Immunhistokemisk sammenhæng mellem primære tumorer og lymfeknudemetastaser af gastrisk neuroendokrine karcinom

Immunhistokemisk sammenhæng mellem primære tumorer og lymfeknudemetastaser af gastrisk neuroendokrine karcinom
Abstract
Baggrund
Gastric neuroendokrine karcinom (G-NEC) er en sjælden, yderst ondartet svulst, der udviser aggressiv vækst, der fører til vaskulær invasion, fjernmetastaser og ekstremt dårlig prognose. Vi studerede klinisk-patologiske fund af syv patienter på vores institut til bedre under denne sygdom.
Metoder
Syv tilfælde af G-NEC blev identificeret blandt 1.027 tilfælde af gastrisk karcinom, der undergik gastrektomi på Kansai Rousai Hospital mellem 2002 og 2010. Vi studerede de patologiske og immunohistokemiske funktioner i gastriske neuroendokrine karcinom med både det primære sted og metastatiske lymfeknuder.
Resultater
gennemsnitlige patientens alder var 73 år (spændvidde 63 til 86 år). Der var ingen hunner i denne serie. Den endelige mellemstation var stadium I i et tilfælde, Stage II i to, trin III i to og trin IV i to. I alt 31 metastatiske lymfeknuder blev fundet i disse patienter. Denne undersøgelse viste, at forholdet mellem neuroendokrine celler var ens mellem de primære og metastatiske websteder, som havde en tendens til at vise det samme udtryk mønstre af neuroendokrine markører.
Konklusioner
metastatisk lymfeknuder viste heterogene immunhistokemiske ekspressionsmønstre ligner de primære steder . G-NEC er langt fremme på diagnose og hurtigt når lymfeknuderne bevarer sin heterogenitet, der bærer en dårligere prognose end almindelig mavekræft.
Mini abstrakt
G-NEC vokser hurtigt og metastaserer til lymfeknuder, bevarer sin patologiske og immunhistokemisk heterogenitet selv ved de metastatiske steder.
Nøgleord
Ki67 Immunhistokemi heterogenitet Baggrund
Gastric neuroendokrine karcinom (G-NEC) er en sjælden tumor (0,1 til 0,2% af alle gastriske carcinomer) med yderst ondartet biologisk adfærd udviser aggressiv vækst, som fører til vaskulær invasion, fjernmetastaser og ekstremt dårlig prognose. 2010 WHO klassifikationen definerer godt differentierede endokrine tumorer /carcinomer som neuroendokrine tumorer (net), og dårligt differentierede endokrine carcinomer som neuroendokrine karcinomer (NEC). Sammenlignet med godt-opdelte gastriske NET, G-NEC har yderst ondartet adfærd og dårlig prognose, men deres prognostiske markører og terapeutiske strategier er endnu ikke defineret.
En konkret diagnose af G-NEC leveres af immunhistokemisk undersøgelse med neuroendokrine markører , såsom synaptophysin (SYN), chromogranin A (CGA), CD56 og neuron-specifik enolase (NSE). Det er blevet foreslået, at forsigtighed bør udvises i diagnose på grund af variationen vist ved G-NEC i både histologiske morfologi og immunhistokemisk udtryk. Imidlertid har ingen rapporter undersøgt forholdet mellem ekspressionsmønsteret ved det primære sted og at i de metastatiske steder som både histologisk morfologi og immunhistokemisk ekspression. I denne undersøgelse undersøgte vi de primære tumorer og alle metastatiske lymfeknuder, og revideret sammenslutningen af ​​ekspressionsmønstre ved hjælp af immunhistokemisk undersøgelse.
Metoder
Patienter og prøver
Syv tilfælde af G-NEC blev identificeret blandt 1.027 tilfælde af gastrisk karcinom, der undergik gastrektomi på Kansai Rousai Hospital mellem 2002 og 2010 (0,68%). Alle patienter gav skriftligt informeret samtykke til klinisk-patologisk evaluering.
