Genetiniai ir Epigenetiniai pakitimai netrin-1 receptorių skrandžio vėžio chromosomų instability

genetinių ir epigenetinių pakitimų netrin-1 receptorių skrandžio vėžio chromosomų nestabilumo pervežimas tezės
Background Viesbutis The genų išraiškos netrin-1 priklausomybės receptorius DCC parsisiųsti ir UNC5C
, dažnai downregulated daugelyje vėžio. Mes iškėlė hipotezę, kad downregulation DCC ir UNC5C turi svarbų augimo reguliavimo funkciją skrandžio Tumorigenesis.
Rezultatai
Šioje studijoje, genetinės seriją ir epigenetinius analizes DCC
ir UNC5C
buvo atlikti Japonijos kohortos 98 sporadinių skrandžio vėžio ir atitinkamų normaliomis skrandžio gleivinės egzempliorių. Praradimas heterozigotiškumu (LOH) analizuoja ir Mikrosatelitinis nestabilumas (MSI) analizė buvo taikoma siekiant nustatyti chromosomų nestabilumas (CIN) ir MSI fenotipų, atitinkamai. Daugiau nei 5% metilinimas į DCC
ir UNC5C
rengėjams buvo rasta 45% (44/98) ir 32% (31/98) skrandžio vėžys, atitinkamai, ir 9% (9/105) ir 5% (5/105) normalus skrandžio gleivinės, atitinkamai. Apskritai, 70% (58 iš 83 informaciniai atvejai) ir 51% (40 iš 79 informaciniai atvejai) skrandžio vėžio uostuose arba Loh arba netipiško metilinimas į DCC
ir UNC5C
genų, atitinkamai. Iš viso 77% (51 iš 66 informaciniai atvejai) skrandžio vėžio parodė kaupiamąjį defektų šių dviejų priklausomybės receptorių ir buvo reikšmingai susijęs su chromosomų nestabilumo. Tiek "DCC ir UNC5C buvo inaktyvuotas 97% CIN-teigiamų skrandžio vėžio ir 55% CIN neigiami skrandžio vėžio.
Išvadas
defektas netrin receptorių yra bendras bruožas skrandžio vėžio. DCC
pakitimai išryškėja ankstyvosiose stadijose, ir UNC5C
pakitimai peraugti su ligos progresavimo, o tai rodo, kad kaupiamosios pakitimai netrin-1 receptorių buvo vėlu renginys skrandžio vėžio progresavimo ir pabrėžiant tai svarbu augimo reguliavimo kelią skrandžio kancerogenezėje.
Raktiniai žodžiai
skrandžio vėžys Metilinimas chromosomų nestabilumas DCC
UNC5C
Netrin-1 receptorių faktai
Global sąmatos vėžio dažnis rangas skrandžio vėžio, kaip ir ketvirtoji dažniausia piktybinių navikų ir antra labiausiai paplitusi priežastis, dėl vėžio mirčių visame pasaulyje [1]. Skrandžio vėžys yra nevienalytė liga su keliais aplinkos etiologies ir alternatyvių keliai kancerogenezėje [2, 3]. Vienas iš pagrindinių etiologinėms rizikos veiksnių skrandžio vėžys yra Helicobacter pylori
(H. pylori
) infekcija. Ankstesni pranešimai nurodė 93,1-100% infekcijų dažnis H. pylori pervežimas pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, o tik 1,2-2,8% infekuotų H. pylori pervežimas plėtoti skrandžio vėžiu [4-7] asmenims.
Dabartinis žinių apie molekulinius mechanizmus pagrindinių skrandžio kancerogenezės rodo vieną svarbų epigenetinius nestabilumo kelią ir du pagrindinius genetinio nestabilumo kelius [8]. Pagrindinis epigenetinius nestabilumas kelias apibrėžiamas kaip CpG sala methylator fenotipo (CIMP), kuris iš pradžių buvo aprašyta kolorektalinio vėžio ir taip pat pastebėta, kad skrandžio vėžio pogrupyje ir kuri priglaudžia kritinį laipsnį nukrypusiu nuo normos promotoriaus hypermethylation, susijusios su transkripcijos nuslopinami išsėtinės naviko slopintuvas genų [9, 10]. Dvi pagrindinės genetinio nestabilumo keliai yra mikrosatelitinio nestabilumą (MSI) ir chromosomų nestabilumas (CIN) [8]. MSI apibrėžiamas kaip replikacijos klaidų buvimo paprastų pasikartojančių mikrosatelitinius sekų, kurias sukelia nesutapimas remonto (MMR) trūkumų. Vienas iš jų yra Lynch "sindromas, kurį sukelia gemalo mutacijų MMR genų ir kita yra atsitiktinis MSI sukelia daugiausia promotoriaus hypermethylation Į MLH1
geno [10, 11]. Kita vertus, CIN, kuriai būdingas chromosomų pakitimų-arba kokybinis arba kiekybinis-yra labiau paplitęs būdas, kuris gali apimti clinicopathologically ir molekules nevienalyčių navikai [8].
