Genetiska och epigenetiska förändringar av netrin-1 receptorer i magcancer med kromosom instabilitet

Genetiska och epigenetiska förändringar av netrin-1 receptorer i magcancer med kromosom instabilitet Bild Sammanfattning
Bakgrund sälja The genuttryck av netrin-1 beroende receptorer, DCC
och UNC5C
, ofta nedreglerade i många cancerformer. Vi antar att nedreglering av DCC och UNC5C har en viktig tillväxtreglerande funktion i magsäcken tumörbildning.
Resultat
I den aktuella studien, en serie av genetisk och epigenetisk analyser för DCC Mössor och UNC5C
utfördes en japansk kohort av 98 sporadiska gastric cancer och motsvarande normal magslemhinna exemplar. Förlust av heterozygositet (LOH) analyserar och mikrosatellitinstabilitet (MSI) analys tillämpades för att fastställa kromosom instabilitet (CIN) och MSI fenotyper, respektive. Mer än 5% metylering i DCC
och UNC5C
promotorer återfanns i 45% (44/98) och 32% (31/98) gastric cancer, respektive, och i 9% (9/105) och 5% (5/105) normal magslemhinna, respektive. Sammantaget 70% (58 av 83 informativa fall) och 51% (40 av 79 informativa fall) av magcancer hyste antingen LOH eller avvikande metylering i DCC Mössor och UNC5C
gener, respektive. Totalt 77% (51 av 66 informativa fall) av magcancer uppvisade kumulativa defekter i dessa två beroende receptorer och var signifikant associerade med kromosom instabilitet. Både DCC och UNC5C inaktiverades i 97% av CIN-positiva gastric cancer och 55% av CIN-negativa gastric cancer.
Slutsatser
Defekt i netrin receptorer är ett vanligt inslag i gastric cancer. DCC
förändringar är uppenbara i de tidiga stadierna, och UNC5C
förändringar eskalera med utvecklingen av sjukdomen, vilket tyder på att de kumulativa förändringar av netrin-1-receptorer var en sen händelse i magcancer progression och betona vikten av detta tillväxtreglerande väg i gastric cancer.
Nyckelord
magcancer Metylering kromosom~~POS=TRUNC instabilitet DCC
UNC5C
netrin-1 receptorer bakgrund
globala uppskattningar av cancerförekomsten rang magsäckscancer som den fjärde vanligaste malignitet och den näst vanligaste orsaken till cancerrelaterade dödsfall i världen [1]. Gastric cancer är en heterogen sjukdom med flera miljö etiologier och med alternativa vägar av cancer [2, 3]. En av de viktigaste etiologiska riskfaktorer för magsäckscancer är Helicobacter pylori
(H. pylori
) infektion. Tidigare rapporter indikerade en 93,1-100% infektionsfrekvensen för H. pylori
hos patienter med magcancer, medan endast 1,2 till 2,8% av individer infekterade med H. pylori
utveckla magcancer [4-7].
Aktuell kunskap om de molekylära mekanismerna bakom gastric cancer indikerar en större epigenetisk instabilitet vägen och två stora genetiska instabilitet vägar [8]. Den stora epigenetisk instabilitet vägen definieras som CpG-ö methylator fenotyp (CIMP), som ursprungligen beskrevs i kolorektal cancer och även observerats i en delmängd av magcancer och som hyser en kritisk grad av avvikande promotor hypermethylation samband med transkriptions tysta flera tumör suppressorgener [9, 10]. De två stora genetiska instabilitet vägar inkluderar mikro instabilitet (MSI) och kromosomala instabilitet (CIN) [8]. MSI definieras som närvaron av replikerings fel i enkla repetitiva mikro sekvenser som orsakas av obalans reparation (MMR) brister. En är Lynch syndrom som orsakas av nedärvda mutationer i MMR generna och en annan är sporadisk MSI orsakas främst av promotor hypermethylation i MLH1
genen [10, 11]. Å andra sidan, CIN, som kännetecknas av kromosomförändringar, antingen kvalitativ eller kvantitativ, är en vanligare väg som kan innefatta clinicopathologically och molekylärt heterogena tumörer [8].
