PLoS ONE: Ciljana Brisanje Kcne2 uzrokuje gastritis Cystica profunda i želučana neoplazija

Sažetak pregled

Rak želuca je drugi vodeći uzrok smrti od raka u svijetu. Predisponirajući faktori uključuju achlorhydria, Helicobacter pylori pregled infekcija, oxyntic atrofija i TFF2-izražavanje Metaplazija. U parietalnim stanicama, apikalni kalijeve kanale sadrže KCNQ1 a podjedinica i KCNE2 β podjedinice daju K ^{+ istjecanja tekuće olakšati izlučivanje želučane kiseline apikalni H + K + ATPase. U skladu s tim, genetski brisanje mišjih KCNQ1 Netlogu ili Kcne2 pregled narušava izlučivanje želučane kiseline. Ostali dokazi upućuju na ulogu KCNE2 u ljudskom proliferacije želučane stanice raka, neovisno o svojoj ulozi u želučanom zakiseljavanja. Ovdje ćemo pokazati da je 1-godišnja Kcne2 pregled - /- miševa u okruženju bez patogenih organizama svi pokazuju teške želučane preneoplastic fenotipa koji obuhvaća gastritis cystica profunda, 6 puta povećan trbuh masa, povećana Ki67 i nuklearne izraz Ciklin D1 i TFF2- i keratin 7-izražavanje metaplazije. Neki Kcne2 pregled - /- miševi izloženi pilorusa Polipoidne adenoma protežu u dvanaesnik i neoplastične invaziju tankih stijenki žila u sub-sluznici. Konačno, analiza ljudskog tkiva raka želuca navedeno smanjenom parijetalni stanica izraz KCNE2. Zajedno s prijašnjim istraživanjima, rezultati sugeriraju KCNE2 poremećaje kao mogući čimbenik rizika za želučane neoplazija pregled}

Izvor:. Roepke TK, Purtell K, kralj EZ, La Perle KMD, Lerner DJ, Abbott GW (2010) ciljano brisanje Kcne2 pregled Uzroci gastritisa Cystica profunda i želučana neoplazije. PLoS ONE 5 (7): e11451. doi: 10,1371 /journal.pone.0011451 pregled

Urednik: Xin-yuan Guan, Sveučilište u Hong Kongu, Kina pregled

Primljeno: 3. svibnja 2010. godine; Prihvaćeno: 13. lipnja 2010; Objavljeno: 6. srpnja 2010 pregled

Copyright: © 2010 Roepke et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. G.W.A. je podržan od strane nacionalnog srce, pluća i krvi Instituta, National Institutes of Health (R01 HL079275), American Heart Association (Grant-u-Aid 0855756D), te Scientist Award Irma T. Hirschl karijera. U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

karcinoma želuca ostaje jedan od glavnih uzroka smrtnosti, a drugi vodeći uzrok smrti od raka u cijelom svijetu. Želučani karcinogeneze je proces koji napreduje kroz više etapa, uključujući oxyntic atrofije, stvaranje čira, foveolar hiperplazije, hipo- i achlorhydria i stanica metaplazije sluznice [1]. Unatoč napretku u liječenju raka želuca, relativno malo se zna o molekularnim mehanizmima uključenim u želučanom karcinogeneze, razvoj normalne sluznice želuca u preneoplastic želučanih lezija ili potencijalnu ulogu za ionske kanale u tim procesima. Pregled

Parijetalni stanice se postigla želučane kiselosti na temelju nekog apikalni H ^{+ K + ATPaze (HKA), koji pumpe protone u lumen želuca u zamjenu za K + iona. Za održavanje ove aktivnosti, K ioni + moraju putovati iz parijetalni stanica u lumen želuca putem vanjskoj membrani, kako bi se osigurala kontinuirana supstrat za HKA [2]. Ovaj K + ion istjecanja javlja kroz jednu ili više vrsta apikalni, K + - selektivnih kanala. Nekoliko unutra ispravljač (KIR) kanali su uključeni u ovaj proces na temelju izraza parijetalni stanica i farmakološka dokazima [3], [4], ali do sada ne postoji genetska dokaz za samo jedan kanal koji ispunjava tu ulogu: KCNE2-KCNQ1 [5] - [7]. KCNQ1 je šest transmembranskih domena α podjedinice iz S4 superfamilije koji čini funkcionalno, naponski, homotetrameric K + - selektivnih kanalima heterologne ekspresije studijama [8], [9]. KCNQ1 također mogu formirati heteromerni kanala komplekse s pomoćnim podjedinicama iz obitelji gena KCNE i svih pet poznati proizvodi KCNE gena su pokazala da regulira KCNQ1 funkciju heterologne ekspresije studija [10]. Jedan od njih, KCNE2, pretvara KCNQ1 na napon neovisan, konstitutivno-aktivnog kanalom čije struje je povećana niskim pH. KCNE2 i KCNQ1 su izrazili na ili u blizini parijetalni vanjskoj membrani stanica, a ciljani gen brisanje bilo rezultata podjedinica u achlorhydria zbog poremećenim izlučivanjem želučane kiseline [5] - [7]. Tako KCNE2-KCNQ1 kanala smatraju bitni za lučenje želučane kiseline i mislio dati lumena K iona + kao supstrat za želučane HKA pregled}

