PLoS ONE: Tikslinės Išbraukus Kcne2 Sukelia Gastritas Cystica Profunda ir skrandžio Neoplasia

Anotacija

Skrandžio vėžys yra antra pagrindinė priežastis, dėl vėžio mirties visame pasaulyje. Linkusiems veiksniai achlorhidrija Helicobacter pylori
infekcija, oxyntic atrofija ir TFF2 ekspresija metaplazija. Be pakauškaulio ląsteles, viršūninio kalio kanalai, sudarantys KCNQ1 alfa subvieneto ir KCNE2 β subvieneto pateikti K <sup>+ emanacijos srovę palengvinti skrandžio sulčių sekreciją viršūninio H + K + ATPazės. Todėl genetinių išbraukta pelių Kcnq1
arba Kcne2
kliudytų skrandžio rūgšties sekreciją. Kiti įrodymai pasiūlė vaidmenį KCNE2 į žmogiškąjį skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją, nepriklausomai nuo jo vaidmenį skrandžio rūgštingumo sumažinimą. Čia mes įrodyti, kad 1-metų Kcne2
- /- pelių patogeno aplinkoje be visų eksponuoti sunkus skrandžio priešvėžine fenotipas, apimantis gastritas cystica profunda, 6 kartus padidėjo skrandžio masė, padidėjęs KI67 ir branduolinė cikloniniai D1 raiška ir TFF2- ir citokeratino 7 išreikšti Metaplasia. Kai Kcne2
- /- pelėms taip pat eksponuojami prievarčio Polipveidīgs adenomų, nusidriekę į dvylikapirštę žarną, ir neoplastinį Invazija plonasienių laivų sub-gleivinę. Galiausiai analizė žmogaus skrandžio vėžio audinio nurodomas sumažintas Išorinis mobilųjį KCNE2 išraiška. Kartu su ankstesnių tyrimų išvadas, rezultatai rodo, KCNE2 sutrikimų kaip galimą rizikos veiksnys skrandžio navikų</sup>

nurodomoji dalis:. Roepke TK Purtell K karalius EB La Perle KMD, Lerner DJ "Abbott GW (2010) Tikslinės ištrynimas iš Kcne2
Sukelia gastritas Cystica Profunda ir skrandžio navikų. PLoS ONE 5 (7): e11451. Doi: 10,1371 /journal.pone.0011451

redaktorius: Xin juanis Guan, Honkongo universitetas, Kinija

Įstojo: gegužės 3, 2010; Priimtas birželio 13? ", 2010; Paskelbta 6 Liepos 2010

Visos teisės saugomos: © 2010 Roepke et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. G.W.A. remia Nacionalinis širdies, plaučių ir kraujo instituto, National Institutes of Health (R01 HL079275), Amerikos širdies asociacijos (Grantas In-pagalba 0855756D), o Irma T. Hirschl Karjera Scientist apdovanojimą. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys išlieka viena iš pagrindinių mirties priežasčių, o antroji pagrindinė priežastis, dėl vėžio mirties visame pasaulyje. Skrandžio Kancerogeninis yra procesas, kuris progresuoja per kelis etapus, įskaitant oxyntic atrofija, opa formavimas, foveolar hiperplazija, hipogamaglobulinemija ir achlorhidrija ir gleivinės ląstelių metaplazijos [1]. Nepaisant pažangos gydant skrandžio vėžiu, palyginti mažai žinoma apie molekulinius mechanizmus, skrandžio kancerogenezėje, normaliai skrandžio gleivinės plėtra į priešvėžine skrandžio pažeidimų, ar potencialus vaidmuo jonų kanalų šių procesų.

parietal ląstelės pasiekti skrandžio rūgštėjimą įmones pagal viršūninio H ^{+ K + ATPazės (HKA), kuris siurbliai protonus į skrandį spindyje mainais už K + jonais. Siekiant išlaikyti šią veiklą, K + jonai turi keliauti iš parietalinių ląstelių į skrandį spindyje per viršūninio membrana, siekiant užtikrinti nuolatinę substratas HKA [2]. Tai K + jonų ištekėjimo atsiranda per vieną ar daugiau tipų viršūninio, K + - selektyviuosius kanalų. Keletas vidų lygintuvas (KIR) kanalai susijęs šiame procese grindžiamas Parietal ląstelių ekspresijos ir farmakologinių įrodymų [3], [4], tačiau iki šiol egzistuoja genetinės įrodymų tik vieną kanalą, atitinkančių šį vaidmenį: KCNE2-KCNQ1 [5] - [7]. KCNQ1 yra šešių transmembraninę α subvieneto nuo S4 superfamily, kuris yra funkcinis, įtampos reguliuojamų, homotetrameric K + - selektyviuosius kanalų heteroologinių ekspresijos tyrimų [8], [9]. KCNQ1 taip pat gali sudaryti heteromerinio kanalų kompleksus su papildomomis padaliniuose iš KCNE genų šeima, ir visi penki žinomi KCNE geno produktai buvo įrodyta, kad reguliuoti KCNQ1 funkciją heteroologinių ekspresijos tyrimų [10]. Vienas iš jų, KCNE2, konvertuoja KCNQ1 į įtampos nepriklausoma, constitutively aktyviosiomis kanalą, kurio srovė padidėjo žemo pH. KCNE2 ir KCNQ1 yra abu išreikšti arba arti jo parietalinių ląstelių viršūninio membranos, ir tiksliniai geno deleciją iš arba subvieneto rezultatų achlorhidrija Dėl sutrikusios skrandžio rūgšties sekrecijos [5] - [7]. Taigi KCNE2-KCNQ1 kanalai laikoma esmine skrandžio rūgšties sekreciją ir maniau teikti luminal K + jonus kaip skrandžio HKA substrato}

