Inverkan av HRH2 promotor polymorfism på avvikande DNA-metylering av DAPK och CDH1in mag epitel

Inverkan av HRH2
promotor polymorfism på avvikande DNA-metylering av DAPK Mössor och CDH1
i mag epitel Bild Sammanfattning
Bakgrund
Avvikande metylering mönster i CpG-ö är kända för att vara inflytelserik i genen tystande. Histamin spelar viktiga fysiologiska roller i övre mag-tarmkanalen och verkar via H2-receptorn. Vi rapporterar en utredning om effekterna av HRH2
promotor polymorfism (rs2607474 G > A) på metylering av DAPK Mössor och CDH1
metoder
Icke cancer magslemhinnan prover erhölls från. 115 patienter med magcancer (GC) och 412 icke-cancerämnen (icke-GC). Metyleringsstatus av gener bestämdes genom MSP. Gentypning av rs2607474 utfördes genom PCR-SSCP.
Resultat
Metylering av DAPK
och CDH1
observerades hos 296 och 246 försökspersoner, respektive. Frekvensen av CDH1
metylering i de ämnen med GC var signifikant lägre i cancer lesion än hos icke cancerösa slemhinna, medan den hos DAPK
metylering var inte annorlunda. Den alleliska fördelningen av rs2607474 var 401GG, 119GA och 7AA. GG homozygot var associerad med en signifikant ökad risk för metylering av både DAPK Mössor och CDH1
(p < 0,0001 och p = 0,0009, respektive). I icke-GC ämnen eller mer än 60 år, var GG homozygot närmare i samband med både DAPK Mössor och CDH1
metylering. Men denna genotyp inte visar en ökad risk för utveckling av metylering av båda generna hos patienter med GC. I H. pylori
negativa ämnen, GG homozygot visade en ökad risk för metylering av både DAPK Mössor och CDH1
(p = 0,0074 och p = 0,0016, respektive), medan denna genotyp associerades med en ökad risk för utveckling av DAPK
metylering i H. pylori
positiva patienter (p = 0,0018). Dessutom, hos personer äldre än 60 år, atrofi och metaplasi poäng var signifikant högre i GG homozygot (p = 0,011 och p = 0,039 respektive) och en signifikant korrelation observerades mellan ålder och atrofi eller metaplasi.
slutsatser
Våra resultat tyder på att rs2607474 GG homozygota ger en signifikant ökad risk för ålders- och inflammationsrelaterade DAPK
och CDH1
metylering.
Nyckelord
HRH2
Genetisk polymorfism Aberrant DNA-metylering bakgrund
Gastric cancer är en av de vanligaste cancerformer i hela världen och är associerad med en hög dödlighet [1, 2]. Flera cancerformer, inklusive gastriska tumörer, show metylering av multipla gener innefattande E-cadherin (CDH1
),
dödsassocierade proteinkinas (DAPK
) och cyklinberoende kinas-inhibitor 2A (CDKN2A
) [3, 4]. Metylering av promotor CpG-öar leder till DNA-strukturförändringar och följdriktigt, geninaktivering [5]. Många studier har identifierat denna tysta genom DNA-metylering som en mekanism som ansvarar för tumörsuppressorgen inaktivering. Men vissa gener också metyleras i icke-neoplastiska vävnader på grund av åldrande [6, 7], och det har också föreslagits att genen metylering inträffar under kronisk inflammation i olika vävnader [8-10]. I magslemhinnan, har det postulerats att metylering av CpG-ö induceras av Helicobacter pylori
(H. pylori
) infektion i icke-cancerös slemhinna [11, 12] och betraktas som de precancerösa tillstånd i magsaftens karcinogenes [ ,,,0],13]. Bland flera gener, DAPK
, CDH1
och CDKN2A
är kända för att ofta metyleras i icke-neoplastiska magslemhinna och detta metylering är kopplad till åldern, H. pylori
infektion, histologisk grad av gastrit och magcancer [11, 13, 14].