Cancer Genome Atlas Research Network nyligen delat gastric cancer i fyra subtyper [12]. Tumörer först kategoriserade efter Epstein-Barr-virus (EBV) -positivity (9%), därefter av MSI-hög status, hädanefter kallad MSI-positiva (22%), och de återstående tumörerna klassificerades genom graden av aneuploidi i de benämns genomiskt stabil (20%) eller de som visar CIN (50%). EBV-positiva cancerformer samt MSI-positiva cancer var kända för att kluster var på egen hand, uppvisar extrema CIMP. Skillnader mellan de EBV-CIMP och MSI-associerade gastric-CIMP metylering profiler exemplifieras av det faktum att alla EBV-positiva tumörer analyserade visas CDKN2A
(p16INK4a
) -promotor hypermetylering men saknade MLH1
hypermetylering karakteristisk för MSI-associerad CIMP. hotell med avseende på CIN kännetecknas av kopietal förändringar i kromosomerna, Deng et al. Begagnade hög upplösning genomisk analys att profilera somatiska kopietal förändringar i en panel av 233 gastric cancer (primärtumörer och cellinjer) och 98 matchade gastric icke-maligna vävnader. När det gäller stora områden kromosomala innehöll mest amplifierade regionen kromosomer 1Q, 5p, 6p, 7p, 7q, 8Q, 13q, 19p, 20p och 20q, och de mest raderade regioner som ingår kromosomer 3p, 4p, 4q, 5q, 6q , 9p, 14q, 18q, och 21 q [13].
Vanliga borttagna kromosomala regioner kännetecknas vanligen av förlust av heterozygositet (LOH) och föreslå närvaron av tumörsuppressorgener [14, 15]. LOH på kromosom 18q21 finns i 30-71% av magcancer [13, 16-18], och DPC4
(Smad4
) /DCC
har antagits vara de viktigaste målen. DPC4
(Smad4
), en tumörsuppressorgen, uppvisar frekventa mutationer åtföljs av LOH i ungefär 20% av pankreascancer [19], men inga mutationer har rapporterats i gastric cancer [20]. Däremot har få studier fokuserat på DCC
genförändringar, och dess genetiska /epigenetiska status fortfarande så gott som outforskat i magcancer, delvis på grund av längden och komplexiteten av denna gen [21]. Intressant nog har nya studier visat att DCC samt UNC5C tjäna som beroende receptorer för netrin-1, därmed förstärka deras potentiella roll som tumörundertryckare i humana cancerformer [22-25].
DCC-receptorer är fördelade utmed längden av epitelet i tarmen, medan netrin-1 är differentiellt uttryckt, som bildar en gradient inom mag-tarmkanalen [24]. En hög koncentration av netrin-1 är närvarande vid kryptan bas där stamceller och övergående förstärkningskroppar uppe. Däremot föreligger en låg koncentration av netrin-1 vid spetsen av villi, där många celler genomgår apoptos och sårskorpa-off. Detta netrin-1-gradient undersöktes ytterligare med användning av transgena möss för att bestämma om netrin-1 ansvarar för att reglera DCC-inducerad apoptos i tarmepitelet [24]. Studien av Mazelin et al. indikerade att netrin-1 överexpression orsakade en minskning i intestinal epitelial celldöd, medan ingen ökning i proliferation och differentiering av celler observerades. Däremot uppvisade netrin-1-mutant nyfödda möss ökad celldöd. Sammantaget stöder dessa data konceptet att netrin-1 reglerar apoptos genom DCC-beroende receptor i tarmen. Dock är netrin-1 osannolikt att en direkt regulator av tarm homeostas, med tanke på att normal epitelvävnad organisation inte störs av netrin-1 uttryck [24].
Likhet med DCC-receptorer, andra netrin-1 receptorer, inklusive UNC5A, UNC5B och UNC5C, upptäcktes också som förmodade tumörsuppressorgener i olika tumörer, däribland magcancer [26, 27]. I synnerhet en dubbel nedreglering av UNC5C uttryck jämfört med motsvarande normala vävnader observerades hos cirka 70% av gastric cancerfall [26]. Denna region är belägen vid 4q21-23, vilket ofta är ett ställe för deletion i magsäckscancer och är associerad med epigenetisk geninaktivering, såsom promotor metylering [26-28].
