Dopolnilne vloge preoblikovanje rastni faktor-a v mehanizmih citoprotekcije iz želodčne sluznice poškodbe

Dopolnilne vloge preoblikovanje rastni faktor-a v mehanizmih citoprotekcije za poškodbe želodčne sluznice
Abstract
Ozadje
Preoblikovanje rastni faktor alfa (TGFα) ščiti pred želodčne sluznice poškodbe in pospešuje celjenje ran. Vendar pa je njegova čezmernim znano, da inducira hipertrofično gastropatije spominja Menetrier bolezni v transgenih (TG) miši na FVB ozadju, kot eden od avtorjev prej poročali. Raziskovali smo še TGFα-izraža miške črto na CD1 podlagi, katere želodčne sluznice zdi normalno. Ker ta TG miška je imel močan odpor do-etanola povzroča poškodbe želodca, smo upoštevali dolgoročni učinek TGFα na več želodčnih mehanizme varstva.
Metode
TGFα-izražajo transgenih (Tg) miška linije nosijo cDNA človeško TGFα pod nadzorom promotorja gena I mouse metalotioneina so bili ustvarjeni na podlagi CD1 miške in analizirali njihove etanol škode odporna fenotipov proizvaja TGFα.
Rezultati
v TG sluznice, je pretok krvi urejeno po etanola poškodbi . Nadalje so nevralne in inducibilni vrste NO sintaza dosledno in močno izražena v TG sluznico, v primerjavi z omejenim distribucijo nevronske tipa NO sintaza v luminalne pit območju divjega tipa (WT) sluznico. COX-2 in njegove višje transkripcijski faktor NFKb bilo konstitutivno povišano TG sluznice, še preden etanola dajanju, medtem ko so v istem območju WT sluznice inducirane šele etanola poškodbi. Dva antiapoptozne proteini, Hsp70 in Bcl-2, so bile povečana pri TG sluznice, še preden etanola dajanjem, pri čemer niso bili izraženi v WT sluznici pred poškodbami. Poleg tega je bila pro-kaspaze 3 aktivacija zaviral TG sluznici, medtem ko se je pretvori v aktivno obliko v WT sluznice po etanola uprave.
Zaključek
Sklepamo, da TGFα ohranja želodčne sluznice obrambo pred poškodbo želodca s vključevanje drugih mehanizmov za zaščito celice.
Ozadje
Etanol je že dolgo uporablja za ustvarjanje hemoragični želodčne sluznice poškodbe pri glodavcih [1]. Z oralnim dajanjem absolutnega ali solne kisline, kislo etanol, lahko obsežna hemoragične lezije se proizvaja v želodčni sluznici. Ta eksperimentalna želodca model, je bila škoda pogosto uporablja za zdravljenje želodčnih za zaščito sluznice in vračanja študij. Dejansko so bili številni zaščito celice spojin testirali oceniti njihovo moč upirajo poškodbe želodca, vključno prebavil hormonov, rastnih faktorjev, prostaglandini, bioaktivnih amini in blage dražilne snovi, kot so kapsaicin [2-5]. Med temi spojinami, epidermalni rastni faktor (EGF) Družina rastnih faktorjev, zlasti preoblikovanje rastni faktor alfa (TGFα), so poročali močnih zaščito celice spojin proti etanolom, ocetna kislina, ali z aspirinom povzroča poškodbe želodčne [2, 4].
TGFα je bila izražena na podganji želodčne sluznice, po peroralni fermentiranih tavroholat ali solno kislino, kar kaže na njeno popravljalni vlogo pri škodi želodčni [6]. TGFα danem intraperitonealno zaščiteni pred-etanola povzroča poškodbe želodčne z znatnim povečanjem priraščena želodčne mucin pri podganah [7]. Citoprotektivno funkcija TGFα Videti je bilo posredovano z aktivacijo fosfolipaze C-γ1, ne pa prostaglandine, in je bil neodvisen od anti-sekretorni učinek TGFα [7]. Po drugi strani, prostaglandinov in njihovi sintetični encim ciklooksigenaza (COX), že dolgo predlagani kot zaščito celice faktorji proti škodi želodca [5, 8]. ESPG Dokazano je, da izrazimo inducibilne COX izoformo, COX-2 v RGM1 podganjega želodca sluznice celične linije skozi ERK MAP kinaze izvedeni [9] in Swiss 3T3 fibloblasts, zlasti s sodelovanjem stimulacijo z gastrina [10]. Poleg tega COX-2 ekspresijo z heparina za vezavo EGF podobnega rastnega faktorja, član ESPG družine rastnih faktorjev, je bil blokiran s posebno EGF receptorja (EGF-R) inhibitor v podganji želodčne sluznice [11]. Tako se zdi, EGF-R signala za posredovanje COX-2 indukcije v želodčni sluznici.