Kcnq1
<sup>-. /- pelės ir Kcne2
- /- pelių parodyti panašius skrandžio fenotipų, kuriai būdinga achlorhidrija, hypergastrinemia ir skrandžio liaukų hiperplazija [5] - [7]. Pakauškaulio ląstelės arba null šou ~10 kartus mažesnis gebėjimą atsigauti nuo protonų pakrovimo, rodo pirminis defektą skrandžio rūgšties sekreciją. Kcnq1
- /- pelėms taip pat plėtoti Metaplasia, displazija ir iš anksto piktybinis adenomatozinio hiperplazija skrandžio nepriklausomai nuo infekcijos [11]. Tai rodo, kad KCNQ1 disfunkcija gali sukelti skrandžio navikų nedalyvavę H. pylori
dėl sunkių achlorhidrija arba yra papildomas rizikos veiksnys, kuris kartu su H. pylori
gali sąlygoti skrandžio vėžio</sup>

achlorhidrija ir skrandžio hiperplazija mes anksčiau pastebėta, Kcne2
<sup>-. /- pelėms buvo kalė turint omenyje, kad porų formavimo subvieneto iš sudėtinga, KCNQ1, dar dalyvavo, ir iš tikrųjų jis buvo stipriai išreikštas dvigubai ląstelių viename skrandžio liaukos, Kcne2
skaičius - /- pelių, palyginti su Kcne2
+ /+ peles [7]. Neseniai atliktas tyrimas, buvo nustatyta KCNE2 išraiška turi būti išreiškiama gana žemo lygio žmonėmis skrandžio navikų ir skrandžio vėžio ląstelių linijų; be to, perpumpuojamu-išraiškos KCNE2 slopino žmogaus skrandžio vėžio ląstelių augimą, sergant audinių kultūroje, ir nuogas pelių [12]. Šie duomenys iškėlė intriguojantį galimybę, kad KCNE2 gali būti įtraukti į skrandžio kancerogenezėje ir potencialiai nepriklausomai arba H. pylori
infekcijos ar achlorhidrija. Čia papildomai apibrėžti galimą vaidmenį KCNE2 reguliuodama normalų skrandžio ląstelių augimą, mes kruopščiai skrandžio patologija Kcne2 pervežimas - /-. Pelėms iki 15 mėnesių amžiaus</sup>

rezultatai

Kcne2 ^{- /-
peles demonstruoja laipsnišką skrandžio hiperplazija}

anksčiau parodė, kad Kcne2 reikalingas normaliam reguliavimo skrandžio gleivinės ląstelių augimą: 3- mėnesių amžiaus, Kcne2
<sup>- /- pelėmis skrandžio hiperplazija, achlorhidrija ir nenormalus Išorinis ląstelių morfologija [7]. Čia mes palyginti skrandžio masę 3 savaitės, 3-month- ir 12-15 mėnesių amžiaus, Kcne2
- /- pelės. Iš skrandžius masė 3 savaičių amžiaus buvo panašūs Kcne2 + /+ parsisiųsti ir Kcne2
- /- pelės, o po 3 mėnesių buvo padaryta reikšmingų skrandžio hiperplazija į Kcne2
- /- pelių. Šis skirtumas padidėjo 12-15 mėnesių iki tiek, kad Kcne2
- /- pelės turėjo skrandžiai 6 kartus didesnis nei Kcne2 + /+
pelių to paties amžiaus (1 pav A)</sup>