KCNQ1 pregled ^{-. /- miševi i Kcne2 pregled - /- miševi pokazuju slične želučanog fenotipa koju karakteriziraju achlorhydria, hipergastrinemija i želučane žljezdanog hiperplazije [5] - [7]. Parijetalni stanice iz oba null showu ~ 10 puta smanjenu sposobnost da se oporavi od protona utovara, što ukazuje na primarni nedostatak u lučenja želučane kiseline. KCNQ1 pregled - /- miševi razvijaju metaplazije, displazija i premalignih adenomatozne hiperplazija želuca neovisno od infekcije [11]. To sugerira da KCNQ1 disfunkcija može dovesti do želučanih neoplazija neovisno o H. pylori
zbog teške achlorhydria ili predstavljaju dodatni faktor rizika koji je u suradnji s H. pylori pregled može predstavljati čimbenik rizika za rak želuca pregled}

achlorhydria i želuca hiperplazija smo ranije zabilježen je u Kcne2 pregled <sup>-. /- miševa je ubijao s obzirom da je podjedinica oblikovanje pora od kompleks, KCNQ1, bio je još uvijek prisutna, a zapravo je to jako je izražen u dvostrukom broju stanica po želučane žlijezde u Kcne2 pregled - /- miševa u usporedbi s Kcne2 pregled + /+ miševa [7]. U nedavnom istraživanju, KCNE2 izraz je utvrđeno da se izražava na relativno niskim razinama ljudskog želuca tumora i želučanih staničnim linijama karcinoma; Nadalje, prisilno ekspresijom KCNE2 suprimira rast ljudskih stanica raka želuca u kulturi tkiva, te u golih miševa [12]. Ovi rezultati podigli intrigantnu mogućnost da KCNE2 mogli biti uključeni u želučanom karcinogeneze, i potencijalno neovisno o bilo H. pylori
infekciju ili achlorhydria. Evo, da se dodatno definirati moguću ulogu KCNE2 u regulaciji normalnog rasta želučane stanice, pomno smo želučane patologiju Kcne2
- /-. Miševa do 15 mjeseci starosti pregled</sup>

Rezultati pregled

Kcne2 ^{- /-
miševi pokazuju progresivni želučane hiperplazije pregled}

Mi smo ranije pokazala da Kcne2 je potreban za normalan regulaciju rasta želučane sluznice stanica: 3- mjesec-star Kcne2 pregled ^{- /- miševi imaju želučane hiperplazijom achlorhydria i abnormalni parijetalni stanica morfologija [7]. Ovdje smo u odnosu na želucu masu od 3 tjedna, 3-mjesečne i 12-15 mjeseci stara Kcne2 pregled - /- miševa. Masa želudaca na 3 tjedna starosti bili su slični za Kcne2 + /+ pregled i Kcne2 pregled - /- miševa, dok je za 3 mjeseca došlo je do značajnog želuca hiperplazija u Kcne2 pregled - /- miševa. Ta razlika je porastao za 12-15 mjeseci do te mjere da Kcne2 pregled - /- miševi su imali želuci 6 puta veće od onih u Kcne2 + /+
miševe iste dobi (slika 1 A) pregled}