Vėžys genomo atlasas tyrimų tinklas neseniai padalintas skrandžio vėžio į keturi potipiai [12]. Navikai buvo pirmą kartą skirstomi pagal Epstein-Barr viruso (EBV) -positivity (9%), tada MSI-aukšto statuso, toliau vadinamas MSI teigiamas (22%), o likusios navikai buvo klasifikuojami pagal laipsnio Aneuploidijos į tuos, vadinama genomically stabilus (20%) arba tiems, eksponuoti CIN (50%). EBV-teigiamas vėžys taip pat MSI teigiami vėžio buvo žinoma, kad klasteris kiekvienas savo, eksponuoti ekstremalių CIMP. Skirtumai tarp EBV CIMP ir MSI, susijusių skrandžio-CIMP metilinimas profilių iliustruoja faktas, kad visi EBV-teigiamas navikai tiriami rodomas CDKN2A
(p16INK4A
) promotorių hypermethylation bet trūko MLH1
hypermethylation charakteristika MSI susijęs CIMP.
atsižvelgiant į CIN būdingas kopija skaičius pokyčių chromosomų, Dan ir kt. Naudota aukštos rezoliucijos genomo analizė profilis somatinių kopijos numeris pakitimus iš 233 skrandžio vėžio (pirminius navikus ir ląstelių linijos), ir 98 suderintų skrandžio nepiktybinių audinių skydelyje. Dėl plataus chromosomų regionai, dažniausiai sustiprina regionas įtrauktas chromosomų 1Q, 5p, 6p, 7p, 7Q, 8q, 13q, 19p, 20 p, ir 20Q, ir dažniausiai ištrinta regionais, įtrauktais chromosomų 3P, 4P, 4Q, 5q, 6Q , 9p, 14q, 18q, ir 21q [13].
Dažnai ištrinti chromosomų regionai, paprastai būdingas nuostolių heterozigotiškumu (LOH) ir pasiūlyti auglio slopintuvas genų [14, 15] buvimą. LOH chromosomos 18q21 randama 30-71% skrandžio vėžio [13, 16-18] ir DPC4
(Smad4
) /DCC
buvo postuluojama, kad pagrindiniai tikslai. DPC4
(Smad4
), navikas slopintuvas genų, eksponatų dažnai mutacijas lydi LOH maždaug 20% ​​kasos vėžio [19], tačiau nėra mutacijos buvo pranešta apie skrandžio vėžio [20]. Priešingai, keletas tyrimų buvo siekiama DCC
genų pakitimų ir jo genetinę /epigenetinius statusas išlieka beveik neištirta skrandžio vėžio, iš dalies dėl ilgio ir sudėtingumo šio geno [21]. Įdomu tai, kad naujausi tyrimai parodė, kad DCC taip pat UNC5C tarnauti kaip priklausomybės receptorių netrin-1, todėl stiprinant kaip naviko slopintuvai žmogaus vėžio [22-25] jų galimą vaidmenį.
DCC receptorius platinami išilgai ilgio iš žarnyne, o epitelio, kadangi netrin-1 yra skirtingai išreikštas, formavimo gradientas per virškinimo trakto [24]. Didelės koncentracijos netrin-1 yra dalyvauti kriptų bazę, kur kamieninės ląstelės ir pereinamųjų stiprinančių ląstelių gyvena. Priešingai, mažos koncentracijos netrin-1 egzistuoja ties Willy, kur daug ląstelės išgyvena apoptozę ir sloughing-off galiuko. Tai netrin-1 gradientas buvo toliau tiriama naudojant transgeninių pelių siekiant nustatyti, ar netrin-1 yra atsakingas už reguliavimo DCC-sukeltas apoptozę žarnyno epitelio [24]. Tyrimas pagal Mazelin et al. nurodė, kad netrin-1 raišką sukėlė į žarnyno epitelio ląstelių žūtį sumažėjo, o nepastebėta, platinimu ir diferenciacijos ląstelių padidėjimas. Priešingai, netrin-1-mutantas naujagimis pelės eksponuojami padidėjo ląstelių žūtį. Kartu šie duomenys patvirtina koncepciją, netrin-1 reguliuoja apoptozę per DCC-priklausomybės receptorius žarnyne. Tačiau netrin-1 yra mažai tikėtina, kad yra tiesioginis reguliatorius žarnyno homeostazės, nes normalus epitelio organizacija nėra sutrikdyta netrin-1 raiškos [24].
