Serum CD26 nivåer hos patienter med magcancer: en ny potentiell diagnostisk marker

Serum CD26 nivåer hos patienter med magcancer: en ny potentiell diagnostisk markör Bild Sammanfattning
Bakgrund
CD26 är en ectoenzyme med dipeptidylpeptidas 4 (DPP-4) aktivitet uttrycks på en mängd olika celltyper. Med tanke på att serum CD26 nivåer har tidigare i samband med olika cancerformer, undersökte vi möjligheten diagnostiska värdet av serum CD26 nivåer i magcancer.
Metoder
Lösliga serum CD26 mättes i pre- och postoperativa serumprover från 30 patienter med gastric cancer och i 24 friska donatorer genom en specifik ELISA-kit.
Resultat
Vi hittade betydligt lägre serum CD26 nivåer hos patienter med magcancer (557,7 ± 118,3 pg /ml) jämfört med friska donatorer (703,4 ± 170,3 pg /ml). Dessutom patienter med HER2-positiva tumörer hade signifikant lägre CD26 serumnivåer (511,8 ± 84,8 pg /ml) jämfört med HER2 negativa tumörer (619,1 ± 109,9 pg /ml, p
= 0,006). En binär logistisk modell med magcancer som beroende variabel medan ålder, kön, CEA, CA19.9 och CD26 nivåer som kovariater, visade att CD26 serumnivåerna oberoende associerades med gastric närvaro cancer. I själva verket efter 3 månader från operation serum CD26 nivåer betydligt högre (700,1 ± 119,9 pg /ml vs 557,7 ± 118,3 pg /ml) hos alla patienter (t = -4,454, p Hotel < 0,0001).
Slutsatser
Detta är en förstudie som visar att mätningen av serum CD26 nivåer skulle kunna utgöra en tidig upptäckt markör för magcancer.
Nyckelord
magcancer Biomarker sCD26 dipeptidylpeptidas-4- bakgrund
gastric cancer, trots minskande incidens, representerar en av de största hälsoproblem i hela världen och den femte vanligaste typen av cancer [1]. Gastric cancer är en tyst sjukdom ofta diagnostiseras i avancerade stadier, som är ansvarig för sin upphöjda dödlighet speciellt bland den äldre befolkningen där förekomsten är betydligt högre [2, 3]. Tekniska framsteg har möjliggjort utvecklingen av flera metoder för att förstå mekanismerna bakom gastric cancer, vilket resulterar i identifiering av ett stort antal molekylära mål som kan användas som biomarkörer med diagnostiska och prognostiska potentialer. Nyligen genomförda studier har identifierat CD26 /dipeptidylpeptidas 4 (DPP-4) i form av en gen som påverkar invasivitet av många tumörceller [4-8] och det är konsekvent i samband med cancer. CD26 /dipeptidylpeptidas 4 är en allmänt uttryckt cellytan peptidas som uppvisar en komplex biologi med tre olika funktioner: adenosindeaminas (ADA) bindande serin peptidasaktivitet, och extracellulära matrix (ECM) bindning. CD26 kan vara cellmembran förankrad eller i en löslig form, som förekommer i serum (sCD26). Cellassocierad CD26 är allmänt uttryckt på T-celler, B-celler, naturliga mördarceller, endotelceller och epitelceller. De olika biologiska aktiviteter CD26 och dess allestädes närvarande uttryck kan spegla dess olika, ibland motstridiga funktioner i fysiologiska och patologiska inställningar [9]. Review, en brist i solubiliserad CD26 rapporterades totalt homogenat av tumörer i kolon, njure, lunga och lever . Tvärtom har cellytan CD26 uttryck satts i samband med sjukdom aggressivitet T- och B-cellslymfom och leukemi, follikulära-cellerna sköldkörtel karcinom och basaliom [10]. Dessutom är serum DPP4 nivåerna ökade hos patienter med nedsatt levercancer och minskade hos patienter med blod, fast och munhålecancer [10, 11]. Nyligen har CD26 identifierats som en serummarkör för kolorektal cancer upptäckt [11-13] samt en prognostisk faktor kan främja människors kolorektal cancer metastaser [14], medan till bäst av vår kunskap ingen studie undersökte rollen av serum CD26 i magcancer. Endast en tidigare studie antydde att CD26-expressionsnivån i kirurgiska prover kan betraktas som en tillförlitlig biomarkör av maligna GIST i magsäcken som kännetecknas av olika kliniska, genetiska och histopatologiska egenskaper [15]. Med tanke på att icke-invasiva biologiska serummarkörer skulle vara till stor nytta för screening, vi syftar till att undersöka den potentiella rollen av CD26 serumnivåer som en diagnostisk markör för gastric cancerupptäckt.