Kcne2 ^{-. /- pregled miševi pokazuju gastritis cistična profunda pregled}

Čak i nakon 3 tjedna starosti, usprkos sličnim želudac masa onoj Kcne2 ^{+ /+
miševi, želučane sluznice od Kcne2 pregled - /- miševa već pokazali vacuolations blizu bazolateralnu stranu (slika 1 B, uvećano u D). Da bi istražili napredovanje želučane hiperplazije i njegove posljedice, ukupno jedanaest 12-15 mjeseci stara Kcne2 pregled - /- miševa i pet Kcne2 + /+ pregled miševi su histološki pregled. Sluznice želuca u svim Kcne2 pregled - /- miševi pokazuju žljezdane hipertrofije i hiperplazije difuzno s povećanim brojem mukoznih stanica i parietalnim stanicama koje su ponekad sadrži sitne šupljine (slika 1C). Nevjerojatno, gastritis cystica profunda (GPC) zabilježen je u 11/11 Kcne2 pregled - /- miševa, no 0/5 od Kcne2 pregled + /+ miševi ( χ 2 p pregled = 0,002) (povećanje cista na slici 1 E). Raširene žlijezde sadržane ostaci stanica i, u nekim, ali ne i sve Kcne2 pregled - /- miševa, neutrofili. Tu je i želučanom epitela hyalinosis s povremenim intraluminalnih kristala, limfoplazmacitni agregati u sluzi, submukozi i muscularisa. U nekim 12-15 mjeseci stara Kcne2 pregled - /- miševa želuci, istaknuti lamina proprial fibroza je navedeno, posebno u površinskim slojevima. GCP, također se prije zvao benignom želučane pseudotumor, obično predstavlja kao spektar hiperplastičnih i metaplastičnim promjena nakon oštećenja sluznice želuca. Dok GCP pokazuje histološke značajke povezane s malignosti, to je samo po sebi općenito smatra funkcionalno benigna - iako je bio predložen kao mogući čimbenik rizika za rak želuca [13], [14] pregled}

Povećana proliferativna markera u želuca. sluznica Kcne2 ^{- /- pregled miševi pregled}

Važno je izraz utvrđenih preneoplastic markera je povećan u Kcne2 pregled ^{- /- miševa u odnosu na Kcne2 pregled + /+ miševi. Ki67 antigen je stanični ciklus se odnosi nuklearni protein obično koristi kao proliferacije markera u razmnožavanje i neoplastičnih tkiva, uključujući želuca [15]. Ki67 bojanje u sekcije Kcne2 pregled + /+ miš želuci (3 mjeseca) pokazuje mali bend Ki67 pozitivnih stanica unutar isthmic regijama želučanih žlijezda, a to proliferativna pretinac značajno je proširena u starenjem uskladiti Kcne2 pregled - /- miševa (Slika 2 A-C). Epitel podstava cistične područja za područje zvuka u 12-mjesečni Kcne2 pregled - /-. Miševi pokazali istaknuto bojenje jezgri s Ki67, ukazuje na visoku stopu proliferacije (Slika 2 B) pregled}

citokeratin (CK) -7 je 54 kDa polipeptid izražen u raznim epitelnih tkiva, uključujući rak pluća, dojke, te fetalnog ljudski želudac; Međutim, to nije izražen u probavnom sluznice normalne odrasle osobe [16]. Pojačanu regulaciju CK-7, indikativno dediferencijacije, bilo je vidljivo u Kcne2
^{- /- želučane sluznice nakon 12 mjeseci; u dobi-odgovarajuće Kcne2 pregled + /+ miševi, želučane sluznice pozitivne epitelne stanice su mnogo rjeđe (Slika 2 D). CK-7 je također istaknuti oko ciste (slika 2 E) pregled}

TFF2-izražavanje Metaplazija u želučanoj sluznici Kcne2 ^{-. /-
Miševi}

Trefoil- faktor obitelji (TFF) 2-izražavanje metaplazija je povezana s napretkom raka želuca kod ljudi, a mongolskih gerbila zaraženih s H. pylori pregled [17]. Želučana sluznica u Kcne2 pregled ^{- /- miševi izloženi dijelovi metaplazije s istaknutim TFF2 izražavanja, uključujući u epitelnim stanicama sluznice ciste (Slika 3-C). TFF2 eksprimirajuće metaplazije obično je povezana s oxyntic atrofije, naznačen time što je gubitak parietalnim stanicama [1]. Ovdje smo analizirali želučanu sluznicu od 12-mjesečnog miševa s TFF2-izražavanje metaplazije za izražavanje HKA β podjedinica (HKA P), marker parijetalni stanica. Izrazito nije bilo dokaza o oxyntic atrofije u pogledu broja parietalnim stanicama (slika 4A). Nadalje, HKA β je u stanicama koje oblažu ciste (slika 4 b) pregled}

Povećana želučane sluznice Ciklin D1 izraz i želuca neoplazija u Kcne2 ^{-. /- Pregled miševi pregled}

