Pepsinogeno I e II espressioni in situ e le loro correlazioni con livelli sierici di pesignogen a cancro gastrico e la sua malattia precancerosa

Pepsinogeno I e II espressioni in situ e le loro correlazioni con livelli sierici di pesignogen a cancro gastrico e la sua malattia precancerosa
Abstract
sfondo
pepsinogeno Serum (PG) I /II rapporto è stato ampiamente utilizzato come "biopsia sierologica" per lo screening del cancro gastrico (GC) e gastrite atrofica (GA). Tuttavia, per quanto riguarda lo studio in situ dell'espressione di PG è attualmente insufficiente, in particolare per il loro rapporto con i livelli sierici di PG. Questo studio è stato progettato per indagare in situ di espressione IGP e PGII in soggetti con mucosa normale (NOR), gastrite superficiale (GS), GA e GC, e di valutare le correlazioni tra PG espressioni in situ e nel siero.
Metodi
185 soggetti sono stati arruolati per lo studio, tra cui 30 NOR, 70 GS, 54 GA e 31 GC. IGP e PGII espressioni in situ e nel siero sono stati rilevati mediante immunoistochimica e immunoenzimatico (ELISA), rispettivamente. . H. pylori
immunoglobuline (Ig) G è stata determinata anche da ELISA
Risultati
in espressioni in situ di IGP, PGII e il rapporto PGI /II costantemente diminuita in sequenza di NOR /GS- > GA-> GC. Le espressioni di IGP, PGII e il rapporto PGI /II in situ erano statisticamente superiore nei più giovani che in olders (P < 0,05). Nei soggetti NOR, IGP colorazione era statisticamente superiore nei maschi che nelle femmine che (p = 0,02). Per le correlazioni tra in situ e siero espressioni di IGP, PGII e il rapporto PGI /II, una correlazione borderline nel campione di studio totale (r = 0.131, p = 0,076) e una correlazione statistica nei casi GA (r = 0,307; p = 0,027) sono stati osservati per il rapporto PGI /II. L'espressione IGP correlata bene con quella di PGII in situ e nel siero.
Conclusioni
Il livelli situ di IGP, PGII e il rapporto PGI /II nettamente diminuito nei casi di GA e GC. I più giovani hanno mostrato livelli più elevati di IGP, PGII e IGP /II ratio rispetto ai olders. Il rapporto in situ IGP /II anziché IGP e PGII da solo ha mostrato certa correlazione con quella nel siero, e l'espressione IGP correlata bene con l'espressione PGII. Ulteriori studi con campioni di grandi dimensioni sono ancora necessari per convalidare i nostri risultati.
Parole
Pepsinogen gastrica malattia Correlazione Sfondo
mucosa gastrica umana contiene due proteinasi aspartico abbondanti e distinguibili, vale a dire pepsinogeno I (IGP o PGA) e pepsinogeno II (PGII o PGC) [1]. La maggior parte di PG sono presenti nella mucosa gastrica e una piccola parte di quelli può essere rilasciato nel sangue [2]. In genere, PG sono presenti come zimogeni in mucosa gastrica e possono essere convertiti in forme proteolitici attivi in ​​determinate condizione acida nel lume dello stomaco. I pepsine attivati ​​sono estremamente importanti per il processo digestivo nello stomaco [1].
Ci sono schiaccianti evidenze epidemiologiche di supporto che livelli sierici di IGP e /o il rapporto PGI /II correla bene con morfologiche e funzionali cambiamenti della mucosa gastrica [3- 7]. Di conseguenza, sono stati ampiamente usati come 'biopsia sierologica' per lo screening del cancro gastrico (GC) e le sue lesioni precancerose [3-7]. Nonostante l'ampio uso di PG siero nella pratica clinica, studio preoccupante nelle espressioni in situ di PG, in particolare nella progressione graduale da mucosa normale (NOR), gastrite superficiale (GS), gastrite atrofica (GA) per il carcinoma, è attualmente insufficiente . Le domande se i cambiamenti PG espressione in situ sono synchronistic con quelli nel siero e quali fattori influenzano l'espressione in situ di PG non sono ancora risolta sulla base di studi precedenti. Questi possono, in una certa misura, Puzzle Il lavoro clinico su come interpretare adeguatamente le variazioni di espressione siero PG in stato di diverso di malattie gastriche.
Il presente studio è stato condotto per indagare nelle espressioni in situ di IGP, PGII e IGP /II rapporto nella sequenza di NOR > GS- > GA-> GC. Le possibili influenze di sesso, età e H. pylori
