PLOS ONE: Riktad Radering av Kcne2 orsakar gastrit cystica profunda och Gastric neoplasi

Abstrakt

Gastric cancer är den näst vanligaste orsaken till dödsfall i cancer i hela världen. Predisponerande faktorer inkluderar aklorhydri, Helicobacter pylori
infektion, oxyntic atrofi och TFF2 uttryck metaplasi. I parietalceller, apikala kaliumkanaler som omfattar KCNQ1 α-subenheten och KCNE2 β subenheten ge en K <sup>+ utflödesström för att underlätta utsöndring av magsyra genom den apikala H + K + ATPas. Följaktligen genetisk deletion av murin KCNQ1
eller Kcne2
försämrar magsyrasekretion. Andra bevis har föreslagit en roll för KCNE2 i human magcancer celltillväxt, oberoende av dess roll i gastric försurning. Här visar vi att ett-åriga Kcne2
- /- möss i en patogen miljö alla uppvisar en allvarlig gastrisk preneoplastisk fenotyp innefattar gastrit cystica profunda, 6-faldigt ökad magen massa, ökade Ki67 och kärnkraft cyklin D1 uttryck, och TFF2- och cytokeratin 7-uttryck metaplasi. Några Kcne2
- /- möss även uppvisade pyloric polypoid adenom sträcker sig in i tolvfingertarmen, och neoplastisk invasion av tunnväggiga kärl i under slemhinnan. Slutligen, analys av mänsklig gastric cancervävnad indikerade minskad parietalcellens KCNE2 uttryck. Tillsammans med tidigare fynd, tyder resultaten på KCNE2 störningar som en möjlig riskfaktor för gastric neoplasi</sup>

Citation. Roepke TK, Purtell K, kung EG La Perle KMD, Lerner DJ, Abbott GW (2010) riktade radering av Kcne2
orsakar gastrit cystica profunda och Gastric neoplasi. PLoS ONE 5 (7): e11451. doi: 10.1371 /journal.pone.0011451

Redaktör: Xin-yuan Guan, University of Hong Kong, Kina

emottagen: 3 maj 2010; Accepteras: 13 juni 2010. Publicerad: 6 juli 2010

Copyright: © 2010 Roepke et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit

Finansiering:. G.W.A. stöds av National Heart, Lung and Blood Institute, National Institutes of Health (R01 HL079275), American Heart Association (Grant-i-Stöd 0855756D), och ett Irma T. Hirschl Karriär Scientist Award. Finansiärerna hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera, eller beredning av manuskriptet

Konkurrerande intressen:.. Författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns

Introduktion

Gastric cancer förblir en av de viktigaste orsakerna till dödlighet, och den näst vanligaste orsaken till dödsfall i cancer, över hela världen. Gastric cancer är en process som fortskrider genom flera steg inklusive oxyntic atrofi, sårbildning, foveolar hyperplasi, hypo- och aklorhydri och slemhinnor cell metaplasi [1]. Trots framsteg inom behandling av magsäckscancer är relativt lite känt om de molekylära mekanismer som är involverade i gastric cancer, utveckling av normal magslemhinna i preneoplastiska magsår, eller den potentiella rollen för jonkanaler i dessa processer.

Parietal celler uppnå gastric försurning på grund av en apikal H ^{+ K + ATPas (HKA) som pumpar protoner i magen lumen i utbyte mot K + joner. För att bibehålla denna verksamhet, K + joner måste resa från parietalcellen i magen lumen via apikala membranet, för att säkerställa fortsatt substrat för HKA [2]. Detta K + jon utflödet sker genom en eller flera typer av apikal, K + - selektiva kanaler. Flera inåt likriktare (KIR) kanaler är inblandade i denna process baserad på parietalcellens uttryck och farmakologiska bevis [3], [4], men än så länge finns det genetiska bevis för bara en kanal som uppfyller denna roll: KCNE2-KCNQ1 [5] - [7]. KCNQ1 är en sex-transmembrandomän α-subenheten från S4 super, som bildar funktionell, spänningskänsliga, homotetrameric K + - selektiva kanaler i heterologa expressionsstudier [8], [9]. KCNQ1 kan också bilda heteromera kanalkomplex med anslutna subenheter från KCNE genfamiljen, och alla fem kända KCNE genprodukter har visats reglera KCNQ1 funktion i heterologa expressionsstudier [10]. En, KCNE2 omvandlar KCNQ1 till en spänningsoberoende, konstitutivt aktiv kanal vars nuvarande ökar med lågt pH. KCNE2 och KCNQ1 båda uttrycks vid eller nära parietalcellen apikala membran, och riktade gendeletion av antingen subenhet resulterar i aklorhydri på grund av nedsatt magsyrasekre [5] - [7]. Således KCNE2-KCNQ1 kanaler anses viktiga för magsyrasekretion och tänkt att ge luminal K + joner som ett substrat för mag HKA}

