Regulering af amylin frigivelse fra dyrkede kanin gastrisk fundiske slimhinde cells

Regulering af amylin frigivelse fra dyrkede kanin gastriske fundiske slimhindeceller
Abstrakt
Baggrund
Amylin (islet amyloid polypeptid) er et hormon med foreslåede roller i reguleringen af ​​glukose homeostase, gastrisk motor og sekretorisk funktion og gastrobeskyttelse. I maveslimhinden amylin findes co-lokaliseret med somatostatin i D-celler. De faktorer, der regulerer gastrisk frisætning af amylin er ukendte. I denne undersøgelse har vi undersøgt reguleringen af ​​amylin frigivelse fra maveslimhinden celler i primær kultur. Kanin fundiske slimhindeceller beriget med D-celler ved modstrøm elutriering blev dyrket i 40 timer. Amylin og somatostatinfrigivelse løbet af 2 timer som reaktion på agonister blev vurderet.
Resultater Salg amylin frigivelse blev signifikant forøget ved aktivering af proteinkinase C med phorbol-12-myristat-13-acetat, adenylatcyclase med forskolin og elevation af intracellulært calcium med A23187. Cholecystokinin (CCK), epinephrin og glucagonlignende peptid-1 (GLP-1) hver stimulerede frisætning af amylin på en dosis-afhængig måde. Maksimal CCK-stimuleret frigivelse var større end både epinephrin eller GLP-1, selv når virkningerne af de to sidstnævnte blev forstærket af isobutylmethylxanthin. Stimuleret amylin frigivelse blev signifikant inhiberet af carbachol (med 51-59%) og octreotid (med 33-42%). Somatostatin frigivelse parallel, at af amylin.
Konklusioner
dyrkede D-celle model giver et middel til at studere amylin frigivelse. Amylinudskillelse stimuleres af receptor-afhængige og -uafhængige aktivering af Ca 2 + /proteinkinase C og adenylatcyclase veje. Hæmning involverer aktivering af muskarine receptorer og auto-regulering ved somatostatin.
Baggrund
Amylin (islet amyloid polypeptid) er en 37-aminosyre peptid overvejende udtrykt i bugspytkirtlen Langerhanske øer [1, 2]. Amylin er også blevet lokaliseret i hele mave-tarmkanalen [3] og i hjernen [4]. Meget seneste arbejde har fokuseret på fysiologi af pancreas amylin; peptidet synes at være co-lagres og co-udskilles med insulin i bugspytkirtlen B-celler [5, 6], en mindre andel er co-lokaliseret med somatostatin i pancreas D-celler [7].
Amylin menes at funktion som et hormon regulering glucosehomeostase. Amylin inhiberer basal og insulinstimuleret glycogensyntese i rotte skeletmuskulatur [8, 9]; det hæmmer insulin, somatostatin og glucagonsekretion fra isolerede pancreas-øer og intakte perfunderet bugspytkirtel og det reducerer postprandial glucagon og insulin sekretion [10-12]. Amylin kan også bidrage til glykæmisk kontrol ved at bremse ventrikeltømning [13]. Det Foruden disse fysiologiske roller, er amylin menes at spille en betydelig rolle i patogenesen af ​​diabetes mellitus. Det er hovedkomponenten af ​​de amyloide aflejringer i øer fra patienter med ikke-insulinafhængig diabetes mellitus [1, 2] og mangel på amylin kan bidrage svigt af glykæmisk kontrol typisk for insulinafhængig diabetes [14] og i dyreforsøg amylin selv synes at inducere insulinresistens [15].