Kcne2 ^{-. /- CR.LT peles demonstruoja gastritas cistinė profunda}

Net 3 savaičių amžiaus, nepaisant panašaus skrandžio masė, kad Kcne2 <sup>+ /+
pelėms, skrandžio gleivinę, Kcne2
- /- pelių jau parodė vacuolations arti prie basolateral pusės (pav 1 B; padidintos D). Ištirti skrandžio hiperplazijos progresavimą ir jos pasekmes, iš viso vienuolika 12-15 mėnesių amžiaus, Kcne2
- /- pelės ir penkių Kcne2 + /+
pelėms buvo histologiškai ištirti. Skrandžio gleivinės visų Kcne2
- /- pelėmis parodė liaukų hipertrofija ir hiperplazija Difuzinis su padaugėjo gleivinės ląstelių ir pakauškaulio ląstelių, kurios buvo kartais vacuolated (1 paveikslas C). Įdomu pastebėti, gastritas cystica profunda (GKP) buvo pastebėtas 11/11 Kcne2
- /- pelių, bet 0/5 iš Kcne2
+ /+ peles ( χ 2 p
= 0,002) (priartinimas cista 1 pav E). Išsiplėtę liaukos esančius ląstelių šiukšles, o kai kuriuos, bet ne visi Kcne2
- /- Pelės, neutrofilai. Taip pat buvo skrandžio epitelio hyalinosis su atsitiktiniais intraluminal kristalai ir limfoplazmacitinė suvestiniai rodikliai gleivinę, submucosa ir muscularis. Kai 12-15 mėnesių amžiaus, Kcne2
- /- pelės skrandžiai, garsių Lamina proprial fibrozė buvo pažymėta, ypač paviršinių sluoksnių. GKP, taip pat anksčiau nurodyta kaip gerybinės skrandžio pseudonavikas, paprastai pristato kaip hiperplazinių ir metaplastic pokyčių ši žala į skrandžio gleivinės spektro. Nors GKP rodo histologinius funkcijas, susijusias su piktybinių navikų, tai savaime paprastai laikoma funkciškai gerybinis - nors ji buvo pasiūlyta kaip įmanoma rizikos veiksnys skrandžio vėžiui [13], [14]</sup>

Padidėjęs proliferacinis žymekliai skrandžio. gleivinę, Kcne2 ^{- /- CR.LT pelės}

Svarbu, išraiška nustatytų priešvėžine žymeklių buvo padidintas, Kcne2
<sup>- /- pelių, palyginti su Kcne2
+ /+ peles. KI67 antigenas yra ląstelės ciklo susijusios branduolinės baltymų dažniausiai naudojamas kaip proliferacijos persekiotoją besidauginančiose ir neoplastinių audinių, įskaitant skrandžio [15]. KI67 dažymo skirsniuose iš Kcne2
+ /+ pelė skrandžiai (3 mėnesiai) nurodė mažą juosta KI67 teigiamų ląstelių neviršijant isthmic regionuose skrandžio liaukų, kadangi šis proliferacijos skyrius buvo žymiai išplėsta amžiumi atitiko Kcne2
- /- pelėms (2 pav A, C). Epitelio pamušalas cistine sritis GKP į 12 mėnesių amžiaus, Kcne2
- /-. Pelėms taip pat parodė pastebimą dažymo branduolių su KI67, rodo didelis platinimo norma (2 pav B)</sup>

citokeratino (CK) -7 yra 54 kDa polipeptidas išreikštas įvairių epitelinio audinio įskaitant plaučių, krūties, ir vaisiaus žmogaus skrandžio; Tačiau, tai nėra išreikštas įprastais suaugusiųjų virškinimo epitelyje [16]. Ląstelę CK-7, rodo dedifferentiation, buvo akivaizdu, Kcne2 pervežimas <sup>- /- skrandžio gleivinės per 12 mėnesių; amžiaus atitikimo Kcne2
+ /+ peles, skrandžio gleivinės teigiami epitelio ląstelės buvo daug rečiau (2 pav D). CK-7 taip pat buvo garsus visame cistos (2 pav e)</sup>

TFF2 ekspresija metaplazija skrandžio gleivinę, Kcne2 ^{-. /-
Pelės}

Trefoil- veiksnys šeimos (TFF) 2 ekspresija metaplazija yra susijęs su progresavimo į skrandžio vėžį žmonėms ir mongolų smiltpelėms užsikrėtusių H. pylori
[17]. Skrandžio gleivinė iš Kcne2
^{- /- pelių eksponuojami sritys metaplazijos su žinomais TFF2 išraiškos, įskaitant epitelio ląstelių pamušalas cistos (3 pav A, C). TFF2 išreiškiančias, iš metaplazijos yra paprastai yra susijusios su oxyntic atrofija, besiskiriantis tuo, kaip parietalinėse ląstelėse [1] praradimo. Čia mes analizuojami skrandžio gleivinę nuo 12 mėnesių amžiaus pelių TFF2 ekspresija metaplazijos už išraiška HKA β subvieneto (HKA beta), yra Parietal ląstelių persekiotoją. Įdomu pastebėti, nebuvo oxyntic atrofija įrodymų, kalbant apie skaičių pakauškaulio ląstelių (4 pav A). Be to, HKA β buvo išreikštas ląstelių sienelės cistos (4 pav B)}

Padidėjęs skrandžio gleivinės cikloniniai D1 raiška ir skrandžio navikų ir Kcne2 ^{-. /- CR.LT pelės}