KCNQ1
<sup>-. /- möss och Kcne2
- /- möss visar liknande gastric fenotyper, som kännetecknas av aklorhydri, hypergastrinemia och gastric körtel hyperplasi [5] - [7]. Parietalceller från antingen null show -10-faldigt minskad förmåga att återhämta från proton lastning, vilket tyder på en primär defekt i magsyrasekretion. KCNQ1
- /- möss utvecklar också metaplasi, dysplasi och pre-maligna adenomatös hyperplasi i magen oberoende av infektion [11]. Detta tyder på att KCNQ1 dysfunktion kan leda till mag neoplasi oberoende av H. pylori
följd av svår aklorhydri, eller utgör en ytterligare riskfaktor som i samband med H. pylori
kan öka risken för magcancer</sup>

aklorhydri och gastric hyperplasi vi tidigare observerats i Kcne2
<sup>-. /- möss var slående med tanke på att det porbildande subenheten av komplex, KCNQ1 var fortfarande närvarande, och i själva verket starkt uttryck i dubbla antalet celler per funduskörtlar i Kcne2
- /- möss jämfört med Kcne2
+ /+ möss [7]. I en nyligen genomförd studie visade KCNE2 uttryck befanns uttryckas på relativt låga nivåer i mag tumörer mänskliga och i gastric cancercellinjer; Vidare tvingas över-expression av KCNE2 tryckte tillväxten av humana gastriska cancerceller i vävnadskultur, och i nakna möss [12]. Dessa fynd höjt spännande möjlighet att KCNE2 kan vara inblandade i gastric cancer, och potentiellt oberoende av antingen H. pylori
infektion eller aklorhydri. Här, för att ytterligare definiera potentiella roll KCNE2 i regleringen av normal gastric celltillväxt, granskade vi gastric patologi Kcne2
- /-. Möss upp till 15 månaders ålder</sup>

Resultat

Kcne2 ^{- /- Paket möss uppvisar progressiv gastric hyperplasi}

Vi visade tidigare att Kcne2 krävs för normal reglering av gastrointestinala celltillväxt: 3- månader gammal Kcne2
<sup>- /- möss har gastric hyperplasi, aklorhydri och onormal parietalcellens morfologi [7]. Här har vi jämfört magen massan av tre veckor, tre-månads- och 12-15 månader gamla Kcne2
- /- möss. Massan av magar vid 3 veckors ålder var liknande för Kcne2 + /+ Mössor och Kcne2
- /- möss, medan efter 3 månader var signifikant gastric hyperplasi i Kcne2
- /- möss. Denna skillnad har ökat med 12-15 månader i den utsträckning som Kcne2
- /- möss hade magar sex gånger större än för Kcne2 + /+
möss i samma ålder (Figur 1 A) katalog</sup>

Kcne2 ^{-. /-
möss uppvisar gastrit cystisk profunda}

Även vid 3 veckors ålder, trots liknande mage massa som i Kcne2 <sup>+ /+
möss, magslemhinnan av Kcne2
- /- möss visade redan vacuolations nära basolaterala sidan (Figur 1 B, förstorat i D). För att undersöka utvecklingen av gastric hyperplasi och dess konsekvenser, totalt elva 12-15 månader gamla Kcne2
- /- möss och fem Kcne2 + /+
möss histologiskt undersöktes. Magslemhinnan i alla Kcne2
- /- möss visade körtel hypertrofi och diffus hyperplasi med ökat antal slemceller och parietalceller som ibland vakuoliserade (Figur 1 C). Påfallande, gastrit cystica profunda (GCP) observerades hos 11/11 Kcne2
- /- möss, men 0/5 av Kcne2
+ /+ möss ( χ 2 p
= 0,002) (förstoring av cysta i figur 1 E). Vidgade körtlar innehöll cellrester och i vissa men inte alla Kcne2
- /- möss, neutrofiler. Det fanns också gastric epithelial hyalinosis med enstaka intraluminala kristaller och lymphoplasmacytic aggregat i slemhinnan, submucosa och muscularis. I vissa 12-15 månader gamla Kcne2
- /- mus magar, framträdande lamina proprial fibros noterades, särskilt i de ytliga skikten. GCP, också tidigare kallat godartad gastric pseudo allmänhet presenterar som ett spektrum av hyperplastiska och metaplastiska förändringar efter skador på magslemhinnan. Medan GCP visar histologiska egenskaper som hör ihop med malignitet, är det i och för sig i allmänhet vara funktionellt godartad - även om det har föreslagits som en möjlig riskfaktor för magcancer [13], [14]</sup>