Najpomembnejši citoprotektivno mehanizmi vključujejo želodčne sluznice prekrvavitev. ESPG in TGFα so pokazale, da izvaja citoprotektivno učinke preko stimulacije kapsaicinom občutljivih nevronov s sproščanjem kalcitonina povezanih genov peptid (CGRP) in dušikov oksid (NO) pri podganah, izpostavljenih orogastric dajanje etanol, kar je povzročilo povečanje želodčne sluznice krvi tok [11, 12]. V nasprotju s tem, Konturek sod. zmanjšati vlogo povečanja CGRP odvisnega v želodčni krvnega pretoka, ki ga dokazuje, da dajanje NO-sproščujoči aspirin ponujeno zaščito pred absolutni etanol-povzročene poškodbe želodčne celo kapsaicinom-denervirati podgan, kar uravnavanjem toplotni šok protein 70 (Hsp70 ) izražanje in oslabi oksidativno škodo, ki jo močno uravnavanjem antioksidativnih genov, kot so cink bakra superoksid dismutazo (SOD) in glutation peroksidaze [13].
TGFα je imunoreaktivnosti pretežno v GSM celicah vzdolž želodca jamo pri ljudeh [14] intenzivno v želodčnem površine sluznice (GSM) celic nad proliferativne coni in šibko po žleznega območju pod proliferativno coni pri podganah [15], ter izrazito po sluznici vratu celic v FVB /N sev miši [16]. Po drugi strani pa je EGF-R imunoreaktivnosti v GSM celice obdaja foveolar jamo in sluznice vratu celic regijo s spodnjim žleznega regiji pri ljudeh [17]. Pri podganah je bila EGF-R lokalizirana na top-pit regiji in v glavnih skupin celic na dnu želodca žlez [15]. Čeprav je TGFα znano, da inducira proliferacijo celic v primarni kultivirani podganjih želodčnih celic sluznice [18], in hiperplastični širjenje v sluznici na TGFα-izraža transgenih (TG) miš [19, 20], distribucija TGFα in EGF-R v terminalno diferenciranih želodčnih celic sluznice kažejo, da TGFα izvaja brez proliferacije funkcij, vključno z anti-apoptotskih učinkov in želodčnega epitela nastanka ovir v avtokrinskega /parakrin način. Na primer, TGFα inhibira apoptozo miške želodčne sluznice celične linije, GSM06, ki jo izražajo anti-apoptotične Bcl-2 družinskim proteine ​​preko NF-κB odvisni poti [21]. Želodca apical in basolateral EGF-R je pokazalo, da inducira zmanjšanje paracelični prepustnosti do kisline za zaščito žleznih celic v kislem okolju [18, 22]. Tako TGFα izvaja tako proliferacije in ne-proliferacije učinke na želodčnih funkcij sluznice, in te raznolike učinke TGFα je treba ponovno oceniti, vsaj glede na to, ali so njihovi rezultati pridobljeni iz kratkotrajno zdravljenje s pomočjo kulture celičnih linij ali iz dolgoročnih izraz izraz uporablja TGFα-transgena izražajo živali.
pred desetletjem, eden od avtorjev, H. Takagi, ustvarila TGFα izražajo TG miši linije pod nadzorom promotorja metalotionein genov, in eden od teh vrstic (MT100) razstavljena hipertrofična gastropatije spominja Menetrier bolezni, kot je podobno prikazano z drugimi raziskovalci [19, 20]. V nasprotju s tem pa prikažejo drugo TG linija (MT42) normalno, pojavljajo želodčne sluznice, čeprav je TGFα transgenov izražena v podobnem obsegu v obeh TG vodih [20]. Ker MT42 vrstica prikaže presenetljivo stopnjo odpornosti proti-etanol povzroča poškodbe želodčne sluznice, smo menili, da bi bilo koristno za raziskovanje neproliferativni učinke TGFα, kot so odpornost sluznice na etanol poškodbe. V tej študiji smo raziskovali dolgotrajne učinke TGFα na etanol-povzročene škode, želodca, ki jih analizira spremembe v zaščito celice in anti-apoptotskih regulativnih dejavnikov, vključno z želodčno pretok krvi, NO-sintaze, COX-2, in beljakovine-apoptoze povezana takšnih kot HSP70, Bcl-2 in kaspaze 3.
