Influenza della HRH2 promotore polimorfismo aberrante metilazione del DNA di DAPK e CDH1in il gastrica epithelium

influenza di HRH2
polimorfismo del promotore sulla aberrante metilazione del DNA di DAPK
e CDH1
nell'epitelio gastrico
Abstract
Background
modelli di metilazione aberrante isola CpG sono noti per essere influente nel silenziamento genico. L'istamina svolge importanti funzioni fisiologiche nel tratto gastrointestinale superiore e agisce attraverso il recettore H2. Riportiamo un'indagine l'effetto di HRH2
polimorfismo del promotore (rs2607474 G > A) sulla metilazione del DAPK
e CDH1
Metodi
non cancerose campioni di mucosa gastrica sono stati ottenuti da. 115 soggetti con cancro gastrico (GC) e 412 soggetti non-cancro (non-GC). stato di metilazione dei geni è stato determinato mediante MSP. La genotipizzazione di rs2607474 è stata eseguita mediante PCR-SSCP.
Risultati
metilazione di DAPK
e CDH1
è stata osservata in 296 e 246 soggetti, rispettivamente. La frequenza di CDH1
metilazione nei soggetti con GC era significativamente più bassa nel lesione cancro rispetto nella mucosa non cancerose, mentre quella di DAPK
metilazione non era diversa. La distribuzione allelica di rs2607474 era 401GG, 119GA e 7AA. Il omozigote GG è stato associato ad un aumento significativo del rischio per la metilazione sia DAPK
e CDH1
(p < 0,0001 ep = 0.0009, rispettivamente). Nei soggetti non GC o più di 60 anni di età, GG omozigote era più strettamente associato sia con DAPK
e CDH1
metilazione. Tuttavia, questo genotipo non ha mostrato un aumento del rischio per lo sviluppo di metilazione dei geni in pazienti con GC. In H. pylori
soggetti negativi, GG omozigote ha mostrato un aumento del rischio per la metilazione sia DAPK
e CDH1
(p = 0,0074 ep = 0,0016 rispettivamente), mentre questo genotipo era associata ad un aumento del rischio per lo sviluppo di DAPK
metilazione in H. pylori
soggetti positivi (p = 0,0018). Inoltre, nei soggetti di età superiore ai 60 anni di età, atrofia e metaplasia punteggi sono stati significativamente più alta nel omozigote GG (p = 0.011 ep = 0.039, rispettivamente) e una correlazione significativa è stata osservata tra l'età e l'atrofia o metaplasia.
Conclusioni
nostri risultati suggeriscono che rs2607474 GG omozigote conferisce un aumento significativo del rischio per età e infiammazioni legate DAPK
e CDH1
metilazione.
Parole
HRH2
polimorfismo genetico del DNA aberrante metilazione Sfondo
cancro gastrico è uno dei tumori più comuni nel mondo ed è associata con un alto tasso di mortalità [1, 2]. Diversi tipi di cancro, compresi i tumori gastrici, spettacolo metilazione di geni multipli, tra cui E-caderina (CDH1
),
chinasi morte-proteina associata (DAPK
) e inibitore della chinasi ciclina-dipendente 2A (CDKN2A
) [3, 4]. La metilazione del promotore isole CpG DNA porta a cambiamenti strutturali e, di conseguenza, inattivazione genica [5]. Molti studi hanno identificato questo silenziamento metilazione del DNA come un meccanismo responsabile di soppressore del tumore inattivazione. Tuttavia, alcuni geni sono metilate in tessuti non neoplastici dovuta all'invecchiamento [6, 7], ed è stato anche suggerito che gene metilazione avviene durante l'infiammazione cronica in vari tessuti [8-10]. In mucosa gastrica, è stato ipotizzato che la metilazione dell'isola CpG è indotta da Helicobacter pylori
(H. pylori
) infezione mucosa non cancerose [11, 12] e considerati come le condizioni precancerose carcinogenesi gastrica [ ,,,0],13]. Tra i vari geni, DAPK
, CDH1
e CDKN2A Quali sono noti per essere frequentemente metilato nella mucosa gastrica non neoplastica e questo metilazione è connessa all'età, H. pylori
infezione, istologico grado di gastrite e cancro gastrico [11, 13, 14].