Sumažintas KCNE2 išraiška buvo anksčiau siūlė didinti platinimu skrandžio vėžio ląstelių linijos SGC7901 per padidėjusios raiškos cikloniniai D1 [12]. Čia Vakarų dėmės rodo, kad Kcne2
geną padidėjo bendras cikloniniai D1 išraišką skrandžio gleivinę, 12 mėnesių amžiaus pelių (5 paveikslas A). CIKLONAS D1 parodė silpną ir daugiausia citoplazmos išraišką tuo bazės Kcne2
<sup>+ /+ oxyntic liaukos (5 paveikslas B, C, paliko plokštės), kaip buvo aprašyta anksčiau normaliai, proliferuojančias ląstelių pelės skrandžio [ ,,,0],18]. Priešingai, Kcne2
- /- pelės, cikloniniai D1 parodė labiau paplitęs ir branduolinės dažymo kaklo kyšulio regione skrandžio liaukų ir liaukinio duobę (5 paveikslas B, C, dešinysis plokštės). Dviejuose iš vienuolikos 1 metų Kcne2
- /- buvo pastebėtas pelės analizuojami prievarčio Polipveidīgs adenoma, išplėsti į dvylikapirštę žarną (5 pav D). Tie patys du Kcne2
- /- pelėms taip pat eksponuojami neoplastinį augimą nuo trombų forma, sudaryta iš fibrino ir liaukinio epitelio, visų plonasienių indų (identifikuotą naudoja endotelio žymeklis CD34) per skrandžio submucosa ( 5 pav El-H).</sup>

sumažintas Išorinis ląstelių KCNE2 išraiška žmogaus skrandžio vėžio audinio

Kadangi ankstesniame tyrime buvo nustatyta, kad padidinti skrandžio vėžio ląstelių linija platinimu sumažintas KCNE2 išraiška, ir KCNE2 buvo rastas išraiška turi būti sumažinta žmogaus skrandžio vėžio [12], mes išanalizavome KCNE2 išraišką normalios žmogaus skrandžio gleivinės, skrandžio vėžio audinyje. IMUNOFLUORESCENCIJOS tyrimai atskleidė ryškius netolygumus susijusius su KCNE2 ir KCNQ1 bendradarbiavimo lokalizaciją, tarp normalių ir piktybinių žmogaus skrandžio gleivinės. Kaip ir tikėtasi, KCNQ1 ir KCNE2 bendrai lokalizuota tvirtai pakauškaulio ląstelių normalios žmogaus skrandžio gleivinės (6 pav A), kaip tai darė KCNQ1 ir HKA β (6 pav. B skirsnį) Priešingai, žmogaus skrandžio karcinoma, KCNQ1 ir KCNE2 išraiška retai sutapo (6 pav, C, D), nors KCNQ1 išlaikė tvirtą bendradarbiavimą lokalizacija su HKA beta (6 pav E). Taigi, KCNE2 išraiška pakauškaulio ląstelių buvo retai pastebėta skrandžio karcinoma. Iš KCNE2-KCNQ1 bendradarbiavimo lokalizavimo trūkumas buvo dar gilus žmogaus skrandžio adenokarcinoma (6 pav F), kuris vėl išlaikė bendro lokalizacija KCNQ1 ir HKA beta (6 pav G).

Diskusijos

Kalio kanalų proliferacijos sutrikimų

Kalio kanalų atsirado kaip potencialų taikinį už priešvėžinio gydymo [19], įskaitant KCNQ1, hERG ir Kv2.1, kurie visi yra alfa subvieneto partneriai KCNE2. Sutrinka spauda sukelia mutacijas KCNQ1 genas sukelia Beckwith-Wiedemann sindromas (BWS), kuris predisposes vėžį [20] - [22], ir KCNQ1 nokautas nuteikia skrandžio metaplazijos [11]. HERG kalio kanalo α subvieneto, kuris yra kompleksus su KCNE2 pagalbinės subvieneto žmogaus širdies [23], yra per daug išreikštas kai kurių navikų, ir buvo nustatyta, kad auglio išgyvenimo faktorius [24] - [27], turi KV2. 1 [28].

KCNE2 anksčiau buvo nustatyta, kad būti išreikštas 2 kartus mažesnis žmogaus skrandžio vėžio audinio nei kaimyninėse normaliomis skrandžio ląstelėse, ir priversti ląstelę KCNE2 buvo antiproliferacinis poveikis skrandžio vėžio ląstelių in vitro, parsisiųsti ir švirkščiamas į nuogas pelių [12]. Postuluojama mechanizmas šio antiproliferacinio poveikis yra žemyn reguliavimas cikloniniai D1, vilkinti progresavimą per ląstelės ciklo [12] panašus į tai, kas buvo pastebėta su hERG blokatorių cisaprido [29]. Padidėjęs išraiška cikloniniai D1 žmogaus skrandžio navikų koreliuoja su itin prastos prognozės [30], todėl suprasti veiksnius, kurie didina cikloniniai D1 raiška gali sukelti terapinių būdų Dėl šios ir kitų vėžio formų. Padidėjusi cikloniniai D1 buvo pasiūlyta prisidėti prie onkogenezėje iki sutrikdyti ląstelės ciklą, ir buvo pranešta, kad svarbus onkogeninė veiksnys stemplės vėžio [31], ir susijęs su branduolinės kaupimo beta-kateninai kiaušidžių endometrioid adenokarcinomos [32]; branduolinės cikloniniai D1 raiška ir tulžies pūslės karcinoma yra kritinis įvykis [33].

