somatostatinanalog oktreotid produsert små, men ikke-signifikant reduksjon i både basal amylin ( med 14%) og basal somatostatin (18%) sekresjon (figur 5). Karbakol hadde ingen tydelig effekt på enten basal amylin eller somatostatin sekresjon (figur 5). CCK-stimulert frigivelse amylin ble betydelig inhibert av oktreotid (med 42%) og muskarinagonisten karbakol (med 51%). Tilsvar adrenalin (med IBMX) stimulert amylin meldingen ble hemmet med 33% av oktreotid og 59% av karbakol (både P
< 0,05). Som vist i figur 6, ble et lignende mønster sett med somatostatin frigivelse. Figur 5 Effekt av oktreotid og karbakol på basal amylin og somatostatin frigjøring fra dyrkede D-celler. D-celler ble stimulert med enten 10 nM oktreotid (OCT) eller karbakol 100 um (CBH) i 2 timer og frigivelse av amylin og somatostatin vurdert. Resultatene uttrykkes som% av celleinnholdet av peptid frigjort, gjennomsnitt ± SEM.
Figur 6 Inhibitoriske effekter av oktreotid og karbakol på agonist-stimulert amylin (øverst) og somatostatin (nederst) frigivelse. D-celler ble stimulert med enten 10 nM CCK eller adrenalin med begge 100 isobutylmethylxanthine um (EPI), i kombinasjon med oktreotid 10 nM (OCT) eller karbakol 100 um (CBH) i 2 timer. Resultater uttrykt i% av celleinnholdet av peptid utgitt, gjennomsnitt ± SEM, * P
< 0,05 vs. relevant agonist stimulert utgivelse.
Diskusjon
Dette er den første studien som undersøker utgivelsen av amylin fra mageslimhinnen på cellenivå. Resultatene viste at amylin ikke bare var lagret i mageslimhinneceller, men også at det putative fysiologiske agonister regulert frigivelse av peptidet. Tidligere studier har lokalisert amylin til magen ved hjelp av Northern blotting [31, 32], immunocytochemistry [33], radioimmunoassay [3] og in situ
hybridisering [22], men utgivelsen av mage amylin har ikke blitt vist tidligere.
de fleste av mage fundus amylin ser ut til å være lokalisert med somatostatin innenfor D-celler [22] Derfor har vi brukt den kultiverte kanin D-celle modell for å undersøke agenter som kontrollerer celle frigivelse av amylin og å sammenligne dette til somatostatin sekresjon.
Innledende studier ble utført med potente midler som er kjent for å direkte aktivere peptid sekresjon fra endokrine celler i et reseptor-uavhengig måte [26] forbolestere (for eksempel en PMA) direkte aktiverer proteinkinase C i det indre lag av cellemembranen; dette i sin tur aktiverer de cellulære prosessene som kreves for eksocytose. PMA var en potent stimulerende både somatostatin og amylin sekresjon. Kalsium A23187, noe som øker nivået av intracellulært kalsium ([Ca 2 +] i]) også stimulert amylin utgivelse, selv om det var betydelig mindre potent enn PMA. Dette ligner på svarene sett i menneskelig antrum [26] og hunde fundic D-celler [30] hvor det er tror økningen i [Ca 2 +] i hovedsak facilitative stedet for direkte stimulerende sekresjon. Direkte aktivering av adenylatsyklase med forskolin også stimulert amylin utgivelse. Derfor er de innledende studier vist at amylin frigivelse kan bli stimulert ved aktivering av en av de to hoved intracellulære signalveier som er kjent for å øke peptid-sekresjon. Etter å ha fastslått at disse banene var aktive, utforsket vi som fysiologiske midler kunne stimulere sekresjon amylin i en reseptor-avhengig måte.
Cholecystokinin-8 produserte en doseavhengig økning i amylin og somatostatin sekresjon. CCK er kjent for å være en potent in vitro
stimulerende av somatostatin frigjøring fra antrum og fundus-D-celler [26, 30, 34]. En tilsvarende doserespons ble observert for amylin, selv om den generelle tilveksten var noe større enn for somatostatin amylin. Videre studier vil være nødvendig for å fastslå om dette representerer en egen pool av somatostatin spesifikt skilles etter stimulering med CCK. Fundic D-celler synes å uttrykke både CCK-en (CCK A) og CCK-2 (gastrin /CCK B) reseptorer [35]. Aktivering av disse reseptorene utløser aktivering av fosfolipase C, frigjøring av diacylglerol og inositol 1,4,5-trisphosphate og påfølgende heving av [Ca 2 +] i og aktivering av PKC, som fører til frigivelse peptidet [36 ]. Disse resultatene er i samsvar med resultatene for A23187 og PMA stimulering. Derfor ser det ut til at CCK kan fungere som en fysiologisk stimulerende av amylin utgivelsen.
Adrenalin og GLP-1 produsert doseavhengig økning små i amylin og somatostatin sekresjon. Denne effekten kan forsterkes ved samtidig behandling med en fosfodiesterase-inhibitor IBMX, som hemmer cAMP sammenbrudd og forsterker responser generert av adenylatsyklase koblete reseptorer. Men svarene var fortsatt betydelig mindre enn de som ble sett med aktivering av Ca 2 + /PKC sti ved enten CCK eller PMA. Tilsvarende forskjeller i sensitivitet, er beskrevet i human antral [26] og canine fundisk [30] D-celler.