I denna studie vi hypotesen att nedreglering av DCC och UNC5C spelar en viktig tillväxtreglerande funktion i magsäcken tumörbildning, som vi riktat genom att undersöka en panel av magcancer cellinjer och kliniska prover från patienter med magcancer. Häri rapporterar vi att majoriteten av magcancer visar förlust av både netrin-1-receptorer. Vi tillhandahåller även data som antyder att inaktiveringen av dessa receptorer medieras genom både genetiska och epigenetiska mekanismer. Ackumulerade defekter i dessa två beroende receptorer signifikant samband med CIN fenotypen, betona vikten av dessa nya rön och denna tillväxtreglerande väg i gastric cancer.
Resultat
Kännetecken för gastric cancerpatienter
av 98 magcancer patienter var 34 patienter kvinnor (35%), och 48 tumörer patologiskt diagnosen differentierade (49%) (tabell 1). När det gäller TNM stadium, 18, 29, 37, och 14 gastric cancerpatienter klassificerades som stadium I, II, III, och IV resp. Av tumör genetiska analyser, var 13 gastric cancer kategoriseras som visar mikro instabilitet (MSI, 13%). Medelvärdet LOH förhållandet av de 98 tumörerna var 0,24 (standardavvikelse (SD), ± 0,3) .table 1 Kännetecken för gastric cancerpatienter
Karakteristisk
Procent (Nr)
Ålder
Genomsnittsålder (SD) Review 65,1 (11,8) Review Kön
Kvinna
35 (34) Review Man
65 (64) Review histologi
Diff
49 (48) Review Undiff
51 (50) Review Stage
IA /IB
18 (18) Review IIA /IIB
30 (29) Review IIIA /IIIB /IIIC
38 (37) Review IV
14 (14) katalog T
T1a /1b
14 (14) Review T2
14 (14 ) Review T3
28 (27) Review T4A /4b
44 (43) Review N
N0
27 (26) Review N1
35 (34 ) Review N2
24 (24) Review N3
14 (14) Review fjärrmetastaser
Negativ
86 (84) Review Positiv
14 (14)
MSI
MSI
13 (13) Review icke-MSI
87 (85) Review LOH Ratio
medelvärde (SD) Review 0,24 (0,3 ) katalog CIN
Positiv
51 (50) Review Negativ
47 (46) Review Inte informativ
2 (2) katalog KRAS
Mutant
5 (5) Review Wild
95 (93) katalog BRAF
Mutant
0 (0) Review Wild
100 (98) Review PIK3CA
Mutant
4 (3) Review Wild
96 (94) katalog H.pyroli
Positiv
71 (70) Review Negativ
29 (28) Review CIN fenotypen kategoriserades genom att beräkna LOH förhållandet mellan informativa markörer för de sju polymorfa mikrosekvenser, oberoende av 4q och 18q loci. När en tumör visade en LOH förhållande högre än 0, var tumören kategoriseras som CIN-positiv. Genom detta kriterium var 50/98 tumörer (51%) klassificeras som CIN-positiva.
Direkt sekvensering av gastriska cancerprover avslöjade andelen KRAS
, BRAF
och PIK3CA
mutationer (tabell 1). Mutationer upptäcktes i KRAS
kodon 12 (5%, N
= 5/98) och kodon 13 (1%, N
= 1/98); BRAF
kodon 600 (0%, N
= 0/98); PIK3CA
kodon 545 (1%, N
= 1/98); och kodon 1047 (3%, N
= 3/98). KRAS
kodon 12 mutationer bestod av G12D (35G till A, N
= 4) och G12R (34G till C, N
= 1), och kodon 13 mutationer ingår G13D (38G till A, N
= 1). Intressant, en tumör visas både KRAS
kodon 12 och 13 mutationer (Ytterligare fil 1: Figur S1A). PIK3CA
exon 9 mutationer bestod E545K (1633G till A, N
= 1), medan exon 20 mutationer bestod H1047R (3140A till G, N
= 3). Dessutom bestämde vi infektionsstatus av H. pylori Musik av återvinna cagA
genotyp (Ytterligare fil 1: Figur S1B). Genom denna analys kan vi återvinna cagA
sekvensen från 70 magcancer vävnader (71%).