En række fysiologiske virkninger på mave-tarmkanalen er også blevet beskrevet. Parenteral indgivelse af amylin har en anorectant virkning [13], foruden betydelig reduktion mavetømning [16]. En protectant indsats mod reserpine-, og serotonin-induceret gastropati er blevet beskrevet [17]. Intravenøs amylin er en potent inhibitor af basal, pentagastrin og 2-deoxy-D-glucose stimulerede mavesyresekretion hos rotter [18] og amylin reduceret syresekretion i isolerede præparation muse maven [19]. En stimulerende virkning på serum gastrin er også blevet rapporteret, selv om dette kan have været sekundær til inhibering af syresekretion [20]. I overensstemmelse med disse aktioner er blevet opdaget amylin-bindingssteder hos rotter gastrisk fundiske slimhinde [21]. Inden mavetarmkanalen amylin synes at co-lokalisere med andre gastrointestinale peptider. Anvendelse af in situ hybridisering
, immunofluorescens og immuncytokemi, Mulder et al
viste, at amylin overvejende co-lokaliseret med somatostatin i D-celler fra rotter og mus antrale slimhinde og rotte fundiske slimhinde [22]. Et mindretal af amylin co-lokaliseret til separate populationer af gastrin-holdige celler i antrum og PYY-holdige celler i fundus. Undersøgelser i PDX-1 mangler mus (som ikke udvikle G-celler) viste ingen ændring i gastrisk amylin udtryk, hvilket bekræfter fremherskende udtryk for amylin inden D-celler [23]. Disse data, der viser tilstedeværelsen af ​​amylin og amylinreceptorer, kombineret med de farmakologiske virkninger, foreslog, at amylin kan have en parakrin og /eller endokrin regulerings- og patofysiologisk rolle i maveslimhinden. Men der er ingen undersøgelser udforsker involveret i gastrisk amylin sekretion processer. Sådanne data er en forudsætning for yderligere forståelse af gastrisk amylin fysiologi. Primære kulturer af gastriske og intestinale endokrine celler er blevet anvendt til at undersøge den fysiologiske og patofysiologiske kontrollere flere gastrointestinale peptider, herunder gastrin, somatostatin, glucagon-lignende peptid-1 (GLP-1) og cholecystokinin (CCK) [24-30]. Co-lokalisering af amylin med somatostatin gør det gastriske fundiske D-cellepræparat en nyttig model til at undersøge kontrollen med amylinudskillelse på celleniveau.
I denne undersøgelse har vi undersøgt receptor-afhængige og receptor-uafhængig regulering af amylin sekretion fra dyrkede kanin gastriske fundiske slimhindeceller. Cholecystokinin, glucagonlignende peptid-1 og epinephrin stimulerede frisætning af amylin på en dosisafhængig måde, og den muscariniske receptor-agonist carbachol og somatostatin-receptor-agonist octreotid inhiberede amylin frigivelse. Somatostatin og amylin udgivelse fandt sted parallelt.
Resultater
receptor-uafhængige stimulering af peptid release
Til indledningsvis vurdere, om amylin frigivelse kunne påvises fra kulturer af kanin fundiske celler blev potente receptor-uafhængige stimuli anvendt [ ,,,0],26] det totale indhold celle (TCC) af amylin i den dyrkede celle præparat (801 ± 151 fmol /brønd) var ca. 4 til 5 gange lavere end den af ​​somatostatin (3 768 ± 1325 fmol /brønd). Signifikant stimulering af amylin release forekom med den aktive phorbolester (phorbol-12-myristat-13-acetat, PMA), som aktiverer proteinkinase C (PKC), aktivering af adenylatcyclase med forskolin og elevation af intracellulært calcium med A23187 (figur 1). Phorbolesteren var den mest potente stimulerende middel, hvilket fører til 8,5 gange stigning i frisætning af amylin (basal frigivelse 2,14 ± 0,8% stigende til 18,5 ± 1,4% af TCC). Forskolin øget frigivelse 3.3 fold (maksimal frigivelse 7,2 ± 1,4% af TCC) og A23187 med 1,8 gange (3,8 ± 0,5% TCC), disse var markant mindre potent end PMA. Der var ingen signifikante forskelle mellem de mønstre af somatostatin og amylin frigivelse (fig. 1). Figur 1 Receptor-uafhængig stimulering af amylin (øverst) og somatostatin (nederst) fra dyrkede D-celler. Celler blev stimuleret med phorbol-12-myristat-13-acetat 100 nM (PMA), forskolin 10 uM (FSK) og A23187 1 uM i 2 timer. Resultater er udtrykt som% af celleindholdet af peptid frigivet, gennemsnit ± SEM, ** P
< 0,01 vs. kontrol, * P
< 0,05 over for kontrol.
Receptor-afhængig stimulering
Tidligere undersøgelser har vist, at CCK er en potent stimulerende af somatostatinfrigivelse [26]. Dette blev bekræftet her. CCK dosisafhængigt stimuleret frigivelse af amylin fra de dyrkede celler (figur 2). Maksimal stimulering, en stigning 2,75 gange, 2,1 ± 0,7% basal frigivelse steg til 5,9 ± 0,8% TCC, forekom med CCK 10 nM. Et lignende dosisrespons mønster sås for CCK-stimuleret somatostatinfrigivelse selvom maksimal frigivelse var relativt højere for somatostatin (4,4 fold, 1,1 ± 0,1% til 5,2 ± 0,7% TCC) end amylin (figur 2). Figur 2 CCK-stimuleret amylin (øverst) og somatostatin (nederst) frigivelse fra dyrkede D-celler. Dyrkede slimhindeceller blev stimuleret med CCK i 2 timer. Resultater er udtrykt som% af celleindholdet af peptid frigivet, gennemsnit ± SEM, * P
< 0,05 over for kontrol.