Smanjena KCNE2 izraz je prethodno predložio kako bi se poboljšala širenje u rak želuca stanične linije SGC7901 putem povećane ekspresije ciklina D1 [12]. Evo, Western blot predložio da Kcne2 pregled gen brisanje povećao ukupne ekspresije ciklina D1 u želučanoj sluznici 12-mjesečnog miševa (Slika 5). Ciklin D1 pokazali slabu i pretežno citoplazmičnu ekspresiju na bazi Kcne2 pregled ^{+ /+ oxyntic žlijezde (slika 5 B, C, ostavi ploče), kao što je prethodno opisano za normalne, proliferacijom stanica u mišjim želucu [ ,,,0],18]. Nasuprot tome, u Kcne2 pregled - /- miševa, ciklin D1 pokazao više raširen i nuklearnu bojanje u prevlaci grlića želučanih žlijezda, a žljezdani jama (slika 5 B, C, desni prikaz). U dva od jedanaest 1-godišnji Kcne2 pregled - /- miševa analizirani, pilorusa Polipoidne adenomi su uočeni, koji se proteže u dvanaesnik (Slika 5 D). Ista dva Kcne2 pregled - /- miševi su također pokazale neoplastični rast u obliku tromba koji se sastoji od fibrina i žlijezdanog epitela, u tankostijenih plovila (identificiran pomoću markera endotelnih CD34) u želučanom submukozu ( Slika 5 E-H). pregled}

smanjena parijetalni stanica izraz KCNE2 u ljudskom želučanog raka tkiva pregled

s obzirom da je u prethodnom istraživanju utvrđeno je smanjen KCNE2 izraz za poboljšanje želučanog proliferaciju linija stanica raka, i KCNE2 ekspresija je utvrđeno da se smanjuje u ljudskoj raka želuca [12], ispitali smo ekspresiju KCNE2 na normalne ljudske želučane sluznice, te rak želuca tkiva. Imunofluorescencija studije su pokazale značajne razlike s obzirom na KCNE2 i KCNQ1 ko-lokalizaciju, između normalne i maligne ljudske želučane sluznice. Kao što se očekivalo, KCNQ1 i KCNE2 snažno lokalizirani u parietalnim stanicama normalnog ljudskog želučane sluznice (slika 6 A), kao što je i KCNQ1 HKA β (slika 6B). Za razliku od toga, u ljudskim želučanog karcinoma, KCNQ1 i KCNE2 izraz rijetko preklapale (Slika 6 C, D), iako KCNQ1 zadržala svoj snažan suradnju lokalizaciju s HKA P (slika 6 E). Dakle, KCNE2 ekspresija u parijetalni stanice rijetko zabilježena je u želučanom karcinomu. Nedostatak KCNE2-KCNQ1 ko-lokalizaciju je još dublje u ljudskoj želučanog adenokarcinoma (Slika 6 F), koja opet zadržane ko-lokalizacija KCNQ1 i HKA P (slika 6 G). Pregled

Rasprava pregled

kalijeve kanale u poremećajima proliferacije

kalij kanali su se pojavili kao potencijalna meta za terapiju protiv raka [19], uključujući KCNQ1, HERG i Kv2.1, svi koji su a podjedinica partneri KCNE2. Poremećen otisak uzrokovan mutacijama u KCNQ1 gena uzrokovale Beckwith-Wiedemann sindromom (UMK), koji imaju predispoziciju za rak [20] - [22], a KCNQ1 knockout predisponira za želučane metaplazije [11]. HERG kalijev kanal α podjedinica koji tvore komplekse s KCNE2 pomoćne podgrupu u ljudskom srcu [23], je prekomjerno izražen u nekih tumora, te je identificiran kao faktor preživljavanja tumora [24] - [27] kao ima Kv2. 1. [28]. pregled

KCNE2 prethodno eksprimira 2-puta niža u tkivu raka želuca nego u susjednim normalnih stanica želuca, pritisnut doreguliranje KCNE2 je anti-proliferativni učinci na stanice karcinoma želuca in vitro pregled i ubrizgava u golim miševima [12]. Postuliranoj Mehanizam tih anti-proliferativnog učinka nizvodne regulacije ciklina D1, odgađajući progresiju staničnog ciklusa [12] slično onoga što je opaženo s hERG blokatorom cisaprida [29]. Povišena ekspresija ciklina D1 u ljudskim želučanih tumora korelira s izrazito lošu prognozu [30], dakle razumijevanje čimbenika koji povećavaju Ciklin D1 izraz može dovesti do terapijskih avenija za ovog i drugih oblika raka. Prekomjerna ekspresija ciklina D1 je sugerirao da doprinese onkogcnczom ometanjem staničnog ciklusa, te je izvijestio da bude važan onkogeni faktor u jednjaka karcinoma [31], i povezano s nuklearnom nakupljanja beta-katenina u jajnicima endometrioid adenokarcinoma [32]; nuklearna Ciklin D1 pojačanom ekspresijom u žučni mjehur karcinoma je kritični događaj [33]. pregled