Čia mes aprašome platų metaplastic pokyčius skrandžio muscosa dėl genetinių sutrikimų Kcne2
. Tai susiję su padidėjo branduolinės cikloniniai D1 raiškos skrandžio gleivinės, primenantis rezultatus nuo ankstesnio in vitro
tyrimai KCNE2 [12]. Nei dabartinė ataskaita, nei ankstesnis tyrimas, tačiau, apibrėžti už cikloniniai D1 ląstelę mechanizmą, Kcne2
^{- /- gleivinė - tai iš metaplastic pokyčių pasekmė antrinė achlorhidrija šių pelių, arba ten labiau tiesioginis ryšys tarp Kcne2 parsisiųsti ir cikloniniai D1? Iš Yanglin ir kolegomis tyrimas teigia, kad pastarasis bent jau iš dalies, nes jų tyrimu nustatyta, kad nuo ciklino D1 pokyčiai įvyko izoliuotų ląstelių be achlorhidrija [12] įtakos. Mes manome, kad keičia antrinė achlorhidrija yra labiausiai tikėtina, dominuojantis veiksnys, tačiau tiesioginis ryšys negalima atmesti. Įdomu tai, kad hERG, kita KCNE2 partneris, išreiškiamas skrandžio vėžio ląsteles, bet ne normalus skrandžio epitelyje ir hERG kanalų blokatorius cisapridas anksčiau buvo nustatyta, kad sumažinti skrandžio vėžio ląstelių augimą slopina atvykti į S fazę nuo G (1) etapas ląstelės ciklo, didinant apoptozė [29]. Kadangi KCNE2 iš dalies slopina hERG sroves mažinant vieningą laidumo ir pagreitinti išjungimo [23], tai intriguojanti galimybė, kad pastebėtas antiproliferacinis poveikis KCNE2 raiškos in vitro
[12] dėl hERG dabartinės slopinimo skatinti apoptozė ir atvirkščiai, kad KCNE2 žemyn reguliavimo ar genetinio sutrikimo gali skatinti skrandžio ląstelių proliferaciją didinant hERG srovės tankį}

GKP ir TFF2 ekspresija metaplazija (SPEM) į Kcne2 ^{-. /-
Pelės}

GKP gali pateikti žmonėmis su pertrūkiais epigastriumo skausmas, pilvo pūtimas, skrandžio nepraeinamumas ar viršutinės virškinimo trakto dalies kraujavimas, ir dažniausiai pacientams su kuriuo pašalintas skrandis arba gastrostomą [34] istorija. Tačiau keletas atvejų buvo pranešta be asociacija išankstinio skrandžio operacijos [35], [36]. Žmogaus GKP patogenezė Manoma, kad kyla iš su muscularis gleivinės traumos, kuris gali sukelti negimdinio nepatektų skrandžio liaukos submucosa, muscularis gleivinės ar serosa arba nuo lėtinio uždegimo. GKP paprastai laikoma gerybinis klinikinė subjektas, nors asociacija su skrandžio vėžio buvo pranešta [14], [37], [38].

laboratoriniams gyvūnams, GKP antrinė Helicobacter sp
, infekcija buvo apibūdinta kaip intramucosal displazija ir neoplazija [39] pirmtakas, ir susijęs su raidos skrandžio karcinoma. GKP buvo dažnai randama H. pylori
-infected mongolų smiltpelės, kuris taip pat sukūrė skrandžio adenokarcinoma ir limfoidinio audinio hiperplazija [40]. Ankstesnėje pelių genetinės modelio GKP, TGF beta 1 <sup>+/- pelės sukūrė liaukų hiperplazinių pažeidimų, kad bendras morfologines savybes žmogaus GKP, mišrus uždegiminės infiltracijos aplinkinių gleivinės ir lėtinis kraujagyslių uždegimas audiniuose gretimose šių pažeidimų [ ,,,0],41]. Čia, Kcne2
- /- pelės, GKP vyksta pirminio uždegimo pažeidimo nėra, ir nepriklauso nuo kraujagyslių išnykimo. Vietoj to, mes siūlome, kad pagrindinis trūkumas yra nuostolis KCNE2 beta subvieneto nuo kanalo kompleksų su KCNQ1, taip sumenkino svarbų viršūninio K + perdirbimo kelią į pakauškaulio ląsteles ir neleidžia skrandžio parūgš- parietalinių ląstelių HKA. Nors tai funkcinė atrofija "parietalinėse ląstelių populiacijos, ankstesniuose tyrimuose žarnyno metaplazijos faktinis nuostolis pakauškaulio ląsteles, vadinamas" oxyntic atrofija ", buvo laikoma svarbiu procesas žarnyno metaplazijos etiologijos, susijęs su rūgšties refliukso liga arba h. pylori
infekcija, ir yra labiausiai paplitusi metaplastic procesas stebimas viršutinės virškinimo trakto [42].</sup>