Tabel 1 viser de klinisk-patologiske karakteristika disse patienter. Den mediane alder var 73 år (spændvidde 63 til 86 år). Der var ingen hunner i denne serie. Alle patienter undergik gastrektomi med regional lymfeknude dissektion, og i Case 4, blev yderligere leverresektion udført for synkron liver metastasis.Table 1 Patienters egenskaber
Patient nr
Alder
Beliggenhed
Gross typen
Tumor størrelse (cm)
Præoperativ diagnose
Operation
R
1
63
L
3
13
tub2
Distal gastrektomi
R2
2
71
M
2
2
por1 > tub2
Total gastrektomi
R0
3
71
M
3
13
NEC
Distal gastrektomi
R1
4
86
M
2
3
tub2 > por1 > por2
Distal gastrektomi + hepatektomi
R1
5
74
M
2
9
NEC
Distal gastrektomi
R0
6
69
L
3
3
tub2
Distal gastrektomi
R0
7
77
M
5
6
NEC
Distal gastrektomi
R0
NEC, neuroendokrine karcinom; por1, dårligt differentieret adenocarcinom, fast form; por2. dårligt differentieret adenocarcinom, ikke-fast form; R, Resectability; tub2, moderat differentieret adenocarcinom rørformet.
Immunohistokemisk farvning
Alle operativt fjernede maver og lymfeknuder blev fikseret i 10% neutral formalin, og derefter, hele tumoren blev trin-skåret til en bredde på 4 til 5 mm. Prøver blev indlejret i paraffin, skåret i 4-um snit og farvet med hematoxylin og eosin. En immunhistokemisk procedure ved hjælp af EnVision systemet (DakoCytomation, Glostrup, Danmark) blev anvendt som tidligere fastslået. Immunhistokemisk farvning blev undersøgt i alle blokke af maksimal opdelt overflade af det primære sted og alle blokkene i metastatiske lymfeknuder i hvert tilfælde. Vi gennemgik histologi af tumor på hematoxylin og eosin pletter og evalueret udtryk for SYN, CGA, CD56 og NSE. Vi undersøgte ikke kun primære tumorer, men også 236 lymfeknuder, hvorfra vi identificeret 31 metastatiske lymfeknuder afledt fra fem patienter. Den immunhistokemiske udtryk for hvert antistof blev defineret som følger: - (< 5%), 1+ (5 til 9%), 2+ (10 til 49%) og 3+ (over 50%). Forholdet tumorområdet med positivitet af hver markør blev evalueret i hele den maksimale dimension af de primære tumorer og metastatiske lymfeknuder. Positivitet blev defineret som en dimension forhold af ekspression over 10% (over 2+). Følgende antistoffer blev anvendt: anti-synaptophysin og anti-CD56 købt fra Novocastra Laboratories Ltd. (Newcastle upon Tyne, UK), og anti-chromogranin A og anti-NSE købt fra DakoCytomation (Glostrup, Danmark). Ki67-mærkningsindeks blev også estimeret i blokken herunder den dybeste del af den primære tumor.