Ovdje ćemo opisati opsežne metaplastičnim promjene u želučane sluznice zbog genetskog poremećaja u Kcne2 Netlogu. Ovo je povezano s povećanom nuklearne izražavanja Ciklin D1 u sluznicu želuca, podsjeća rezultata iz prethodne in vitro
studije KCNE2 [12]. Ni sadašnji izvješće ni prethodna studija, međutim, ocrtati mehanizam za ciklin D1 ranijim koracima u Kcne2 pregled ^{- /- sluznica - je li to posljedica metaplastičnim promjena sekundarna achlorhydria u tih miševa, ili je postoji više izravnih veza između Kcne2 pregled i Ciklin D1? Studija YangLin i kolega tvrdi za potonje barem djelomično, jer je u svojoj studiji ciklin D1 promjene u izoliranim stanicama bez utjecaja achlorhydria [12]. Smatramo da se mijenja sekundarna achlorhydria su najvjerojatnije dominantan faktor, ali direktna veza ne može se isključiti. Zanimljivo, HERG, drugi partner KCNE2, izražena je u želučanim stanice raka, ali ne i normalne želučanog epitela i HERG blokator kanala cisaprida je prethodno utvrđeno da suprimira želučane rast stanica raka inhibicijom ulazak u S fazu s G (1), faze se u staničnog ciklusa, povećanje apoptoze [29]. Zbog KCNE2 djelomično potiskuje HERG struje smanjujući jedinične vodljivost i ubrzavanje deaktivaciju [23], to je intrigantna mogućnost da se uočene antiproliferativna učinci KCNE2 prekomjernom ekspresijom In vitro pregled [12] su zbog hERG trenutne suzbijanje promicanje apoptoza, i obratno da KCNE2 se regulacija ili genetskog poremećaja mogu favorizirati želučane staničnu proliferaciju povećanjem HERG gustoća struje pregled}

GCP i TFF2-izražavanje metaplazija (SPEM) u Kcne2 ^{-. /-
miševi}

GCP mogu predstaviti ljudima s povremenim epigastričan bol, nadutost, želučani opstrukciju ili gornjeg gastrointestinalnog krvarenja, te se najčešće vidi u bolesnika s anamnezom bilo gastrektomije ili gastrostomy [34]. Međutim, nekoliko slučajeva su izvijestili bez udruživanja na prethodnu želuca operacije [35], [36]. Patogeneza ljudskog GCP se vjeruje da potječu od ozljede muscularis sluznica, što može dovesti do izvanmaternične zatvaranjem želučanih žlijezda u sluznicu, muskularis mukoze ili serosa ili od kronične upale. GCP obično smatra dobroćudan klinički entitet, iako veza s rakom želuca je prijavljen [14], [37], [38]. Pregled

U laboratorijskim životinjama, GCP sekundarna Helicobacter sp pregled , Infekcija je opisan kao prethodnika intramucosal displazije i neoplazije [39], a povezana je s razvojem želučanog karcinoma. GCP često se nalaze u H. pylori
-infected mongolskih gerbila koji je također razvijen želučane adenokarcinom i limfnog hiperplazije [40]. U prethodnoj mišjeg genetskog modela GCP, TGF beta 1 ^{+/- miševi su razvili žljezdane Hiperplastične promjene koje dijele morfološke mogućnosti ljudskom GCP miješanom upalne infiltracije okolnih sluznice i kronične vaskulitis u tkivo susjedno nalazu [ ,,,0],41]. Ovdje, u Kcne2 pregled - /- miševa, GCP javlja u odsustvu primarne upalne lezije i neovisno od vaskularne uništenja. Umjesto toga, predlažemo da je primarni mana je gubitak KCNE2 beta podjedinica iz kompleksa kanala s KCNQ1, a time impairing važnu apikalni K + recikliranje put u parijetalni stanice i sprečavaju želučane kiselosti od parijetalni stanice HKA. Iako ovo predstavlja 'funkcionalno atrofije' u populaciji parijetalni stanice, kod ranijih studija intestinalne metaplazije stvarni gubitak parijetalni stanice, nazvane 'oxyntic atrofija ", smatra važan proces u etiologiji crijevnih metaplazije, povezano s kiselinom refluksa bolest ili H. pylori pregled infekcija, a najčešći metaplastičnim postupak vidjeti u gornjem gastrointestinalnom traktu [42]. pregled}