metod
TGFα izražajo transgene miške in-etanol povzroča poškodbe želodčne
TGFα izražajo transgenih (Tg) miška linije nosijo cDNA človeško TGFα pod nadzorom glavnega miška metalotionein gen I promotor smo ustvarili na CD1 ali FVB ozadju miške, kot je bilo prej [20] opisano. Eden izmed linij TG, MT100 na FVB ozadju miške, prikaže hipertrofično gastropatije spominja Menetrier bolezni [20], medtem ko je na drugi strani linije, MT42 na ozadju CD1 miške, prikaže normalno, pojavljajo želodčne sluznice. Fenotip v TGFα-TG miško je zdelo, da je odvisna od seva miške, saj tako MT100 in MT42 linije izrazil podobno raven TGFα transgena v želodcu [20]. V tej raziskavi smo uporabili MT42 linijo TGFα izražajo TG moški miši in CD1 divjega tipa (WT) moškega miši v starosti od 6 do 8 tednov. Živali so se ohranili pod kontrolirano svetlobo (7:00 do 7:00 PM) s hrano in vodo, ki ad libitum
.
Miši, ki tehta 30-35 g, postimo 24 ur pred poskusom, vendar pustimo prost dostop do vode. Vsi eksperimentalni postopki, ki vplivajo na miših so bili potrjeni na Animal Care in Odbora za pregled uporabe na Univerzi Gunma. Miši so bile nato dana orogastric kislega etanola (100 ml, 60% etanola v 0,15 mol /L HCl). Tri, šest in dvanajst ur po fermentiranih uprave etanola so bile miši žrtvovali za oceno poškodbe želodčne in Imunohistokemične analiz in RNK in ekstrakcijo proteinov za PCR v realnem času, Severni in Western blot analiz.
Fiziološki študij
izločanja želodčne kisline smo izmerili kot je opisano predhodno [20, 23]. Na kratko smo WT in TG miši postiti 3 h in nato anestezirali z etrom. Po rezu trebušno steno, je pyrolus ligirali in rez je zašite. Fluid želodca zberemo 4 h po pyrolus ligacijo. Za izhod maksimalno kisline, je bila kislina izločanje spodbujena z vbrizgavanjem pentagastrin subkutano (500 mg /kg telesne teže). Fluid želodca titriramo z 0,1 N NaOH na pH 7,0 s pomočjo microtitrator.
Želodčni pretok krvi sluznice smo merili z laserskim Dopplerjevega merilnika pretoka (model SFA211, Advance Co, Tokio) z dajanjem sondo na površini želodca sluznica, kot je opisano predhodno [24]. Signal tok smo spremljali s snemanja programa MacLab. Pretok krvi je bil izražen glede na bazalno raven.
Morfološke študije
debelina želodčne sluznice je bila izmerjena s najvišji del na dnu žlez z mikrometra. Prav tako so bile v želodcu lezije škode meri (širino in dolžino), z mikrometrom za izračun poškodovano območje.
Za imunskim barvanjem, smo pridobili protitelesa, kot sledi. Poliklonsko protitelo H + /K + - ATPaze je bila pridobljena z vbrizganjem zajec parietalnih frakcije celic-mikrosomskih v miši [25]. Rabbit poliklonsko protitelo za metalotioneina je bil neke vrste darilo dr Nagamine, Gunma University School of Health Sciences [26]. Kupili smo protitelesa, kot sledi: zajec poliklonsko protitelo, da TGFα, kuncev poliklonskega protitelesa za EGF-R, koza poliklonska protiteles za COX-2, zajec poliklonska protiteles za NFκB in miška monoklonska protitelesa za nNOS in iNOS iz Santa Cruz Biotech. (Santa Cruz, CA); miš monoklonsko protitelo proliferativni celično jedrni antigen (PCNA) iz Zymed Lab. (South San Francisco, CA); ovce protitelesa za človeško pepsinogen II iz Biopur AB (Bubendorf, Švica), ki reagira tudi miške pepsinogen; zajec poliklonsko protitelo, da HSP70 od Stressgen Biotech. (Victoria, BC, Kanada); in miško monoklonsko protitelo Bcl-2 iz BD Biosciences (San Diego, CA).