Tuttavia, istamina, una delle ammine attivi rilasciati in risposta ad una varietà di stimoli fisiologici, è ampiamente distribuito nel tratto gastrointestinale inclusi stomaco ed è coinvolto nella patogenesi di ulcerazione gastroduodenale e l'infiammazione gastrica [15]. Nello stomaco, i recettori H2, anche se ampiamente distribuita nei tessuti del corpo, sembrano avere un ruolo centrale nella regolazione della secrezione acida, come conferma l'ampio uso di H2 bloccanti del recettore nella terapia di patologie acido-correlate [16, 17] . L'istamina ha un ruolo importante nel processo infiammatorio gastrico agisce attraverso il recettore H2, anche se H. pylori
infezione è uno dei principali fattori che contribuiscono allo sviluppo di infiammazione gastro-duodenale [18]. Recentemente, l'associazione tra polimorfismi genetici di geni istamina recettori e suscettibilità alla schizofrenia, e la sua risposta clinica al trattamento clozapina è stato studiato [19]. Questa indagine dei polimorfismi di HRH2
, che codifica per il recettore H2, rivela l'associazione tra il genotipo al HRH2
-1018 G /A locus (rs2607474) e la risposta clinica al trattamento con clozapina. Inoltre, questa relazione ha dimostrato che rs2607474 si trova un elemento enhancer della HRH2
promotore del gene [19, 20] ed è pertanto probabile che questa variante induce cambiamenti nell'espressione dei recettori. Secondo HapMap-JPT, c'è solo un linkage disequilibrium (LD) blocco, composto da rs686874, rs2067474, rs678591, rs645574, rs2890892 e rs11954815, in HRH2. Tutti gli altri SNP sono polimorfismi minori. Pertanto, abbiamo ipotizzato che questo blocco LD influenzare l'espressione e /o la funzione dei recettori dell'istamina H2 e rs2607474 selezionati come SNP tag. Non c'è stata ancora alcuna relazione sulle rs2607474 influiscono sullo sviluppo e la progressione di disturbi gastrointestinali. Abbiamo ipotizzato che il rs2607474 può influenzare lo sviluppo di aberranti schemi di metilazione del DNA nella mucosa gastrica.
Nel presente studio, abbiamo studiato la relazione tra HRH2
polimorfismo promotore (rs2607474) e metilazione del DNA di DAPK
e CDH1
nell'epitelio gastrico non-cancerose. La differenza di stato di metilazione del DNA tra i pazienti affetti da cancro gastrico e soggetti non cancerose è stato anche indagato.
Metodi
campioni di tessuto, estrazione del DNA, e lo stato di infezione da Helicobacter pylori
La nostra popolazione studiata comprendevano 527 soggetti (412 senza maligna tumori e 115 con cancro gastrico) reclutati dal Endoscopia Centro di Salute Fujita University Hospital o Kanazawa Medical University Hospital. I pazienti affetti da gravi malattie sistemiche sono stati esclusi da questo studio. Quelli con ulcera gastrica o duodenale attivi sono stati anche esclusi. Tutti i soggetti sono stati sottoposti l'endoscopia superiore con biopsia della mucosa da non-cancerose. In 115 soggetti con cancro gastrico, campione bioptico sono stati ottenuti anche da lesione cancro. Parti di ciascun campione sono stati immediatamente congelati e conservati a -80 ° C, mentre alcuni dall'altra è stata fissata a 10% formalina tamponata e inclusi in paraffina. Più tardi, DNA genomico è stato estratto direttamente da campioni congelati utilizzando il metodo di fenolo /cloroformio standard dopo proteinasi K digestione. In 296 di 412 soggetti senza cancro gastrico, la gravità della gastrite cronica è stato classificato in base al sistema di Sydney aggiornato [21] da un patologo che non ha avuto accesso a tutte le informazioni cliniche. H. pylori
stato di infezione è stata valutata mediante esami sierologici, istologici, o urea breath test. I soggetti sono stati diagnosticati come infetto quando almeno uno dei test diagnostici è stato positivo.