Oxyntic atrofija esant sunkiam uždegimui nebuvimas gali būti sukeltos DMP-777, neutrofilų elastazės inhibitorius, taip pat yra orientuota pakauškaulio ląsteles dėl savo veiksmų kaip protonophore [43]. Oxyntic atrofija skrandžio trūkumas pelių, po gydymo DMP-777, greitai sukelia TFF2 ekspresija metaplazijos, taip pat vadinama spazmolitiniu peptidas išreikšti Metaplasia (SPEM) [44]. SPEM išsiskiria dėl savo stiprios asociacijos su žmogaus skrandžio adenokarcinoma, ir tai yra pastebėta, kad fundic liaukų biopsijos dauguma iš žmogaus H. pylori
-infected gastritas pacientai [45]. Iš SPEM pasirodymas Kcne2
<sup>- /- pelės į abiejų H nebuvimo. pylori
arba klasikinis oxyntic atrofija rodo, kad "funkcinė atrofija" sukėlė Kcne2
trynimas gali būti pakankamai, kad sukeltų SPEM. Vienas esminis skirtumas tarp Kcne2
- /- pelės ir tuos, Nozaki tyrimo yra tai, kad Kcne2
- /- pelės yra hypergastrinemic ne gastrino trūkumas. Kitas skirtumas yra tai, kad "DMP-777 sutrikdo skrandžio tubulovesicle protonų gradientas nepakenkiant O + K + - ATPazės funkciją, o tikslingai, Kcne2
sutrikdymas neleidžia O + /K + -ATPazė funkcija pašalinant savo luminal substrato K + jonai [7], [44]. Galbūt tai pastarasis mechanizmas gali ateityje atskleisti įkalčiais dėl kritinių įvykių oxyntic atrofija, dėl kurių atsiranda SPEM: šiuo metu ji teigė, kad SPEM indukcijos rezultatai nuo A trūkumas pakauškaulio ląstelių išskiriami reguliavimo normalios skrandžio gleivinės atsinaujinimo, kurios apima sonic ežys ir TGF-α [46], [47] dėl nuostolių parietalinėse ląstelėse. Daugiau studijos, Kcne2
- /- parietalinės ląstelės - kurios vis dar yra, bet blogai - gali atskleisti reguliatoriai kurioje jie vis dar gali išskiria, ir tie, kurių jie negali</sup>

skrandžio gleivinė. iš Kcne2
<sup>- /- pelėms taip pat rodo padidėjusį išraiška nustatyta platinimo persekiotoją KI67, pasireiškianti kaip atsižvelgiant į gleivinės proliferacijos juostos plotis padidėjo, ir taip Ki67 teigiamas ląsteles pamušalas cistos regionuose GSP. Panašiai, de-diferenciacija žymeklis CK7, neišreikštas 1 metų Kcne2
+ /+ skrandžio gleivinė, buvo plačiai išreikšta, kad Kcne2
- /- pelės. Atsižvelgiant šiuos ir pirmiau aprašyti žymenys kartu, Kcne2
- /- skrandžio gleivinės eksponatų metaplazija su keliais požymiais preneoplasia, o kai kuriais atvejais navikų, ypač konkretaus patogeno aplinkoje be įrodymų skrandžio Helicobacter
infekcija arba oxyntic atrofija ir cheminių inhibitorių skrandžio rūgštingumo sumažinimą nėra. Kartu su išvada, čia pasirodo turi būti sumažinta žmogaus skrandžio vėžio audinio, kuris Išorinis ląstelių KCNE2 išraiška (4 paveikslas) ir ankstesnėje ataskaitoje, kad KCNE2 slopina skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją [12] duomenys rodo, KCNE2 sutrikdymas yra susijęs su skrandžio vėžio progresavimą. Ateities studijos apims tiria, ar Kcne2
sutrikimas didina polinkį į skrandžio vėžiu per patogenų ir kancerogenas pagrindu protokolų, už šių galimų skirtumų mechanizmai ir galimos mechanistiniai ryšiai tarp Kcne2 pervežimas, cikloniniai D1 ir ląstelės ciklo pasipiktinimas nepriklauso achlorhidrija susijusių ligų etiologijos srityje. Be to, kaip KCNQ1 ir KCNE2 taip pat bendrai išreikštas skydliaukės epitelinių ląstelių, kur jos yra svarbus skydliaukės hormonų biosintezė [48], ji bus naudinga išnagrinėti galimą vaidmenį KCNE2 nenormalus thyrocyte platinimu.</sup>

medžiagos ir metodai

gamyba ir naudojimas genų orientuojasi pelės

Visos aprašytos šiame tyrime pelėms buvo laikomi, naudojami ir numarinti pagal NIH ir Kornelio universiteto institucinė gyvūnų globos ir vaistų komiteto rekomendacijas. Visi aprašyti šiame tyrime pelėms buvo laikomi, naudojami ir numarinti pagal NIH ir Weill medicinos koledžo Institucinis gyvūnų globos ir vaistų komiteto rekomendacijas. Etinį patvirtinimą veisti ir derlius audinių iš laukinio tipo ir Kcne2
<sup>- /- pelių Biomedicininių tyrimų buvo patvirtinta Weill medicinos koledžo institucinių gyvūnų priežiūrai ir naudojimui komiteto (protokolinis 0704-610A). Kcne2
- /- pelėms buvo sukurtas kaip aprašyta anksčiau iš C57BL /6 Kcne2 + /
- X, Kcne2 +/-
kryžiai [7]. Skaitiniai duomenys buvo analizuojami su Excel programine įranga (Microsoft), naudojant vieną pusę dispersinė analizė (ANOVA) su statistinio reikšmingumo, nustatyta, P
. ≪ 0,05</sup>

