Serum CD26 niveaus bij patiënten met maagkanker: een nieuwe potentiële diagnostische marker

serum CD26 niveaus bij patiënten met maagkanker: een nieuwe potentiële diagnostische merker
Abstracte achtergrond
CD26 is een ecto-enzym met dipeptidylpeptidase 4 (DPP-4) uitgedrukte op een verscheidenheid van celtypen. Aangezien serum CD26 niveaus zijn eerder geassocieerd met verschillende kankers, onderzochten we de potentiële diagnostische waarde van serum CD26 niveaus bij maagkanker.
Methods
Oplosbaar CD26 serum niveaus werden gemeten in pre- en postoperatieve serummonsters van 30 patiënten met maagkanker en in 24 gezonde donoren door een specifieke ELISA-kit.
Resultaten
We hebben significant lagere serum CD26 niveaus bij patiënten met maagkanker (557,7 ± 118,3 pg /ml) in vergelijking met gezonde donoren (703,4 ± 170,3 pg /mL). Bovendien patiënten met HER2-positieve tumoren hadden significant lagere CD26 serum niveaus (511,8 ± 84,8 pg /ml) in vergelijking met HER2-negatieve tumoren (619,1 ± 109,9 pg /mL, p
= 0,006). Een binaire logistisch model met maagkanker als afhankelijke variabele terwijl leeftijd, geslacht, CEA, CD26 en CA19.9 niveau als covariaten bleek dat CD26 serumniveaus onafhankelijk geassocieerd met maag- aanwezigheid kanker. Inderdaad na 3 maanden na operatie serum CD26 significant toe (700,1 ± 119,9 pg /mL vs 557,7 ± 118,3 pg /ml) bij alle patiënten (t = -4,454, p
< 0,0001).
Conclusies
Dit is een voorlopige studie blijkt dat de meting van het serum CD26 niveaus een vroegtijdige opsporing marker voor maagkanker kunnen vertegenwoordigen.
Sleutelwoorden
maagkanker Biomarker sCD26 dipeptidylpeptidase 4 Achtergrond
maagkanker, ondanks de afnemende incidentie, is een van de belangrijk gezondheidsprobleem wereldwijd en de vijfde meest voorkomende vorm van kanker [1]. Maagkanker is een stille ziekte gediagnosticeerde in gevorderde stadia, die verantwoordelijk is voor de verhoogde sterfte vooral onder de oudere bevolking waarvan de incidentie aanzienlijk hoger [2, 3]. Vooruitgang in technologie hebben de ontwikkeling mogelijk gemaakt van verschillende methoden om de onderliggende mechanismen te begrijpen maagkanker, resulteerde in identificatie van een groot aantal van eiwitten die kunnen worden gebruikt als biomarkers diagnostische en prognostische mogelijkheden. Recente studies hebben vastgesteld CD26 /dipeptidylpeptidase-4 (DPP-4) een gen dat het invasieve karakter van veel tumorcellen [4-8] beïnvloedt en het is altijd geassocieerd met kanker. CD26 /dipeptidylpeptidase 4 is een breed tot expressie celoppervlak peptidase dat een complexe biologie met drie verschillende functies vertoont: adenosine deaminase (ADA) binding, serine peptidase activiteit, en extracellulaire matrix (ECM) binden. CD26 kan celmembraan-verankerde of in een oplosbare vorm, die zich in het serum (sCD26). Celgebonden CD26 is algemeen voor op T-cellen, B-cellen, NK-cellen, endotheelcellen en epitheelcellen. De verschillende biologische activiteiten van CD26 en de alomtegenwoordige expressie kan weerspiegelen de verschillende, soms tegengestelde functies in fysiologische en pathologische instellingen [9].
Een tekort aan oplosbaar CD26 werd bij totale homogenaten van tumoren van colon, nier, long en lever . Integendeel is celoppervlak CD26-expressie gecorreleerd met de ziekte agressiviteit van T- en B-cel lymfomen en soorten leukemie, folliculaire cellen afgeleide schildklier carcinoma's en basaalcelcarcinomen [10]. Bovendien wordt serum DPP4 niveaus verhoogd bij patiënten met leverkanker en verminderd bij patiënten met bloed, solide en orale kanker [10, 11]. Onlangs is CD26 geïdentificeerd als een serum marker voor colorectale kanker detectie [11-13] en een prognostische factor de humane colorectale kanker metastase [14] te bevorderen, terwijl om ons beste weten geen studie onderzocht de rol van serum CD26 bij maagkanker. Slechts een eerdere studie suggereerde dat CD26 expressie in chirurgische monsters kan worden beschouwd als een betrouwbare biomarker van kwaadaardige GIST van de maag gekenmerkt door verschillende klinische, genetische en histopathologische kenmerken [15]. Aangezien niet-invasieve biologische serum markers van groot voordeel voor screening zou zijn we gericht op het onderzoeken van de potentiële rol van CD26 serumspiegels als een diagnostische merker voor detectie maagkanker.