De dominerende inhiberende påvirkninger som er beskrevet så langt på fundus-D-cellene er muskarine agonister [37, 38] og autoregulation etter somatostatin selv [39, 40]. Svarene som presenteres her er i tråd med dataene på somatostatin utgivelsen fra hjørnetann fundic D-celler [30, 37]. I motsetning til dette, muskarine reseptorer er stimulerende for å antrum D-celler [41], som sannsynligvis gjenspeiler en bestemt forskjell i funksjon. Den aktuelle studien bekreftet hemmende handlingene til både somatostatin-analog oktreotid og muskarin agonist karbakol mot somatostatin utgivelse. En tilsvarende inhibering av stimulert amylin frigivelse ble sett. Dette tyder på at in vivo
hemming av amylin utgivelsen innebærer parasympatiske innspill og autokrint regulering av somatostatin.
Under alle forhold studert somatostatin og amylin ble utskilt i parallell, som kan forventes hvis de er co-lagret i sekretoriske granulat. Insulin og amylin er co-utskilt fra pankreatiske p-celler, sekresjon forekommer normalt i parallell [42-44], men differensial sekresjon er blitt rapportert i eksperimentmodeller for diabetes mellitus [45, 46]. Videre studier vil være nødvendig for å definere forholdet mellom utskillelsen og handlingene til gastrisk amylin og somatostatin. I isolerte pankreatiske øyer de to peptidene ser ut til å ha en co-operative rolle i regulering av peptid sekresjon: kombineres imunoneutralisation av amylin og somatostatin resultert i større forbedring av insulin og glukagon sekresjon enn nøytralisering av enten alene [10]. Det vil være interessant å undersøke om lignende resultater er sett med mage funksjoner.
Postprandial utgivelsen av tarm CCK og GLP-1 hemmer ventrikkeltømming og magesyre [13, 47]. Disse effektene er skjønt skal meditated i det minste delvis via mellomprodukter frigjøres fra D-cellen heller enn ved direkte inhibering av syre-utskillende parietalcellen [48]. Det ble antatt at somatostatin var den eneste mellom men resultatene av denne studien tyder på at parakrint regulering av amylin av parietal, kan ECL- og andre endokrine celler har en rolle i integrerende svar på måltider. Den amylin-indusert hemming av histamin frigjøres fra rotte fundic slimhinne segmenter in vitro
ble formidlet via økt somatostatin meldingen [19], men ved hjelp av en selektiv somatostatin reseptor antagonist Rossowski et al
viste in vivo
i rotter som en del av de syre-hemmende virkninger av både amylin og relaterte peptid adrenomedullin ble somatostatin-uavhengig [49]. De spesifikke roller amylin i mage fysiologi krever ytterligere forklaring, men disse dataene tyder på at lokalt utgitt amylin er direkte stand til å regulere slimhinne funksjoner.
Svarene til adrenalin og karbakol foreslå at autonom innervasjon kan regulere utskillelsen av amylin. Den totale balansen in vivo
vil da avhenge av den relative input av de inhiberende muskarine og stimulerende adrenerge system, kombinert med sirkulerende endokrine og lokal parakrin og muligens luminal faktorer.
Konklusjon Dette studiet
beskriver den innledende karakterisering av faktorer som regulerer mage amylin utgivelsen. Vi har vist at amylin utgivelsen kan bli stimulert av reseptor-avhengig stimulering av ett av Ca 2 + /PKC og adenylatcyclase /cAMP stier og at fysiologisk relevante peptider og nevrale meglere kan forbedre amylin utgivelse. Dette støtter hypotesen om at amylin kan modul mage mucosal funksjon. Denne studien bekrefter at kortsiktige kulturer av celler beriket av oppslemming vil gi en modell for å utforske den patofysiologiske utgivelsen av mage amylin og gir en rute for ytterligere å forstå rollen av amylin i regulering av mage motor og sekretoriske funksjon.
Metoder
Material
Matrigel ble oppnådd fra Universal Biologicals (London, UK), oktreotid fra Novartis (Surrey, UK) og Hams F12 /Dulbeccos modifiserte Eagles kulturmedium (50:50, v: v), glutamin, Hanks balanserte salt løsning og føtalt kalveserum ble kjøpt fra Gibco (Paisley, UK). Sulfatert cholecystokinin-8 (CCK), humant GLP-1 og alle andre reagenser ble oppnådd fra Sigma (Poole, UK).