Resultater
Gross resultater og mellemstationer
Fem tumorer blev placeret i midten af ​​maven, og de resterende to var i den nedre mave (tabel 1). Et tilfælde var en T1b (submucosa) tumor, fire tilfælde var T3 (subserosa), den ene var T4A (penetration af serosa) og en var T4B (invasion til tilstødende strukturer) (Tabel 2). Lymfeknudemetastase blev fundet i fem tilfælde. Den endelige iscenesættelse var Stage IA i ét tilfælde, Stage IIA i én, Stage IIB i én, Stage IIIA i én, Stage IIIB i én og trin IV i to, i henhold til den syvende amerikanske fælles udvalg om kræft (AJCC) TNM mellemstationer klassifikation . Tumorerne havde vokset til en median størrelse på 6 cm (interval 2 til 13 cm) i den største dimension. Groft, tumoren var Type 3 i tre tilfælde, Type 2 i tre og type 5 i one.Table 2 klinisk-patologisk fund af primær tumor og reseceret lymfeknude
Pt Ingen
Patologisk Stage

Metastatisk forhold af dissekerede lymfeknuder
Histologi af lymfeknudemetastaser Vejviser
Vejviser

Ad
Samtidig annonce og NEC
NEC
n Hotel (%)
n Hotel (%)
n
(%)
n Hotel (%)
1
T4b
N3a
M0
H0
P0
CY1
IV
8/16
(50)
0
(0)
0
(0)
8
(100)
2
T3
N2
M0
H0
P0
CY0
IIIA
5/26
(19)
0
(0)
0
(0)
5
(100)
3
T3
N0
M0
H0
P0
CY0
IIA
0/42
(0)
-
-
4
T3
N1
M0
H1
P0
CY0
IV
1/31
(3)
0
(0)
0
(0)
1
(100)
5
T3
N1
M0
H0
P0
CY0
IIB
2/52
(4)
0
(0)
0
(0)
2
(100)
6
T4a
N3b
M0
H0
P0
CY0
IIIC
15/25
(60)
12
(80)
3
(20)
0
(0)
7
T1b
N0
M0
H0
P0
CY0
IA
0/44
(0)
-
-
-
Angivelse af immunhistokemisk farvning mellem de primære og metastatiske steder i kun tre sager blev korrekt diagnosticeret som G-NEC præoperativt. Vi samlet de forskellige histologiske mønstre af primære tumorer og lymfeknuder i tabel 3. Ifølge WHO klassificering, fem af de syv tumorerne var store-celle undertyper og de andre var små-celle undertyper. De blev klassificeret i fem rene neuroendokrine karcinomer og to tumorer kombineret med adenocarcinom. Vi undersøgte i alt 236 lymfeknuder opnået fra syv patienter. Blandt dem, 31 positive lymfeknuder omfattede 12 knuder viser rent adenocarcinom, 3 viser både adenocarcinom og neuroendokrine karcinom, og 16, der viser ren neuroendokrine karcinom. Mens tilfælde med rent NEC havde lymfeknudemetastase af ren NEC (fx Case 1 vist i figur 1 og 2), havde de to resterende tilfælde med både adenokarcinomceller og neuroendokrine carcinomaceller varierede lymfeknudemetastase. Case 4 havde rent NEC, og sag 6 havde både rene adenocarcinom noder og samtidig noder. Desuden har vi efterprøvet de primære og lymfeknude undertyper ved farvning for neuroendokrine markører, og alle primære tumorer blev stærkt farvet af SYN og CD56. De fleste tilfælde viste varieret ekspressionsmønstre, der var ens i begge de primære og metastatiske steder. Den overensstemmelse med positivitet mellem de primære steder og lymfeknuder var ekstremt høj: 80% i SYN, 100% i CGA, 60% i CD56 og 80% i NSE. Desuden Ki67 mærkning indekset var høj, over 20% i alle cases.Table 3 histologi og immunohistokemiske resultater af både primær tumor og metastatiske lymfeknuder
patienten ikke.