Ökade proliferativa markörer i magsäcken. slemhinna Kcne2 ^{- /-
möss}

Det är viktigt uttryck etablerade preneoplastiska markörer ökades i Kcne2
<sup>- /- möss jämfört med Kcne2
+ /+ möss. Ki67 antigen är ett cellcykelrelaterade nukleärt protein som vanligen används som en proliferationsmarkör i prolifererande och neoplastiska vävnader, innefattande magen [15]. Ki67 färgning i sektioner från Kcne2
+ /+ mus magar (3 månader) indikerade en liten skara Ki67 positiva celler inom isthmic regionerna gastric körtlar, medan denna proliferativa fack var utvidgas betydligt i ålders matchas Kcne2
- /- möss (Figur 2 A-C). Epitel foder cystisk områden av GCP i 12-månader gammal Kcne2
- /-. Möss visade också framträdande färgning av kärnor med Ki67, vilket tyder på en hög spridningshastighet (Figur 2 B) katalog</sup>

Cytokeratin (CK) -7 är en polypeptid 54 kDa uttrycks i en mängd olika epitelvävnader inklusive lung-, bröst-, och fetal mänskliga magen; emellertid är det inte uttrycks i normal vuxen mag epitel [16]. Uppreglering av CK-7, som indikerar dedifferentiering, var tydlig i Kcne2
<sup>- /- magslemhinnan vid 12 månader; i åldersmatchade Kcne2
+ /+ möss, gastrointestinala positiva epitelceller var mycket sällsynt (Figur 2 D). CK-7 var också framträdande runt cystor (Figur 2 E) katalog</sup>

TFF2 uttrycker metaplasi i magslemhinnan av Kcne2 ^{-. /- Paket möss}

Trefoil- familjen (TFF) 2-uttryckande metaplasi är förknippad med progression till gastric cancer hos människor, och i mongoliska ökenråttor infekterade med H. pylori
[17]. Magslemhinnan av Kcne2
^{- /- möss uppvisade områden metaplasi med framträdande TFF2 uttryck, bland annat i epitelceller cystor (Figur 3 A-C). TFF2-uttryck metaplasi är vanligtvis förknippas med oxyntic atrofi, kännetecknad som en förlust av parietalceller [1]. Här analyserade vi magslemhinnan från 12 månader gamla möss med TFF2-uttryck metaplasi för uttryck av HKA β-subenheten (HKA β), en parietalcellens markör. Slående, det fanns inget bevis för oxyntic atrofi i termer av antal parietalceller (Figur 4 A). Vidare var HKA β uttrycks i celler som kantar cystor (Figur 4 B) katalog}

Ökad gastrointestinala cyklin D1 uttryck och gastric neoplasi i Kcne2 ^{-. /-
Möss}

Minskad KCNE2 uttryck tidigare föreslagits för att öka spridningen i magcancer cellinje SGC7901 via ökat uttryck av cyklin D1 [12]. Här, western blottar föreslog att Kcne2
gendeletion ökad total cyklin D1 uttryck i magslemhinnan av 12-månader gamla möss (Figur 5 A). Cyklin D1 visade svag och övervägande cytoplasmisk expression vid basen av Kcne2
<sup>+ /+ oxyntic körtlar (Figur 5 B, C, vänster paneler), som tidigare beskrivits för normala, prolifererande celler i mus mage [ ,,,0],18]. Däremot i Kcne2
- /- möss, cyklin D1 visade mer utbredd och nukleär färgning i halsen näs regionen gastric körtlar, och körtel grop (Figur 5 B, C, höger sida). I två av elva 1-åriga Kcne2
- /- möss som analyserats, pyloric polypoid adenom observerades, sträcker sig in i tolvfingertarmen (Figur 5 D). Samma två Kcne2
- /- möss uppvisade också neoplastisk tillväxt i form av tromber som består av fibrin och körtelepitel i tunnväggiga kärl (identifieras med hjälp av endotel markör CD34) inom mag submukosa ( figur 5 E-H).</sup>