Metylering status DCC
i magcancer prover och tillsammans med kliniskt patologiska egenskaper
Vi undersökte DCC
metylering status i 98 gastric cancer och 105 normala magslemhinnan exemplar. Placering av DCC
genen och resultaten av en panel av representativa kombinerad bisulfit restriktionsanalyser (COBRA) är avbildade i Fig. 1a-b; dessa resultat analyserades som kontinuerliga variabler (fig. 1c). Vi fann att 56/98 gastric cancer (57%) och 31/105 normala magslemhinnan prover (29,5%) visade mer än 1,0% metylering i DCC
promotorn. Den genomsnittliga metylering nivån var 18,3% [95% konfidensintervall (CI), 14,5-22,2%] bland magcancer vävnader som visas under 1,0% metylering i DCC
promotorn och 4,9% (95% CI, 3,3-6,5% ) i motsvarande normala magslemhinnan exemplar som visas över 1,0% metylering (P Hotel < 0,0001, Wilcoxon /Kruskal-Wallis test, Fig. 1c-d). Därför fastställde vi en DCC
metylering av 5% eller mer som en kontinuerlig variabel (dvs. > 5,0% metylering definierades som metylering-positiva (denaturerad) och < 5,0% metylering som metylering-negativa (ometylerade)) . Genom att använda detta kriterium, observerade vi DCC
metylerade fall 44/98 gastric cancer (45%) och 9/105 normal magslemhinna (9%). Fikon. En DCC
promotor metylering och 18q LOH-analyser. (A) Schematisk representation av placeringen av de tre LOH prober och DCC
gen promotorregionerna i kromosom 18. Den röda linjen
betecknar DCC
genen. Grå Mössor och svarta fyrkanter
representerar oöversatta och kodnings exon 1-regionerna, respektive; pilar på torgen
indikerar transkriptionsstartplatser; vertikala linjer
visar CpG platser; vita diamanter
representerar restriktionsställen för Hhal; tjocka horisontella linjer
skildrar platser av COBRA produkter; pilar på de tjocka horisontella linjer
betecknar COBRA primers. (B) Representativa resultat av COBRA DCC. Pilar
indikerar metylerade alleler; M
betecknar metylering; U
betecknar unmethylation; Mc
betecknar den metylerade kontroll; SM
betecknar storleksmarkör. (c) Resultat av DCC
metylering som en kontinuerlig variabel. I rutan plotdiagram,
den horisontella linjen i varje ruta representerar medianen, gränserna
av varje ruta representerar interkvartilt område, och whiskers
är den högsta och lägsta värden. Varje grön stapel
representerar medelvärdet. NM
betecknar normal slemhinna. T
betecknar tumör. (D) Frekvensen av metylering-positivitet av cancer och normala vävnader enligt olika tröskelvärden. (E) DCC
mRNA expressionsnivåer och metylering status i 10 gastriska cancercellinjer och en human lunga fibroblastcellinje. DCC
mRNA-expression observeras (lägre ΔCT) i GCIY och NHLH cellinjer. DW betecknar destillerat vatten
Därefter undersökte vi sambandet mellan DCC
promotor metylering och olika kliniskt patologiska och genetiska egenskaper. DCC
metylering status var signifikant associerad med MSI status. MSI-positiva gastric cancer signifikant oftare i samband med DCC
metylering än med DCC
unmethylation (23 jämfört med 6%, P
= 0,013; tabell 2). Det fanns inga signifikanta samband mellan DCC
metylering status och alla andra variables.Table två associering mellan epigenetiska /genetiska förändringar av DCC-genen och kliniskt patologiska funktioner i gastric cancer
DCC
Metylering Status-% ( No.)