Panašus į DCC receptorių, kiti netrin-1 receptorių, įskaitant UNC5A, UNC5B, ir UNC5C, taip pat buvo atrasta kaip tariamų navikų supresorinių genų įvairių auglių, įskaitant skrandžio vėžio [26, 27]. Visų pirma, dvejopas downregulation iš UNC5C išraiška palyginti su atitinkamu normaliuose audiniuose pasireiškė maždaug 70% skrandžio vėžio atvejų [26]. Šis regionas yra ne 4q21-23, kuris dažnai yra ištrynimą skrandžio vėžio svetainė ir yra susijęs su epigenetinio genų nukenksminti, pavyzdžiui, promotoriaus metilinimo [26-28].
Šiame tyrime mes iškėlė hipotezę, kad downregulation DCC ir UNC5C vaidina svarbų augimo reguliavimo funkciją skrandžio tumorigenesis, kurią mes spręsti tiriant iš skrandžio vėžio ląstelių linijų ir klinikinių mėginių iš pacientų, sergančių skrandžio vėžiu skydelį. Čia, mes pranešti, kad skrandžio vėžio dauguma rodo nuostolių abiejų netrin-1 receptorių. Mes taip pat teikia duomenis, rodančius, kad šių receptorių inaktyvacijai tarpininkaujant per tiek genetinių ir epigenetinių mechanizmus. Suvestiniai defektai šių dviejų priklausomybės receptorių yra reikšmingai susijęs su CIN fenotipo, pabrėžiant šių naujų išvadų svarbą ir šį augimą reguliavimo kelią skrandžio kancerogenezėje.
Rezultatai
Charakteristikos skrandžio vėžiu sergantiems pacientams
98 skrandžio vėžiu pacientai, 34 pacientai buvo moterų (35%), ir 48 navikai buvo patologiškai diagnozuota kaip besiskiriančių (49%) (1 lentelė). Kalbant apie TNM etape, 18, 29, 37, ir 14 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams buvo klasifikuojamas kaip I etapo, II, III, ir IV, atitinkamai. Auglio genetinių analizių, 13 skrandžio vėžio buvo klasifikuojama kaip rodyti mikrosatelitinio nestabilumą (MSI; 13%). Vidutinė LOH santykis 98 auglių buvo 0,24 (standartinis nuokrypis (SN), ± 0,3) .table 1 Charakteristikos skrandžio vėžiu sergantiems pacientams
Būdinga
procentais (No.)

Amžius
amžiaus vidurkis (SD)
65,1 (11,8)
Lytis
Moteris
35 (34)
Vyras
65 (64)
Histologija
DA
49 (48)
Undiff
51 (50)
etapas
LS /IB
18
(18)
TIS /IIB
30 (29) IIIA /III B /IIIC
38 (37)
IV
14 (14)
T
T1a /1b
14 (14)
T2
14 (14 )
T3
28 (27)
T4A /4b
44 (43)
N.
N0
27 (26)
N1
35 (34 )
N2
24 (24)
N3
14 (14)
Tolima metastazės
Neigiama
86 (84)
Teigiamas
14 (14)
MSI
MSI
13 (13)
Non-MSI
87 (85)
LOH santykis

vidutinis santykis (SD)
0,24 (0,3 )
CIN
teigiamą
51 (50)
Neigiama
informaciniais
47 (46)
Ne 2 (2)
KRAS
mutantas
5 (5)
Laukiniai
BRAF

Mutant
95 (93): 0 (0)
Laukiniai
100 (98) PIK3CA
mutantas
(3)
Laukiniai
96 (94)
H.pyroli
teigiamą
4 71 (70)
Neigiamas 29 (28)
CIN fenotipas buvo suskirstyti skaičiuojant Loh santykis informaciniams žymenų septynių polimorfines mikrosatelitinių sekas, nepriklausomai nuo 4Q ir 18q loci. Kai navikas parodė didelį LOH santykis buvo didesnis nei 0, navikas buvo klasifikuojama kaip CIN-teigiamas. Šiuo kriterijumi, 50/98 navikai (51%) buvo klasifikuojami kaip CIN-teigiamas.