za hrenovo peroksidazo (HRP) -catalyzing Imunohistokemijsko bilo mleto želodcev določen v nevtralizirani 10% formalinu pri 4 ° C 24 ur, in nato smo vdelali v parafin za mikrotom odseke. odseki deparaffinized tkiva smo rehidrirano in inkubiramo v 3% raztopini vodikovega peroksida, da zavirajo endogene peroksidaze aktivnost. Nato so bili odseki inkubirali s prvim protitelesom opisano zgoraj z ustrezno raztopino pri sobni temperaturi 30 minut. Sekundarni biotiniliranega protitelesca je bil izbran na osnovi prvih proizvaja protitelesa živalskih vrstah, in smo nato uporabili s HRP-konjugirano streptavidin. Reakcijo HRP smo izvedli s 3-amino-9-etil-karbazola in vodikovega peroksida v skladu z navodili, ki so priložena streptavidina-biotin barvanja Vectastatin Elite Kit (vektorjih Laboratories, Burlingame, CA). Pozitivni stainings pojavil rjave barve.
Za imunofluorescenčnim obarvanjem, je bilo mleto želodcev določen v 4% paraformaldehida v 0,1 M fosfatnem pufru, pH 7,4 pri 4 ° C za 24 h. Koščke mletega tkiva doživel saharoza zamenjavo in so bili vgrajeni v ČDO-spojine v pripravah na zamrznjenem oddelku uporabo Mikrotom. Za primarni imunoreakcija so narezane sekcije skeniran s prvim protitelesom, in smo nato inkubirali bodisi z indodicarbocyanide (Cy3) označenih s afiniteto očistimo osel anti-zajec, anti-mouse IgG (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA), ali fluorescein izotiocianatom (FITC) označenega anti-zajec IgG (Jackson ImmunoResearch), kot sekundarna protitelesa. Sekundarni IgG protiteles je bil izbran na podlagi vrste, na katerih je bila postavljena prva protitelesa.
Pri odkrivanju in situ apoptotskih celic smo izvedli z uporabo in situ Detection Kit apoptozo (TAKARA BIO INC. Tokio, Japonska). Komplet vsebuje terminal deoxynucleotidyl transferaze posredovano uridin trifosfat biotin nick konec označevanje (TUNEL) Analiza sistema. Želodec odseki so permeabiliziramo z proteinaze K in 3'-OH konce DNA fragmente smo nato obarvajo v skladu z navodili, ki so priložena kompletu. Jedra obarvajo temno rjava naj bi bile apoptotske celice.
Analiza RNA
želodcev so obrezani in skupno RNA so bili pridobljeni s pomočjo TRIzola (Gibco BRL, Tokyo), v skladu s protokolom, ki jih določi proizvajalec. Za Northern blot smo celotno RNA elektroforezo na 1,0% agaroznem gelu in prenesemo v najlonsko membrano (Amersham Pharmacia Biotech, Tokyo). Hibridizacijo smo izvedli s sondo cDNA humanega TGFα (917 bp) označenih s [a- 32P] deoksi-CTP. Ta sonda prepozna človeški TGFα mRNA, vendar ne miš raven TGF mRNA.
