Integrative Rollen vun transforméiert Wuesstem Faktor-α an der cytoprotection Mechanisme vun gastric mucosal blesséiert

Integrative Rollen vun Wuesstem Faktor-α an der cytoprotection Mechanisme vun gastric mucosal blesséiert VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background transforméiert VerfÜgung Wuesstem zitt Faktor α (TGFα) schützt géint gastric mucosal Verletzungen an erliichtert verkënnegt Meter. Allerdéngs ass säi overexpression virdrun hypertrophic gastropathy Mooss Menetrier d'Krankheet an transgenic (TG) Mais op eng FVB Hannergrond, als eent vun den Auteuren Untersuchungshaft induce bekannt. Mir studéiert aner TGFα-ausdrécken Maus Linn op engem CD1 Hannergrond, hir gastric mucosa schéngt normal. Zënter dësem TG Maus eng staark Resistenz zu Ethanol-entschlof gastric Verletzung hat, als mir d'laangfristeg Effet vun TGFα op verschiddene gastric Schutz Mechanismen. VerfÜgung Method VerfÜgung TGFα-ausdrécken transgenic (TG) Maus Linnen Träger Mënsch TGFα cDNA ënnert der Kontroll vun der Gentherapie ech Promoteur Maus metallothionein sech op enger CD1 Maus Hannergrond generéiert, an analyséiert hir Ethanol blesséiert-resistent phenotypes vun TGFα produzéiert. VerfÜgung Resultater an der TG mucosa VerfÜgung, war ugekuerbelt gutt no Ethanol Verletzung haten . Weider, goufen Mä an inducible Zorte vun KENG synthases konsequent an iwwerall an den TG mucosa ausgedréckt, am Verglach mat der limitéiert Verdeelung vun Mä Typ mucosa KENG synthase an der luminal pit Regioun vun der Show-Typ (virstellen). COX-2 an hiren Offloss Transkriptiouns Faktor NfkB sech constitutively an der TG mucosa nik och virun Ethanol Administratioun hierkommen si nëmmen no Ethanol Verletzungen an der selwechter Regioun vun der virstellen mucosa entschlof waren. Zwee anti-apoptotic Proteinen, HSP70 an BCL-2, goufen an der TG mucosa upregulated souguer virun Ethanol Administratioun, wann se net an der virstellen mucosa virun enger Verletzung ausgedréckt huet. Ausserdeem, pro-caspase 3 Aktivéierung war an der TG mucosa inhibited, wann et zu der aktiver Form vun der virstellen mucosa folgenden Ethanol Administratioun getraff huet. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Mir schléissen dass TGFα der gastric mucosal Ofwier géint gastric blesséiert Erhaalung vun integréiert aner cytoprotective Mechanismen. VerfÜgung Background VerfÜgung Ethanol huet laang gebraucht ginn an Nager [1] eng hemorrhagic gastric mucosal Verletzungen ze generéieren. Mat mëndlech Administratioun vun absolute oder Salz- Seier-acidified Ethanol, kann extensiv hemorrhagic lesions an der gastric mucosa produzéiert ginn. Dës experimentell gastric blesséiert Modell fir gastric mucosal Schutz an Zréckbezuelen Studien dacks benotzt gouf. Iwwerhaapt hunn eng Zuel vun cytoprotective awer scho laang hier as an Sylvie Conter gastric Verletzungen ze diskutéieren, dorënner gastrointestinal liicht, Wuesstem Faktoren, prostaglandins, bioactive et kann ee, a mëll irritants wéi capsaicin [2-5]. Dorënner awer, epidermal Wuesstem Faktor (EGF) Faktoren Famill Wuesstem, notamment Wuesstem Faktor α (TGFα) transforméiert, goufen als mächtegst cytoprotective awer géint ethanol-, acetic acid-, oder aspirin-entschlof gastric blesséiert ginn [2, 4]. VerfÜgung TGFα war an der Grenzwäerter gastric mucosa der mëndlech Administratioun vun acidified taurocholate oder Salz- Seier, proposéiert Iech seng reparative Roll an gastric blesséiert [6] ausgedréckt. TGFα entscheet intraperitoneally geschützt géint Ethanol-entschlof gastric Verletzung mat engem groussen Zouhuele Operstéiungszeen gastric mucin an deër [7]. D'cytoprotective Funktioun vun TGFα wossten zur Aktivatioun vun phospholipase C-γ1 mediated ze ginn, mee net duerch prostaglandins, a war