18q LOH Status-% (nr)
DCC
Ändring Status-% (nr)
Unmethylation
Metylering
P
Inte informativ
Negativ
Positiv
P
Inte informativ
Negativ
Positiv
Positiv
P
Totalt
Metylering ensam

ensam LOH
Både
(n
= 54)
(n
= 44)
(n
= 15)
(n
= 47)
(n
= 36)
(n
= 15) katalog
(n
= 25)
(n
= 58)
(n
= 22)
(n
= 19 )
(n
= 17)
ålder
Medelålder (SD) Review 63,6 (12,5) Review 67,0 (10,7) Review 0.48a
68,9 (11,4) Review 64,8 (11,4) Review 63,9 (12,4) Review 0.76a
68,9 (11,4) Review 63,5 (12,9) Review 64,8 (11,3) Review 66,3 (9,5) Review 60,7 (12,7) Review 67,4 (11,4) Review 0.98a
Kön
Kvinna
39 (21) Review 30 (13) Review 0.33b
40 (6) Review 38 (18) Review 28 (10) katalog 0.32b
40 (6) Review 44 (11) Review 29 (17) Review 32 (7) Review 32 (6) Review 24 (4) Review 0.19b
Man
61 (23) Review 70 (31) Review 60 (9) Review 62 (29) Review 72 (26) Review 60 (9) Review 56 (14) Review 71 (41) Review 68 (15) Review 68 (13) Review 76 (13) Review histologi
Diff
41 (22) Review 59 (26) Review 0.071b
47 (7) Review 55 (26) Review 42 (15 ) katalog 0.22b
47 (7) Review 52 (13) Review 48 (28) Review 59 (13) Review 32 (6) Review 53 (9)
076b
Undiff
59 (32) Review 41 (18) Review 53 (8) Review 45 (21) Review 58 (21) Review 53 (8)
48 (12) Review 52 (30) Review 41 (9) Review 68 (13) Review 47 (8) Review Stage
IA /IB
20 (11)
16 (7)
0.83b
13 (2) Review 19 (9) Review 19 (7) Review 0.15b
13 (2) Review 24 ( 6) Review 17 (10) Review 14 (3) Review 21 (4) Review 18 (3) katalog 0.70b
IIA /IIB
26 (14)
34 (15) Review 27 (4) Review 30 (14) Review 31 (11) Review 27 (4) Review 24 (6) Review 33 (19) Review 36 (8) Review 32 (6) Review 29 (5) Review IIIA /IIIB /IIC
39 (21) Review 36 (16) Review 53 (8) Review 43 (20) Review 25 (9) Review 53 (8) Review 40 (10) Review 33 (19) Review 45 (10) Review 26 (5) Review 24 (4) Review IV
15 (8) Review 14 (6) Review 7 (1) Review 9 (4) Review 25 (9) Review 7 (1)
12 (3) Review 17 (10) Review 5 (1) Review 21 (4) Review 29 (5) katalog T
T1a /1b
15 (8 ) Review 14 (6) katalog 0.24b
7 (1) Review 17 (8) Review 14 (5) katalog 0.94b
7 (1) Review 16 (4) Review 16 (9) Review 18 (4) Review 21 (4) Review 6 (1) Review 0.54b
T2
13 (7) Review 16 (7) Review 13 (2) Review 15 (7) Review 14 (5) Review 13 (2) Review 16 (4) Review 14 (8) Review 14 (3) Review 11 (2) Review 18 (3) Review T3
20 (11) Review 36 (16) Review 33 (5) Review 28 (13)
25 (9) Review 33 (5) Review 16 (4) Review 31 (18) Review 41 (9) Review 16 (3) Review 35 (6)
T4A /b
52 (28) Review 34 (15) Review 47 (7) Review 40 (19) Review 47 (17) Review 47 (7) Review 52 (13) Review 40 (23) Review 27 (6) Review 53 (10) Review 41 (7) Review N
N0
30 (16) Review 23 (10) Review 0.66b
20 (3) Review 28 (13) Review 28 (10) Review 0.29b
20 (3) Review 32 (8)
26 (15) Review 23 (5) Review 32 (6) Review 24 (4) Review 0.19b
N1
37 (20) Review 32 (14)
47 (7) Review 38 (18) Review 25 (9) Review 47 (7) Review 44 (11) Review 28 (16) Review 32 (7)
26 (5) Review 24 (4) Review N2
20 (11) Review 30 (13) Review 20 (3) Review 26 (12) Review 25 (9 ) Review 20 (3) Review 20 (5) Review 28 (16) Review 32 (7) Review 21 (4) Review 29 (5) katalog N3
13 (7) Review 16 (7) Review 13 (2) Review 9 (4) Review 22 (8) Review 13 (2) Review 4 (1) Review 19 (11) Review 14 (3) Review 21 (4) Review 24 (4) Review fjärrmetastaser