Aktivering af adenylatcyclase-koblede receptorer med enten epinephrin eller glucagon-lignende peptid-1 førte til en dosisafhængig lille stigning i både somatostatin (maksimal stigning 1,44 og 1,35 gange henholdsvis) og amylin frigivelse (1,36 og 1,25 og fold henholdsvis) (figur 3 og 4). Figur 3 Virkning af epinephrin på amylin (øverst) og somatostatin (nederst) frigivelse fra dyrkede D-celler. Celler blev stimuleret med stigende koncentrationer af epinephrin (EPI) i nærvær eller fravær af isobutylmethylxanthin 100 uM (IBMX) i 2 timer. Resultater er udtrykt som% af celleindholdet af peptid frigivet, gennemsnit ± SEM, * P
< 0,05 over for kontrol.
Figur 4 Virkning af glucagon-lignende peptid-1 på amylin (øverst) og somatostatin (nederst) frigivelse fra dyrkede D-celler. Celler blev stimuleret med stigende koncentrationer af glucagon-lignende peptid-1 (GLP) i nærvær eller fravær af isobutylmethylxanthin 100 um (IBMX) i 2 timer. Resultater er udtrykt som% af celleindholdet af peptid frigivet, gennemsnit ± SEM, * P
< 0,05 vs. kontrol.
Reaktionerne på adrenalin og GLP-1 blev styrket ved samtidig administration med phosphodiesteraseinhibitoren isobutylmethylxanthin (IBMX) (100 uM). Basal amylin udgivelse var 2,0 ± 0,2% TCC og maksimal IBMX forbedret release 3,2 ± 0,2% TCC med adrenalin på 100 uM og 3,2 ± 0,3% TCC med GLP-1 ved 10 nM. Basal somatostatin frigivelse (1,1 ± 0,1% TCC) steg til 2,7 ± 0,1% TCC med adrenalin + IBMX og 2,1 ± 0,4% TCC med GLP-1 + IBMX. Disse var stadig betydeligt mindre end CCK-stimuleret frigivelse. Der var ingen forskel i mønster eller forholdet mellem somatostatin og amylin reaktioner (figur 3 og 4).
Hæmmende regulering af amylin frigivelse
Behandling med somatostatin analog octreotid producerede små, men ikke-signifikant reduktion i både basal amylin ( med 14%) og basal somatostatin (med 18%) sekretion (figur 5). Carbachol havde ingen åbenlys virkning på hverken basal amylin eller somatostatin-sekretion (figur 5). CCK-stimuleret amylin frigivelse blev signifikant inhiberet af octreotid (med 42%) og den muscariniske agonist carbachol (med 51%). Tilsvarende adrenalin (med IBMX) stimuleret amylin frigivelse blev hæmmet med 33% af octreotid og 59% af carbachol (begge P
< 0,05). Som vist i figur 6, blev en lignende mønster ses med somatostatin frigivelse. Figur 5 Virkning af octreotid og carbachol på basal amylin og somatostatin-frigivelse fra dyrkede D-celler. D-celler blev stimuleret med enten octreotid 10 nM (OCT) eller carbachol 100 um (CBH) i 2 timer og frigivelse af amylin og somatostatin vurderet. Resultater udtrykkes som% af celleindholdet af peptid frigivet, gennemsnit ± SEM.
Figur 6 inhiberende virkninger octreotid og carbachol på agonist-stimuleret amylin (øverst) og somatostatin (nederst) frigivelse. D-celler blev stimuleret med enten CCK 10 nM eller epinephrin med isobutylmethylxanthin både 100 uM (EPI) i kombination med octreotid 10 nM (OCT) eller carbachol 100 um (CBH) i 2 timer. Resultater er udtrykt som% af celleindholdet af peptid frigivet, gennemsnit ± SEM, * P
< 0.05 vs. relevant agonist-stimuleret frigivelse.