onofhängeg vun der anti-secretory Effet vun TGFα [7]. Wéinst dem prostaglandins an hir syntheteschen Aktivitéit, cyclooxygenase (COX), muss laang als cytoprotective Faktoren géint gastric blesséiert proposéiert ginn [5, 8]. EGF gouf en inducible COX isoform, COX-2, vun der RGM1 Grenzwäerter gastric mucosal Zell Linn duerch eng Erk MAP kinase Passerelle [9] an am Schwäizer 3T3 fibloblasts, virun allem vun de Ko-Stimulatioun mat gastrin [10] zu hinne gewisen. Ausserdeem, COX-2 Ausdrock vun heparin-verbindlech EGF-wëll Wuesstem Faktor, e Member vun der EGF Famill Wuesstem Faktoren, gouf vun engem spezifeschen EGF receptor (EGF-R) inhibitor an der Grenzwäerter gastric mucosa [11] gespaart. Sou, schéngt de EGF-R Signal COX-2 kopéiert an der gastric mucosa zu Mediate. VerfÜgung Déi wichtegst cytoprotective Mechanismen gastric mucosal ugekuerbelt gehéiert. EGF an TGFα gewiescht mat release vun calcitonin Gentherapie-Zesummenhang peptide (CGRP) an nitric It (NO) an deër ausgesat orogastric Ethanol Administratioun, déi zu enger Erhéijung vun gastric mucosal Blutt cytoprotective Effekter via Stimulatioun vun capsaicin-senisitive Zelle huele fir dës Flux [11, 12]. Am Géigesaz, Konturek et al. d'Roll vun der CGRP-ofhängeg Erhéijung vun gastric ugekuerbelt minimal andeems datt d'Verwaltung vun NO-Thorunn aspirin ugebueden Schutz géint absolute Ethanol-entschlof gastric blesséiert och zu capsaicin-denervated deër geplatzt an der upregulation vun Hëtzt Schock FAQ 70 (HSP70 ) Ausdrock an attenuation vun der oxidative Verletzung vum staarke upregulation vun antioxidative Genen wéi Zénk Koffer superoxide dismutase (SOD) an glutathione peroxidase [13]. VerfÜgung TGFα war zu Mënschen [14] Kannerbetreiung zu Handysnummer Zellen laanscht de gastric pit immunostained, intensiv zu gastric Uewerfläch mucosal (Handysnummer) Zellen iwwer d'proliferative zesummebriechen a schwaach laanscht de glandular Regioun ënnert der proliferative Zon zu deër [15], an Ofstand laanscht d'Panz Hals Zell Regioun an FVB /N Deformatioun Mais [16]. Wéinst dem EGF-R war zu Handysnummer Zellen Doropshin der foveolar pit a Panz Hals Zell Regioun un der ënneschter glandular Regioun am Mënschen [17] immunostained. An deër, war EGF-R um Top-pit Regioun an de Chef Zell Stärekéip an der leschter vun de gastric Glands en der [15]. Obwuel TGFα ass bekannt Zell Zouhuelen vun der Primärschoul-cultured Grenzwäerter gastric mucosal Zellen [18], an hyperplastic Zouhuelen vun der mucosa op der TGFα-ausdrécken transgenic (TG) Maus [19, 20], d'Verdeelung vun TGFα an EGF-R zu induce an die ënnerscheet mobiliséiert gastric mucosal Zellen datt TGFα enormen Net-proliferative Funktiounen och anti-apoptotic Effekter an gastric epithelial Barrière Équipe an eng autocrine /paracrine täteg. Zum Beispill, inhibited TGFα apoptosis vun enger Maus gastric mucosal Zell Linn, GSM06, déi ausdrécken, anti-apoptotic BCL-2 Famill Proteinen duerch eng NF-κB-ofhängeg Passerelle [21]. Gastric enger steriler a basolateral EGF-R ass fir de Schutz vun glandular Zellen an en dono Ëmwelt [18, 22] eng Ofsenkung vun paracellular permeability zu Seier un induce gewisen. Sou, enormen TGFα souwuel proliferative an Net-proliferative Auswierkungen op gastric mucosal Funktiounen, an deene verschiddenste TGFα Effekter soll, op d'mannst a punkto Re-évaluéiert ginn, ob hir Resultater vum Traitement kuerzfristeg ofgeleet ginn mat Kultur Zell Linnen oder aus Flegeversécherung TG Maus Linnen ënnert der Kontroll vun der metallothionein Gentherapie Promoteur Begrëff Ausdrock TGFα-transgene-ausdrécken Déieren benotzen. ago E Jorzéngt VerfÜgung, eent vun den Auteuren, H. Takagi, generéiert TGFα-ausdrécken, an ee vun dëse Linnen (MT100) Schatzkummer hypertrophic gastropathy Menetrier d'Krankheet