Miš TGFα mRNA smo merili z uporabo realnem času polimerazne verižne reakcije (PCR) z gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH) kot notranje kontrole. V realnem času PCR je bila izvedena s pomočjo ABI Prism 7700 Sequence detektor in brezalkoholne (Applied Biosystems, Foster City, CA) s pomočjo DNK fluorescentna barvila SYBR Green zaznavanja. Temeljni premazi so namenjeni uporabi programske opreme oblikovanje Primer Express (Applied Biosystems). Končni rezultati vsakega vzorca smo normalizirali so jih vrednostjo GAPDH. Primer sekvence so naslednji: miške TGFα: 5'-CCTGAGCACCCGAAGAT-3 'in 5'-CCTTCCCTCATGCCTTACT-3'; GAPDH: 5'-GTCGTGGATCTGACGTGCC-3 'in 5' TGCCTGCTTCACCACCTTCT-3 '
Western analiza blot
vzorcev želodčnega tkiva so obrezani in skupnih beljakovin iz želodčne sluznice smo homogenizirali v RIPA pufru, ki vsebuje mešanico zaviralci proteaz. (fenilmetilsulfonil fluorid, lizocima, leupeptin in aprotinin) (Roche Diagnostics, Mannheim, Nemčija). Supernatant smo ločili na SDS-PAGE gelu, nato pa smo osušili na poliviniliden difluorid membrano. Membrana je skeniran v naslednjih protiteles: protiteles iNOS, COX-1, COX-2, HSP70 in Bcl-2, ki so bile enake tistim, ki se uporabljajo za morfoloških študije; miško monoklonsko protitelo za Bax (Santa Cruz Biotech.); zajec poliklonsko protitelo za kaspaze 3 (Santa Cruz Biotech.); in miško monoklonsko protitelo proti aktinu filamenti (Santa Cruz Biotech.). -Protiteles odzvala trakovi so odkrili z uporabo sistema za zaznavanje ECL (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Merjenje gastrin
Serum gastrina smo merili z gastrin radioimunskega komplet (gastrin RIA komplet, Dainabot, Tokio, Japonska). Je protitelo specifično za gastrina z amidno delom na svojem karboksilnem koncu.
Merjenje prostaglandina E2
sluznico želodca homogeniziramo pri 4 ° C v liznega pufra. Homogenate smo centrifugirali pri 12000 obratih na minuto za 20 minut, in supernatante izpostavimo prostaglandina E 2 testom z uporabo prostaglandina E 2 Monoklonsko Imunohistokemija Kit (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI), v skladu z navodili proizvajalca .
Statistična analiza
Statistična analiza je opravil ponovljene analize ukrepa variance (ANOVA) za celotno dolžino želodca lezij, ki ga brez para t-testa za želodčne razmerje zmanjšanje pretoka sluznice krvi. Vse vrednosti so izražene kot povprečje ± SE. P < 0.05 je bil sprejet kot statistično značilne.
Rezultati
Karakterizacija na TGFα-izraža TG miške želodčne sluznice
WT CD1 seva in TGFα-transgena izražajo MT42 linij miši rasla podobno in pokazala opazne razlike v njihovih značilnosti, vedenja, ali življenjska doba. Največja debelina opazovati želodčni steni in fundic žleze je bilo 3,50 ± 0,18 mm in 2,33 ± 0,20 mm, in sicer v miši WT, in 3,85 ± 0,24 mm in 2,63 ± 0,16 mm, in sicer v miši TG; ni bilo bistvenih razlik v obliki želodca sluznic in žlez med miši WT in TG. Poleg običajnega videza želodčne sluznice imela ta TG miš linija tudi normalno, pojavljajo jetra, trebušno slinavko in druge organe.
Smo nato primerjali izločanja želodčne kisline zmogljivosti med miši WT in TG. V miših WT, proizvodnja največja kisline znatno povečal s bazalnih vrednost 25 ± 1,4 mmol /h na 50 ± 5,8 meq /h po stimulaciji pentagastrinom. Nasprotno, v miših TG, proizvodnja največja kislina poveča na manj meri 30 ± 5,7 mmol /h od bazalnih močjo 23 ± 0,7 mmol /h (n = 5 v WT in TG miši). Izhodna posneti kislina je lahko posledica zmanjšane mase parietalnih celic v TG sluznice (slika 1e) v. Slika 1 karakterizacija TGFα-izraža TG sluznice. Lestvica v vsaki sliki kaže 100 um. (A) Porazdelitev TGFα-izražajo celic. Rjavo obarvano TGFα-pozitivne celice so bili vidni po luminalne pit regije v WT sluznici, podolgovate foveolar jame regijo in spodnje tretjine žleznega regije TG sluznici. (B) Prekrivanje rdeče obarvan TGFα-pozitivnimi celicami in zeleno obarvan H + /K + -ATPaznega pozitivne parietalnih celicah. Nižje TGFα-pozitivnih celic v gruči se razlikujejo od zelene barve parietalnih celic TG sluznice. (C) Northern blot človeškega TGFα mRNA in PCR-pomnožene miške TGFα mRNA. Human TGFα mRNA se izraža samo v sluznici TG (levo plošče), vendar PCR pomnožili miška TGFα mRNA se izraža prav tako WT in TG sluznice (desni panel). (D) Western blot za TGFα vmesnih oblik. TGFα predhodnik (20 kDa) in vmesne oblike obarvajo bolj intenzivno v TG sluznici kot v WT sluznice. (E) Lokalizacija EGF receptorja v želodčni sluznici. EGF receptor (EGF-R) so obarvane s Cy3 (rdeča) in H + /K + -ATPazni smo obarvali s FITC (zelena). EGF-R je imunoreaktivnosti zmerno v zgornjem jamo regiji in trdno v spodnjem žleznega regiji podobno tako WT in TG sluznice. (F) Porazdelitev metalotioneina v želodčni sluznici. Metalotionein močno imunoreaktivnosti v spodnjem žleznega regiji in zmerno vzdolž foveolar regiji. (G) Raztezek na želodčni jame TG sluznice. PCNA-pozitivne celice so razdeljeni na zgornjem tretje regije v želodčnih žlez WT, ker so porazdeljeni bolj numerously in na splošno v srednjem žleznega regiji. (H) PAS barvanjem kaže podolgovato jamo v TG sluznice.