Patienter och metoder
Patienter
Preoperativ blodprov samlades in mellan januari 2013 och oktober 2014 från 30 patienter med histologiskt dokumenterat magcancer som var kandidater för kirurgisk behandling antingen med kurativ eller palliativ uppsåt. Uteslutningskriterier var tidigare buken strålbehandling, preoperativ kemoterapi, diabetes, historia av den senaste tidens immunosuppressiv behandling eller immunologiska och hematologiska sjukdomar, pågående infektion.
Tumör läge, storlek, Lauren typ, grad av differentiering, pTNM liksom steg enligt 7 e upplagan av den amerikanska kommittén för cancer (AJCC) /UICC (UICC) tumör, nod, metastaser (TNM) stadieindelning systemet [16], onkologisk radikalitet av resektion och HER2 har undersökts.
kontroll~~POS=TRUNC gruppen~~POS=HEADCOMP bestod av 24 friska blodgivare. Att undvika en snedvridning personer med tecken på akuta inflammatoriska eller infektionssjukdomar, diabetes, immunologiska eller hematologiska sjukdomar har uteslutits. Klinisk information erhölls genom rutinlaboratorieanalyser, historia och fysisk undersökning. Efter en tydlig förklaring av de potentiella riskerna med studien att alla ämnen som skriftligt informerat samtycke delta i studien, som godkändes av den etiska kommittén för det andra universitetet i Neapel.
Analysmetoder
Blodprov togs på morgonen efter det att deltagarna hade fastat under åtminstone 8 timmar. Den dragna Blodet fick koagulera vid rumstemperatur och centrifugerades vid 2000 g under 15 min. Sera lagrades vid -85 ° C tills de användes.
Fastställande av CD26 serumnivåer
Koncentrationen av serum CD26 analyserades med en specifika immun (Human CD26 /DPP4 ELISA Kit, Boster Biotechnology, Pleasanton, CA) ELISA utfördes enligt tillverkarens instruktioner:. medelvärden av duplicerade mätningar beräknades och en sigmoid formad standardkurva bestämdes genom att samtidigt analysera en utspädningsserie av standardprover
Bestämning av CEA och CA19.9 serumnivåer
CEA och CA19.9 nivåer analyserades i serum genom specifika ELISA-kit i enlighet med tillverkarens instruktioner. Cut-off var < 5 ng /ml för CEA och. ≪ 37 U /ml för CA19.9
bestämning av HER2-uttryck i cancervävnader
HER-2 status testades genom immunhistokemi (IHC) på alla tumörprover av utvärderade patienter, medan i osäkra (2+) prover fluorescens in situ hybridisering (FISH) utfördes. Tumörprover immun färgas på 3-im tjocka sektioner som är monterade på silanbelagda objektglas med hjälp av HercepTest ™ (Dako, Glostrup, Danmark). Varje immun färgade avsnittet utvärderades enligt kriterier toga försöks: ingen reaktivitet eller membran reaktivitet < 10% av tumörcellerna (0+, negativ); svagt ofullständig membran reaktivitet hos ≥ 10% av tumörcellerna (1+, negativ); svag till måttlig, komplett basolateral eller lateral membran reaktivitet hos ≥ 10% av tumörcellerna (2+, tvetydigt); stark, komplett basolateral eller lateral membran reaktivitet hos ≥ 10% av tumörcellerna (3+, positiv). FISH-testet (pharmDx; Dako, Glostrup, Danmark) utfördes i alla fall av tvetydiga resultat (IHC 2+). Genamplifiering noterades när HER2 och centromer sond 17 (CEP17) signalförhållandet var > 2.0.The HAC prover testades med hjälp av polyklonala kanin-anti-human α-1-fetoprotein (klon A000802-29) och monoklonal mus-anti-human hepatocyte (Klon OCH1E5) (Dako, Glostrup, Danmark). Tumörer klassificerades som negativt när HER2: CEP17 förhållandet var < 1,8 och positiv när HER2: CEP17 förhållandet var ≥ 2,2. Om HER2: CEP17 förhållandet var ≥ 1,8 men < 2,2 provet ansågs tvetydiga.