Primær tumor
lymfeknudemetastaser
Ki-6 7 mærkning indeks (%)
Mitotiske tællinger (/10HPF)
Histologi
Ratio af neuroendokrin celle (%)
Angivelse af neuroendokrine markører
Histlogy
Angivelse af neuroendokrine markører Vejviser

SYN
CGA
CD56
NSE
SYN
CGA
CD56

NSE Vejviser 1
SC
100
3+ -
3+
3+
SC
3+ -
3+
3+
60
60 til 70
2
LC
100
3+
3+
2+
1+
LC
1+
3+
1+
2+
20
20
3
LC
100
3+
-
2+
3+
80
80 til 90
4
LC > tub2
90
3+
3+
3+ -
LC
3+
3+
2+ -
30
80 til 90
5
LC
100
3+ -
3+ -
LC
3+
-
3+ -
70
100-110
6
LC > tub2 > por1
60
3+
3+
3+
1+
ren annonce
2+ -
- -
70
20
LC + Ad
3+
2+
1+ -
7
SC
100
3+
-
2+
3+
80
100-110
Expression positivitet blev defineret som følger; - (≪ 5%), 1+ (5 til 9%), 2+ (10 til 49%), og 3+ (over 50%). Ad, adenocarcinom; CGA, Chromogranin A; HPF, høj effekt områder; LC, storcellet; NSE, neuron-specifik enolase; SC, småcellet; SYN, synaptophysin.
Figur 1 Immunhistokemisk udtryk for neuroendokrine markører i primær tumor (sag 1). a) synaptophysin, b) chromogranin A, c) CD56, d) neuron-specifik enolase. Tumorceller variabelt udtrykte neuroendokrine markører.
Figur 2 Immunhistokemisk udtryk for neuroendokrine markører i metastatiske tumorceller i lymfeknuder (Case 1). a) synaptophysin, b) chromogranin A, c) CD56, d) neuron-specifik enolase. Ekspressionsmønstre for neuroendokrine markører i metastatiske tumorer var de samme som i den primære tumor.
Kliniske forløb
adjuvans kemoterapi, herunder S-1, blev introduceret til alle tilfælde med undtagelse af én på et tidligt stadium. Den mediane behandlingsvarighed var 8,1 måneder (interval 0,9 til 24,5 måneder). Under behandlingsforløbet, der var to gentagelser (sagerne 1 og 4), og et dødsfald tre måneder efter incurative kirurgi (Case 1). Den største site af tilbagefald var leveren efterfulgt af bughinden. Kemoterapi blev indført efter liver tilbagefald i sag 4. Patienten reagerede godt til terapi og opnåede lang, samlet overlevelse, 21 måneder, på trods af sin fremskredent stadium. Den treårige sygdomsfri overlevelse sats var 64,3%, og den treårige samlede overlevelsesrate var 83,8% efter operationen.
Diskussion
NEC er klassificeret i rene tumorer og sammensatte tumorer sammenblanding adenocarcinomatous differentiering [1, 2 ]. Kriterier for klassificering i NEC kategorier er, at over 30% af cellerne viser funktionerne i neuroendokrine differentiering [2]. NEC har aggressiv biologisk opførsel og udviser hurtig spredning [1-7].
Vi undersøgte karakteristika G-NEC ved hjælp af patologisk og immunhistokemisk undersøgelse af både de primære steder og metastatiske lymfeknuder. I denne undersøgelse fandt vi et blandet population af rene neuroendokrine celler, adenokarcinomceller og deres intermediære celler, som har de morfologiske træk ved adenokarcinom med positivitet til neuroendokrine markører. Andre undersøgelser har rapporteret, at NEC viser stærk farvning for neuroendokrine markører, såsom CGA, SYN, NSE og CD56 [1-3, 5, 7]. I vores serie, positivitet sats for CGA, SYN, NSE og CD56 var 42,9%, 100%, 85,7% og 72,7%, hhv. Blandt disse markører, viste tumorer den højeste positivitet for SYN og laveste positivitet for CGA. CGA er en markør for neuroendokrine granulat og en vejledende faktor differentiering til neuroendokrine celler. Den dårlige differentiering i vores tilfælde forhindrede tilstrækkelig ekspression af granulat.
Vi fandt, at tumorerne varierede i immunhistokemisk ekspression. I én tumor, mens nogle celler med høj CGA-ekspression viste negativitet for andre markører, nogle celler uden CGA ekspression viste diffus høj positivitet for andre markører. Desuden foruden neuroendokrine celler positive for SYN, viste nogle adenokarcinomceller positivitet for SYN blandt komposit-type tumorer. Dette indikerer histologiske og immunophenotypical kontinuitet mellem adenocarcinom komponent og NEC komponenten.