Mooss, wéi ähnlech déi aner Enquêteuren dës [19, 20]. gastric mucosa Am Géigesaz, ugewisen aner TG Linn (MT42) eng normal-optauchen, obwuel TGFα transgene zu engem ähnleche Mooss a béid TG Linnen ausgedréckt huet [20]. Zënter der MT42 Linn eng onerwaarten Niveau vun der Resistenz ze Ethanol-Bewegung opkomm fir d'gastric mucosa ugewisen, als mir dass et fir lassleeën d'Net-proliferative Auswierkunge vun TGFα wéi mucosal Resistenz zu Ethanol blesséiert nëtzlech ginn hätt. gastric Verletzung vun analyséiert Ännerungen am cytoprotective an Anti-apoptotic reglementaresche Facteuren an de Grëff ze studéieren, ze propagéieren mir d'laangfristeg Folge vun TGFα op Ethanol-entschlof, dorënner gastric ugekuerbelt, nee synthase, COX-2, an apoptosis-verbonne Proteinen esou wéi HSP70, BCL-2, an caspase 3. VerfÜgung Method VerfÜgung TGFα-ausdrécken transgenic Maus an gastric blesséiert Ethanol-entschlof VerfÜgung TGFα-ausdrécken transgenic (TG) Maus Linnen Mënsch TGFα cDNA ënnert der Kontroll vun den Träger Maus metallothionein Gentherapie ech Promoteur sech op enger CD1 oder FVB Maus Hannergrond generéiert, wéi virdru beschriwwen [20]. Ee vun de TG Linnen, MT100 op eng FVB Maus Hannergrond, ugewisen hypertrophic gastropathy Menetrier d'Krankheet Mooss [20] hierkommen, déi aner Linn, MT42 op engem CD1 Maus Hannergrond, eng normal-Rostain gastric mucosa ugewisen. D'phenotype vun der TGFα-TG Maus wossten op d'Maus Klischee ze hänken, well souwuel d'MT100 an MT42 Linnen engem ähnlechen Niveau vun der TGFα transgene am Mo. ausgedréckt [20]. Am Moment studéieren, déi mir de MT42 Linn vun TGFα-ausdrécken TG männlech Mais an CD1 wëll Typ (virstellen) männlech Mais am Alter vun 6 bis 8 Wochen. D'Déiere goufen ënner kontrolléiert Liichtjoer (7:00 AM bis 7:00 PM) mat Iessen a Waasser haten gëtt ad libitum VerfÜgung. VerfÜgung de Mais, Persoun vu 30-35 g, sech fir 24 h virum Experimenter fasted mä sech gratis Zougang zu Waasser erlaabt. All experimentell Prozeduren d'Mais déi sech duerch d'Déieren Care an Benotzt Kritik Comité bei der Gunma University guttgeheescht. (; 60% Ethanol an 0,15 mol /L HCl 100 μl) de Mais sech dann orogastric acidified Ethanol entscheet. Dräi, sechs, an zwielef Stonnen no der acidified Ethanol Administratioun de Mais fir d'Evaluatioun vun gastric Verletzungen an immunohistochemical Analysë geaffert huet, a fir RNS an FAQ Extraktioun fir real Zäit Hinnen alleguer, Northern a Western blot analyséiert. VerfÜgung gestallt Studien
Gastric Seier secretion gemooss gouf wéi virdru beschriwwen [20, 23]. Kuerz, sech virstellen an TG Mais fir 3 h fasted an duerno mat ETHER Nodeel. No der Trauer vun postwendend misse Mauer, war d'pyrolus Jonglenster huet, an huet sech der Trauer sutured. D'gastric Flesseggassystem war 4 h no der pyrolus ligation gesammelt. Fir Bäschten Seier Wasserstoff, war Seier secretion vun iergendee pentagastrin subcutaneously stimuléiert (500 μg /kg Kierpergewiicht). D'gastric Flesseggassystem war mat 0,1 N NaOH zu pH 7.0 mat engem microtitrator titrated. VerfÜgung Flux Gastric mucosal Blutt gouf mat engem Laser Doppler flowmeter (Modell SFA211, Virausbezuelung Co., Tokyo) gemooss ginn vun enger bis ewell op der Uewerfläch vun der gastric Placement mucosa, wéi virdru beschriwwen [24]. De Flux Signal war mat der MacLab Opnahmen Programm iwwerwaacht. Der ugekuerbelt war de basal Niveau ausgedréckt Bekannten. VerfÜgung Morphological Studien déi deck vun der gastric mucosa VerfÜgung aus dem héchsten Deel zu der leschter vun der drüs mat engem gebraucht gemooss gouf. Den Zerfall, goufen d'gastric blesséiert lesions gemooss (Breet an geozentresch) mat engem gebraucht der blesséiert Beräich ze berechnen. VerfÜgung Fir immunostaining, dèi mir antibodies wéi follegt. Polyclonal antibody