Beräkningar och statistiska analyser sälja The observerade data är normalfördelade (Shapiro-Wilk W-Test) och presenteras som medelvärde ± standardavvikelse (SD). Analyserna utfördes med Chi-kvadrat, parat t-test eller oparat t-test där disponeras. Ett avskurna värde för CD26 bestämdes med användning av mottagare driftsegenskaper (ROC). Urvalsstorleken beräkning uppskattades på en IBM PC-dator av GPOWER programvara. Den resulterande totala provstorleken, beräknas enligt en global effekt storlek på 25% med typ I fel på 0,05 och en effekt av 80% var 57 fall. Alla p
värden är 2-tailed och ett p
≤ 0,05 valdes för nivåer av betydelse. Statistiska analyser utfördes med hjälp av SPSS 17 programpaket (SPSS, Inc., Chicago, IL).
Resultat
CD26-nivåer i serum hos patienter med magcancer och friska givare
serum CD26 mättes i 24 friska försökspersoner (14 män och 10 kvinnor) med en medianålder på 63,5 ± 11,1 år. Studiegruppen ingick 30 patienter med magcancer (16 män och 14 kvinnor) med en medianålder på 66,9 ± 10,2 år. De två grupperna skilde sig inte i ålder (p
= 0,262) och kön (χ
2 = 0,053, p
= 0,519). Den genomsnittliga serumnivå av CD26 i patienter med magsäckscancer var 557,7 ± 118,3 pg /ml, vilket är betydligt lägre än hos friska individer (703,4 ± 170,3 pg /ml, P
= 0,001) (Fig. 1). Ingen skillnad i CD26 nivåer återfanns bland kön (p
= 0,392) i alla befolkningsstudie. Ingen korrelation mellan CD26 serumnivåer och ålder (r
= -0,178, p
= 0,232). Fikon. En CD26 serumnivåer hos patienter med magcancer (n
= 30) och i kontroll friska individer (n
= 24). Patienter serum CD26 nivåer: 557,7 ± 118,3 pg /ml; kontrollserum CD26 nivåer: 703,4 ± 170,3 pg /ml. * P
= 0,001 genom oparade t-test
Serum CD26 nivåer och clinicomorphologic tumörer egenskaper
Tabell 1 ger clinicopathologic data för alla patienter med magcancer (n = 30). Relationerna mellan serum CD26 nivåer och tumör läge, storlek, Lauren typ, grad av differentiering, var pTNM, scen, onkologisk radikalitet av resektion och HER2 uttryck undersöktes (tabell 1). Inga skillnader i serum CD26 nivåer återfinns bland alla variabel beskrivits med undantag för HER2 uttryck: patienter med HER2-positiva tumörer hade signifikant lägre CD26 serumnivåer (511,8 ± 84,8 pg /ml) jämfört HER2 negativa tumörer (619,1 ± 109,9 pg /ml, p
= 0,006). Patienter med positiv lymfkörtel metastas hade lägre CD26 nivåer, men en sådan skillnad inte nådde statistisk signifikans. När det gäller andra preoperativa markörer, var CEA och CA19.9 bestäms hos alla patienter. En positiv korrelation mellan CEA och CA19.9 nivåer befanns (r
= 0,515, p
= 0,004). Snittet off bestämdes för båda markörerna enligt tidigare litteratur: 7 (23,3%) (χ
2 = 0,900, p
= 0,279) patienter resulterade över cut-off för CA19.9 och 4 (12%) (χ
2 = 0,279, p
= 0,471) patienter resulterade över cut-off för CEA. De kliniska och morfologiska tumörer egenskaper studerades också i enlighet med den positiva för var och en av dessa kliniska markörer (data visas ej) och endast HER2-positiv tumörer i samband med ett positivt värde för CEA (χ
2 = 4,971, p
= 0,042). Ingen signifikant korrelation mellan CD26 och andra studerade markörerna var found.Table 1 clinicopathologic data för alla patienter med magcancer (n
= 30)
Patienter
sCD26 nivåer (pg /ml)
p
värde
tumörlokalisation n (%)
Övre
6 (20%) Review 556,1 ± 77,2
0,986
Mellan
11 (36,6%) katalog 558,0 ± 133,8
Lower
13 (43,4%) Review 564,2 ± 108,5
Tumörstorlek storlek~~POS=HEADCOMP n (%)
< 3 cm
15 (50%) katalog 569,1 ± 101,2