Tiesioginiai seka skrandžio vėžio egzempliorių atskleidė KRAS
, BRAF
ir PIK3CA
mutacijų (lentelė dalis 1). Mutacijos buvo aptikta KRAS
kodono 12 (5%, N
= 5/98) ir kodonus 13 (1% N
= 1/98); BRAF
kodono 600 (0%, N
= 0/98); PIK3CA
kodono 545 (1%, N
= 1/98); ir kodonas 1047 (3%, N
= 3/98). KRAS
kodono 12 mutacijų sudarė G12D (35g A, N
= 4) ir G12R (34g C, N
= 1), kodonus 13 mutacijų įtraukti G13D (38g A, N
= 1). Įdomu tai, kad vienas navikas rodomas tiek kras
kodoną 12 ir 13 mutacijų (Papildoma failų 1: S1A pav). PIK3CA
Exon 9 mutacijos sudaro E545K (1633G A, N
= 1), o Exon 20 mutacijos sudaro H1047R (3140A G, N
= 3). Be to, mes nustatoma infekcija statusas H. pylori
susigrąžinant CagA
genotipą (papildomas failo 1: S1B pav). Per šią analizę, galėtume susigrąžinti į CagA
seka iš 70 skrandžio vėžiu audinių (71%).
Metilinimas statusą DCC
skrandžio vėžio egzempliorių ir asociacijos klinikos funkcijų
Mes tirtų DCC
metilinimas statusas 98 skrandžio vėžiu ir 105 normalios skrandžio gleivinės egzempliorių. Vieta DCC
geno ir sutarties dėl atstovaujamosios kartu bisulfito apribojimas skydelyje rezultatai analizuojami (COBRA) yra pavaizduota paveiksle. 1a-b; šie rezultatai buvo analizuojami kaip nuolat kintamųjų (pav. 1c). Mes nustatėme, kad 56/98 skrandžio vėžio (57%) ir 31/105 normalus skrandžio gleivinės mėginiai (29,5%) eksponuojama daugiau kaip 1,0% metilinimas yra DCC
rengėjas. Vidutinė metilinimas lygis buvo 18,3% [95% pasikliautinasis intervalas (PI), 14,5-22,2%] tarp skrandžio vėžio audiniuose, kad rodomų per 1,0% metilinimo į DCC
promotoriaus ir 4,9% (95% PI 3,3-6,5% ) į atitinkamus normaliomis skrandžio gleivinės egzemplioriams, kurie rodomi per 1,0% metilinimo (p
< 0,0001, Vilkoksono /Kruskal-Wallis testas; pav. 1c-d). Todėl mes apibrėžta DCC
metilinimas 5% arba daugiau kaip tolydžiai kintamu (ty > 5,0% metilinimas buvo apibrėžtas kaip metilinimas teigiamas (metilo) ir < 5,0% metilinimo kaip metilinimo neigiamas (nemetilintas)) , Naudojant šį kriterijų, mes nustatėme, DCC
denatūruoti atvejus 44/98 skrandžio vėžio (45%) ir 9/105 normalų skrandžio gleivinės (9%). Pav. 1 DCC
rengėjas metilinimas ir 18q LOH analizes. (A) schema atstovavimas trijų Loh zondų ir DCC
geno promotoriaus regionų chromosomos 18. Raudona linija žymi
DCC
geną vietą. Pilki parsisiųsti ir juodi kvadratai
atstovauja neišverstas ir kodavimas Exon 1 regionai, atitinkamai; rodyklės ant kvadratų
rodo transkripcijos starto vietas; vertikalios linijos
nurodyti CpG svetaines; balti deimantai
atstovauja apribojimo vietų AluI; storio horizontaliomis linijomis
vaizduoti COBRA produktai vietas; rodykles storio horizontaliomis linijomis
pažymėti COBRA pradmenis. (B) Reprezentacinės rezultatai COBRA DCC. Rodyklės
nurodyti denatūruoti alelių; M
žymi metilinimas; U
žymi unmethylation; Mc
žymi metilintas kontrolę; S.
reiškia dydį žymeklį. (c) rezultatai DCC
metilinimo kaip nuolat kintama. Langelyje sklypo schemos, horizontali linija
Kiekviename lange yra medianą, ribos
kiekvienos dėžutės atstovauti interkvartiliniais intervalais, o ūsai
yra didžiausi ir mažiausi dydžiai. Kiekvienas žalia juosta
atstovauja vidurkį. N.