PATIËNTEN EN METHODEN Patiënten

Preoperatieve bloedmonsters werden verzameld tussen januari 2013 en oktober 2014 van 30 patiënten met een histologisch gedocumenteerde adenocarcinoom van de maag, die kandidaten voor chirurgische behandeling, ofwel met curatieve of palliatieve opzet waren. Uitsluitingscriteria waren vorige abdominale radiotherapie, preoperatieve chemotherapie, diabetes, geschiedenis van de recente immunosuppressieve therapie of immunologische en hematologische aandoeningen, aanhoudende infectie.
Tumor locatie, grootte, type Lauren's, mate van differentiatie, pTNM evenals stadium volgens de 7 e editie van het Gemengd Comité Amerikaanse on Cancer (AJCC) /Union for International Cancer control (UICC) tumor, knooppunt metastase (TNM) staging-systeem [16], oncologische radicaliteit van de resectie en HER2 is onderzocht.
De controlegroep bestond uit 24 gezonde bloeddonoren. Om vertekening individuen voorkomen met tekenen van acute ontsteking of besmettelijke ziekten, diabetes, immunologische of hematologische aandoeningen zijn uitgesloten. Klinische informatie werd verkregen door routinematige laboratoriumanalyses, anamnese en lichamelijk onderzoek. Na een duidelijke uitleg over de mogelijke risico's van de studie, alle patiënten gaven schriftelijk toestemming voor deelname aan de studie, die door de ethische commissie van de Tweede Universiteit van Napels werd goedgekeurd.
Analysemethoden
Bloedmonsters werden verzameld in de ochtend na de deelnemers hadden gevast gedurende ten minste 8 uur. De getekende bloed liet men stollen bij kamertemperatuur en gecentrifugeerd bij 2000 g gedurende 15 min. De sera werden bewaard bij -85 ° C tot gebruik.
Bepaling van CD26 serumspiegels Ondernemingen De concentratie serum CD26 werd geanalyseerd met een specifieke immunoassays (Human CD26 /DPP-4 ELISA kit, Boster biologische technologie, Pleasanton, CA) ELISA's werden uitgevoerd volgens de instructies van de fabrikant. gemiddelde waarden van gedupliceerde metingen werden berekend en een sigmoïde vorm standaardkromme werd bepaald door het gelijktijdig analyseren van een verdunningsreeks van standaardmonsters
Bepaling van CEA en CA19.9 serumniveaus
CEA en CA19.9 niveaus in serum werden geanalyseerd door specifieke ELISA-kits volgens de instructies van de fabrikant. De cut-off waren < 5 ng /ml CEA en <. 37 U /ml voor CA19.9
bepaling van HER2 expressie in kankerweefsel
HER-2 status werd getest door immunohistochemie (IHC) voor alle tumormonsters geëvalueerde patiënten, terwijl in dubbelzinnige (2+) monsters fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) werd uitgevoerd. Tumor monsters immuun-gekleurd op 3-pm dikke secties die op silaan gecoate dia's met behulp HercepTest ™ (Dako, Glostrup, Denemarken) werden gemonteerd. Elke immuun-gekleurde sectie werd geëvalueerd volgens ToGA proef criteria: geen reactiviteit of membraanreactiviteit < 10% van de tumorcellen (0+, negatief); vage onvolledige membraanreactiviteit bij ≥ 10% van de tumorcellen (1+, negatief); zwakke tot matige volledige basolaterale of laterale membraanreactiviteit bij ≥ 10% van de tumorcellen (2+, dubbelzinnig); sterke volledige basolaterale of laterale membraanreactiviteit bij ≥ 10% van de tumorcellen (3+, positief). De FISH-test (pharmDx; Dako, Glostrup, Denemarken) werd uitgevoerd in alle gevallen van onduidelijke resultaten (IHC 2+). Gene amplificatie werd opgenomen terwijl de HER2 en centromeer probe 17 (CEP17) signaal verhouding > 2.0.The HAC monsters werden getest met behulp van polyklonaal konijn anti-humaan α-1-foetoproteïne (kloon A000802-29) en monoklonale muizen anti-humaan hepatocyte (Clone OCH1E5) (Dako, Glostrup, Denemarken). Tumoren werden geclassificeerd als negatief als de HER2: CEP17 ratio < 1,8 en positief wanneer de HER2: CEP17 ratio ≥ 2,2. Als de HER2: CEP17 ratio ≥ 1,8 maar < 2.2 het monster werd beschouwd als twijfelachtig.