I comitati etici della Fujita University Health e Kanazawa Medical University ha approvato il protocollo, e prima, consenso informato scritto è stato ottenuto da tutti i soggetti partecipanti.
modifica bisolfito e metilazione-specifica PCR (MSP)
per esaminare la metilazione del DNA, il DNA genomico è stato trattato con bisolfito di sodio utilizzando kit BislFast DNA modifica per metilato del DNA Detection (TOYOBO, Co., Ltd., Osaka, Giappone). MSP per DAPK
e CDH1
sono state effettuate utilizzando i metodi riportati da Katzenellenbogen et al. [22] e Herman et al. . [23], rispettivamente
In breve, le reazioni MSP sono state effettuate con le seguenti coppie di primer utilizzando EX Taq HS (Takara Bio Inc., Shiga, Giappone) paia di primer:.
DAPK: metilato inoltrare; 5 '- ggatagtcggatcgagttaacgtc-3 '
inversa; 5 '- ccctcccaaacgccga-3 ',
DAPK: in avanti non metilato; 5 '- ggaggatagttggattgagttaatgtt-3 ',
inversa; 5 '- caaatccctcccaaacaccaa-3 ',
CDH1: metilato in avanti; 5 '- ttaggttagagggttatcgcgt-3 ',
inversa; 5 '- taactaaaaattcacctaccgac-3 ',
CDH1: in avanti non metilato; 5 '- taattttaggttagagggttattgt-3 ',
inversa; 5 '- cacaaccaatcaacaacaca-3 ',
temperatura di ricottura e gli orari sono stati determinati usando il DNA dal sangue periferico di un giovane individuo senza H. pylori
infezione come controllo negativo e questo DNA metilato con SSSI methylase (New England Biolabs Inc., Beverly, MA) come controllo positivo. La MSP è stata effettuata in un volume di 20μL contenente 0,1 mg di DNA bisolfito modificated. Il DNA è stato denaturato a 95 ° C per 5 minuti, seguito da 35 cicli a 95 ° C per 30 secondi, 64 o 65 ° C (per CDH1
o DAPK
rispettivamente) per 1 minuto e 72 ° C per 1 minuto con una estensione finale a 72 ° C per 5 minuti. Le bande di MSP sono stati rilevati mediante elettroforesi in gel di agarosio 3,0% colorate con ethdium bromuro. Ipermetilazione è stata definita come la presenza di una banda metilazione positivo mostrando segnali approssimativamente pari o superiore a quella del marcatore di formato (10 ng /ml: 100 bp DNA Ladder, Takara Bio, Inc., Shiga, Giappone) indipendentemente dalla presenza di bande non metilato [4]
. genotipizzazione del polimorfismo HRH2
Il rs2607474 è stato genotipizzati mediante PCR-SSCP come riportato in precedenza [24, 25]. Per rilevare il genotipo, utilizzando la coppia di primer (avanti: 5 '- acctgacccttttctgaaaaagtttgtc-3 ', e invertire: 5 '- ctactcctctgaagtgctgagaaccat-3 '), la PCR è stata condotta in un volume di 20 microlitri contenenti 0,1 mg di DNA genomico. Il DNA è stato denaturato a 95 ° C per 3 minuti, seguito da 35 cicli a 96 ° C per 15 secondi, 60 ° C per 30 secondi, e 72 ° C per 30 secondi, con estensione finale a 72 ° C per 5 minuti. Successivamente, 2 ml di prodotto di PCR è stato denaturato con 10 ml di formammide (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, USA) a 95 ° C per 5 minuti. SSCP è stata effettuata a 6 ° C utilizzando un sistema di separazione GenePhor DNA con GeneGel Excel 12.5 /24 (GE Healthcare, Stati Uniti d'America), dopo di che sono state rilevate le bande di DNA a singolo filamento denaturati utilizzando un kit di colorazione argento DNA (GE Healthcare). Abbiamo confermato che i singoli DNA filamento sono stati nettamente separati da questa condizione [25]. risultati SSCP sono stati confermati utilizzando frammenti di DNA positivi preparati da nested-PCR come riportato in precedenza [24, 26] Analisi statistica