Izražanje TGFα transgena
TGFα-izražajo celic vrstami so bile ugotovljene na podlagi tipa celic za posamezne imunskim barvanjem in njihovo sluznice lokacijo. TGFα je domnevno imunoreaktivnosti vzdolž celice GSM v želodčni jamo pri ljudeh [14] in podgane [15], in ob sluznice vratu celic regiji v FVB sev miši [16]. V tej študiji so rjavo obarvani TGFα-pozitivne celice porazdeljene vzdolž foveolar regije tako WT in TG sluznice, in vzdolž spodnjega žleznega območju TG sluznice (slika 1a). V TGFα-pozitivne celice vzdolž foveolar regiji zdelo, da je v želodcu pit celice, ki jih njihovi lokaciji (slika 1b, zgornje plošče), ki temeljijo, in tiste, ob spodnjem žleznega območju TG sluznice ne prekrivajo z zeleno obarvan H + /K + - ATPaze pozitivni parietalnih celicah (slika 1b, spodnja slika), vendar se prekrivajo z vodilnimi celic pepsinogen-pozitivne (podatki niso prikazani). Protitelo smo uporabili za imunskim barvanjem za TGFα ne more razlikovati med človeškimi in miške TGFα, vendar mRNA sonda lahko stori za Northern blot analizo. Človeško TGFα-transgen je bilo izraženo v TG sluznice, medtem ko ni bilo izraz zapisano v WT sluznice (slika 1c, levo plošče). V nasprotju s tem je endogeni miška TGFα mRNA podobno izražena tako v WT in TG sluznice s PCR v realnem času (slika 1c, desno plošče). TGFα je peptid 50 amino, pridobljeni iz njene 160 aminokislin membransko segajo prekurzorja s tumorje nekrotizirajočega faktorja-alfa konvertaze encimom (TACE) odcepimo [27, 28]. Z presežka izraz človeškega TGFα-transgena v TG sluznice, približno 20 kDa TGFα predhodnik in njenih vmesnih oblik so se povečali za imuno (slika 1d).
Ker sta tako predhodnik in predelane oblike enako aktiven za spodbujanje ESPG -R [28], smo podrobneje proučiti EGF-R lokalizacije v sluznici. EGF-R je močno lokalizirana v spodnjem glavni regiji celic grozdov in zmerno v sluznice vratu celic regiji in v foveolar jamo regiji tako v WT in TG sluznice (slika 1e), kot je bilo že poročali, za podgane želodčne sluznice [15 ]. Ker je bila TGFα transgen zajeti v miško metalotioneina gena [20] in metalotionein je domnevno proizvedeni v želodčni sluznici [29], smo pregledali, metalotioneina izražanje vrste celic v sluznici. Imunohistokemicno smo opazili, metalotioneina madež predvsem ob spodnjem žleznega regiji in scatteringly po pit območju nadzor CD1-seva želodčne sluznice (slika 1f). Tako je porazdelitev TGFα-ekspresirajočih celic-vrste je podoben tistemu metalotioneina-ekspresirajočih celic v želodčni sluznici TG (slikah 1a in 1f).