reiškia normalų gleivinę. T
žymi auglį. (D) metilinimo-pozityvumo vėžio ir normaliuose audiniuose, atsižvelgiant į skirtingus ribas dažnis. (E) DCC
iRNR raiška lygiai ir metilinimas statusas 10 skrandžio vėžio ląstelių linijų ir žmogaus plaučių fibroblastų ląstelių linija. DCC
iRNR raiška pastebima (mažesnės ΔCT) į GCIY ir NHLH ląstelių linijų. DW žymi Distiliuotas vanduo
Be to, mes ištirti ryšį tarp DCC
promotoriaus metilinimo ir įvairių klinikos ir genetinių bruožų asociacija. DCC
metilinimas statusas buvo reikšmingai susijęs su MSI statusą. MSI teigiami skrandžio vėžio buvo reikšmingai dažniau siejama su DCC
metilinimo nei su DCC
unmethylation (23 vs 6%, p
= 0,013, 2 lentelė). Nebuvo jokių reikšmingų asociacijos tarp DCC
metilinimo statuso ir bet kuri kita variables.Table 2 asociacija tarp epigenetinių /genetinių pakitimų DCC geno ir klinikos funkcijų skrandžio vėžio
DCC
Metilinimas Status-% ( Ne)
18q LOH Status-% (Ne)
DCC
keitimas Status-% (Ne)
Unmethylation
Metilinimas
P
Ne informatyvus
Neigiama

teigiamą
P
Ne informatyvus
Neigiama

Teigiamas
Teigiamas
P
viso
metilinimas vien

vien LOH

Tiek
(N
= 54)
(N
= 44)
(N
= 15)
(N
= 47)
(N
= 36)
(N
= 15)

(N
= 25)
(N
= 58)
(N
= 22)
(N
= 19 )
(N
= 17)
Amžius
amžiaus vidurkis (SD)
63,6 (12,5)
67,0 (10,7)
0.48a
68,9 (11,4)
64,8 (11,4)
63,9 (12,4)
0.76a
68,9 (11,4) pervežimas 63,5 (12,9) pervežimas 64,8 (11,3) pervežimas 66,3 (9.5)
60,7 (12,7)
67,4 (11,4)
0.98a
Lytis
Moteris
39 (21)
30 (13)
0.33b <(6)
Br> 40 38 (18)
28 (10)
(6)
0.32b
40 44 (11)
29
(17) 32 (7)
32 (6) (4)
0.19b
Vyras
61 (9)
24 (23)
70 (31)
60 62 (29)
72 (26)
(9)
60 56 (14)
71 (41)
68 (15)
68
(13) 76 (13)
histologijos
DA
41 (22)
59 (26)
0.071b
47 (7)
55 (26)
42 (15 )
0.22b
47 (7)
52 (13)
48 (28)
59 (13)
32 (6) 53 (9)
076b
Undiff
59 (32)
41 (18)
(8)
53 45 (21)
58 (21)
53 (8)
48 (12)
52 (30)
(9)
41 68 (13)
47 (8)
etapas
LS /IB
20 (11)
16 (7)
0.83b
13 (2)
19 (9)
19 (7)
0.15b
13 (2)
24 ( 6)
17 (10)
(3)
14 21 (4)
18 (3)
0.70b
TIS /IIB
26 (14)
34 (15)
(4)
27 30 (14)
31 (11)
(4)
27
24 (6) 33
(19) (8)
36
32 (6) (5)
IIIA /IIIB /IIC
39 (21)
36 (16)
(8)
29 53 43 (20)
(9)
25 (8)
53 40 (10)
33 (19)
45 (10)
(5)
26 24 (4)
IV
15 (8) 14 (6)
7 (1)
9 (4)
25 (9)
7 (1)
12 (3)
17 (10)
5 (1)
(4)
21 29 (5)
T
T1a /1b
15 (8 )
(6)
14 0.24b
7 (1)
17 (8)
(5)
14 0.94b
7 (1)
16 (4)
(9)
16
18 (4) (4)
(1)
0.54b
T2
(7)
21 6 13 16 (7)
(2)
13 (7)
15
14 (5) 13 (2)
16 (4)
(8)
14 14 (3)
11 (2) 18 (3)
T3
20
(11) 36 (16)
28 33 (5) (13)
25 (9)
33 (5) (4)
16 31 (18)
(9)
41 16 (3)
35 (6)
T4A /b
52 (28)
34 (15)
(7)
47 40 (19)
47 (17)
(7)
47 52 (13)
40 (23)
(6)
27 53 (10)
41 (7)
N.