Negativ
85 (46) Review 86 (38) Review 0.87b
93 (14) Review 91 (43) Review 75 (27) katalog 0.041b
93 (14) Review 88 (22) Review 83 (48)
95 (21) Review 79 (15) Review 71 (12) Review 0.55b
Positiv
15 (8) Review 14 (6) Review 7 (1)
9 (4) Review 25 (9) Review 7 (1) Review 12 (3) Review 17 (10) Review 5 (1) Review 21 (4)
29 (5) Review MSI status
MSI
6 (3) Review 23 (10) Review 0.013b ​​
33 (5) Review 9 (4)
11 (4) Review 0.69b
33 (5) Review 4 (1) Review 12 (7) Review 14 (3) Review 0 (0) Review 24 ( 4) Review 0.25b
Icke-MSI
94 (51) Review 77 (34) Review 67 (10) Review 91 (43) Review 89 (32)
67 (10) Review 96 (24) Review 88 (51) Review 86 (19) Review 100 (19) Review 76 (13) Review LOH förhållande
genomsnittlig kvot (SD) Review 0,23 (0,30) Review 0,26 (0,31) Review 0.55a
0,22 (0,29) Review 0,10 (0,15) Review 0,44 (0,36) Hotel < 0.0001a
0,22 (0,29) Review 0,05 (0,10) Review 0,33 (0,33) Review 0,16 (0,18) Review 0,44 (0,34) Review 0,44 (0,39) Hotel < 0.0001a
CIN *
Positiv
46 (25) Review 57 (25) katalog 0.39b
47 (7) Review 38 (18) Review 74 (25)
0.0017b
47 (7) Review 24 (6) Review 66 (37) Review 55 (12) Review 76 (13) Review 71 (12) Review 0.0005b
Negativ
54 (27) Review 43 (19) Review 53 (8) Review 62 (29) Review 26 (9) Review 53 (8) Review 76 (19) Review 34 (19) Review 45 (10) Review 24 (4) Review 29 (5) katalog KRAS
/BRAF
/PIK3CA

Mutant
6 (3) Review 11 (5) katalog 0.30b
27 (4) Review 6 (3) Review 3 (1) katalog 0.45b
27 (4) katalog 4 (1) Review 5 (3) Review 9 (2) Review 5 (1) Review 0 (0) katalog 0.82b
Wild
94 (51) Review 89 (38) Review 73 (11) Review 94 (44) Review 97 (35) Review 73 (11) Review 96 (24) Review 95 (55) Review 91 (20) Review 95 (18) Review 100 (17) katalog H.pyroli
Positiv
72 (39) Review 70 (31)
0.85b
80 (12) Review 66 (31) Review 75 (27) Review 0.37b
80 (12) Review 60 (15) Review 74 (43 ) Review 73 (16) Review 79 (15) Review 71 (12) katalog 0.20b
Negativ
28 (15) Review 30 (13) Review 20 ( 3) Review 34 (16) Review 25 (9) Review 20 (3) Review 40 (10) Review 26 (15) Review 27 (6) Review 21 (4 ) Review 29 (5) Review * Två fall är inte informativa CIN status
ett P
värde beräknades mellan unmethylation och metylering, 18qLOH negativ och positiv, och DCC förändring negativ och positiv (totalt) genom Wilcoxon /Kruskal-Wallis testet
b p
värden beräknades mellan unmethylation och metylering, 18qLOH negativ och positiv, och DCC förändring negativ och positiv (totalt) av Piason s chitvåtest
LOH av 18q locus associerad med CIN fenotyp i magcancer
Bland informativa fall frekvenserna av 18q LOH vid varje mikrosatellitmarkören var 14/41 (24%) vid D18S35, 17/55 (31%) vid D18S69, och 21/58 (36 %) vid D18S58 (platsen för varje tillverkare visas i Fig. 1a). Tumörer som visar LOH alls tre, två, och endast en av de tre mikrosatellitmarkörer var 4 (4,8%), 9 (11%), och 23 (28%) av 83 informativa fall bland 98 primära gastric cancer, respektive. Tumörer som visar LOH i åtminstone en av de tre mikrosatellitmarkörer för 18q LOH kategoriserades som 18q LOH-positiva. Genom detta kriterium var 18q LOH-positiva cancer upptäcks i 36 (43%) av 83 informativa fall bland 98 primära gastric cancer (tabell 2).