Età e punteggi di sistema Sydney aggiornati
. sono stati espressi come media ± SD. età media tra due gruppi sono stati confrontati con il test t di Student
. Il rapporto tra i sessi, H. pylori
infezione e la metilazione del DNA sono stati confrontati utilizzando il test esatto di Fisher. I conteggi allele sono stati confrontati tra il metilato e non metilato i gruppi di test esatto di Fisher. OR aggiustati sono stati calcolati con l'utilizzo di analisi di regressione logistica dopo aggiustamento per età, sesso e H. pylori
stato infettivo. Ogni punteggi di sistema Sydney aggiornati tra i 2 gruppi è stato confrontato da Mann Whitney U
-test. La correlazione tra età e ogni punteggio sistema Sydney aggiornato è stata valutata mediante ANOVA. Per tutte le analisi, il livello di significatività è stato fissato a pag
< 0.05.
Risultati
Soggetti
Un totale di 412 non-cancro (non-GC) soggetti e 115 cancro gastrico (GC) pazienti hanno partecipato a questo studio. Queste caratteristiche sono riassunte nella Tabella 1. L'età media e il rapporto maschio /femmina del gruppo GC erano significativamente superiori a quelli nel gruppo non-GC. Il H. pylori
rapporto positivo del gruppo GC era anche significativamente superiore a quella del gruppo non-GC. Inoltre, le frequenze di CpG metilazione di
CDH1 sia DAPK
ed erano significativamente più alti nel gruppo GC che nei non-GC group.Table 1 caratteristiche dei soggetti e le frequenze di gene metilazione
Nel complesso
non GC
GC
valore p *
il numero di soggetti
527
412
115
età media ± DS
61,0 ± 13,7
60,0 ± 13,8
66,2 ± 9,7
0,0019
maschio: femmina
319: 208
235: 177
84:31
0,0018
rapporto positivo H. pylori
338/527
249/412
89/115
0,00091
DAPK rapporto metilato
296/527
201/412
95/115
< 0,0001
CDH1 rapporto metilato
246/527
150/412
96/115
< 0,0001
*:. non-GC gruppo contro gruppo GC
frequenze di genotipo rs2607474 tra DAPK gruppi metilato e non metilato
La distribuzione di questo genotipo in tutti i 527 soggetti è stato 401GG, 119GA e 7AA ed era in Hardy -Weinberg equilibrio (p = 0,70). L'età media, H. pylori
rapporto positivo e GC /rapporto non-GC erano significativamente più alti nel
DAPK metilato rispetto ai gruppi unmethylated, mentre il rapporto maschi /femmine tra i due gruppi non era significativamente differente ( Tabella 2). La frequenza dell'allele minore di rs2607474 nel gruppo metilata era significativamente inferiore a quella nel gruppo non metilato (p < 0,0001, impostando α = 0.05, 1-βpower = 0,978). Inoltre, la frequenza della omozigote GG era significativamente più alta nel gruppo metilata che nel gruppo non metilato (p < 0,0001) .table 2 Le frequenze dei genotipi tra DAPK gruppi metilato e non metilato
DAPK non metilato
il numero di soggetti
231
296>
DAPK metilato
valore p *
età media ± DS
59,6 ± 13,4
62,1 ± 13.8
0.035
maschio: femmina
137: 94
182: 114
NS
H. pylori positività
122/231
216/296
< 0,0001
non GC: GC
211: 20
201: 95
< 0,0001
HRH2 rs2607474 genotipo GG

155
246
< 0,0001 #
GA
72
47
AA Pagina 4 3
Una frequenza allele
17,3%
9,0%
< 0,0001