Histologija

histologija ir skrandžio masė kiekybinis Kcne2 <sup>+ /+ parsisiųsti ir Kcne2
- /- pelių 3 savaites, 3 mėnesių ir 12-15 mėnesių buvo paaukota naudojant CO _{2 uždusimas (5-10 už genotipo). Skrandžiai buvo pašalintos atlikus skrodimą, skrandžio masė nustatoma, tada skrandis audinių buvo nustatyta 10% neutralus buferiniame formalino, apdoroti įprastiniais metodais ir įdėta į parafinas. Skrandžio gleivinės skyriai buvo nupjauti 5 mkm intervalais, ant teigiamai įkrautą SuperFrost skaidres, tamsintas hematoksilinu ir eozinu (H & E)., Ir įvertinti su "Olympus BX45 mikroskopu}</sup>

imunohistocheminis

Imunohistocheminis aptikimas KI67 CK-7 ir TFF2 (taip pat žinomas kaip spazmolitiniu peptido) buvo atlikta naudojant "Discovery XT procesorius (Ventana Medical Systems). Pirminiai antikūnų koncentracija buvo naudojamos: 0,05 mikrogramo /ml (triušis polikloninis kovos su Ki67, Vector Labs "); 1 mikrogramo /ml (pelės monokloninis anti-CK-7; Abcam); 1 mikrogramo /ml (pelės monokloninis anti-TFF2; Abcam). Prieš pirminį antikūną inkubavimas, audinio dalys buvo blokuojamas 30 min 10% normalaus ožkų serume, 2% BSA PBS (anti-KI67); 30 min 10% normalaus ožkų serume, 2% BSA PBS ir avidino /biotino, kai yra 8 min (anti-CK-7); 30 min 10% normalaus ožkų serume, 2% BSA PBS ir avidino /biotino už 4 min (anti-TFF2). Pirminiai antikūnų inkubavimo laikai buvo: 3 val (KI67 ir CK-7); 5 valandos (Anti-TFF2). Antriniai antikūnai Inkubaci buvo: 32 min 1:200 biotinilinto ožkos prieš triušio IgG (Vector Labs) už KI67; 60 min 1:200 biotinilinto arklių anti-pelės IgG (Vector Labs) CK-7 ir TFF2. Dėl KI67 vidurinė antikūnų inkubacijos blokavimo D streptavidinas-HRP ir TBP aptikimo komplektas (Ventana Medical Systems) buvo naudojama pagal gamintojo instrukcijas. Už CK-7 ir TFF2, pelės IgG1 (5 g /ml) buvo naudojamas kaip izotipo neigiama kontrolė, ir blokavimo D, streptavidinas-HRP ir DAB aptikimo rinkinys (Ventana Medical Systems) buvo naudojamas.

dėl nuo ciklino D1 aptikimo, skrandžio skaidres kaitino iki 58-60 ° C temperatūroje 30 min, o po to deparaffinized. Endogeninė peroksidazės aktyvumas buvo užblokuotas inkubacinio skyriuose 1% vandenilio peroksido PBS 15 min (8,3 ml 30% O _{2O 2 /241,7 ml PBS;) po demaskavimo su antigeno epitopq iki microwaving 10 mM citrato buferis, kurio didelės galios 15 min. Skaidres buvo aušinamas 20 min, išplautos distiliuotame vandenyje, 5 min, perkelti į PBS ir inkubuojami 10% normalaus arklių serumo (2% BSA-PBS skiediklio) 30 min drėgnoje kameroje. Pelės monokloninis anti-ciklino D1-antikūnų (Mobilusis signalizacijos) buvo įtraukta į 1:1000 su 2% BSA PBS ir inkubuojami per naktį 4 ° C temperatūroje drėgnoje kameroje. Skaidres buvo perplaunamos PBS ir buvo taikoma antrinė biotinilinto arklys anti-pelės IgG, (Vector Labs) ne 1:500 PBS 30 min kambario temperatūroje. Skaidrės buvo plaunami ir Avidino-biotinas kompleksas (Vectastain ABC Elito komplektas, Vector Labs ") sumažintas ne 1:25 PBS buvo taikoma 30 min. Signalas buvo aptikta inkubacijos į 3,3-diaminobenzidinas (Sigma, partijos Nr 026K3767), kol buvo pasiektas norimas spalvos intensyvumas. Po galutinių plovyklos vandenyje, skaidres buvo lengvai counterstained į hematoksilinu. KCNQ1 ir HKA β vieno ženklinimo ir aptikimo buvo atliekamas kaip aprašyta anksčiau [7]. CD34 aptikimo buvo su 1:50 anti-CD34 antikūnas (AbCam). Skaidrės buvo žiūrima su Nikon Eclipse E600 mikroskopu ir fotografavo naudojant RT spalvoto vaizdo kamera ir vietoje programinę įrangą (diagnostinius prietaisus, Inc).}