Likhet med DCC
metylering status undersökte vi associationer mellan 18q LOH status och olika kliniskt patologiska och genetiska egenskaper. Bland informativa fall, frekvensen av magsäckscancer med fjärrmetastaser var högre i 18q LOH-positiv gastric cancer jämfört med 18q LOH-negativa cancer (25 vs. 9%, P
= 0,041; tabell 2). De LOH förhållanden beräknas för de övriga sju loci var också signifikant högre för 18q LOH-positiva än för 18q LOH-negativa tumörer (0,44 jämfört med 0,10, P Hotel < 0001, tabell 2). Enligt dessa resultat, när en tumör visade en LOH förhållande högre än 0, var tumören kategoriseras som CIN-positiv. Vidare CIN-positiva gastric cancer som också var 18q LOH-positiva var betydligt rikligare än de som var 18q LOH-negativa (74 jämfört med 38%, P
= 0,0017, Tabell 2). Tidigare studier har visat att 18q förlust är allmänt observeras i kolorektala cancrar, och dess frekvens är korrelerad med CIN fenotypen men omvänt korrelerade med MSI fenotyp [29, 30]. Som vår studie och en annan studie visade, var detta fenomen även reproduceras för magcancer [18].
Expression och metylering status DCC
i gastric cancercellinjer
att bedöma samband mellan DCC
uttryck status och epigenetiska förändringar i DCC
genen, undersökte vi budbärar-RNA (mRNA) nivåer genom omvänd transkription kvantitativ polymeraskedjereaktion (RT-qPCR) med användning av en primer set tidigare beskrivits [31] och undersöktes associationer mellan DCC
uttryck och CpG-metylering status i DCC
promotorregionen i 10 gastriska cancercellinjer (MKN7, N87, MKN74, MKN45, NUGC-2, NUGC-3, NUGC-4, GCIY, Ogum-1, och MKN1) och en normal lungfibroblast-cellinjen (NHLF). Alla cellinjer, förutom MKN74, GCIY, Ogum-1, MKN1 och NHLF celler, visade minskat uttryck av DCC
gentranskript, och deras promotorer metylerades (Fig. 1e). Å andra sidan, även om tre cellinjer, N87, Ogum-1, och MKN1 uppvisade minskad expression av DCC
gentranskript, var DCC
promotorer i dessa celler inte metyleras genom COBRA. Bland de 10 gastriska cancercellinjer, endast den GCIY cellinjen uttryckte DCC
transkript på samma nivå som NHLF celler, men dess promotor var metylerad. När vi kategoriseras en cellinje visar aΔC T av mer än 15,0 som DCC
uttryck negativa och en cellinje med aΔC T 15,0 eller mindre som DCC
uttryck-positiva, bara GCIY cellinje kan kategoriseras som DCC
uttryck-positiva bland de sju gastric cancercellinjer med DCC
metylering; detta fynd var statistiskt icke-signifikant.