N0
30
(16) 23 (10)
0.66b
20 (3)
28 (13)
28 (10)
0.29b
20 (3)
32 (8)
26 (15)
23 (5)
32 (6) 24 (4)
0.19b
N1
37 (20)
32 (14)
47 (7)
38 (18)
(9)
25 (7)
47 44 (11)
28 (16)
32 (7)
> 26 24 (4)
N2
20
(11) 30 (13)
20 (3)
26 (12)
25 (9 )
20 (3)
20 (5) 28 (16)
32 (7)
21 (4)
29 (5)
N3
(7)
13
16 (7) 13 (2)
9 (4)
(8)
22 (2)
(1)
19 13 4 (11)
14 (3)
(4)
21 (4)
Tolima metastazės
Neigiama
85 (46)
24
86 (38) 0.87b
93 (14)
91 (43)
75 (27)
0.041b
93 (14)
88 (22)
83 (48)
95 (21)
79 (15)
71 (12)
0.55b Teigiamas
15 (8)
(6)
14 7 (1)
9 (4)
25 (9) 7 (1)
12 (3)
17 (10)
5 (1)
21 (4)
29 (5)
MSI statusas
MSI
6 (3)
23 (10)
0.013b ​​
33 (5)
9 (4)
11 (4)
0.69b
33 (5)
4 (1)
12 (7)
(3)
(0)
24 0 14 ( 4)
0.25b
Ne MSI
94 (51)
77 (34)
67 (10)
91 (43) 89 (32)
67 (10)
96 (24)
88 (51)
86 (19)
100 (19)
76 (13)
LOH santykis
vidutinis santykis (SD)
0,23 (0,30)
0,26 (0,31)
0.55a
0,22 (0,29) pervežimas 0,10 (0,15) pervežimas 0,44 (0,36)
< 0.0001a
0,22 (0,29)
0,05 (0,10)
0,33 (0,33)
0,16 (0,18)
0,44 (0,34)
0,44 (0,39)
< 0.0001a
CIN *
Teigiamas
46 (25)
57 (25)
(7)
0.39b
47
38 (18) 74 (25)
0.0017b
47 (7)
(6)
24 66 (37)
55 (12)
76 (13)
71 (12)
0.0005b
Neigiama
54 (27)
43 (19)
(8)
53 62 (29)
26 (9) (8)
53 76 (19)
34 (19)
45 (10)
24 (4) 29 (5)
KRAS
/BRAF
/PIK3CA

mutantas
6 (3)
(5)
0.30b
27 (4)
6 (3)
3 (1)
0.45b
11 27 (4)
4 (1)
5 (3)
9 (2)
5 (1)
0 (0)
0.82b
Wild
94 (51)
89 (38)
73 (11)
94 (44)
97 (35)
73 (11)
96 (24)
95 (55)
91 (20)
95 (18)
100 (17)
H.pyroli
Teigiamas
72 (39)
70 (31)
0.85b
80 (12)
66 (31)
75 (27)
0.37b
80 (12)
60 (15)
74 (43 )
73 (16)
79 (15)
71 (12)
0.20b
Neigiama
28 (15)
30 (13) 20 ( 3)
34 (16)
(9)
25 20 (3)
40 (10)
26 (15)
(6)
27 21 (4 )
29 (5)
* du atvejai nėra informatyvus ir CIN statuso
P
vertė buvo apskaičiuota tarp unmethylation bei metilinimo, 18qLOH neigiamas ir teigiamas, ir DCC pakeitimo neigiamas ir teigiamas (iš viso) pagal Vilkoksono /Kruskal-Wallis testas
b P
vertės apskaičiuotos tarp unmethylation bei metilinimo, 18qLOH neigiamą ir teigiamą, ir DCC pakeitimo teigiamas ir neigiamas (iš viso) iki Piason chi-square testą pervežimas LOH iš 18q lokuso susijęs su CIN fenotipas skrandžio vėžio
Tarp informacinių atvejais apie 18q LOH dažniai kiekviename mikrosatelitiniai persekiotoją buvo 14/41 (24%) ne D18S35, 17/55 (31%) ne D18S69 ir 21/58 (36 %) ne D18S58 (kiekvieno virimo aparatas vieta yra parodyta Fig. 1a). Navikai, rodantys LOH visuose trijuose, du, ir tik vienas iš trijų mikrosatelitinius žymenų buvo 4 (4,8%), 9 (11%), ir 23 (28%) 83 informaciniai atvejais tarp 98 pirminių skrandžio vėžio, atitinkamai. Navikai, rodantys Loh bent vieną iš trijų mikrosatelitinių žymenų 18q LOH buvo priskirti 18q LOH-teigiamas. Šiuo kriterijumi, 18q LOH teigiami vėžio buvo aptikta 36 (43%) 83 informatyvių atvejais tarp 98 pirminių skrandžio vėžio (2 lentelė).