*:.. unmethylated vs metilato, #: frequenza del GG omozigoti
NS: non significativo
frequenze di genotipo rs2607474 tra CDH1 gruppi metilato e non metilato
Il H. pylori
rapporto positivo e GC /rapporto non-GC erano significativamente più alti nel gruppo CDH1
metilato rispetto al gruppo non metilato, mentre età media e il rapporto maschio /femmina tra i due gruppi non erano significativamente differenti (tabella 3). La frequenza dell'allele minore di rs2607474 nel gruppo metilata era significativamente inferiore a quella nel gruppo non metilato (p = 0,0004, impostando α = 0.05, 1-βpower = 0,946) e la frequenza della omozigote GG era significativamente più alta nel gruppo metilata che nel gruppo non metilato (p = 0,013) .table 3 le frequenze dei genotipi tra CDH1 gruppi metilato e non metilato
CDH1
non metilato
CDH1 metilato
valore di p *

il numero di soggetti
281
246
età media ± DS
60,6 ± 14,0
61,4 ± 13,3
NS
maschio: femmina
165: 116
154: 92
NS
H. pylori positività
152/281
186/246
< 0,0001
non GC: GC 262
: 19
150: 96
< 0,0001
HRH2 rs2607474 genotipo
G /G
197
204
0.013 #
G /A
78
41
A /A
6
1 Una frequenza dell'allele
16,0%
8,7%
0,0004
*: unmethylated vs metilato, #: frequenza di GG homozygote
NS:.. non significativo
rischio associato con rs2607474 GG omozigoti per DAPK e CDH1 metilazione
Nel complesso, rs2607474 GG omozigote ha conferito un aumento del rischio altamente significativo per lo sviluppo di DAPK
metilazione ( OR, 2.43; 95% CI, 1,60-3,69; p < 0,0001; Tabella 4). Nei soggetti non-GC, il omozigote GG ha anche mostrato un aumento significativo del rischio per lo sviluppo di DAPK
metilazione (OR, 2.61; 95% CI, 1,62-4,20; p < 0,0001). Tuttavia, è visualizzata né un rischio significativo nella mucosa non cancerose né lesione cancro in soggetti con GC (Tabella 4). La frequenza di DAPK
metilazione non era significativa differenza tra la mucosa non cancerose e lesioni cancro in soggetti con GC (95/115 vs 104/115, p = 0,12) .table 4 Rischio di -1018 GG omozigote per lo sviluppo di DAPK metilazione
complessiva (527)
GG
GA
AA
GG vs vettore; O (95% CI)
valore p
non metilato (231)
155
72 4
riferimento -
metilato (296 )
246
47 3
2,43 (1,60-3,69)
< 0,0001
non GC (412)
non metilato (211)
138
69 4
riferimento -
metilato (201)
167
31 3
2.61 (1,62-4,20)
< 0,0001
GC (115)
(non cancerosa mucosa)
non metilato (20)
17 3
0
riferimento -
metilato (95)
79
16
0
0,825 (0,379-3,73)
0,78
(lesione cancro)
non metilato (11) 10
1
0
di riferimento -
metilato (104)
86
18
0
0,598 (0,069-5,19)
0.64
da analisi di regressione logistica dopo aggiustamento per età, genere e l'infezione da H. pylori stato
():.. il numero di soggetti
D'altra parte, rs2607474 GG omozigote è stato associato ad un aumento significativo del rischio per lo sviluppo di CDH1
, così come DAPK
, metilazione (OR, 2.07; 95% CI, 1,35-3,17; p = 0,0009; Tabella 5). Nei soggetti non-GC, il omozigote GG è stata anche associata ad un aumento significativo del rischio per lo sviluppo di CDH1
metilazione (OR, 2.25; 95% CI, 1,35-3,75; p = 0,0019). Tuttavia, è esposto né un rischio significativo nella mucosa non cancerose né lesione cancro in soggetti con GC (Tabella 5). La frequenza di CDH1