Oxyntic atrofije u odsustvu značajnog upale mogu biti inducirane DMP-777, inhibitor elastaze neutrofila koje cilja i parijetalni stanice zbog njegovog djelovanja kao protonophore [43]. Oxyntic atrofija u želučanim deficijentnih miševa, nakon tretmana s DMP-777, brzo dovodi do TFF2 eksprimirajuće metaplazije, koja se označava kao spazmolitik peptid eksprimira metaplazijom (SPEM) [44]. SPEM je značajan zbog svoje jake povezanosti s ljudskim želučanog adenokarcinoma, a primijećeno je u većini biopsija fundusnih žlijezde iz ljudske H. pylori pregled -infected gastritis bolesnika [45]. Pojava SPEM u Kcne2 pregled ^{- /- miševa u odsustvu bilo H. pylori
ili klasična oxyntic atrofija sugerira da je "funkcionalna atrofija 'uzrokovan Kcne2 pregled, brisanje može biti dovoljno za poticanje SPEM. Jedan od glavnih razlika između Kcne2 pregled - /- miševa i onih u Nozaki studije je da je Kcne2 pregled - /- miševi su hypergastrinemic, ne gastrin-manjkav. Još jedna razlika je u tome što DMP-777 narušava želuca protona gradijent tubulovesicle bez narušavanja H + K + - ATPaze funkciju, dok je ciljana Kcne2 pregled poremećaj sprječava H + /K + -ATPaze funkcija uklanjanjem njegove lumena podloge, K + iona [7], [44]. Možda je ovo posljednji mehanizam u budućnosti može otkriti tragove u vezi s kritičnim događajima u oxyntic atrofije koje rezultiraju SPEM: trenutno je sugerirao da SPEM indukcijske proizlazi iz nedostatka u parijetalni regulatora stanica luči normalne želučane sluznice obnove, koji uključuju Sonic jež i TGF-α [46], [47] zbog gubitka parijetalnih stanica. Daljnje studije Kcne2 pregled - /- parijetalni stanice - koji su još uvijek prisutni, ali ne radi ispravno - može otkriti regulatore koji su još uvijek može lučiti, a oni koji se ne mogu pregled}

želučane sluznice. Kcne2 pregled ^{- /- miševi pokazuju povećanu ekspresiju uspostavljenog proliferacije marker Ki67, manifestira kao povećanje širine proliferativna benda sluznice, a kao Ki67-pozitivnih stanica sluznice ciste u regijama GCP. Isto tako, de-diferencijacije marker CK7, nije izražen u 1-godišnji Kcne2 pregled + /+ želučane sluznice, naširoko je izražena u onom Kcne2 pregled - /- miševa. Uzimajući ove i markeri gore opisani zajedno, Kcne2 pregled - /- želučane sluznice izlošci Metaplazija s više značajki preneoplasia, te u nekim slučajevima i neoplazije, osobito u određenom okruženju bez patogenih organizama bez dokaza od želuca Helicobacter pregled infekcija ili oxyntic atrofije, te u odsutnosti kemijskih inhibitora želučane kiselosti. Zajedno s nalazom ovdje da parijetalni stanica KCNE2 izraz pojavljuje se smanjiti u ljudskom tkivu karcinoma želuca (slika 4) i na prethodno izvješće koje KCNE2 inhibira želučanu proliferacije stanica raka [12], podaci ukazuju KCNE2 poremećaj povezan s želučanim progresije raka. Buduće studije će uključivati ​​ispitivanje je li Kcne2 pregled poremećaj povećava sklonost za rak želuca u roku od patogena i kancerogen bazi protokola, mehanizmi koji stoje iza tih mogućih razlika, i potencijal mehanicistički veze između Kcne2
, ciklin D1 i stanični ciklus perturbacija izvan područja etiologiji bolesti achlorhydria povezane. Nadalje, kao KCNQ1 i KCNE2 su također co-izražena u epitelnim stanicama štitnjače, gdje su važni za biosintezu hormona štitnjače [48], to će biti od interesa ispitati potencijalnu ulogu za KCNE2 u abnormalnim thyrocyte proliferacije. Pregled}

materijal i metode pregled

Proizvodnja i uporaba miševa gen koji ciljaju

Svi su miševi koji su opisani u ovoj studiji su smješteni, koristi i eutanazirani u skladu sa NIH i Cornell University Institucionalni Animal Care and use odbora smjernicama. Svi miševi su opisane u ovoj studiji su smješteni, koristi i eutanazirani u skladu sa NIH i Weill Medical College Institucionalni Animal Care and Use odbora smjernicama. Etičko odobrenje za uzgoj i žetva tkivo iz divljeg tipa i Kcne2 pregled ^{- /- miševa za biomedicinska istraživanja odobrilo je Weill Medical College Institucionalna Animal Care i korištenja odbora (protokol 0704-610A). Kcne2 pregled - /- miševi su generirani kao što je prethodno opisano od C57BL /6 Kcne2 + /pregled - x Kcne2 +/- pregled križevi [7]. Numerički podaci su analizirani s Excel softvera (Microsoft) pomoću jednosmjerne analize varijance (ANOVA) uz statističke značajnosti postavljena na P pregled. ≪ 0,05 pregled}