0.800 Hotel > 3 cm
15 (50%) Review 558,5 ± 121,6
Laurens typ n (% )
Intestinal
20 (60%) katalog 564,8 ± 94,8
0,934
Diffusa
10 (40%) Review 651,0 ± 145,9
differentiering n ( %)
väl
4 (13,3%) katalog 556,3 ± 95,4
0,681
måttligt
20 (66,7%) Review 553,9 ± 120,0
dåligt
6 (20%) katalog 559,8 ± 107,2
Tumör status n (%)
T1a
0 -
0,781
T1b
2 ( 6,6%) Review 556,3 ± 0
T2
6 (20%) Review 563,4 ± 88,1
T3
12 (40%) Review 543,5 ± 146,9
T4A
7 (23,3%) Review 636,7 ± 0
T4B
3 (10%) Review 579,6 ± 88,9
Lymfkörtel metastaser n (%)
N0
12 (40%) katalog 602,8 ± 120,1
0,113
N1
8 (40%) Review 511,3 ± 50,6
N2
4 (6,6%) Review 447,7 ± 109,2
N3A
2 (10%) Review 660,2 ± 0
N3B
4 (3,4%) Review 636,7 ± 0
metastaserande sjukdom n (%) Review
M0
26 (86,7%) Review 562,0 ± 114,7
0,660
M1
4 (13,3%) Review 586,2 ± 83,5
Stage n (%)
vid Ia
en (3,4%) Review 546,1 ± 26,5
0,513
Ib
4 (13,3%) Review 587,2 ± 81,3
IIa
2 ( 6,6%) Review 603,3 ± 144,3
IIb
en (3,4%) Review 626,8 ± 101,8
IIIa
8 (26,6%) Review 587,1 ± 59,7
IIIb
5 (16,7%) katalog 613,8 ± 150,4
IIIc
5 (16,7%) Review 564,8 ± 119,7
IV
4 (13,3%) Review 518,9 ± 70,4
resektion typ n (%)
R0
25 (83,3%) Review 562,0 ± 114,7
0,660
R1-2
5 (16,7%) Review 586,2 ± 83,5
HER2 n (%)
positiv
15 (50%) Review 511,8 ± 84,8
0,006
negativa
15 (50%)
619,1 ± 109,9
Diagnostisk effektivitet CD26 preoperativ serumnivåer Review, en binär logistisk modell med magcancer som beroende variabel medan ålder, kön, CEA, CA19.9 och CD26 nivåer som oberoende variabler, visade att CD26 serumnivåer var oberoende associerad med magcancer närvaro (tabell 2). ROC-kurvan för CD26 visade ett område under kurvan för C
= 0,738 med SE = 0,071 och 95% CI 0,598-0,877 (Fig. 2). Det bästa cut-off som maximerar (känslighet + specificitet) var 465,8 pg /ml. På denna nivå, känslighet var 0,90 och specificitet var 0,43. Vid denna etablerade avskurna nivå 8 (26,6%) resulterade patienter bakom cut-off (χ
2 = 7,224, p
= 0,007) visar högre diagnostisk effektivitet jämfört CEA och CA19.9. Efter 3 månader från kirurgi CD26 nivåer ökade signifikant (700,1 ± 119,9 pg /ml vs 557,7 ± 118,3 pg /ml) hos alla patienter (t = -4,454, p Hotel < 0,0001) .table 2 Binär logistisk regressionsanalys med gastric cancer som de beroende variablerna i alla befolkningsstudie (n
= 54)
B
Odds Ratio
95% CI
p


Gender
−0.188
0.828
0.220–3.123
.828
Age
0.019
1.019
0.957–1.086
.551
CD 26
−0.007
0.993
0.988–0.998
.003
CEA
0.837
2.308
0.255–20.928
.457
CA19.9
0.507
1.660
0.277–9.963
.579
Kön uttryckt som F = 0 en M = 1
Fig. 2 ROC-kurvan för sCD26. ROC-kurvan för sCD26 visade ett område under kurvan C
= 0,738 med SE = 0,071 och 95% CI 0,598-0,877. Det bästa cut-off som maximerar (känslighet + specificitet) var 465,8 pg /ml
Diskussion
De viktigaste resultaten av vår undersökning är: i) patienter som drabbats av magcancer har betydligt lägre serum CD26 nivåer jämfört med friska försökspersoner ii ) CD26 serumnivåer är förknippade med gastric närvaro cancer iii) CD26 mätning visar högre diagnostisk effektivitet jämfört CEA och CA19.9 i magcancer iiii) patienter med HER2-positiva tumörer har betydligt lägre serum CD26 nivåerna jämfört med HER2 negativa motsvarigheten.
gastric cancer representerar den tredje vanligaste orsaken till cancerrelaterad död i världen och de flesta patienter närvarande avancerad sjukdom vid diagnos gör sin behandling mycket invecklad [1-3]. Det är allmänt accepterat att tidig diagnos och behandling är nycklar för bättre kliniskt resultat hos patienter med magcancer [2, 3].