reducerad parietalcellens KCNE2 expression i human gastric cancervävnad

med tanke på att i en tidigare studie reducerat KCNE2 uttryck befanns öka magcancer-cellinjen proliferation, och KCNE2 expression befanns reduceras i human gastric cancer [12] undersökte vi KCNE2 expression i normal human magslemhinna, och magcancer vävnad. Immunofluorescens studier visat slående skillnader vad gäller KCNE2 och KCNQ1 samlokalisering, mellan normal och malign human gastrisk slemhinnor. Som förväntat, KCNQ1 och KCNE2 samlokaliserade starkt i parietalceller i normal human magslemhinna (figur 6 A), som gjorde KCNQ1 och HKA β (Figur 6 B). I motsats, i humana gastriska karcinom, KCNQ1 och KCNE2 uttryck sällan överlappade (Figur 6 C, D), även om KCNQ1 behållit sin starka samlokalisering med HKA β (Figur 6 E). Således KCNE2 uttryck i parietalceller sällan observeras i magcancer. Bristen på KCNE2-KCNQ1 samlokalisering var ännu mer djupgående i human magcancer (Figur 6 F), vilket återigen behöll samlokalisering av KCNQ1 och HKA β (Figur 6 G).

Diskussion

kaliumkanaler i proliferativa störningar

Kaliumkanaler kanaler~~POS=HEADCOMP har dykt upp som ett potentiellt mål för anti-cancerterapier [19], inklusive KCNQ1, hERG och Kv2.1, som alla är a-subenhet partners KCNE2. Störd prägling orsakas av mutationer i KCNQ1 genen orsakar Beckwith-Wiedemanns syndrom (BWS), som predisponerar för cancer [20] - [22], och KCNQ1 knockout predisponerar för gastric metaplasi [11]. HERG kaliumkanalen α-subenhet, som bildar komplex med KCNE2 tillhörande subenheten i människohjärtat [23], är överuttryckt i vissa tumörer, och har identifierats som en tumör överlevnadsfaktor [24] - [27] som har KV2. 1 [28].

KCNE2 tidigare visat sig uttryckas två gånger lägre i human gastrisk cancervävnad än i grann normala gastric celler, och tvingade uppreglering av KCNE2 hade antiproliferativa effekter på gastric cancerceller in vitro och injiceras i nakna möss [12]
. Mekanismen för denna antiproliferativ effekt är nedreglering av cyklin D1, fördröja progression genom cellcykeln [12] som liknar vad som observerades med hERG blockerare cisaprid [29]. Förhöjda uttryck av cyklin D1 i mag tumörer mänskliga korrelerar med en särskilt dålig prognos [30], därför att förstå faktorer som ökar cyklin D1 uttryck kan leda till terapeutiska vägar för detta och andra former av cancer. Överexpression av cyklin D1 har föreslagits att bidra till onkogenes genom att störa cellcykeln, och har rapporterats vara en viktig onkogen faktor i esofageal karcinom [31], och i samband med nukleär ackumulering av β-catenin i äggstock endometrioid adenokarcinom [32]; nukleär cyklin D1 uttryck i gallblåsan karcinom är en kritisk händelse [33].

Här beskriver vi omfattande metaplastiska förändringar i magsäcken muscosa på grund av genetiska störningar av Kcne2
. Detta är förenat med ökad kärn cyklin D1 uttryck i magslemhinnan, som påminner om resultaten från tidigare In vitro
studier av KCNE2 [12]. Varken den aktuella rapporten eller den tidigare studien, dock beskriva mekanismen för cyklin D1 uppreglering i Kcne2
^{- /- slemhinna - är det en följd av metaplastiska förändringar sekundära till aklorhydri i dessa möss, eller är det en mer direkt samband mellan Kcne2 Mössor och cyklin D1? Studien av Yanglin och kollegor argumenterar för senare åtminstone delvis, på grund i deras studie cyklin D1 förändringar skett i isolerade celler utan påverkan av aklorhydri [12]. Vi anser att förändringar sekundärt till aklorhydri är den mest sannolika dominerande faktorn, men kan inte uteslutas en direktlänk. Intressant, hERG, en annan partner KCNE2, uttrycks i gastric cancerceller men inte normala gastric epitel, och hERG kanalsblockerare cisaprid har tidigare funnit att undertrycka gastrisk cancercellernas tillväxt genom att hämma inträde i S-fas från G (1) fas i cellcykeln, öka apoptos [29]. Eftersom KCNE2 trycker delvis hERG strömmar genom att minska enhets ledningsförmåga och snabbare deaktivering [23], är det en spännande möjlighet att de observerade anti-proliferativa effekterna av KCNE2 uttryck In vitro
[12] beror på hERG nuvarande förtryck främja apoptos, och omvänt att KCNE2 nedreglering eller genetisk störning kan gynna gastric cellulär proliferation genom att öka hERG strömtäthet}