bis H + /K + - ATPase war vun iergendee Kanéngchen parietal Zell-microsomal ufale an Mais [25] kritt. Kanéngchen polyclonal antibody zu metallothionein war eng Zort Cadeau vum Dr. Nagamine, Gunma University School Gesondheetsminister Sciences [26]. Mir kaaft antibodies wéi follegt zesummen: Kanéngchen polyclonal antibody zu TGFα, Kanéngchen polyclonal antibody zu EGF-R, Geess polyclonal antibody zu COX-2, Kanéngchen polyclonal antibody zu NFκB, a Maus monoclonal antibody zu nNOS an iNOS vu Santa Cruz Biotech. (Santa Cruz, CA); Maus monoclonal antibody nuklear antigen (PCNA) aus Zymed déngt zu proliferative-Zell. (South San Francisco, CA); Schof antibody zu Mënsch pepsinogen II aus BioPur AB (Bubendorf, Schwäiz), déi fir Maus pepsinogen reagéiert och; Kanéngchen polyclonal antibody zu HSP70 aus Stressgen Biotech. (Victoria, BC, Canada); a Maus monoclonal antibody zu BCL-2 aus BD Biosciences (San Diego, CA). VerfÜgung Fir horseradish peroxidase (HRP) -catalyzing immunohistochemical staining, Schwéngs- Mamm sech fir 24 h am neutraliséiert 10% formalin bei 4 ° C fix, an war deemools fir microtome sectioning zu paraffin Ënnerbewosstsinn. D'deparaffinized Otemschwieregkeeten Rubriken sech zu 3% Waasserstoff Hem Léisung rehydrated an incubated zu endogenous peroxidase Aktivitéit inhibit. Dunn huet sech de Rubriken fir 30 min mat engem éischte antibody beschriwwen uewe mat engem passenden dilution bei Raumtemperatur incubated. Eng Première biotinylated antibody war baséiert op den éischte antibody-produzéiert Déierenaarten ausgewielt, a gouf duerno mat HRP-conjugated streptavidin benotzt. D'HRP Reaktioun war mat 3-Aminosaier-9-ethyl-carbazole a Waasserstoff Hem standing no den Instruktioune mat der streptavidin-biotin staining Vectastatin Elite Kit geliwwert (Vectors Laboratoiren, Burlingame, CA). Positiv stainings wossten fuerweg brong. VerfÜgung Fir immunofluorescent staining, Schwéngs- Mamm sech fir 24 h an 0,1 M phosphate Prellbock, pH 7.4 bei 4 ° C zu 4% paraformaldehyde fest. Kleng Stécker vun Schwéngs- Otemschwieregkeeten mécht saccharose Ersatz an huet am Oktober-Massa an Virbereedung fir eng gefruer Rubrik mat engem microtome Ënnerbewosstsinn. Fir d'alleréischt immunoreaction, sech geschnidden Sektiounen mat engem éischte antibody Komedie, an sech dann incubated entweder mat indodicarbocyanide (Cy3) -conjugated Affinitéit-stilvoller Esel anti-Kanéngchen, anti-Maus IgG (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA), oder fluorescein isothiocyanate (FITC) -labeled anti-Kanéngchen IgG (Jackson ImmunoResearch), als sekondär antibody. D'Première antibody IgG war déi éischt antibody baséiert op der Art op déi ausgewielt opgewuess. VerfÜgung An situ ze erkennen apoptotic Zellen war mat der A Situ Apoptosis Detektioun Kit (TAKARA BIO INC. Tokyo, Japan) gesuergt. De Kit mat engem Uschloss deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine Adenosintriphosphat biotin Nick Enn-Etikette (TUNEL) assay System. Mo. Rubriken sech mat proteinase K permeabilized, an der 3'-leider Extremitéiten vun der DNA Fragmenter sech da mat de Kit geliwwert folgenden d'Instruktioune Kierchefënster. D'Käre brong Kierchefënster sech als apoptotic Zellen ze ginn. VerfÜgung RNS Analyse VerfÜgung Mamm huet Trierweiler an de ganzen RNAs benotzt TRIzol (Gibco BRL, Tokyo) no de Protokoll vun den Hiersteller geliwwert ofgebaut. Fir Northern blot, war de ganzen RNS op engem 1.0% agarose gelies electrophoresed a gouf zu engem Nylon Membran (Amersham Pharmacia Biotech, Tokyo) transferéiert. Hybridization war mat engem Studiebäihëllefe vun der mënschlecher TGFα cDNA (917 BP) Fortgeschratten mat [α- 32P] deoxy-CTP gesuergt. Dës Studiebäihëllefe erkennt de Mënsch TGFα mRNA, mä net Maus TGF mRNA. VerfÜgung Mouse