CD26 är en multifunktionell cellyteglykoprotein med inneboende dipeptidylpeptidas 4 aktivitet särskilt uttryckt på epitelceller och lymfocyter [ ,,,0],9, 17, 18]. Men CD26 existerar också som en löslig cirkulerande form i plasma och dess roll är fortfarande okänd. Cellytan proteaser deltar i malign transformation och cancer progression genom att främja invasion och metastas. Ibland kan de även gav en motsatt effekt, är detta fallet av CD26 [11, 17]. I själva verket är ytan CD26 uttryck förloras eller ändras på melanom, hepatocellulär cancer och tjocktarmscancerceller [10]. Det har föreslagits att CD26 med sin enzymatiska aktivitet är i stånd att bryta ned tillväxtfaktorerna som krävs för överlevnad och invasivitet hos tumörceller [12]. Även serum CD26 är i huvudsak oreglerad i olika cancerformer: serum CD26 nivåerna ökar hos patienter med nedsatt levercancer och minskade hos patienter med blod, sköldkörtel och oral cancer [10, 11]
Nyligen har CD26 identifierats som en serummarkör. för kolorektal cancer upptäckt och prognostisk faktor [12-14] samtidigt till vitt vi vet ingen studie undersökte rollen av serum CD26 i närvaro av magcancer.
med denna förstudie vi funnit att patienter som drabbats av magcancer har lägre nivåer cirkulerande serum CD26 jämfört med friska kontroller, vilket representerar en kraftfull biomarkörer för magcancer. Vi hittade en brist på en sammanslutning av sCD26 nivåer med tumörlokalisering, storlek, typ, differentiering, TNM, scen eller lymfkörtelmetastaser. Följaktligen Cordero och medarbetare [12, 13] inte funnit något samband mellan nivåerna av sCD26 och Dukes stadium klassificering hos patienter som drabbats av kolorektal cancer. Dessa data tillsammans tyder på den potentiella nyttan av denna molekyl för tidig diagnos av magcancer. Regressionsanalys visade att lägre sCD26 nivåerna var förenade med magcancer närvaro oberoende av ålder, kön och andra tumörer biomarkörer (CA19.9 och CEA). Detta fynd ytterligare stödja betydelsen av CD26 som en ny diagnostisk markör för magsäckscancer med högre effektivitet jämfört med andra tillgängliga biomarkörer som visas av ROC-kurva. Om lägre CD26 serumnivåer är förknippade med lägre eller högre tumör ytexpression är okänd och kan representera en begränsning av denna studie. Men tidigare bevis att nedskrivning i sCD26 i kolorektal cancer verkar inte vara härrör från förändring av CD26 på tumörceller [11-13]. Således kan vi spekulera i att nedgången i serum CD26 nivåer kan relateras till en dysfunktion i immunsystemet status hos patienter med magcancer. I själva verket har en överhörning mellan lymfoida och maligna tumörer in vivo har länge diskuterats och vissa uppgifter om immunbristantitumörsvar i många cancerformer, såsom kolon, har beskrivits tidigare, bland annat en defekt i IL-12-produktion [19], som är ett välkänt CD26 up-regulator på T-celler [20]. Återigen i orala cancerpatienter, där cirka 50% minskning av serum CD26 aktivitet har rapporterats, var en korrelation mellan sCD26 och CD26 + T hittats och fästet av CD26 i T-lymfocyter plasmamembran var betydligt lägre än hos friska försökspersoner [21 ]. Således, även i magcancer, den hypotetiska rollen av sCD26 i överhörning mellan immunsystemet och karcinogenes, kan inte uteslutas. Vidare studeras behövs för att testa en sådan hypotes och samla lymfocyter, delmängd distribution och andra immun parametrar hos patienter med magcancer. Intressant nya studier visar att sCD26 terapi förbättrar immunsystemets funktion i vissa patologiska tillstånd, såsom AIDS [22] och det kan vara intressant att analysera om gastric cancerpatienter kan mycket väl dra nytta av exogen sCD26 behandling.