Berekeningen en statistische analyses
De waargenomen gegevens normaal verdeeld zijn (Shapiro-Wilk W-Test) en weergegeven als het gemiddelde ± standaarddeviatie (SD). De analyses werden uitgevoerd met Chi-kwadraat, gepaarde t-test of ongepaarde t-test waarbij toegeëigend. Een afgesneden waarde voor CD26 werd bepaald met behulp van ROC-curve (ROC). Steekproefgrootte berekening werd geschat op een IBM PC computer door GPOWER software. De resulterende totale monstergrootte, geschat op basis van een totale effect grootte van 25% met type I fout van 0,05 en een vermogen van 80% was 57 gevallen. Alle p
waarden voorgesteld zijn 2 staart en een p
≤ 0,05 werd gekozen voor de niveaus van betekenis. Statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van SPSS 17 softwarepakket (SPSS Inc., Chicago, IL).
Resultaten
CD26 niveaus in het serum van patiënten met maagkanker en gezonde donoren of the serum CD26 niveaus werden gemeten in 24 gezonde proefpersonen (14 mannen en 10 vrouwen) met een gemiddelde leeftijd van 63,5 ± 11,1 jaar. De studie groep bestond uit 30 patiënten met maagkanker (16 mannen en 14 vrouwen) met een gemiddelde leeftijd van 66,9 ± 10,2 jaar. De twee groepen verschilden niet in leeftijd (p
= 0,262) en geslacht (χ
2 = 0,053, p
= 0,519). De gemiddelde serumspiegel van CD26 bij patiënten met maagkanker was 557,7 ± 118,3 pg /ml, significant lager dan die bij gezonde individuen (703,4 ± 170,3 pg /ml, p
= 0,001) (fig. 1). Geen verschil in CD26 niveaus werden gevonden bij mannen (p
= 0,392) in alle bevolkingsonderzoek. Er werd geen correlatie gevonden tussen de CD26 serum niveaus en leeftijd (r
= -0,178, p
= 0,232). Fig. 1 CD26 serum niveaus bij patiënten met maagkanker (n
= 30) en in de controle gezonde individuen (n
= 24). Patiënten serum CD26 niveaus: 557,7 ± 118,3 pg /ml; controleserum CD26 niveaus: 703,4 ± 170,3 pg /mL. * P = 0,001
door ongepaarde t-test
Serum CD26 niveaus en clinicomorphologic tumoren kenmerken
Tabel 1 geeft clinicopathologic gegevens voor alle patiënten met maagkanker (n = 30). De relatie tussen serum CD26 niveaus en tumor locatie, grootte, type Lauren's, de mate van differentiatie, pTNM, podium, oncologische radicaliteit van de resectie en HER2 expressie werden onderzocht (tabel 1). Geen verschillen in serum CD26 niveaus werden gevonden onder alle variabele beschreven, behalve voor HER2 expressie: patiënten met HER2-positieve tumoren hadden significant lagere CD26 serum niveaus (511,8 ± 84,8 pg /ml) in vergelijking met HER2-negatieve tumoren (619,1 ± 109,9 pg /mL, p
= 0,006). Patiënten met een positieve lymfklier metastase hadden lagere CD26 niveaus, maar een dergelijk verschil niet statistisch significant. Betreffende andere preoperatieve markers, CEA en CA19.9 werden bepaald bij alle patiënten. Een positieve correlatie tussen CEA en CA19.9 niveaus werden gevonden (r
= 0,515, p
= 0,004). De cut off werd bepaald voor beide markers op basis van eerdere literatuur: 7 (23,3%) (χ