Diskussion
Dette er den første undersøgelse for at undersøge frigivelsen af ​​amylin fra maveslimhinden på celleniveau. Resultaterne viste, at amylin ikke kun blev opbevaret i gastriske slimhindeceller, men også, at formodede fysiologiske agonister reguleret frigivelse af peptidet. Tidligere undersøgelser har lokaliseret amylin til maven ved hjælp af Northern blotting [31, 32], immuncytokemi [33], radioimmunoassay [3] og in situ
hybridisering [22], men udgivelsen af ​​gastrisk amylin er ikke vist tidligere.
de fleste af gastrisk fundiske amylin synes at være lokaliseret med somatostatin inden D-celler [22] Derfor har vi brugt den kultiverede kanin D-celle model til at undersøge agenter kontrollerer cellulære frigivelse af amylin og at sammenligne dette somatostatin sekretion.
Indledende undersøgelser blev udført med potente midler, der vides direkte at aktivere peptid udskillelse fra endokrine celler i en receptor-uafhængig måde [26] Phorbolestere (sådan PMA) direkte aktiverer proteinkinase C i det indre lag af cellemembranen; dette igen aktiverer de cellulære processer, der kræves for exocytose. PMA var en potent stimulerende af både somatostatin og amylin sekretion. Calcium ionofor A23187, hvilket øger niveauerne af intracellulært calcium ([Ca 2 +] i]) også stimuleret amylin frigivelse, selv om det var betydeligt mindre potent end PMA. Dette svarer til svarene set i human antral [26] og hunde fundiske D-celler [30], hvor det er tro stigningen i [Ca 2 +] i er hovedsagelig faciliterende snarere end direkte at stimulere sekretion. Direkte aktivering af adenylatcyclase med forskolin stimuleret også amylin frigivelse. demonstrerede de indledende undersøgelser derfor, at amylin frigivelse kunne stimuleres ved aktivering af en af ​​de to vigtigste intracellulære signalveje, der vides at forbedre peptid sekretion. Have fastslået, at disse veje var aktive, vi undersøgt som fysiologiske midler kan stimulere amylinudskillelse i en receptor-afhængig måde.
Cholecystokinin-8 producerede en dosisafhængig stigning i amylin og somatostatin-sekretion. CCK er kendt for at være en potent in vitro
stimulans af somatostatin-frigivelse fra antrale og fundiske D-celler [26, 30, 34]. En lignende dosisrespons blev set for amylin, selv om den samlede stigning var lidt større for somatostatin end amylin. Yderligere undersøgelser vil være nødvendige for at afgøre, om dette udgør en separat pulje af somatostatin specifikt udskilles efter stimulering med CCK. Fundiske D-celler synes at udtrykke både CCK-1 (CCK A) og CCK-2 (gastrin /CCK B) receptorer [35]. Aktivering af disse receptorer udløser aktivering af phospholipase C, frigivelse af diacylglerol og inositol 1,4,5-triphosphat og efterfølgende forhøjelse af [Ca 2 +] i og aktivering af PKC, fører til peptidfrigivelse [36 ]. Disse resultater er konsistente med resultaterne for A23187 og PMA-stimulering. Det fremgår således, at CCK kan virke som en fysiologisk stimulans af amylin frigivelse.
Adrenalin og GLP-1 producerede små dosisafhængige stigninger i amylin og somatostatin sekretion. Denne virkning kan forbedres ved co-behandling med phosphodiesteraseinhibitoren IBMX, som hæmmer cAMP nedbrydning og forstærker responser frembragt af adenylatcyklase-koblede receptorer. Men svarene var stadig betydeligt mindre end dem, der ses med aktivering af Ca 2 + /PKC vej ved enten CCK eller PMA. Lignende forskelle i følsomheder er beskrevet i human antral [26] og hunde-fundiske [30] D-celler.
Den fremherskende inhibitoriske påvirkninger er beskrevet hidtil på fundiske D-celler er muskarine agonister [37, 38] og autoregulering af somatostatin selv [39, 40]. Svarene er rapporteret her, er i overensstemmelse med dataene på somatostatin frigivelse fra hunde fundiske D-celler [30, 37]. I modsætning hertil muscarinreceptorer er stimulerende for antrale D-celler [41], hvilket sandsynligvis skyldes en specifik forskel i funktion. Den nuværende undersøgelse bekræftede de inhiberende virkninger af både somatostatin-analog octreotid og muskarin agonist carbachol mod somatostatin frigivelse. En lignende inhibering af stimuleret amylin frigivelse blev set. Dette antyder, at in vivo
hæmning af amylin frigivelse involverer parasympatiske input og autokrine regulering af somatostatin.