GCP och TFF2 uttryck metaplasi (spem) i Kcne2 ^{-. /-
möss}

GCP kan presentera människohandel med intermittent epigastrisk smärta, svullnad, mag obstruktion eller övre gastrointestinal blödning, och är vanligast hos patienter med en historia av antingen gastrektomi eller gastrostomi [34]. Emellertid har ett fåtal fall har rapporterats med något samband med tidigare magoperationer [35], [36]. Patogenesen av humant GCP tros uppkomma från en skada av muscularis mucosae, vilket kan leda till ektopisk inneslutning av gastriska körtlar i submucosa, muscularis slemhinnor eller serosa, eller från kronisk inflammation. GCP anses allmänt en godartad klinisk enhet, men tillsammans med magsäckscancer har rapporterats [14], [37], [38].

I försöksdjur, GCP sekundärt till Helicobacter sp
. infektion har beskrivits som en föregångare till intramucosal dysplasi och neoplasi [39], och i samband med utvecklingen av magcancer. GCP var ofta i H. pylori
infekterade mongoliska gerbiler som också utvecklade gastrisk adenokarcinom och lymfoid hyperplasi [40]. I en tidigare mus genetisk modell av GCP, TGF-beta utvecklat en <sup>+/- möss körtelhyperplastiska skador som delade morfologiska egenskaper med humant GCP, med blandad inflammatorisk infiltration av omgivande slemhinna och kronisk vaskulit i vävnaderna intill dessa skador [ ,,,0],41]. Här, i Kcne2
- /- möss, sker GCP i frånvaro av en primär inflammatorisk lesion, och oberoende av vaskulär obliteration. I stället föreslår vi att den primära defekten är förlusten av KCNE2 β-subenheten från kanalkomplex med KCNQ1, vilket försämrar en viktig apikal K + återvinning vägen i parietalcellerna och förhindrar gastric försurning av parietalcellen HKA. Detta är visserligen en "funktionell atrofi" i parietalcellen befolkningen i tidigare studier av intestinal metaplasi en faktisk förlust av parietalceller, benämnd "oxyntic atrofi", ansågs vara en viktig process i etiologin av intestinal metaplasi, förknippad med syra refluxsjukdom eller H. pylori
infektion, och är den vanligaste metaplastiskt process observerades i den övre mag-tarmkanalen [42].</sup>

Oxyntic atrofi i frånvaro av betydande inflammation kan induceras av DMP-777, en neutrofilelastas inhibitor som riktar också parietalceller på grund av dess verkan som en protonophore [43]. Oxyntic atrofi i mag-brist möss efter behandling med DMP-777, leder snabbt till TFF2 uttrycker metaplasi, även kallad spasmolytisk peptid uttrycker metaplasi (spem) [44]. Spem är anmärkningsvärd på grund av dess starkt samband med mänsklig magcancer, och det har observerats i de flesta fundic körtel biopsier från människa H. pylori
infekterade gastrit patienter [45]. Utseendet på spem i Kcne2
<sup>- /- möss i frånvaro av antingen H. pylori
eller klassisk oxyntic atrofi tyder på att "funktionell atrofi" på grund av Kcne2
radering kan vara tillräckligt för att utlösa spem. En stor skillnad mellan Kcne2
- /- möss och de i Nozaki studien är att Kcne2
- /- möss är hypergastrinemic inte gastrin-brist. En annan skillnad är att DMP-777 avbryter en gastric tubulovesicle proton gradient utan att försämra H + K + - ATPas funktion, medan riktad Kcne2
störningar förhindrar H + /K + -ATPas funktion genom att ta bort dess luminala substrat, K + joner [7], [44]. Kanske denna senare mekanism kan i framtiden avslöja ledtrådar om de kritiska händelser i oxyntic atrofi som resulterar i spem: det är för närvarande föreslås att spem induktions resultat från en brist i parietalcellens utsöndrade regulatorer för normal förnyelse gastrointestinala, bland annat sonic hedgehog och TGF-α [46], [47] på grund av förlust av parietalceller. Ytterligare studier av Kcne2
- /- parietalceller - som fortfarande är närvarande men fungerar - kan avslöja tillsynsmyndigheter som de fortfarande kan utsöndra, och de som de kan inte</sup>