Desuden fokus på lymfeknuder, fandt vi, at sager med rene neuroendokrine primære steder havde metastatiske lymfeknuder med rene neuroendokrine celler (tabel 3). Variationen i immunhistokemiske ekspressionsmønstre for det primære site blev opretholdt selv i de metastatiske rene endokrine celler. I sag 6, blev en af ​​de to tilfælde med kombineret primære tumorer, komposit metastaser af NEC og adenocarcinom set i nogle lymfeknuder, og ren adenocarcinom metastaser blev set i andre knuder. Tumoren viste sammenhæng i både histologiske type og immunhistokemisk udtryk mellem den primære websted og de metastatiske lymfeknuder. Dette resultat har ført til en hypotese om, hvorledes af metastase. Det vil sige, klynger celler, herunder adenocarcinom og neuroendokrine celler med varieret immunfænotyper, spredt sig til lymfeknuderne og sameksisteret der. Derudover lymfeknuder fra komposit-type tumorer udtrykte en lidt anden farvningsmønster. Celler der ikke undergår tilstrækkelig moden differentiering i primære steder kan differentiere til neuroendokrine celler eller udvikle varieret immunhistokemisk udtryk. I denne serie, var der ingen klar sammenhæng mellem immunhistokemisk ekspression og klinisk resultat. Sager med lave Ki67 mærkning indeks havde en god prognose. For eksempel, Case 2, for hvilke var Ki67-mærkningsindeks 20%, opnået den længste overlevelse sigt 55 måneder. Case 4, for hvilke Ki67-mærkningsindeks var 30%, blev succesfuldt behandlet med kirurgi og kemoterapi og overlevede i 21 måneder trods fjernmetastase. Begrænsninger af denne undersøgelse omfatter korte varighed af opfølgning og lille stikprøve meste består af rene former. Derfor er der behov store og langsigtede undersøgelser for at drage en endelig konklusion.
Konklusion
Sammenfattende vi rapporterede de patologiske og immunohistokemiske funktioner i neuroendokrine karcinom med både de primære steder og metastatiske lymfeknuder. Cellerne vokser hurtigt og metastaserer til lymfeknuder bevarer deres heterogenitet selv ved de metastatiske steder
Forkortelser
G-NEC:.
Gastric neuroendokrine karcinom
NET:
neuroendokrine tumorer
NEC:
neuroendokrine karcinomer
SYN:
synaptophysin


CGA:
chromogranin En
NSE:
neuron enolase
por1:
dårligt differentieret adenocarcinom, fast form
por2:
dårligt differentieret adenocarcinom, ikke-fast form
R:
Resectability
tub2:
moderat differentieret rørformede adenocarcinom
AJCC:
amerikanske Blandede Udvalg om kræft

Ad:
adenocarcinom
HPF:
høj effekt felter
LC:
store celle
SC:.
småcellet
erklæringer
Forfatternes oprindelige indsendt filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendt filer til billeder. 12957_2012_1057_MOESM1_ESM.tiff Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12957_2012_1057_MOESM2_ESM.tiff Forfatternes oprindelige fil til figur 2 konkurrerende interesser
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende interesser.
Forfattere bidrag
CU og ST udtænkt af studere. ST og SN overvåget manuskriptet skriftligt. SN udførte den patologiske og immunhistokemiske evaluering og scoring. AT, HM, TK, SN, RS, KN, YT og TK indsamlet de tilfælde og kliniske oplysninger. CU udførte litteraturgennemgang og skrev manuskriptet. AT og SN udførte den statistiske analyse. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Glucose absorption og gastrisk tømning i kritisk illness
• En case-kontrol undersøgelse af effekten af ​​apolipoprotein E genotyper på mavekræft risiko og progression