TGFα mRNA Niveau gemooss gouf eng real Zäit polymerase Kette Reaktioun (Hinnen alleguer) mat glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) wéi eng intern Kontroll benotzt. Déi richteg Zäit Hinnen alleguer war d'Abi Prism 7700 liichtkraaftarm heescht benotzt a mëll (Obwuel Biosystems, Foster City, CA) duerchgefouert mat der DNA unisse Hoerfaarw SYBR Green erkennen. Primers sech entworf Primer Express Design Software (Obwuel Biosystems) benotzt. D'Finale Resultat fir all Prouf huet déi jeeweileg GAPDH Wäert normalized. Primer Message gi wéi follegt: Maus TGFα: 5'-CCTGAGCACCCGAAGAT-3 'an 5'-CCTTCCCTCATGCCTTACT-3 "; GAPDH: 5'-GTCGTGGATCTGACGTGCC-3 'an 5'-TGCCTGCTTCACCACCTTCT-3 "VerfÜgung Western blot Analyse VerfÜgung Gastric Otemschwieregkeeten Echantillon waren Trierweiler an total FAQ aus der gastric mucosa war zu Ripa gefiermt mat engem Cocktail vun protease inhibitors homogenized. (phenylmethylsulphonyl fluoride, pepstatin, leupeptin, an aprotinin) (Roche kinnt, Mannheim, Däitschland). D'supernatant war op en SDS-PAGE gelies getrennt, a gouf duerno zu engem polyvinylidene difluoride Membran blotted. D'Membran war mat der folgender antibodies Komedie: antibodies zu iNOS, COX-1, COX-2, HSP70, an BCL-2, wou déi selwecht déi fir morphological Studien gebraucht goufen; Maus monoclonal antibody zu Bax (Santa Cruz Biotech.); Kanéngchen polyclonal antibody zu caspase 3 (Santa Cruz Biotech.); a Maus monoclonal antibody zu actin Filamenter (Santa Cruz Biotech.). Antibody-geklot Bands goufen erwëscht en ECL erkennen System schreiwen (Amersham, Buckinghamshire, UK). VerfÜgung Kilometréierung vun gastrin VerfÜgung Serum gastrin gemooss gouf mat engem gastrin radioimmunoassay Kit (gastrin Neiwahlen Kit, Dainabot, Tokyo, Japan). D'antibody ass fir gastrin mat enger amide moiety op seng carboxyl Kappgare spezifesch. VerfÜgung Kilometréierung vun Prostaglandin E2 VerfÜgung der gastric mucosa bei 4 ° C an lysis gefiermt homogenized war. Homogenates sech fir 20 min bei 12000 Ziichter centrifuged, an der supernatants sech ze prostaglandin E ënnerworf 2 assay engem Prostaglandin E 2 Monoclonal Aktivitéit Immunoassay Kit (Cayman chemesche, Ann Arbor, MI) benotzt, laut der Uweisunge vum Fabrikant . VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung statistique Analyse gouf vun widderholl Moossnam Analyse vun Varianz (ANOVA) fir déi total Längt vun der gastric lesions vun unpaired T-Test fir gastric mucosal ugekuerbelt erofgoen Verhältnis gesuergt. All Wäerter sinn wéi déi heeschen ± SE ausgedréckt. P &Si besteet; 0,05 war den statistesch relevant akzeptéiert. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Characterization vun der TGFα-ausdrécken TG Maus gastric mucosa VerfÜgung D'Efforten virstellen CD1 an TGFα-transgene ausdrécken MT42 Linn Mais gewuess ähnlech an awer keng deitlech Differenz an hir Fonctiounen, Behuelen, oder lifespans. Déi gréisste deck fir de gastric Mauer observéiert an fundic Glands waren 3,50 ± 0,18 mm an 2.33 ± 0,20 mm, respektiv, am virstellen Mais, an 3,85 ± 0,24 mm an 2,63 ± 0,16 mm, respektiv, am TG Mais; do waren keng Differenze vun der Form vun de gastric mucosae an Glands tëscht der virstellen an TG Mais. Nieft der normal Optrëtt vun der gastric mucosa, dës Linn TG Maus och eng normal-Rostain Liewer haten, Bauchspaicheldrüs, an aner Organer. VerfÜgung Mir dann Seier secretion Muecht tëscht der virstellen an TG Mais Verglach. An der virstellen Mais, fräi Bäschten Seier Wasserstoff vill aus basal Niveau vun 25 ± 1,4 mEq /h bis 50 ± 5.8 mEq /h no der pentagastrin Stimulatioun. Par contre, an der TG Mais, fräi Bäschten Seier Wasserstoff zu engem manner wäit bis 30 ± 5,7 mEq /h aus der basal Wasserstoff 23 ± 0,7 mEq /h (n = 5 zu virstellen an TG Mais). D'Seier