magslemhinnan. av Kcne2
<sup>- /- möss visar också ökad expression av den etablerade proliferation markören Ki67, manifesterar sig som en ökning av bredden av det mukosala proliferativa bandet, och som Ki67-positiva celler som kantar cystor i regioner av GCP. Likaså de-differentieringsmarkör CK7, uttrycks inte i en-åriga Kcne2
+ /+ magslemhinnan, var allmänt uttryck i den för Kcne2
- /- möss. Att ta dessa och markörer som beskrivits ovan tillsammans, Kcne2
- /- magslemhinnan uppvisar metaplasi med flera funktioner i preneoplasia, och i vissa fall neoplasi, särskilt i ett visst patogen miljö utan tecken av gastric Helicobacter
infektion eller oxyntic atrofi, och i avsaknad av kemiska hämmare av gastric försurning. Tillsammans med upptäckten här att parietalcellens KCNE2 uttryck tycks minska i human magcancer vävnad (Figur 4) och den föregående rapporten att KCNE2 hämmar magcancer celltillväxt [12], de data tyder KCNE2 störningar associeras med gastric cancer progression. Framtida studier kommer att innebära att undersöka huruvida ökar Kcne2
störningar anlag för magcancer inom patogener och cancerframkallande baserade protokoll, mekanismerna bakom dessa eventuella skillnader, och de potentiella mekanistiska kopplingen mellan Kcne2
, cyklin D1 och cellcykel störning utanför sfären av aklorhydri-associerad sjukdom etiologi. Såsom KCNQ1 och KCNE2 också samuttrycktes i sköldkörtel epitelceller, där de är viktiga för sköldkörtelhormon biosyntes [48], kommer det att vara av intresse att undersöka en potentiell roll för KCNE2 i onormal thyrocyte spridning.</sup>

Material och metoder

Generation och användning av gen-riktade möss

Alla möss som beskrivs i denna studie inhystes, utnyttjas och avlivas enligt NIH och Cornell University Institutional Animal Care och användning kommittén riktlinjer. Alla möss som beskrivs i denna studie inhystes, utnyttjas och avlivas enligt NIH och Weill Medical College Institutional Animal Care och användning kommittén riktlinjer. Etiskt godkännande att föda upp och skörda vävnad från vildtypen och Kcne2
<sup>- /- möss för biomedicinsk forskning godkändes av Weill Medical College Institutional Animal Care och användning kommittén (protokoll 0704-610A). Kcne2
- /- möss genererades som tidigare beskrivits från C57BL /6 Kcne2 + /News - x Kcne2 +/-
korsningar [7]. Numeriska data analyserades med Excel (Microsoft) med hjälp av envägs variansanalys (ANOVA) med statistisk signifikans inställd på P Hotel <. 0,05</sup>

Histologi

För histologi och magen mass kvantifiering, Kcne2 <sup>+ /+ Mössor och Kcne2
- /- möss på 3 veckor, 3 månader och 12-15 månader avlivades med hjälp av CO _{2 kvävning (5-10 per genotyp). Magarna avlägsnades post mortem, mage massa som fastställts, då magen vävnaden fixerades i 10% neutral buffrad formalin, bearbetades med rutinmetoder och inbäddas i paraffinvax. Gastriska mukosala sektioner skars vid 5 ^ m mellanrum, placerade på positivt laddade Superfrost slides, färgades med hematoxylin och eosin (H & E)., Och utvärderas med ett Olympus BX45 mikroskop}</sup>

Immunohistokemi

immunhistokemisk detektion av Ki67, CK-7 och TFF2 (även känd som kramplösande peptid) genomfördes med en Discovery XT-processor (Ventana Medical Systems). Koncentrationerna primär antikropp som användes var: 0,05 mikrogram /ml (kanin polyklonal anti-Ki67, Vector Labs); 1

• PLoS Pathogens: Caveolin-1 skyddar B6129 Möss mot Helicobacter pylori Gastritis
• PLOS ONE: Epstein-Barr-virus och Helicobacter pylori-infektion är positivt förknippade med svår gastrit i Pediatric Patients