Histologija pregled

histologiju i želudac masa kvantifikacija, Kcne2 ^{+ /+ pregled i Kcne2 pregled - /- miševa 3 tjedna, 3 mjeseca i 12-15 mjeseci su žrtvovani pomoću CO _{2 gušenje (5-10 po genotipu). Želudac se ukloni postmortem, želuca masa određena, pa želudac Tkivo je fiksirano u 10% neutralno puferirani formalin, obrađuje uobičajenim metodama i uronjeni u parafin. Želučane sluznice rezovi su na 5 lm intervalima, stavi na pozitivno nabijene SuperFrost slajdova, obojeni hematoksilinom i eozinom (H &E)., I ocijenjen Olympus BX45 mikroskopom pregled}}

Imunohistokem pregled

Imunohistokemijska detekcija Ki67, CK-7 i TFF2 (također poznat kao spazmolitički peptid) je provedena pomoću Discovery XT procesor (Ventana Medical Systems). Koncentracija primarno antitijelo upotrijebljeni su: 0.05 ug /ml (zečjeg poliklonskog anti-Ki67, Vector Labs); 1 ug /mL (mišje monoklonsko anti-CK-7; Abcam); 1 ug /mL (mišje monoklonsko anti-TFF2, Abcam). Prethodna inkubacija primarnog antitijela, sekcije tkiva su blokirane 30 min u 10% normalnom kozjem serumu, 2% BSA u PBS-a (anti-Ki67); 30 min u 10% normalnom kozjem serumu, 2% BSA u PBS-u i avidin /biotin tijekom 8 min (anti-CK-7); 30 min u 10% normalnom kozjem serumu, 2% BSA u PBS i avidin /biotin 4 min (anti-TFF2). Primarni vremena inkubacije antitijela su: 3 sata (Ki67 i CK-7); 5 sati (anti-TFF2). Sekundarni inkubacije antitijela su: 32 min na 1:200 biotiniliranim kozjim anti-zečjim IgG (Vector Labs) za Ki67; 60 min u 1:200 biotiniranim konjskim anti-mišjim IgG (Vector Labs) za CK-7 i TFF2. Za inkubaciju sekundarna antitijela Ki67, blokiranje D, Streptavidin-HRP i detekcija kit DAB (Ventana Medical Systems) korištena su u skladu s uputama proizvođača. Za CK-7 i TFF2, mišji IgG1 (5 ug /ml) koristi se kao negativna kontrola izotopi, te su korišteni Blocker D, Streptavidin-HRP i detekcija kit DAB (Ventana Medical Systems). Pregled

za ciklin detekcija D1, želudac stakalca su zagrijava na 58-60 ° C 30 min, a zatim deparafmizirani. Aktivnost endogene peroksidaze je blokirana inkubacijom presjeka u 1% -tnim vodikovim peroksidom u PBS-u tijekom 15 minuta, (8,3 ml 30% 'H-sub> 2O _{2 /241.7 ml PBS), a zatim raskrinkavanja antigenskog epitopa po mikrovalnoj u 10 mM citrata pufer pri višoj snazi ​​tijekom 15 minuta. Stakalca su hladi tijekom 20 min, isprana u destiliranoj vodi 5 min, prenesena u PBS i inkubirani u 10% normalnog konjskog seruma (2% BSA-PBS otapalo) 30 minuta u vlažnoj komori. Mišje monoklonsko anti-ciklin D1-antitijela (Cell Signaling) dodan je na 1:1000 sa 2% BSA u PBS-u i inkubiraju preko noći na 4 ° C u vlažnoj komori. Stakalca su isprane u PBS i sekundarna biotiniranim konjskim protumišjim IgG protutijela (Vector Labs) se aplicira 1:500 u PBS tijekom 30 minuta pri sobnoj temperaturi. Stakalca su isprana i avidin-biotin kompleks (Vectastain ABC Elite Kit, Vector Labs) razrijeđen na 1:25 u PBS-u je primijenjen 30 min. Signal se detektira inkubacija u 3,3-diaminobenzidinu (Sigma, Serija br 026K3767) do željenog intenziteta boje je postignut. Nakon završnih ispiranja u vodi, tobogani, blago su negativno u hematoksilinom. KCNQ1 i HKA β jednom označavanje i otkrivanje su izvedeni kao što je ranije [7] opisano. Otkrivanje CD34 bio s 1:50 anti-CD34 protutijela (AbCam). Ploče su pregledani s Nikon Eclipse E600 mikroskop i fotografirati fotoaparatom RT boja i spot softver (dijagnostičkih instrumenata, Inc.). Pregled}