metilazione nei soggetti con GC era significativamente più bassa nel lesione cancro rispetto a livello della mucosa non cancerosi (78/115 vs 96/115, p = 0,009) .table 5 Rischio di -1018 GG omozigote per lo sviluppo di CDH1 metilazione
complessiva (527)
GG
GA
AA
GG vs vettore; O (95% CI)
valore p
non metilato (281)
197
78
6
riferimento -
metilato (246 )
204
41
1 2,07 (1,35-3,17)
0,0009
non GC (412)
non metilato (262)
180
76 Pagina 6
riferimento -
metilato (150)
125
24
1 2,25 (1,35-3,75)
0,0019
GC (115 )
(mucosa non cancerosa)
non metilato (19)
17 2
0
riferimento -
metilato (96)
79
17
0
0,579 (0,120-2,80)
0,50
(lesione cancro)
non metilato (37)
30 7
0
riferimento
-
metilato (78)
66
12
0
1,50 (0,507-4,42)
0.47
da analisi di regressione logistica dopo aggiustamento per età, sesso e H. stato pylori infezione
():. il numero di soggetti
rischio associato con omozigoti rs2607474 GG per lo sviluppo di metilazione del DNA in soggetti sopra e sotto i 60 anni di età
nei soggetti di età inferiore ai 60 anni di età. , rs2607474 GG omozigote ha conferito un po ', ma in modo significativo, aumento del rischio di DAPK
metilazione (OR, 2.12; 95% CI, 1,13-3,98; p = 0,020, tabella 6), mentre non per CDH1
metilazione. Tuttavia, l'omozigote GG ha mostrato un aumento significativo del rischio per lo sviluppo di entrambi DAPK
e CDH1
metilazione nei soggetti di età superiore ai 60 anni (OR, 2.72; 95% CI, 1,55-4,80; p = 0,0005 e OR, 2,81; 95% CI, 1,53-5,17; p = 0.0009, rispettivamente Tabella 6) .table 6 rischio di rs2697474 GG omozigote nei soggetti più giovani o più anziani
metilazione

= < 60 (233)
GG
GA
AA
GG vs GA + AA; O (95% CI)
p valore
non metilato (115)
80
32 3
riferimento -
metilato (118)
96
21
1 2,12 (1,13-3,98)
0,020
60 < (294)
non metilato (116)
75
40
1 riferimento -
metilato (178)
150
26 Pagina 2
2,72 (1,55-4,80)
0,0005
CDH1 metilazione
= < 60 (233)
GG
GA
AA
GG vs vettore; O (95% CI)
p valore
non metilato (121)
88
29 4
riferimento -
metilato (112)
88
24
0
1,55 (0,827-2,91)
0,17
60 < (294)
non metilato (160)
109
49 2
riferimento -
metilato (134)
116
17
1
2.81 (1,53-5,17)
0,0009
da analisi di regressione logistica dopo aggiustamento per età, sesso e da H. pylori stato di infezione
():.. il numero di soggetti
rischio associato con rs2607474 omozigoti GG per lo sviluppo di metilazione del DNA in H. pylori soggetti negativi o positivi
in H. pylori
soggetti negativi, rs2607474 GG genotipo è stato associato ad un aumento del rischio per la metilazione sia DAPK
e CDH1
(OR, 2.70; 95% CI, 1,31-5,57; p = 0,0074, e OR, 4.43; 95% CI, 1,76-11,1; p = 0,0016 rispettivamente, tabella 7). Tuttavia, l'omozigote GG mostrato un aumento del rischio per lo sviluppo di DAPK
metilazione in H. pylori
soggetti positivi (OR, 2.29; 95% CI, 1,36-3,86; p = 0,0018), ma non per CDH1
methylation.Table 7 rischio di rs2607474 GG omozigote in H. pylori soggetti positivi o negativi
metilazione

H. pylori negativi DAPK ( 189)
GG
GA
AA
GG vs GA + AA; O (95% CI)
p valore
non metilato (109)
73
35
1 riferimento -
metilato (80)
67
12
1 2,70 (1,31-5,57)
0,0074
H. pylori positivo (338)
non metilato (122)
82
37
3
riferimento -
metilato (216)
179
35 2
2.29 (1,36-3,86)
0,0018
CDH1 gene metilazione
negativo H. pylori (189)
GG
GA
AA
GG vs vettore; O (95% CI)
p valore
non metilato (129)
86
41 2
riferimento -
metilato (60)
54
6