infezione PG espressioni in situ sono stati esplorati. Inoltre, sono stati valutati le correlazioni tra in situ e siero espressione di PG e tra IGP e l'espressione PGII in situ e nel siero.
Metodi
pazienti
Un totale di 185 soggetti (maschi e femmine 110 75) sono stati arruolati in questo studio, compresa NOR (n = 30), GS (n = 70), GA (n = 54) e GC (n = 31). Tutti i soggetti sono stati retrospettivamente arruolati da un programma di salute per lo screening del cancro gastrico in Zhuanghe contea della provincia di Liaoning, in Cina tra il 1998 e il 2010. La diagnosi di malattia gastrica è stato istituito con l'esame gastroscopic e confermato dalla istopatologia. reperti istopatologici sono stati valutati in base al consenso sulla gastrite cronica formulato al Simposio Nazionale in combinazione con l'i criteri dell'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) [8-10] Sistema e Sydney aggiornato. Il NOR Gli individui sono stati confermati per avere relativa normale mucosa gastrica, senza evidenza di H. pylori
infezione o sintomo gastrointestinale. I soggetti GS hanno solo lieve o moderata gastrite superficiale senza lesioni metaplasia atrofiche o intestinali. I casi GA hanno gastrite atrofica con o senza metaplasia intestinale. Informazioni di sesso, di età è stato retrospettivamente estratto da documenti registrati.
Questo studio cross-sezionale è stato approvato dal Comitato Etico Review umana della Cina Medical University. consensi informato scritto sono stati ottenuti dai partecipanti.
immunoistochimica colorazione di IGP e PGII network per il recupero di antigeni, il rilevamento è stato effettuato in 5 sezioni micron di spessore da campioni in sequenza fette di campioni inclusi in paraffina. sezioni deparaffinazione stati riscaldati in tampone citrato (pH 6,0) usando un forno a microonde per 10 min. incubazione overnight a 4 ° C è stata effettuata per il legame di anticorpi primari (IGP, anti-pepsinogeno un anticorpo, nome commerciale: 2 F5, 1: 600 diluizione; PGII, C anticorpo anti-pepsinogeno, nome commerciale: 2D5, 1: 400 diluizione; entrambi gli anticorpi sono stati donati dal Giappone Institute ispezione clinica) [11, 12]. In seguito, SP-two step immunoistochimica è stata eseguita secondo le istruzioni del kit (Kit-9801D2 da Maixin Company di Fujian, Cina). Per tutte le colorazioni, controlli positivi sono stati effettuati, e la colorazione è stata accettata solo se i controlli hanno mostrato risultati valutabili.
Valutazione della colorazione immunoistochimica
risultati immunoistochimici sono stati giudicati da IRS (score immunoreactive), che è stata determinata da due osservatori indipendenti. L'IRS è stato calcolato utilizzando due indici di intensità di colorazione (SI) e la percentuale di cellule positive (PP). Il SI nel citoplasma è stata classificata come: 0 = no, 1 = debole, 2 = moderato, 3 = forte colorazione. Il PP è stato classificato come: 0 = cellule non colorate, 1 = cellule colorate < 25%, 2 = cellule colorate 25 ~ 50%, 3 = cellule colorate il 51% ~ 75%; 4 = cellule colorate > 75%. Per ogni campione un IRS è stata calcolata come SI × PP con un possibile punteggio massimo di 12. Il risultato della valutazione è stato definito come uno negativo (0), debolmente positivo (1 ~ 3), positivo (4 ~ 7) o fortemente positivo (8 ~ 12).
nel presente studio, IGP colorazione era situato in ghiandole gastriche corpus mentre PGII colorazione era situato in entrambi corpus mucosa gastrica e antrale. Pertanto, IGP IRS è stato valutato solo nella mucosa gastrica corpus, e PGII IRS è stata valutata sia in corpus e della mucosa antrale per ogni partecipante. Per IGP colorazione, abbiamo valutato lo stato macchiato di tutte le principali cellule delle ghiandole gastriche corpus per NOR e soggetti GS, le restanti cellule principali di ghiandole corpus sussistenti per i soggetti GA, e le cellule delle lesioni cancerose per i soggetti GC. Per PGII colorazione, abbiamo valutato lo stato colorazione di tutte le gastrici corpus e antro ghiandole per NOR e GS soggetti, il restante corpus gastrica e delle ghiandole antrali per i soggetti GA, e le cellule della lesione cancerosa per i soggetti GC.