Under alle forhold studerede somatostatin og amylin blev udskilt i parallel, som kan forventes, hvis de er co-lagret i sekretoriske granula. Insulin og amylin co-secerneret fra pancreas p-celler, sekretion sted normalt parallelt [42-44], men forskellen sekretion er blevet rapporteret i eksperiment-modeller af diabetes mellitus [45, 46]. Yderligere undersøgelser vil være behov for yderligere at definere forholdet mellem sekretion og handlinger gastrisk amylin og somatostatin. I isolerede Langerhanske øer de to peptider synes at have en co-operative rolle i reguleringen af ​​peptid sekretion: kombineret imunoneutralisation af amylin og somatostatin resulteret i større forbedring af insulin og glucagon sekretion end neutralisering af enten alene [10]. Det vil være interessant at undersøge, om lignende resultater ses med mavens funktioner.
Post-prandial frigivelse af tarm CCK og GLP-1 hæmmer gastrisk tømning og syresekretion [13, 47]. Disse virkninger er imidlertid at blive mediteret i det mindste delvist via mellemprodukter frigives fra D-celle snarere end ved direkte inhibering af syre-secernerende parietalcellerne [48]. Man mente, at somatostatin var den eneste mellemprodukt men resultaterne af den aktuelle undersøgelse tyder på, at parakrin regulering af amylin af parietal kan ECL- og andre endokrine celler har en rolle i de integrative reaktioner på måltider. Amylin-inducerede inhibering af histamin frigivet fra rotte fundiske mukosale segmenter in vitro
var medieret gennem øget somatostatinfrigivelse [19], men ved anvendelse af en selektiv somatostatin receptor antagonist Rossowski et al
viste in vivo
i rotter, at en portion af syren-hæmmende virkning af både amylin og den tilknyttede peptid Adrenomedullin var somatostatin-uafhængig [49]. De specifikke roller amylin i gastrisk fysiologi kræver yderligere udredning, men disse data tyder på, at lokalt frigivet amylin er direkte stand til at regulere slimhinde funktioner.
Svarene til adrenalin og carbachol tyder på, at autonome innervation kan regulere udskillelsen af ​​amylin. Den samlede balance in vivo
ville så afhænge af den relative input af de hæmmende muskarine og stimulerende adrenerge systemer, kombineret med cirkulerende endokrine og lokal parakrin og muligvis luminale faktorer.
Konklusion
Denne undersøgelse beskriver den indledende karakterisering af de faktorer, der regulerer gastrisk frisætning af amylin. Vi har vist, at amylin frigivelse kan stimuleres ved receptor-afhængig stimulering af enten Ca 2 + /PKC og adenylatcyklase /cAMP veje, og at fysiologisk relevante peptider og neurale mediatorer kan forbedre amylin frigivelse. Dette understøtter hypotesen om, at amylin kan modul maveslimhinden funktion. Denne undersøgelse bekræfter, at kortsigtede cellekulturer beriget med elutriation vil give en model for at udforske den patofysiologiske frigivelse af gastrisk amylin og give en rute yderligere forståelse rolle amylin i regulering af gastrisk motor og sekretorisk funktion.
Metoder
Materialer
Matrigel blev opnået fra Universal Biologicals (London, UK), octreotid fra Novartis (Surrey, UK) og Hams F12 /Dulbeccos modificerede Eagles-dyrkningsmedium (50:50, vol: vol), glutamin, Hanks balancerede salt opløsning og føtalt kalveserum blev erhvervet fra Gibco (Paisley, UK). Sulfateret cholecystokinin-8 (CCK), human GLP-1 og alle andre reagenser blev opnået fra Sigma (Poole, UK).
Cell Isolation og dyrkning
Primære kulturer af kanin gastrisk fundiske slimhindeceller beriget for D-celler var opnået som tidligere beskrevet [39, 48]. Kort fortalt blev kanin fundiske slimhinde underkastet sekventiel EDTA og collagenasefordøjelse. Den resulterende cellesuspension blev beriget med D-celler ved modstrøm elutatriation anvendelse af en Beckman JE 5,0 standard rotor som tidligere beskrevet. D-celle beriget fraktion blev resuspenderet i komplet dyrkningsmedium (Ham F12 /Dulbeccos modificerede Eagles-dyrkningsmedium (50:50, vol: vol), indeholdende 2 mM glutamin, 10 mM HEPES pH 7,4, 0,22% NaHCO 3, 10% føtalt kalveserum, 1 mg /l hydrocortison, 8 mg /l insulin, 100 mg /l penicillin, 100 mg /l gentamicin, 100 mg /l streptomycin) og dyrket på Matrigelcoatede brønds vævskulturplader 24 [50] ved en densitet på 1 x 10 6 celler /brønd i 40 timer i en atmosfære af 5% CO 2, 95% luft ved 37 ° C.