0
4.43 (1,76-11,1)
0,0016
H. pylori positivo (338)
non metilato (152)
111
37 4
riferimento -
metilato (186)
150
35
1
1,50 (0,900-2,51)
0.12
da analisi di regressione logistica dopo aggiustamento per età e sesso
():.. il numero di soggetti
associazione tra i punteggi di sistema Sydney e rs2607474
in generale, non vi erano differenze significative nella atrofia o metaplasia punteggi tra il omozigote GG e il genotipo GA + AA (Figura 1). Tuttavia, nei soggetti di età superiore ai 60 anni di età, entrambi i punteggi erano significativamente più alti nel omozigote GG rispetto al genotipo GA + AA. Figura 1 confronti di punteggi di sistema Sydney tra GG omozigote e GA + AA genotipo. Nel complesso, né atrofia né metaplasia punteggi erano significativamente differenti tra GG omozigote e GA + AA genotipo. Tuttavia, nei soggetti di età superiore ai 60 anni, entrambi i punteggi erano significativamente più alti nel GG omozigote che in GA + AA genotipo
entrambi i punteggi atrofia e metaplasia erano fortemente correlati con l'età in omozigote GG (entrambi p. ≪ 0,0001 da ANOVA , Figura 2a, b), mentre non vi era alcuna correlazione tra l'età e sia il punteggio nel genotipo GA + AA (p = 0.76 ep = 0.69, rispettivamente figura 2c, d). Figura 2 associazione tra rs2607474 e gastrica atrofia della mucosa. un: correlazione tra età e punteggio atrofia GG punteggio omozigote Atrofia è risultata significativamente correlata all'età (p = 0,0001 da ANOVA, n = 233). B: correlazione tra età e punteggio metaplasia in GG punteggio omozigote metaplasia è risultata significativamente correlata all'età (p < 0,0001 da ANOVA). C: correlazione tra età e punteggio atrofia GA + AA genotipo. Non c'era alcuna correlazione significativa (p = 0.47 per ANOVA, n = 63). D: La correlazione tra età e punteggio metaplasia in GA + AA genotipo. Non c'era alcuna correlazione significativa (p = 0,48 per ANOVA)
. Discussione
Abbiamo precedentemente riportato che CpG isola metilazione sia DAPK
e CDH1
, nella mucosa gastrica non neoplastica, corrisponde a un aumento del rischio di cancro gastrico [4]. Nel presente studio, la frequenza di metilazione in entrambi i geni era significativamente maggiore nei soggetti con GC che senza GC. Tuttavia, la frequenza di CDH1
metilazione lesione cancro era significativamente inferiore a quella nella mucosa non cancerose nei soggetti con GC, anche se la frequenza di DAPK
metilazione non era. Da questi risultati, CDH1
metilazione sembra prendere piccola parte nello sviluppo del cancro gastrico. Nei nostri soggetti studiati, metilazione del gene non può riflettere l'espressione di proteine ​​o di mRNA, anche se alcuni studi precedenti dimostrano che questi metilazioni geni contribuiscono a diminuire i livelli di proteine ​​e mRNA [27-30]. Un'altra possibilità è che tumore può svilupparsi attraverso E-caderina percorsi indipendenti per la carcinogenesi. Il meccanismo di carcinogenesi attraverso gene metilazione è ancora chiaro. Tuttavia, prestiamo attenzione al fatto che l'accumulo di metilazione del gene mostra in realtà un aumento del rischio di carcinogenesi come molti studi hanno indicato [3, 4, 6, 7, 11-14, 31, 32], anche se la metilazione di CDH1
non possono influenzare direttamente lo sviluppo del tumore.