Vår viktigaste slutsats är att lägre serum CD26 nivåer påträffades i synnerhet i serum hos patienter med HER2-positiva tumörer. Vid ökad kunskap om bröstcancerceller molekylära vägar, är den biologiska funktionen av magcancer blir mer tydlig och särskild uppmärksamhet bör ägnas åt identifiering av human epidermal tillväxtfaktorreceptor-2 (HER2) förstärkt magsäckscancer subtyp. Denna senare står för 10-38% av alla gastric cancer, med en högre prevalens i tumörer från den övre tredjedelen av magen än i de som ligger i mer distala områden, liksom i Laurens intestinal typ än i diffus-typ magcancer [ ,,,0],23]. HER2-proteinöveruttryck på magcancer cellernas yta med förhöjd och förlängd signaler inflytande särskilt från cancer processer som bestämmer distinkt klinik patologisk fenotyp som kännetecknas av förvärv av fördelaktiga egenskaper för överdriven och okontrollerad celltillväxt, identifiera en distinkt magcancer enheten [24]. Ur en prognostisk perspektiv, trots den negativa prognostiska effekten av HER2 positivitet i bröstcancer är väl bedömas förblir förhållandet mellan HER2-status och prognos av gastric cancerpatienter kontroversiell [25]. Icke desto mindre administration av standard kemoterapi med Trastuzumab, en monoklonal antikropp som binder till den extracellulära domänen av HER2-receptorn blockera dess nedströms signalering, visar en kliniskt betydelsefull förbättring i total överlevnad för patienter med HER2-positiv avancerad magcancer [26]. De lägre serum CD26 hos patienter med HER2-positiva tumörer antyder en attraktiv länkmekanism mellan medfödda effektorceller /T-celler immunitet och anti-tumöreffekter. Stödja detta, har det visats att CD26 är ett potentiellt mål för amino boronic dipeptid PT-100, en dipeptidylpeptidas (DPP) inhibitor, som har förmåga att förstärka effekten av trastuzumab på tillväxtinhibering av HER2 positiv karcinom cellinjer i djur modeller [27].
själva verket, om inrättande av diagnosen i ett tidigt skede i magcancer, med en enkel biokemisk index är ett aktuellt ämne för forskning i klinisk onkologi. CEA nivåerna är markören av hänvisning i detta neoplasi, även om inte rekommenderas som diagnostiskt test [28]. Våra resultat visar att känsligheten hos sCD26 var högre vid olika specificitet nivåer än de CEA eller CA 19,9 samt effektivitet. I själva verket kan det faktum att CD26 nivåerna ökar markant efter operationen visar att sCD26 serumnivån kan också användas som prognostisk markör. Men det behövs ytterligare studier för att validera en sådan hypotes.
Slutsatser
Använda nya biomarkörer för tidig gastric cancerupptäckt kan potentiellt minska dödligheten och sjukvårdskostnader. Preoperativ sCD26 nivå kan utgöra en användbar och lätt biomarkör för tidig upptäckt av magcancer. Faktum är att upptäckten att patienter med HER2-positiva tumörer har lägre sCD26 nivåer kan ha kliniska potentialen i magcancer förvaltning förbättra effekten av läkemedel på tillväxthämning av HER2-positiv cancer
Förkortningar
DPP4.
dipeptidylpeptidas 4
IHC:
Immunohistokemi
FISK:
fluorescens in situ hybridisering

ROC:
mottagare är verksamma egenskaper
förklaringar
Open Accessthis artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution 4.0 internationell licens (http: //creative. org /licenser /by /4. 0 /), som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt att du ger rätt kredit till den ursprungliga författaren (s) och källan, en länk till Creative Commons-licens, och ange om det gjorts ändringar. Creative Commons Public Domain Dedication undantag (http:. //Creative org /public /noll /1. 0 /) gäller de uppgifter som görs tillgängliga i den här artikeln, om inte annat anges
Konkurrerande. intressen
författarna förklarar att de inte har några konkurrerande intressen
författarnas bidrag
VB och LM bidragit lika för detta arbete. VB, LM, och GP utformade studien; VB, MRR och LM utförde immun; RRAR, MRR och NDM samlat data; VB och LM utarbetade manuskriptet; LM, VB och GP utförde den statistiska analysen; GP och NDM tänkt av studien, och deltog i sin design och samordning och bidragit till att utarbeta manuskriptet. Alla författare läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• Värdcellinvasion och oral infektion med Trypanosoma cruzi stammar av genetiska grupper TCI och TcIV från chagasic patienter
• Den diagnostiska utmaning av lungtumör trombotisk mikroangiopati som en presentation för magsäckscancer: en fallrapport och översyn av litteraturen