V mišjem sluznico WT, H + /K + - ATPaze pozitivni parietalnih celic so potekale široko preko žleznega regiji, razen za top-pit plasti, medtem ko je H + /K + - ATPaze pozitivni je žleznega regija zmanjšati višino v TG sluznica (Slika 1e). Dejansko je ožine na dnu jame regiji, ki je bila potrjena z PCNA obarvanjem, je premaknjena navzdol na sredini TG sluznice (slika 1 g). Poleg tega so PCNA-pozitivne celice gosto razdeljeni v sredini sluznice. Dosledno smo PAS-obarvanje pozitivni foveolar pit podolgovate TG sluznice v nasprotju kratkem jame v WT sluznici (slika 1h). Tako, čeprav je bila višina želodčne sluznice podoben med WT in TG sluznice, je proliferativna cona premakne navzdol in foveolar jamo regija je bolj podolgovata z zmanjšanim žlez regijo TG mocosa. Ker je rast pit celic močno poveča z gastrina [25, 30], smo primerjali serumski gastrin med miši WT in TG vendar je bilo ugotovljeno na ravni serumskega gastrina v TG miško (WT ni povečala, 213 ± 41 pg /ml;. TG 263 ± 47 pg /ml, je n = 5, p = 0,438)
-etanol povzročene škode želodca pri WT in TG mouse sluznice
Orogastric dajanja fermentiranih etanola (100 ul) povzročil hemoragično Poškodba v TG sluznice (slika 2a, levo). Histološko škoda olupljeni off pit in ožine regije in dosegel do sredine žleznega regiji (slika 2b, levo). Nasprotno pa to neke vrste poškodb pri miške sluznice TG ni bilo opaziti (slika 2a, desno). Poškodba je bila histološko omejena na luminalno pit regiji (slika 2b, desno). V WT sluznice, ranjenih območje hitro narasla in dosegla najvišjo ob 6. uri po dajanju etanola, medtem ko je v TG sluznice območje počasi in minimalno povečana brez izrazitega vrha (slika 2c). Dosledno, apoptotske celice, ki jih TUNEL obarvanjem prikazani razdeli globoko na spodnji žleznega regija 3 ure po dajanju etanola v WT sluznici, medtem ko so apoptoze celice omejena na pit regiji, vendar ne razširi na žleznega regiji TG sluznice ( slika 2d). Slika 2 Etanol-povzročene poškodbe želodčne sluznice v želodcu. (A) Makroskopski pogled želodčne sluznice. Lestvica: 5 mm. Oba sluznice še 6 ur po etanola uprave. Upoštevajte, da WT sluznice prikazuje obsežni hemoragične lezije, v nasprotju s tem, TG sluznica videti nepoškodovan po etanola uprave. (B) Hematoxylin in eozin obarvanje-etanola ranjenih WT sluznice (levo) in TG sluznice (desno). Opomba globoko nastanek razjede v WT sluznice. Lestvica: 100 mikrometrov. (C) Časovni potek-etanola povzroča poškodbe želodca. Vprašanje območje nariše glede na čas do 12 ur po dajanju etanola. Vsaka točka predstavlja povprečje petih miši. p
< 0.05 (d) TUNEL obarvanje WT sluznice (levo) in TG sluznice (desno). Obe deli so zaporedno s tistimi v 2B
oz. Apoptotske celice so vidne s temno rjavo jeder. Številne apoptotske celice so bile opažene pri WT sluznici. Vse fotografije so 6 ur po uporabi zdravila etanola. Lestvica:. 100 mikrometrov
želodca sluznice pretok krvi v etanol-obdelan sluznice
Čeprav so poročali številni zaščito celice regulatornih dejavnikov, vključno z NO, CGRP, COX2 in HSP70 [12, 13, 31, 32] je bil sluznice pretok krvi kot primarni dejavnik za varstvo in vrnitev-etanola povzroča poškodbe želodca [1, 33]. Izmerili smo želodca krvni pretok z dajanjem sondo laserskega Dopplerjevega merilnika pretoka je na želodčni sluznici dostopna prek izpostavljenega trebušne stene v anesteziranih miško. Želodčni pretok krvi zmanjšala označena s 43,5 ± 6,37% po dajanju etanola na želodčni sluznici WT miši (slika 3). Nasprotno, po dajanju etanola na TG sluznici (slika 3) je bila nižja le za 17,2 ± 9,21%. Tako je bil želodčni pretok krvi urejeno v TG sluznici tudi po obdelavi etanola. Ker sluznice ishemija je eden od najpomembnejših ulkusnih dejavnikov [33], se zdi, da je bistven element za zaščito sluznice vzdrževanje želodčne pretoka krvi. Slika 3 Ocena želodčne sluznice pretoka krvi v želodčnem sluznice. Želodca sluznice pretok krvi je bila ocenjena s primerjavo razmerja krvnega pretoka pred in po zdravljenju etanola. Razmerje dobimo kot odstotek nad pretokom krvi pred zdravljenjem, ki je bil v WT sluznici veliko večja kot v TG sluznici. * P