Slip Studies
Dyrkede celler blev vasket 3 gange i frigivelsesmedium (Earls balancerede saltopløsning indeholdende 0,1% bovint serumalbumin, 10 mM HEPES pH 7,4) for at fjerne døde og ikke-adhærente celler. Yderligere 1 ml frigivelsesmedium blev tilsat indeholdende test-agonister og celler inkuberet i 2 timer ved 37 ° C i en atmosfære af 5% CO 2, 95% luft. Efter perioden frigivelse, blev de konditionerede medier aspireret og centrifugeret for at fjerne ikke-adhærerende celler. Totalt cellulært indhold af peptid blev ekstraheret ved kogning i 1 ml i destilleret vand. Konditionerede medier og celleekstrakter blev opbevaret ved -70 ° C indtil analyseret for peptidindhold [30].
Peptid måling
Somatostatin koncentrationer blev vurderet ved radioimmunassay (RIA) med antiserum K2, som tidligere [39] beskrevne. Halvmaksimal inhibering af binding forekom ved 2 fmol /rør og det intra-assay og inter-assay variation var 7% og 8% procent hhv. Amylinkoncentrationer blev målt ved direkte ELISA (Penninsula Laboratories, Belmont, CA, USA), ifølge producentens instruktioner. Assayet har en rækkevidde på 0.04-2 ng /ml, og intra-assay og inter-assay variation af < 5% og < 14%. Antistoffet anvendes, har 100% krydsreaktivitet med amylin og amylin-amid, men < 1% krydsreaktivitet med CGRP og ubetydelig reaktion med andre biologisk aktive peptider. Alle eksperimentelle prøver fra et enkelt præparat dyr blev analyseret i den samme RIA eller ELISA.
Statistisk analyse
Peptid frigivelse i løbet af 2-timers periode blev udtrykt som procentdelen af ​​det totale celleindhold (TCC) i nævnte peptid. Hver eksperimentel betingelse blev afprøvet in duplo, og resultaterne fra et enkelt præparat dyr blev betragtet som N = 1. Resultaterne er udtrykt som middelværdien ± SEM af 3-6 separate animal præparater. Hver 24 brønds plade indeholdt altid kontrol (basale) brønde og positive stimulanser. Peptid frigivelse ved stimulanser blev sammenlignet med den basale frigivelse på det relevante plade med 24 brønde. Envejs variansanalyse og Student parret t-test blev anvendt til bestemmelse betydning. En P
værdi < 0,05 blev betragtet som signifikant
Liste over forkortelser
CCK:.
Cholecystokinin
ECL-:
enterochromaffin-lignende


GLP-1:
glukagon-lignende peptid-1
IAPP:
islet amylioid polypeptid
IBMX:
isobutylmethylxanthin
PKC:
protein kinase C
PMA:
phorbol-12-myristat -13-acetat, TCC, totale celle.
erklæringer
Tak
Dette arbejde blev støttet delvist af en Medical Research Council uddannelse fællesskab for ILPB.
Nogle af de data blev præsenteret i abstrakt form, i de Forenede Europæiske Gastroenterology Week i Birmingham 1997.
forfattere 'originale indsendte filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 12899_2003_47_MOESM1_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12899_2003_47_MOESM2_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 2 12899_2003_47_MOESM3_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 3 12899_2003_47_MOESM4_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 4 12899_2003_47_MOESM5_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 5 12899_2003_47_MOESM6_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 6 Forfattere 'Bidrag
ILPB udtænkt og designet undersøgelsen udførte celle isolation, kultur, eksperimenter release, immunoassays og skrev udkast og endelige versioner af manuskriptet. Den afdøde JC udtænkt undersøgelsen og co-skrev den første manuskript udkast.

• Risikofaktorer for dybden af ​​infiltration i differentierede deprimeret tidlig gastrisk karcinom: en foreløbig analysis
• Differentiel genekspression i den murine gastrisk fundus mangler interstitielle celler af Cajal