Prova per H . pylori
sierologia
Il metodo dettagliato di esame del H. pylori
sierologia è stato descritto nel nostro precedente studio [13]. In breve, circa cinque ml di sangue venoso a digiuno sono stati raccolti da ciascun partecipante. Il campione di siero è stato ottenuto dopo centrifugazione a 3000 g per 10 minuti. Siero immunoglobuline (Ig) G anticorpi di H. pylori
sono stati rilevati mediante test immunoenzimatico (ELISA) Kit enzyme-linked (Biohit Co, Ltd, Helsinki, Finlandia) in base alle istruzioni del produttore. Una lettura di H. pylori
-IgG superiore a 34 EIU (Enzyme immuno-unità) è stato considerato come H. pylori
sieropositivi
. Test per le IGP siero e di espressione PGII
Il metodo dettagliato di esame di pepsinogeno del siero è stato descritto nel nostro precedente studio [14]. Circa 5 ml di digiuno di sangue sono stati raccolti da ciascun partecipante. Il sangue è stato centrifugato a 3000 g per 10 minuti e il siero è stato conservato immediatamente a -20 ° C fino all'uso. Siero IGP (SPGI) e le concentrazioni PGII (sPGII) (microg /L) sono stati rilevati dal kit ELISA (Biohit Co, Ltd, Finlandia) in base alle istruzioni del produttore. Il cinque per cento di tutti i campioni sono stati dosati in duplicato.
Analisi statistica
Tutte le analisi statistica è stata effettuata utilizzando la (13,0) programma SPSS (SPSS, Chicago, USA). Le distribuzioni di variabili discrete erano così rappresentati frequenze e percentuali. Le medie delle variabili continue sono stati rappresentati come mediana (25%, 75%). I tassi positivi di IGP e PGII colorazione in diverse malattie gastriche sono state confrontate con il test chi-quadro di Pearson o test esatto di Fisher. Il coefficiente di correlazione tra due variabili è stata misurata mediante correlazione parziale controllando per sesso ed età. L'IRS di espressione in situ delle IGP, PGII e IGP rapporto /II tra più gruppi sono stati confrontati con il test di Kruskal-Wallis; se la significatività statistica (P < 0,05) sia stata indicata, la differenza tra i due gruppi è stata ulteriormente testato dal Mann-Whitney U
-test. Un valore di p
a due code inferiore a 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.
Risultato
dinamica in situ espressione di PG in diversi tessuti gastrici
Sia IGP e PGII colorazione erano situati nel citoplasma delle cellule e membrana delle cellule epiteliali gastriche, ma in diverse parti dello stomaco. Colorazione per PGI è stata positiva nel corpus mucosa ma negativi in ​​ciascuno mucosa antrale indipendentemente dallo stato della mucosa gastrica (figure 1 e 2). PGII colorazione era presente in entrambi corpus e mucosa antrale (figure 3 e 4). Nessuna delle cellule metaplasia intestinale esposto la colorazione IGP o PGII. Come dimostrato nella Tabella 1, lungo la sequenza di NOR /GS- > GA-> GC, i tassi positivi e tassi fortemente positivi sia espressione IGP e PGII ha mostrato significativamente diminuito tendenze. Figura 1 L'espressione di IGP nelle ghiandole corpus in diversi tessuti gastrici (colorazione immunoistochimica × 200). (A), né le mucose; (B) GS mucosa; (C) GA mucosa; mucosa (D) GC.
figura 2 espressione negativa della IGP in tutte le ghiandole antrali in diversi tessuti gastrici (colorazione immunoistochimica × 200). (A), né le mucose; (B) GS mucosa; (C) GA mucosa; (D) GC mucosa.
Figura 3 Espressione di PGII nelle ghiandole corpus in diversi tessuti gastrici (colorazione immunoistochimica × 200). (A), né le mucose; (B) GS mucosa; (C) GA mucosa; (D) GC mucosa.
Figura 4 Espressione di PGII nelle ghiandole antrali in diversi tessuti gastrici. (A), né mucosa (colorazione immunoistochimica × 400); (B) GS mucosa (colorazione immunoistochimica × 400); (C) GA mucosa (colorazione immunoistochimica × 200); (D) GC mucosa (colorazione immunoistochimica × 200).
Tabella 1 espressione in situ di PG in diversi mucosa gastrica
N
tasso positivo
valore di P
tasso fortemente positivi
valore P
in situ IGP /II ratioa
valore P