2 = 0.900, p
= 0,279) van de patiënten heeft geleid over de cut-off voor CA19.9 en 4 (12%) (χ
2 = 0,279, p
= 0,471) van de patiënten heeft geleid over de cut-off voor CEA. De klinische en morfologische kenmerken tumoren werden bestudeerd volgens de positief voor elk van deze klinische markers (gegevens niet getoond) en slechts HER2 positieve tumoren geassocieerd met een positieve waarde voor CEA (χ
2 = 4,971, p
= 0,042). Geen significante correlatie tussen CD26 en andere bestudeerde markers waren found.Table 1 Clinicopathologische gegevens voor alle patiënten met maagkanker (n
= 30)
Patiënten
sCD26 niveaus (pg /ml)
p
waarde
Tumor locatie n (%)
Upper
6 (20%)
556,1 ± 77,2
0,986
Midden
11 (36,6%)
558,0 ± 133,8
Lower
13 (43,4%)
564,2 ± 108,5
tumorgrootte n (%)
< 3 cm
15 (50%)
569,1 ± 101,2
0.800 Restaurant > 3 cm
15 (50%)
558,5 ± 121,6
Lauren's Type n (% )
Intestinale
20 (60%)
564,8 ± 94,8
0,934
Zend
10 (40%)
651,0 ± 145,9
differentiatie n ( %)
goed verhuur 4 (13,3%)
556,3 ± 95,4
0,681
matig
20 (66,7%)
553,9 ± 120,0
slecht
6 (20%)
559,8 ± 107,2
tumorstatus n (%)
T1a
0 -
0,781
T1b Pagina 2 ( 6,6%)
556,3 ± 0
T2
6 (20%)
563,4 ± 88,1
T3
12 (40%)
543,5 ± 146,9
T4a
7 (23,3%)
636,7 ± 0
T4b
3 (10%)
579,6 ± 88,9
lymfekliermetastasen n (%)
N0
12 (40%)
602,8 ± 120,1
0,113
N1
8 (40%)
511,3 ± 50,6
N2 verhuur 4 (6,6%)
447,7 ± 109,2
N3a
2 (10%)
660,2 ± 0
N3B verhuur 4 (3,4%)
636,7 ± 0
gemetastaseerde ziekte n (%)

M0
26 (86,7%)
562,0 ± 114,7
0.660
M1
4 (13,3%)
586,2 ± 83,5
Stage n (%)

Ia
1 (3,4%)
546,1 ± 26,5
0,513
Ib
4 (13,3%)
587,2 ± 81,3
IIa Pagina 2 ( 6,6%)
603,3 ± 144,3
IIb
1 (3,4%)
626,8 ± 101,8
IIIa
8 (26,6%)
587,1 ± 59,7
IIIb
5 (16,7%)
613,8 ± 150,4
IIIc
5 (16,7%)
564,8 ± 119,7
IV verhuur 4 (13,3%)
518,9 ± 70,4
soort resectie n (%)
R0
25 (83,3%)
562,0 ± 114,7
0.660
R1-2
5 (16,7%)
586,2 ± 83,5
HER2 n (%)
positieve
15 (50%)
511,8 ± 84,8
0,006
negatief
15 (50%)
619,1 ± 109,9
Diagnostische efficiëntie van CD26 preoperatieve serum niveaus
Een binaire logistische model met maagkanker als afhankelijke variabele, terwijl leeftijd, geslacht, CEA, CA19.9 en CD26 niveaus als onafhankelijke variabelen, bleek dat CD26 serumniveaus werden onafhankelijk geassocieerd met maag- kanker aanwezig (tabel 2). ROC curve voor CD26 vertoonden een gebied onder de curve van C = 0,738
met SE = 0,071 en 95% CI 0,598-0,877 (fig. 2). De beste cut-off die maximaliseert (gevoeligheid + specificiteit) was 465,8 pg /mL. Op dit niveau, de gevoeligheid was 0,90 en specificiteit 0,43. Op dit gevestigde afgesneden niveau 8 (26,6%) leidde de patiënten achter de cut-off (χ
2 = 7,

• Gastheer cel invasie en orale infectie met Trypanosoma cruzi stammen van genetische groepen TCI en TcIV van chagasic patiënten
• De diagnostische uitdaging van de longtumor trombotische microangiopathie als een presentatie voor gemetastaseerde maagkanker: een case report en overzicht van de literatuur