Imunofluorescencija pregled

Sve ljudsko tkivo je dobivena od ProSci, Poway, CA, te je certificiran kao što je dobiveno od kvalificiranih i licenciranih patologija usluga, koristeći odgovarajući suobličeni suglasnost za uporabu u biomedicinskim istraživanjima i sa zaštitom donatora anonimnost; dakle, dodatna Weill Medical College Institutional Review Board etika odobrenje nije potrebno. Otkrivanje imunofluorescencija HKA p, KCNQ1 i KCNE2 u ljudskoj želučane tkivo (ProSci) izvedena je pomoću Discovery XT procesor (Ventana Medical Systems). Korišteni su sljedeći ljudska tkiva: normalan želudac tkiva od 50-godišnje žene (PSC-10-809-XB1); tkiva karcinoma želuca, podaci o pacijentu nedostupna (PSC-10-814-CA1); želučanog adenokarcinoma tkivo iz 51-godišnje žene (PSC-10-809-XA1). Koncentracija primarno antitijelo korišteni bili su: 0,5 mg ml anti HKA β (miš monoklonska, afiniteta Bioreagents), 1 mg /ml anti-KCNQ1 (kunić ili kozjeg poliklonalnog, Chemicon), te u kući anti-KCNE2 serumu je korišten /na 1:500 razrjeđivanje nakon stupu obogaćuje IgG. Prethodi inkubacije primarnog antitijela, sekcije tkiva su blokirane 30 min u 10% normalnom kozjem serumu, 2% BSA u PBS, a zatim 8 minuta avidin /biotin bloka. Inkubacija primarno antitijelo (3 sata), a zatim 32 min inkubacije s biotiniliranim anti-mišjim IgG (ABC kit od Vector Labs), 60 min inkubacije s biotiniliranim anti-kozji IgG (ABC kit od Vector Labs), ili biotiniliranim anti-kunić protutijela na 1:200 razrjeđivanja (Vectastain ABC kit). Sekundarna detekcija je provedena pomoću streptavidin-HRP (D Ventana Medical Systems), nakon čega slijedi inkubacija sa tiramidom-Alexa Fluor 488 (Invitrogen) ili tiramidom Alexa Fluor 568 (Invitrogen). Slajdova gledalo sa Zeiss Axiovert 200 widefield mikroskop i slike su stečene korištenjem MetaMorph softvera 7.1 (Molecular Devices). Pregled

Western blot pregled

Za zapadnoj upijajući, membranske frakcije želučani su pripremljeni kao što je prethodno opisano [7]. Tri želuci od 12 mjeseci stara Kcne2 ^{+ /+ pregled i Kcne2 pregled - /- miševi su uklonjene post mortem, razrezano duž curvatura ventriculi glavnih, očišćena od ingesta i odmah momentalno smrznuti u tekućem dušiku. Želuci su zatim homogenizirane u puferu koji sadrži 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 100 ug /ml PMSF, 1 ug /ml Nonidet P40, 0,5% SDS i 0,5% natrijevog ortovanadata i zatim inkubirani na ledu 30 minuta i centrifugira pri 12000 × g pregled za 20 min na 4 ° C. Koncentracija proteina u supernatantu je izmjerena u skladu s Bradford metodom. Ukupnog proteina (40 ug /liniji) stavljeno je u pre-cast tris-glicin 4-20% gel (Jule Inc, Milford, CT) i odvoji elektroforezom. Proteini potom su prenešeni na PVDF membranu (Bio-Rad, Hercules, CA), te blokirani s 5% mlijeka, 0,05% Tween-20 u PBS-u tijekom 12 sati na 4 ° C na klizaču. Inkubacija primarna antitijela (4 h, RT u 1% -tnom mlijeku, 0,05% Tween-20, PBS, "pufer A ') su: 1:2000 anti-ciklin-D1 (Abcam); 1:5000 anti-GAPDH (Abcam). Membrane su isprane 4 puta, 20 minuta svaki s antitijelima inkubacijski pufer zatim inkubirane s odgovarajućim sekundarnim antitijelima (Biorad) razrijeđenim u puferu A 1:10000 2 sata na sobnoj temperaturi zatim se pere 4 × 20 min svaka sa puferom A i jednom 5 min s PBS.}

• PLO Patogeni: Caveolin-1 štiti miševe od B6129 Helicobacter pylori Gastritis
• PLoS ONE: Epstein-Barrov virus i Helicobacter pylori Co-Infekcija pozitivno povezan s teškim gastritis u dječju Patients