blunted Wasserstoff kann de reduzéierten parietal Zell Mass an der TG mucosa (Dorënner 1e) spigelen. Figur 1 Characterization vun der TGFα-ausdrécken TG mucosa. Skala vun all Figur bedeit 100 μm. (En) Distribution vun TGFα-ausdrécken Zellen. Brown-faarweg TGFα-positiv Zellen sech laanscht de luminal pit Regioun am virstellen mucosa siichtbar, de verlängerten foveolar pit Regioun, an der ënneschter een-Drëttel vun de glandular Regioun am TG mucosa. (B) Overlap vu rout-faarweg TGFα-positiv Zellen a gréng-faarweg H + /K + -ATPase-positiv parietal Zellen. Ënneschten TGFα-positiv Zellen am Koup si verschidde vun de grénge-faarweg parietal Zellen am TG mucosa. (C) Northern blot vum Mënsch TGFα mRNA an Hinnen alleguer-Kick Maus TGFα mRNA. Mënsch TGFα mRNA gëtt gehalen an der TG mucosa ausgedréckt (lénks Rot), mee Hinnen alleguer-Kick Maus TGFα mRNA ass ähnlech zu souwuel virstellen an TG mucosae (riets Rot) ausgedréckt. (D) Western blot vum TGFα Tëscherapport Formen. TGFα Virleefer (20 kDa) a seng Zuelen Formen si méi intensiv an der TG mucosa visualized wéi an der mucosa virstellen. (E) Lokalisatioun vun EGF receptor an der gastric mucosa. EGF receptor (EGF-R) war mat Cy3 (rout) Kierchefënster an H + /K + -ATPase war mat FITC (gréng) geschriwwen. EGF-R war mëttelméisseg an der ieweschter pit Regioun a staark am ënneschten glandular Regioun ähnlech zu souwuel d'virstellen an TG mucosae immunostained. (F) Distribution vun metallothionein an der gastric mucosa. Metallothionein ass staark zu der ënneschter glandular Regioun, an mëttelméisseg laanscht de foveolar Regioun immunostained. (G) Elongation vun der gastric pit vun der TG mucosa. PCNA-positiv Zellen sinn an der ieweschter-drëtt Regioun am gastric Glands virstellen verdeelt hierkommen se verdeelt gi méi numerously a breeder an der Mëtt glandular Regioun. (H) Pas staining weist verlängerten pit an der TG mucosa. VerfÜgung Expression vun TGFα transgene VerfÜgung TGFα-ausdrécken Zell-Typen sech op Zell-Typ-spezifesch immunostaining an hir mucosal Standuert identifizéiert baséiert. TGFα war Berichter laanscht d'Handysnummer Zellen am gastric pit a Mënschen [14] an deër [15], a laanscht d'Panz Hals Zell Regioun am FVB Deformatioun Mais [16] immunostained. Am Moment studéieren, brong-faarweg TGFα-positiv Zellen sech laanscht de foveolar Regioun souwuel d'virstellen an TG mucosae, an laanscht den ënneschten glandular Regioun vun der TG mucosa (Dorënner 1a) verdeelt. D'TGFα-positiv Zellen laanscht de foveolar Regioun wossten gastric pit Zellen ze ginn, op Basis vun hire Standuert (Dorënner 1b, ieweschte Rot), an déi laanscht den ënneschten glandular Regioun vun der TG mucosa net mat der grénger-faarweg H iwwerlageren + /K + - ATPase-positiv parietal Zellen (Dorënner 1b, manner Rot), mä mat der pepsinogen-positiv Chef Zellen hutt iwwerlageren (Daten dës net). D'antibody mir fir immunostaining fir TGFα benotzt hätt net tëscht Mënsch a Maus TGFα z'ënnerscheeden, mä seng mRNA Studiebäihëllefe kéint also fir d'Northern blot Analyse maachen. De Mënsch TGFα-transgene war an der TG mucosa ausgedréckt iwwerdeems keen Ausdrock am virstellen mucosa (Dorënner 1c, lénks Rot) bemierken war. Am Géigesaz, war endogenous Maus TGFα mRNA ähnlech Souwuel d'virstellen an TG mucosae vun real Zäit Hinnen alleguer (Dorënner 1c, riets Rot) ausgedréckt. TGFα ass eng 50 Aminosaier peptide, ofgeleet vu sengen 160 Aminosaier Membran-Rennsport Virleefer eenalecn vun entholl necrosis Faktor-α-Ëmrechnung Aktivitéit (TACE) [27, 28]. Mat de Boni Ausdrock vun der mënschlecher TGFα-transgene an der TG mucosa, eng ronn 20 kDa TGFα Virleefer a seng Zuelen Formen huet déi immunoblotting (Dorënner 1d) fräi. VerfÜgung Well souwuel de Virleefer an Filteren Formen EGF gläich aktiv