Celle isolasjon og kultur
Primære kulturer av kaninmave fundisk mukosaceller anriket for D-celler ble oppnådd som tidligere beskrevet [39, 48]. I korthet, ble kanin-mucosa fundus kastet sekvensiell EDTA og kollagenase fordøyelse. Den resulterende cellesuspensjon ble anriket for D-celler ved motstrøms elutatriation anvendelse av en Beckman JE 5.0 standard rotoren som tidligere beskrevet. D-celle-anriket fraksjon ble resuspendert i fullstendig dyrkningsmedium (Ham F12 /Dulbeccos modifiserte Eagles kulturmedium (50:50, v: v), inneholdende 2 mM glutamin, 10 mM HEPES pH 7.4, 0.22% NaHCO 3, 10% føtalt kalveserum, 1 mg /l hydrokortison, 8 mg /l insulin, 100 mg /l penicillin, 100 mg /l gentamicin, 100 mg /l streptomycin) og dyrket på Matrigel-belagte 24-brønners vevskulturplater [50] ved en tetthet på 1 x 10 6 celler /brønn i 40 timer i en atmosfære av 5% CO 2, 95% luft ved 37 ° C.
Slipp-studier
Dyrkede celler ble vasket tre ganger i frigjøringsmediet (Earl balanserte saltløsning inneholdende 0,1% bovint serumalbumin, 10 mM HEPES pH 7,4) for å fjerne døde og ikke-adherente celler. Ytterligere 1 ml av frigjøringsmediet ble tilsatt, inneholdende test-agonister og celler inkubert i 2 timer ved 37 ° C i en atmosfære av 5% CO 2, 95% luft. Etter at frigjøringsperioden, ble det kondisjonerte medium aspireres og sentrifugert for å fjerne ikke-adherente celler. Totalt cellulært innhold av peptidet ble ekstrahert ved koking i 1 ml i destillert vann. Kondisjonerte medier og celleekstrakter ble lagret ved -70 ° C inntil analyse for peptid innhold [30].
Peptide måling
somatostatin-konsentrasjoner ble bestemt ved radioimmunoassay (RIA) med antiserum K2, som tidligere beskrevet [39]. Halv-maksimal inhibering av binding ble observert ved to fmol /røret og den intra-assay og inter-assay variasjon var henholdsvis 7% og 8% prosent. Amylin-konsentrasjoner ble målt ved direkte ELISA (halvøy Laboratories, Belmont, CA, USA), ifølge forhandlerens instruksjoner. Analysen har en rekke 0.04-2 ng /ml, og intra-assay og inter-assay variasjonen av < 5% og mindre enn 14% hhv. Antistoffet som brukes har 100% kryssreaktivitet med amylin og amylin-amid men < 1% kryssreaktivitet med CGRP og ubetydelig reaksjon med andre biologisk aktive peptider. Alle eksperimentelle prøver fra et enkelt dyr preparat ble analysert på samme RIA eller ELISA.
Statistisk analyse
Peptide frigivelse i løpet av 2 timers periode ble uttrykt som prosentandel av det totale celleinnhold (TCC) i nevnte peptid. Hver eksperimentelle tilstand ble testet i duplikat, og resultater fra en enkelt dyr preparat ble betraktet som N = 1. Resultatene er uttrykt som gjennomsnitt ± SEM av 3-6 dyr separate preparater. Hver 24 brønners plate alltid inkludert kontroll (basal) brønner og positive stimulanser. Peptid frigivelse av stimulerende midler ble sammenlignet med basal frigjøring på den aktuelle 24-brønners plate. Én-veis analyse av varians og Student paret t-test ble anvendt for å bestemme signifikans. En P
verdi av < 0,05 ble ansett som vesentlig
Liste over forkortelser
CCK.
Cholecystokinin
ECL-:
Enterochromaffin lignende


GLP-1:
glukagon-lignende peptid-1
IAPP:
holme amylioid polypeptid
IBMX:
isobutylmethylxanthine
PKC:
protein kinase C
PMA:
phorbol-12-myristat -13-acetat, TCC, totalt innhold celle.
Erklæringer
Takk
Dette arbeidet ble støttet delvis av en Medical Research Council trening fellesskap for ILPB.
Noen av data ble presentert i abstrakt form ved United European Gastroenterology Week i Birmingham 1997.
forfatternes opprinnelige innsendte filer for Images Nedenfor er linkene til forfatternes originale innsendte filer for bilder. 12899_2003_47_MOESM1_ESM.jpeg Forfatteroriginalfilen for figur 1 12899_2003_47_MOESM2_ESM.jpeg Forfatteroriginalfilen for figur 2 12899_2003_47_MOESM3_ESM.jpeg Forfatteroriginalfilen for figur 3 12899_2003_47_MOESM4_ESM.jpeg Forfatteroriginalfilen for figur 4 12899_2003_47_MOESM5_ESM.jpeg Forfatteroriginalfilen for figur 5 12899_2003_47_MOESM6_ESM.jpeg Forfatteroriginalfilen for figur 6 Forfatternes Bidrag
ILPB unnfanget og designet studien, utført celleisolasjon, kultur, utslipp eksperimenter, immunologiske analyser og skrev utkastet og endelige versjoner av manuskriptet. Den avdøde JC unnfanget studien og co-skrev den første manuskript utkast.

• Risikofaktorer for dyp på infiltrasjon i den differensierte deprimert tidlig magekreft: en foreløpig analyse
• Differential genuttrykk i murine mage fundus mangler interstitielle celler av Cajal