emellertid histamin, en av de aktiva aminer som frigörs som svar på en mängd olika fysiologiska stimuli, är vitt utbredd i det gastrointestinala området inkluderande magen och är involverad i patogenesen av gastro-duodenal sår och gastrisk inflammation [15]. I magen, H2-receptorer, även om stor spridning i kroppsvävnader, verkar ha en central roll vid reglering av syrasekretionen, vilket bekräftas av den utbredda användningen av H2-receptorblockerare vid terapi av syrarelaterade sjukdomar [16, 17] . Histamin spelar en viktig roll i gastric inflammation agerar via H2-receptorn, även om H. pylori
infektion är en av de största bidragande faktorerna för utvecklingen av mag-duodenal inflammation [18]. På senare tid har sambandet mellan genetisk polymorfism av histamin receptorgener och mottaglighet för schizofreni, och dess kliniska svar på klozapin behandling studerats [19]. Denna undersökning av polymorfism i HRH2
, som kodar för H2-receptorn, avslöjar samband mellan genotyp vid HRH2
-1018 G /A locus (rs2607474) och kliniskt svar på klozapin behandling. Dessutom har denna rapport visat att rs2607474 ligger i ett förstärkarelement av HRH2
genpromotorn [19, 20] och det är därför troligt att denna variant inducerar förändringar i uttrycket av receptorer. Enligt HapMap-JPT, det finns bara ett länkdisekvilibrium (LD) blocket, som består av rs686874, rs2067474, rs678591, rs645574, rs2890892 och rs11954815, i HRH2. Alla andra SNP är mindre polymorfismer. Därför spekulerade vi att denna LD blocket påverka uttrycket och /eller funktion av histamin H2-receptorn och utvalda rs2607474 som en tagg SNP. Det har ännu inte varit någon rapport om rs2607474 inverkan på utvecklingen och utvecklingen av gastrointestinala störningar. Vi antar att rs2607474 kan påverka utvecklingen av avvikande DNA-metylering mönster i magslemhinnan.
I den aktuella studien undersökte vi relationen mellan HRH2
promotor polymorfism (rs2607474) och DNA-metylering av DAPK Mössor och CDH1
i godartade gastric epitel. Skillnaden av DNA-metylering status bland gastric cancerpatienter och godartade ämnen undersöktes också.
Metoder
Vävnadsprover, DNA-extraktion och Helicobacter pylori-infektion status
Vår studerade populationen omfattade 527 patienter (412 utan malign tumörer och 115 med magcancer) rekryteras från Endoskopi Center of Fujita Health universitetssjukhus eller Kanazawa Medical University Hospital. Patienter med systemiska allvarliga sjukdomar uteslöts från denna studie. De med aktivt magsår eller duodenalsår uteslöts också. Alla försökspersoner genomgick övre endoskopi med biopsi från godartade slemhinna. I 115 patienter med magcancer, var biopsiprov även erhållas från cancer lesion. Delar av varje prov frystes omedelbart och lagrades vid -80 ° C, medan en del av den andra delen fixerades i 10% buffrad formalin och inbäddades i paraffin. Senare, extraherades genomiskt DNA direkt från frysta prover med standard fenol /kloroform-metoden efter proteinas K matsmältningen. I 296 av 412 försökspersoner utan magcancer, var svårighetsgraden av kronisk gastrit klassificeras enligt det uppdaterade Sydney systemet [21] av en patolog som inte haft tillgång till någon klinisk information. H. pylori
infektionsstatus bedömdes genom serologi, histologi, eller urea utandningstest. Försökspersoner diagnosen infekterade när åtminstone en av de diagnostiska testerna var positiva. Sälja The etiska kommittéer i Fujita Hälsouniversitetet och Kanazawa Medical University godkänt protokollet, och tidigare, var skriftligt informerat samtycke erhållits från alla deltagande ämnen.
bisulfit modifiering och metylering-specifik PCR (MSP) Review att undersöka DNA-metylering, genomiskt DNA behandlades med natriumbisulfit med hjälp BislFast DNA Modification Kit för metylerat DNA Detection (TOYOBO, Co., Ltd., Osaka, Japan). MSP för DAPK
och CDH1
utfördes med användning av de metoder som rapporterats av Katzenellenbogen et al. [22] och Herman et al. . [23], respektive
I korthet, MSP-reaktioner utfördes med följande primerpar som använder EX Taq HS (Takara Bio, Inc., Shiga, Japan)
Primerpar:.
DAPK: metylerad framåt; 5 '- ggatagtcggatcgagttaacgtc-3 '
omvända; 5 '- ccctcccaaacgccga-3 ',
DAPK: ometylerade framåt; 5 '- ggaggatagttggattgagttaatgtt-3 ',
omvänd; 5 '- caaatccctcccaaacaccaa-3 ',
CDH1: metylerat framåt; 5 '- ttaggttagagggttatcgcgt-3 ',
omvänd; 5 '- taactaaaaattcacctaccgac-3 ',
CDH1: ometylerade framåt; 5 '- taattttaggttagagggttattgt-3 ',
omvänd; 5 '- cacaaccaatcaacaacaca-3 ',
Glödgning temperatur och tider bestämdes med användning av DNA från perifert blod från en ung individ utan H.pylori
infektion som en negativ kontroll och detta DNA metylerades med SSSI metylas (New England Biolabs Inc., Beverly, MA) som en positiv kontroll. MSP genomfördes i en volym av 20

• Fettsyrasammansättning av subkutan fettvävnad och magslemhinnan: Finns det ett samband med magsår
• Lokalt återfall av magcancer efter total gastrektomi: en ovanlig presentation