Panašiai DCC
metilinimo statuso, mes ištirti ryšį tarp 18q LOH statusas ir įvairių klinikos ir genetinių bruožų. Tarp informacinių atvejais skrandžio vėžio dažnumas tolimų metastazių buvo didesnis 18q Loh-teigiamas skrandžio vėžio palyginti su 18q Loh-neigiamas vėžio (25 vs 9%, p
= 0,041; 2 lentelė). Į Loh santykis apskaičiuotas iš kitų septynių lokusų taip pat buvo reikšmingai didesnis 18q LOH teigiamas nei 18q Loh-neigiamas navikų (0,44 vs 0,10, p
< .0001, 2 lentelė). Pagal šiuos rezultatus, kai navikas parodė LOH santykis buvo didesnis nei 0, navikas buvo klasifikuojama kaip CIN-teigiamas. Be to, CIN teigiami skrandžio vėžio, kuris taip pat buvo 18q LOH teigiamas buvo gerokai gausesnės nei tie, kurie buvo 18q LOH neigiamas (74 vs 38%, p
= 0,0017; 2 lentelė). Ankstesni tyrimai parodė, kad 18q nuostoliai dažniausiai pastebėtas storosios žarnos vėžio, o jo dažnis koreliuoja su CIN fenotipo, bet atvirkščiai koreliuoja su MSI fenotipą [29, 30]. Kadangi mūsų tyrimas ir kitas tyrimas parodė, šis reiškinys taip pat buvo atgaminti skrandžio vėžio [18].
Išraiška ir metilinimas statusas DCC
skrandžio vėžio ląstelių linijų
Siekiant įvertinti ryšius tarp DCC
ekspresijos būklė ir Epigenetiniai pakitimai DCC
geno, mes išnagrinėjo Messenger RNR (iRNR) lygių atvirkštinės transkripcijos kiekybinis polimerazės grandininė reakcija (AT-qPCR), naudojant gruntą anksčiau nustatytą aprašyti [31] ir išnagrinėjo asociacijas tarp DCC
saviraiškos ir CpG metilinimas statusas DCC
promotoriaus regione 10 skrandžio vėžio ląstelių linijų (MKN7, N87, MKN74, MKN45, NUGC-2, NUGC-3, NUGC-4, GCIY, OGUM-1 ir MKN1) ir vieno normalaus plaučių fibroblastų ląstelių linija (NHLF). Visi ląstelių linijas, išskyrus MKN74, GCIY, OGUM-1, MKN1 ir NHLF ląsteles, parodė sumažėjo išraiška DCC
genų nuorašai ir jų vykdytojai buvo denatūruotas (. 1e pav). Kita vertus, nors tris ląstelių linijų, N87, OGUM-1 ir MKN1 parodė sumažėjo išraiška DCC
genų nuorašai, DCC
rengėjai tose ląstelėse nebuvo denatūruotas pagal COBRA. Tarp 10 skrandžio vėžio ląstelių linijas, tik GCIY ląstelių linija išreikšti DCC
nuorašai tame pačiame lygyje kaip NHLF ląstelių, tačiau jos rėmėjas buvo metilo. Kai mes suskirstyti ląstelių linija, rodančią aΔC t daugiau nei 15,0 kaip DCC
išraiškos-neigiamas ir ląstelių linijos su aΔC T iš 15,0 arba mažiau kaip DCC
išraiška teigiamas, tik GCIY ląstelių linija gali būti skirstomi DCC
išraiškos teigiamos tarp septynių skrandžio vėžio ląstelių linijų su DCC
metilinimo; Ši išvada buvo statistiškai nereikšmingas.