waren, fir Spannend -R [28], mir iwwerpréift weider EGF-R Lokalisatioun an der mucosa. EGF-R war an der ënneschter Chef Zell Stärekoup Regioun an mëttelméisseg an der Panz Hals Zell Regioun an an der foveolar pit Regioun an souwuel de virstellen an TG mucosae (Dorënner 1e) kräfteg en der, wéi virdru fir d'Grenzwäerter gastric mucosa gemellt gouf [15 ]. Zënter der TGFα transgene ënnert der Maus metallothionein Gentherapie kontrolléiert gouf [20] an metallothionein an der gastric mucosa [29], ass mir mellen produzéiert iwwerpréift der metallothionein-ausdrécken Zell-Zorte vun der mucosa. Immunohistochemically, mir bemierken metallothionein staining gréisstendeels laanscht den ënneschten glandular Regioun an scatteringly laanscht de pit Regioun vun der Kontroll CD1-Klischee gastric mucosa (Dorënner 1f). Also, ass d'Distributioun vun TGFα-ausdrécken Zell-Typen gläicht dofir deem vun metallothionein-ausdrécken Zellen am TG gastric mucosa (Sauerdall 1a an 1f). VerfÜgung An der Maus mucosa virstellen, déi H + /K + - ATPase-positiv parietal Zellen sech verbreet iwwer d'glandular Regioun verbreet ausser fir d'Top-pit futti hierkommen d'H + /K + - ATPase-positiv glandular Regioun war an Héicht vun der TG reduzéiert mucosa (Dorënner 1e). Tatsächlech, de Moien op der Basis vun de pit Regioun, déi vun PCNA staining bestätegt gouf, war fir d'Mëtt vun der TG mucosa (Dorënner 1g) verléiert. Ausserdem, huet héigher PCNA-positiv Zellen an der Mëtt vun der mucosa verdeelt. Konsequent, war an der TG mucosa am Géigesaz zu de kuerzen pit an der virstellen mucosa (Dorënner 1h) verlängerten am Departement Pas-staining-positiv foveolar pit. Sou, obwuel d'Héicht vun der gastric mucosa tëscht der virstellen an TG mucosae ähnlech war, der proliferative Zon war, verléiert an der foveolar pit Regioun war méi verlängerten mat engem reduzéierten glandular Regioun am TG mocosa. Well de Wuesstem vun pit Zelle betraff vun gastrin verstäerkte ass [25, 30], am Verglach mir den serum gastrin Niveau tëscht der virstellen an TG Mais awer keng Erhéijung vun den Niveau vun serum gastrin an der TG Maus fonnt (virstellen, 213 ± 41 PG /ml;. TG, 263 ± 47 PG /ml, n = 5, p = 0.438) VerfÜgung Ethanol-entschlof ëmmer gastric Verletzungen an d'virstellen an TG Maus mucosae VerfÜgung Orogastric Administratioun vun acidified Ethanol (100 μl) hemorrhagic Verletzung vun den TG mucosa (Dorënner 2a, lénks). Histologically opgeklappt de Fouss de pit an Moien Regiounen ugefaangen an erreecht fir d'Mëtt-glandular Regioun (Dorënner 2b, lénks). Am Géigesaz, war dës Zort vu Verletzung vun den TG Maus mucosa net bemierkenswäerte (Dorënner 2a, riets). De Risiko war histologically limitéiert op der luminal pit Regioun (Dorënner 2b, riets). An der virstellen mucosa, fräi blesséiert Beräich ganz séier mat engem Héichpunkt bei 6 h no der Ethanol Administratioun hierkommen an der TG mucosa der Géigend lues a minimally ouni markéiert hierstellen (Dorënner 2C) fräi. Konsequent, vun der TUNEL staining dës apoptotic Zellen ënnerlech un der ënneschter glandular Regioun 3 h no der Ethanol Administratioun vun der virstellen mucosa verdeelt, wobäi d'apoptotic Zellen zu de pit Regioun agespaart waren awer zu der glandular Regioun am TG mucosa net verlängeren ( Figur 2D). Figur 2 gastric Verletzungen an d'gastric mucosae Ethanol-entschlof. (En) Macroscopic Vue vun der gastric mucosa. Skala: 5 mm. Béid mucosae sinn 6 h der Ethanol Administratioun. Bedenkt datt d'Plakater virstellen mucosa lesions extensiv hemorrhagic, am Géigesaz, den TG mucosa der Ethanol Administratioun onbeschiedegt ausgesäit. (B) Hematoxylin an eosin staining vun Ethanol-blesséiert virstellen mucosa (lénks) an TG mucosa (riets). Opgepasst déiwe oppent Équipe an der virstellen mucosa. Skala: 100 μm. (C) Time Laf vun gastric blesséiert Ethanol-entschlof. Blesséiert Beräich ass géint Zäit opgezeechent bis 12 h no der Ethanol Administratioun. All Punkt stellt eng Moyenne vu fënnef Mais. p VerfÜgung &Si besteet; 0,05 (d) TUNEL staining vun virstellen mucosa (lénks) an TG mucosa (riets). Béid Rubriken sinn hannerteneen zu deenen an 2B VerfÜgung, bzw.. Apoptotic Zelle siichtbar mat donkel-brong Kären. Vill apoptotic Zellen sinn an der virstellen mucosa bemierken. All Fotoen goufen 6 h no der Ethanol Administratioun. Skala:. 