Imunofluorescentinis

Visos žmogaus audinių buvo gauta iš ProSci, Poway, CA, ir buvo sertifikuota kaip paimta iš kvalifikuotų ir licencijuojamos patologijos paslaugas, naudojant tinkamas atitiko sutikimą naudoti biomedicininių tyrimų ir su donoro anonimiškumą apsauga; Todėl papildomą Weill medicinos koledžo Institucinis apžvalga valdybos etikos patvirtinimas nebuvo reikalingas. Imunofluorescentinis aptikimas HKA beta, KCNQ1 ir KCNE2 žmonijos skrandžio audinyje (ProSci) buvo atlikta naudojant "Discovery XT procesorius (Ventana Medical Systems). buvo naudojami šie žmogaus audiniai: normalus skrandžio audinius iš 50-erių metų moteris (PSK-10-809-XB1); skrandžio karcinoma audinys, pacientas informacija neprieinama (PSK-10-814-CA1); skrandžio adenokarcinoma audinių iš 51-erių metų moteris (PSK-10-809-XA1). Pirminį antikūną koncentracijos, naudotos buvo: 0,5 mg /ml anti-HKA β (pelės monokloniniai, Affinity Bioreagents), 1 mg /ml anti-KCNQ1 (triušiai arba ožkos polikloninis, Chemicon), ir in-house anti-KCNE2 serumo buvo naudojami 1:500 praskiedimo po stulpelio, praturtinti IgG. Prieš pirminį antikūną inkubacijos audinio dalys buvo užblokuotas 30 min 10% normalaus ožkų serume, 2% BSA PBS, o po to 8 min Avidino /biotinas bloko. Pagrindinis antikūnų inkubacinis (3 val) buvo po 32 min inkubacijos su biotinilinto anti-pelės IgG (ABC rinkinys nuo ligos sukėlėjus pernešančių laboratorijose), 60 min inkubacijos su biotinilinto kovos su ožkos IgG (ABC rinkinys nuo ligos sukėlėjus pernešančių laboratorijose), arba biotinilintu anti-triušis antikūno 1:200 praskiedimo (Vectastain ABC rinkinys). Antrinė aptikimo buvo atliktas su avidino-HRP D (Ventana Medical Systems), po inkubacijos su Tyramide-Alexa Fluor 488 (Invitrogen) arba Tyramide Alexa Fluor 568 (Invitrogen). Dėmėti skaidres buvo žiūrima su Zeiss Axiovert 200 widefield mikroskopu ir nuotraukos buvo įgytos naudojant Metamorph programinę įrangą 7.1 (molekulinė įrenginiais).

imunoblotingu

Imunoblotingo, skrandžio membranos frakcijos buvo parengta kaip aprašyta anksčiau [7]. Trys skrandžiai nuo 12 mėnesių amžiaus, Kcne2 <sup>+ /+ parsisiųsti ir Kcne2
- /- pelėms buvo ištrintas, atlikus skrodimą, prapjauti išilgai curvatura ventriculi dur, pašalinta ingesta ir iš karto Snap-užšaldyti skystame azote. tada skrandžiai homogenizuoti buferiniame tirpale, kuriame yra 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 100 ug /ml PMSF 1 ug /ml Nonidet P40, 0,5% SDS ir 0,5% natrio orthovanadate, tada inkubuojami ant ledo 30 min ir centrifuguojamas 12000 × g
20 min 4 ° C temperatūroje. Baltymo koncentracija supernatanto buvo matuojamas pagal Bradfordo metodu. Iš viso baltymų (40 g /Lane) buvo pakrautas į iš anksto lietiniai tri-glicino 4-20% gelio (liepa Inc, Milford, CT) ir atskirti elektroforezės. tada baltymai buvo perkelti ant PVDF membrana (Bio-Rad, Hercules, CA), ir užblokuotas su 5% pieno, 0,05% Tween-20 PBS 12 valandų, esant 4 ° C dėl svirtiniu. Pirminis antikūnų Inkubaci (4 val, RT 1% pieno, 0,05% Tween-20, PBS, "buferio A") buvo: 1:2000 Anti-cikloniniai-D1 (Abcam); 1:5000 kovos su GAPDH (Abcam). Membranos buvo plaunamos 4 kartus, kurių kiekvienas turi antikūnų inkubavimo buferio tada inkubuoto atskiestomis 1:10000 buferyje A 2 val kambario temperatūroje atitinkamų antrinių antikūnų (BioRed) tada plauti 4 × 20 min kiekvienas buferiu A ir vieną kartą 5 min 20 min su PBS.</sup>

• PLoS ligų sukėlėjai: Caveolin-1 Apsaugo B6129 Pelės prieš Helicobacter pylori gastritas
• PLoS ONE: Epstein Barr virusas ir Helicobacter pylori infekcijos kartu teigiamai susijusi su sunkia gastritas vaikams ir paaugliams