mažinimas DCC išraiškos reikalauja tiek genetinių ir epigenetinius pakeitimus
Pirmyn, mes ištirti ryšį tarp DCC baltymų ekspresijos ir genetinių ir epigenetinių pokyčių asociacija DCC
geno 86 skrandžio vėžiu bandiniai. Tipinių pavyzdžiai imunohistocheminiu (IHC) dažymo rezultatai yra parodyta Fig. 2a-c. Mes suskirstyti auglius į šias tris grupes pagal ant IHC rezultatus analizuoti kaip kategorinio kintamojo: visiškas praradimas DCC išraiškos (. 8 atvejais, 9%; pav 2a), židinio praradimas DCC išraiška (38 atvejų 44%; pav. 2b), ir teigiamas DCC baltymo ekspresiją (40 atvejai, 47%;. pav 2c). Tarp 86-skrandžio vėžio, 46 ​​atvejais (53%), rodomą sumažintas DCC išraiška. Ankstesnis tyrimas pranešė, kad sumažintas DCC išraiška buvo stebimas 38% skrandžio vėžio viso, o etapas T1-T2 navikai išlaikė teigiamą DCC išraiška, o ji buvo panaikinta T3 navikų [32]. Ši išvada taip pat buvo pakartoti šį tyrimą (Papildoma failo 2: S2 pav). Pav. 2 "DCC
rengėjas metilinimas ir imunohistocheminis analizes. Imunohistocheminis analizė DCC
(A-C). Branduoliai naviko ląstelių yra visiškai neigiamai (a), iš pagrindų neigiamai (b), ir teigiamai (c) yra nudažomi. (D) asociacija tarp epigenetinio /genetiniais pakitimais ir DCC
išraiška
Be to, mes išnagrinėjo asociacijas tarp genetinių ir epigenetinių pokyčių ir DCC ekspresijos būklė. Septyni iš 8 atvejais su visiško praradimo, 33 38 atvejais, kurių židinio praradimo, ir 34 iš 40 atvejų, turinčių teigiamą DCC išraiška buvo informatyvus tiek DCC
rengėjas metilinimo ir 18q LOH. Mes nustatėme, kad tarp vėžio su visišką netekimą DCC išraiškos, 5/7 vėžio (71%) parodė tiek DCC
rengėjas metilinimo ir 18q Loh. Priešingai, 8/33 vėžio (24%) parodė, židinio praradimą DCC saviraiškos ir tiek metilinimo ir LOH, 5/33 vėžio (15%) parodė LOH vieni, ir 12/33 vėžio (36%) rodomas metilinimas vieni. Tarp vėžio, kurie buvo teigiamas DCC išraiškos, tik 2/34 vėžio (6%) parodė tiek metilinimas ir LOH, 13/34 (38%) vėžio Loh vieni, ir 8/34 vėžio (24%) metilinimas vienas (vėžio rodo tiek DCC
metilinimas ir 18q LOH vs kiti, p pervežimas = 0.0048, Pearson chi-square testą; pav. 2d). Mūsų duomenys rodo, kad per DCC raiškos sumažinimas gali reikalauti tankus metilinimas į promotoriaus CpGs ir LOH iš 18q lokuso, atsižvelgiant į dviejų Hit teorija [33].
Asociaciją tarp klinikos funkcijų ir genetinių /epigenetinių pakitimų DCC
skrandžio vėžio
Nuo tiek Epigenetiniai ir genetiniai pakitimai yra ypač svarbus DCC slopinimo, mes ištirti ryšį tarp epigenetinius ir genetinių pakitimų santykius DCC
geno su įvairiais klinikos funkcijų. 98 skrandžio vėžiu, 15 vėžys buvo priskirti ne informatyvus, 25 vėžys buvo priskirti neigiamas DCC
pokyčių, ir 58 vėžys buvo klasifikuojama kaip teigiamas DCC
pakitimų. Tarp klinikos ypatybių, LOH santykis CIN fenotipas pasiskirstymas reikšmingai skyrėsi tarp vėžio teigiamų ir neigiamų DCC
pokyčių (2 lentelė).
Tarp 58 vėžio su DCC
pakitimų, 17 augliai parodė pakitimus tiek DCC
metilinimas ir 18q LOH, 19 turėjo 18q Loh vienas, o 22 vėžio eksponavo DCC
metilinimas vieni. LOH santykis apskaičiuojamas iš kitų septynių lokusų buvo žymiai didžiausias skrandžio vėžio su abiem DCC
metilinimo ir 18q LOH (vidutinis LOH santykis, 0,44; SD ± 0,39) ir vėžio vien 18q LOH (vidutinis LOH santykis, 0,44; SD ± 0,34), tarpinis vėžio vien DCC
metilinimo (vidutinis LOH santykis, 0,16; SD ± 0,18), o mažiausias vėžio neigiamas DCC
pokyčių (vidutinis LOH santykis 0,05; SD ± 0,10; p
< 0,0001, Vilkoksono /Kruskal-Wallis testas). Pav. Pav. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Šeimos istorija vėžio ir skrandžio sutrikimų ir rizikos stemplės ir skrandžio adenokarcinomos: atvejo ir kontrolės tyrimas
• Dukart lanko tūrinis moduliuojama terapija pagerina dozės pasiskirstymą lyginant su statiniu estakados IMRT ir 3D konforminės radioterapijos palaikomąja terapija skrandžio vėžio