< . 0.03
Izražanje zaščito celice beljakovin: NO sintaza, COX-2, in HSP70
Raziskovanje mehanizem vzdrževanja pretoka visokega krvnega v TG sluznice, smo pregledali izražanje NO sintaza, zaradi česar NO iz arginina, in sprošča gladke mišice preko cGMP-odvisne proteinske kinaze [34]. Obstajajo tri vrste NO-sintaze (NOS): nevronska NOS (nNOS), inducibilni NOS (iNOS) in endotelija NOS (eNOS). nNOS in eNOS so konstitutivno izražen, medtem ko je iNOS povzročena na poškodbe želodčne [35]. nNOS je bil razdeljen podobno PAS-barvanjem nad foveolar jame regiji (slika 1 g); je bilo opaziti preko podolgovate jame TG sluznice in je bila omejena na luminalne jame WT sluznice (slika 4a). eNOS je šibko razpršene po celotni želodčne sluznice prav tako WT in TG sluznice (podatki niso prikazani). INOS obarvanje bil zanemarljiv v WT sluznico, čeprav je bilo zelo inducira v spodnjem žleznega regiji, potem ko je sluznica izpostavljen etanolu (slika 4b). V TG sluznico, je iNOS konstitutivno izražen v spodnjem žleznega regiji podobno pred in po poškodbi (slika 4b), ki se pojavi nadalje prispeva k vzdrževanju visokega krvnega pretoka. Slika 4 imunskim barvanjem NO sintaza v želodčni sluznici. Lestvica: 100 mikrometrov. (A) nNOS imunskim barvanjem. nNOS bil viden vzdolž jame regiji, zaradi česar je njeno širšo distribucijo vzdolž podolgovate jamo v TG sluznice. (B) iNOS imunskim barvanjem. iNOS bila povzročena v spodnjem žleznega regiji po etanola škode v WT sluznici, medtem ko je konstitutivno izražen v isti regiji TG sluznice neodvisno od etanola škode.
Prostaglandini so bili predlagani kot glavni citoprotektivno faktor pred več kot tremi desetletji [ ,,,0],8] in njihove vloge so bile v veliki meri preučevali [36, 37]. Vloga encimov-prostaglandin tvori, COX-1 in COX-2, je bil sporen pri zaščiti sluznice proti želodčnih dražečih [7, 11, 32]. Proučili smo izražanje COX v WT in TG sluznice v etanol poškodbe. Izraz COX-1 ni bilo razlik med WT in TG sluznice, niti pred ali po etanol škode (slika 5b). COX-2 ni bilo mogoče odkriti v WT sluznice, vendar je njegova ekspresija je postalo očitno 6 ur po poškodbi etanol in njegova obarvanje je lokalizirana na spodnji žleznega regijo (sliki 5a in 5b). V TG sluznico, je imunskim barvanjem COX-2 intenziven v isti regiji še pred poškodbo in ostal po poškodbi (slika 5a) pozitivna. Ker je bilo dokazano, Coxs izraženi v mezenhimskih celic, kot so fibroblasti in mononuklearnih celicah v želodčni sluznici [38], in način streptoavidin /biotin /HPR včasih predstavlja lažno pozitivno barvanje, smo izvedli imunofluorescenčni barvanje z uporabo zamrznjenega odsek, ki je potrdil COX izraz prav v spodnjem žleznega območju TG sluznice (podatki niso prikazani). Z imuno, COX-2 povečal po poškodbi v WT sluznice, ker je bilo pred visoko povzdignjen v podobnem obsegu in po poškodbi (slika 5b). Dosledno so prostaglandin E 2 ravni bistveno višja pri TG sluznici kot v WT sluznice (slika 5c).

• Zaporedje genoma Helicobacter suis podpira njeno vlogo v želodcu pathology
• Up-regulacijo CLDN1 na raka želodca, povezana z zmanjšano survival