vs. NOR
vs. GS
vs. GA
vs. NOR
vs. GS
vs. GA
vs. NOR
vs. GS
vs. GA
in situ IGP espressione
NOR
30
100.00%
50.00%
1,0 (0.7,1.1)
GS
70
100.00 %
/
32.90%
0.021 b
1.0 (0.7,1.4)
0.292d
GA
54
83.30%
0,023 c
< 0,001 c
3,70%
< 0,001 b
< 0,001 b
0.8 (0.4,1.1)
0.086d
0.005 d
GC
31
0,00%
< 0,001 b
< 0,001 b
< 0,001 b
0,00%
< 0,001 b
< 0,001 b &
lt; 0.001 b
0.0 (0.0,0.0)
< 0,001 d
< 0,001 d
< 0,001 d
in situ PGII espressione
NOR
30
100,00%
63.30%
/
GS
70
100.00%
/
31,40%
0,015 b
/
GA
54
92.60%
0.291c
0,034 c
1,90%
< 0,001 b
< 0,001 b
/
GC
31
0.00 %
< 0,001 b
< 0,001 b
< 0,001 b
0,00%
< 0,001 b
< 0,001 b &
lt 0,001 b
/
una, sono stati rappresentati i rapporti di PGI IRS per PGII IRS come mediana (25%, 75%); B, i tassi positivi e tassi fortemente positivi di IGP e PGII colorazione in diverse malattie gastriche sono state confrontate con il test chi-quadro di Pearson; C, i tassi positivi di IGP e di espressione PGII in diverse malattie gastriche sono stati determinati dai test esatto di Fisher; d, i rapporti in situ IGP /II tra più malattie gastriche sono stati analizzati con il test di Kruskal-Wallis. Se il risultato è stato indicato come statisticamente significativo, il test di Mann-Whitney è stato eseguito per verificare ulteriormente la differenza tra due gruppi. Analisi risultati con P < 0.05 sono state evidenziate in grassetto.
Per investigare ulteriormente la relativa espressione di IGP per PGII in situ, il rapporto tra IGP IRS per PGII IRS è stato calcolato, vale a dire il rapporto situ IGP /II. Abbiamo trovato che in situ IGP /rapporti II hanno mostrato un minore tendenza nella sequenza di NOR /GS- > GA-> GC, ha mostrato corrispondente livello medio di 1.0 /1.0, 0.8 e 0 (Tutto l'IRS di IGP e PGII colorazione nel tessuto GC fosse zero). In situ IGP /rapporti II a GA sono statisticamente inferiori a quelli GS (P = 0,005).
In espressione in situ di PG in stato di diverso sesso, età e pylori
infezione da H.
Le differenze di l'IRS di PG colorazione tra femmine e maschi, tra i più giovani (età < 50 anni) e olders (età ≥ 50 anni), e tra H. pylori
sieropositivi e sieronegativi sottopopolazioni sono stati valutati nel campione totale dello studio e nel NOR, GS e sottogruppi GA (Tabella 2). Del campione totale dello studio, nei livelli situ di IGP, PGII e il rapporto PGI /II sono stati osservati per essere statisticamente superiore nei più giovani che nelle olders. Non ci sono state differenze statisticamente significative tra i più giovani e le olders nei sottogruppi di NOR, GS o GA. Inoltre, nell'espressione IGP situ è ​​risultata essere statisticamente superiore nei maschi che nelle femmine che nei NOR subgroup.Table 2 Nel espressione in situ di PG in diversi sesso, età e H. pylori stato
totale

NOR
GS
GA
IRS scorea

IRS scorea
IRS scorea
IRS scorea
in situ IGP colorazione
Sex
0,265 0,002

0,599 0,964

femminile
4.0 (2.0,7.0)
5.0 (4.0,7.5)
6.0 (4.0,9.0)
2.0 (1.0,3.3)
Male
3.0 (0.0,7.0)
9,0 (7.0,10.5)
6.0 (2.5,8.5)
2.0 (1.0,3.0)
Età (anni)
0.003
0,681 0,183

0,563
< 50

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