Minskning av DCC uttryck kräver både genetiska och epigenetiska förändringar
Därefter undersökte vi sambandet mellan DCC proteinuttryck och genetiska och epigenetiska förändringar i DCC
genen i 86 magcancer prover. Representativa exempel på immunohistokemi (IHC) färgningsresultaten visas i Fig. 2a-c. Vi kategoriserade tumörer i följande tre grupper baserade på IHC resultaten analyseras som en kategorisk variabel: total förlust av DCC uttryck (. 8 fall, 9%, fig 2a), fokal förlust av DCC uttryck (38 fall, 44%; Fig. 2b), och positiv DCC proteinuttryck (40 fall, 47%, fig. 2c). Bland 86 gastric cancer, 46 fall (53%) som visas minskas DCC uttryck. En tidigare studie rapporterade att minskad DCC uttryck observerades i totalt 38% av magcancer, och scenen T1-T2 tumörer haft en positiv DCC uttryck medan det avskaffades i T3 tumörer [32]. Detta konstaterande var också reproducerbar i denna studie (Ytterligare fil 2: Figur S2). Fikon. 2 DCC
promotor metylering och immunohistokemi analyser. Immunohistokemi Analys för DCC
(a-c). Kärnor av tumörceller är helt negativt (a), fokalt negativt (b), och positivt (c) färgas. (D) Föreningen mellan epigenetiska /genetisk förändring och DCC
uttryck
Därefter undersökte vi samband mellan genetiska och epigenetiska förändringar och DCC uttryck status. Sju av 8 fall med fullständig förlust, 33 av 38 fall med fokal förlust, och 34 av 40 fall med positiv DCC uttryck var informativ för både DCC
promotor metylering och 18q LOH. Vi fann att bland de cancerformer med total förlust av DCC uttryck, 5/7 cancer (71%) visade både DCC
promotor metylering och 18q LOH. I kontrast, 8/33 cancer (24%) visade fokal förlust av DCC-expression och både metylering och LOH, 5/33 cancer (15%) visade LOH ensam, och 12/33 cancer (36%) visas metylering ensam. Bland de cancerformer som var positiva för DCC uttryck, endast 2/34 cancer (6%) demonstrerade både metylering och LOH, 13/34 (38%) cancrar LOH ensam, och 8/34 cancer (24%) metylering enbart (cancrar som visar både DCC
metylering och 18q LOH mot de andra, P
= 0,0048, Pearsons chi-square test, fig. 2d). Våra data tyder på att en minskning av DCC uttryck kan kräva täta metylering i promotor CpG och LOH i 18q locus, enligt de två drabbade teori [33].
Associering mellan kliniskt patologiska egenskaper och genetiska /epigenetiska förändringar av DCC
i magcancer
Eftersom både epigenetiska och genetiska förändringar är avgörande för DCC undertryckande undersökte vi relationen mellan epigenetiska och genetiska förändringar i DCC
genen med olika kliniskt patologiska egenskaper. 98 gastric cancer, har 15 cancer kategoriseras som icke-informativ, var 25 cancer kategoriseras som negativ för DCC
förändringar, och 58 cancer kategoriserades som positiva för DCC
förändringar. Bland kliniskt patologiska funktioner, LOH förhållande och CIN fenotyp fördelning skilde sig signifikant mellan cancer negativa och positiva för DCC
förändringar (tabell 2).
Bland de 58 cancer med DCC
förändringar, 17 tumörer visade förändringar i både DCC
metylering och 18q LOH, 19 hade 18q LOH ensam, och 22 cancer uppvisade DCC
metylering ensam. Den LOH förhållandet beräknats för de övriga sju loci var signifikant högst i gastric cancer med både DCC
metylering och 18q LOH (medelvärde LOH förhållandet, 0,44, SD ± 0,39) och i cancer med enbart 18q LOH (medelvärde LOH förhållande, 0,44; SD ± 0,34), mellan i cancer med DCC
metylering ensam (medelvärde LOH förhållandet, 0,16, SD ± 0,18), och lägst i cancer negativ för DCC
förändringar (medelvärde LOH ratio, 0,05; SD ± 0,10; P Hotel < 0,0001, Wilcoxon /Kruskal-Wallis test). När vi kategoriserade gastric cancer med LOH förhållanden högre än 0 som CIN-positiv, 12/17 gastric cancer (71%) med både DCC
metylering och 18q LOH, 13/17 gastric cancer (76%) med 18q LOH ensam, Fikon. Fikon. Alla författare läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• Familj historia av cancer och gastroesofageal sjukdomar och risk för esofagus och mag adenokarcinom: en fall-kontrollstudie
• Dubbel båge Volumetric Modulated terapi förbättrar dosfördelningen jämfört med statisk portal IMRT och 3D-konform strålterapi för adjuvant behandling av gastrisk cancer