ci sono alcuni rapporti che dimostrano una influenza dei polimorfismi di HRH2 recensioni sul rischio di disturbi umani, ma quelli ci sono rapporto alcuna associazione tra rs2607474 e disturbi neurologici o psicologici, come ad la schizofrenia o morbo di Parkinson [19, 20, 33]. Siamo a conoscenza di precedenti relazioni sulla associazione tra questo polimorfismo e disorders.In gastrica questo studio, abbiamo studiato l'associazione tra rs2607474 e gli sviluppi di CpG isola metilazione sia DAPK
e CDH1
in non-cancerosa mucosa gastrica. Il nostro studio rivela che rs2607474 GG genotipo era positivamente associato con lo sviluppo di CpG isola metilazione di entrambi i geni. Inoltre, abbiamo anche rivelare che l'atrofia della mucosa gastrica è più grave nei comparativamente più vecchio omozigote GG di GA + AA genotipo, e che gastrica atrofia della mucosa progredisce con l'età solo in GG omozigote.
Uno dei fattori più importanti che causano gene metilazione lo stomaco è H. pylori
infezione [4]. L'infezione da H. pylori
primo induce gastrite superficiale cronica, che può progredire a gastrite cronica atrofica, metaplasia intestinale, e displasia che possono portare carcinoma gastrico [34]. I fattori che promuovono H. pylori
mediata atrofia gastrica sono un po 'più controverso. H. pylori
risultati infezione in una elevazione del livello sierico di gastrina, nella fase iniziale dell'infezione, e procede allo sviluppo di gastrite atrofica. La maggior parte degli studi clinici, tuttavia, hanno accettato che gli inibitori della pompa protonica (PPI), che inducono acloridria e ipergastrinemia, accelerano l'insorgenza di gastrite atrofica in H. pylori
pazienti positivi [35-37]. Pertanto, ipergastrinemia sembra promuovere l'atrofia della mucosa gastrica che è influenzata da H. pylori
infezione. Interstingly, il trattamento a lungo termine di ratti e topi con loxtidine, un potente dei recettori H2 antagonisti che inducono iperplasia delle cellule ECL, (come fa omeprazolo), non ha comportato la perdita di cellule parietali, ma invece sembrava causare un aumento cellule parietali [38, 39]. Inoltre, topi knockout HDC tenuti su una dieta a basso istamina ha mostrato una piscina cellule parietali espanso nonostante esibendo segnato ipergastrinemia [40]. Questi risultati suggeriscono che è l'up-regolazione di istamina, non acloridria nè ipergastrinemia, che contribuisce alla graduale down-regolazione del numero di cellule parietali e atrofia gastrica. Nel nostro studio attuale, l'atrofia della mucosa gastrica progredito con l'età in rs2607474 GG omozigote coorte, mentre nella AA genotipo GA + non ha fatto. Inoltre, il grado di atrofia della mucosa gastrica è stata maggiore nei soggetti anziani che erano omozigoti GG rispetto a quelli che erano il genotipo GA + AA. Nel nostro studio precedente, è stata confermata una correlazione tra metaplasia intestinale e metilazione del gene di vari geni [4]. Per questo motivo suggeriamo che la metilazione del gene progredisce più rapidamente in parallelo con gastrica atrofia della mucosa nel omozigote GG rispetto al genotipo GA + AA. Inoltre, è possibile che l'azione di istamina è up-regolato in GG omozigote. Tuttavia, non ci sono stati studi per gli effetti di rs2607474 sulla funzione o l'espressione dei recettori H2 e il nostro studio statistico genetica non li ha rivelato. Questa è una delle limitazioni nel nostro studio.

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