100 μm VerfÜgung Gastric mucosal ugekuerbelt an der Ethanol-behandelt mucosa VerfÜgung Obwuel eng Zuel vun cytoprotective reglementaresche Facteuren hu gemellt ginn, dorënner nee, CGRP, COX2, an HSP70 [12, 13, 31, 32] , mucosal ugekuerbelt gouf als primären Faktor fir de Schutz an Zréckbezuelen vun Ethanol-entschlof gastric blesséiert [1, 33] proposéiert. Mir gemooss gastric ugekuerbelt vun engem Studiebäihëllefe vun der Laser Doppler flowmeter op der gastric mucosa via eng ausgesat postwendend misse Mauer an der Nodeel Maus Rampen Placement. Gastric ugekuerbelt Verréngerung vun 43,5 ± 6,37% no den Ethanol Verwaltung op der gastric mucosa vun der virstellen Maus (Dorënner 3) markéiert. Am Géigesaz, et nëmme vun 17,2 ± 9,21% no den Ethanol Verwaltung op der TG mucosa (Dorënner 3) ofgeholl. Soumat war d'gastric ugekuerbelt gutt an der TG mucosa och no Ethanol Behandlung haten. Zanter ischemia mucosal eent vun de wichtegsten ulcerogenic Facteuren ass [33], et de maintenance vun gastric ugekuerbelt schéngen e wesentleche Faktor fir mucosal Schutz ze ginn. Figur 3 Assessment vun gastric mucosal ugekuerbelt an der gastric mucosae. Gastric mucosal ugekuerbelt huet, andeems der ugekuerbelt Verhältnis virun an no den Ethanol Behandlung évaluéieren. D'Verhältnis war wéi engem Prozent géint d'ugekuerbelt virun der Behandlung kritt, déi vill méi grouss am virstellen mucosa war wéi am TG mucosa. * P VerfÜgung &Si besteet; . 0,03 VerfÜgung Expression vun cytoprotective Proteinen: KENG synthase, COX-2, an HSP70 VerfÜgung Fir de Mechanismus vun héich ugekuerbelt Ënnerhalt vun den TG mucosa beschen, iwwerpréift mir den Ausdrock vun KENG synthases, déi KENG aus arginine mécht, an relaxes wiere glat Muskelen via cGMP-ofhängeg FAQ kinase [34]. Et ginn dräi verschidden Zorte vu KENG synthase (Nos): Mä Nos (nNOS), inducible Nos (iNOS), an endothelial Nos (eNOS). nNOS an eNOS sinn constitutively ausgedréckt, hierkommen iNOS op gastric blesséiert entschlof ass [35]. nNOS war ähnlech zu der Pas-staining iwwer d'foveolar pit Regioun (Dorënner 1g) verdeelt; et gouf iwwer de verlängerten pit vun der TG mucosa observéiert a war bis de luminal pit vun der virstellen mucosa (Dorënner 4A) begrenzt. eNOS war ähnlech wéi de ganze gastric mucosa schwaach Fragmenter souwuel an der virstellen an TG mucosae (Donnéeën net gewisen). D'iNOS staining war negligible am virstellen mucosa, obwuel et héich am ënneschten glandular Regioun entschlof war no der mucosa zu Ethanol (Dorënner 4B) ausgesat war. An der TG mucosa, war iNOS constitutively am ënneschten glandular Regioun ausgedréckt ähnlech virun an no der Verletzung (Dorënner 4B), déi fir den Ënnerhalt vun héich ugekuerbelt fir weider droen ebenfalls. Figur 4 Immunostaining vun KENG synthases an der gastric mucosa. Skala: 100 μm. (En) nNOS immunostaining. nNOS war siichtbar laanscht de pit Regioun, doraus zu sengem breeden Verdeelung laanscht de verlängerten pit an der TG mucosa. (B) iNOS immunostaining. iNOS war an der ënneschter glandular Regioun no Ethanol Verletzungen an d'virstellen mucosa entschlof, wobäi et constitutively an der selwechter Regioun vun der TG mucosa onofhängeg vun Ethanol blesséiert ausgedréckt huet. VerfÜgung Prostaglandins sech als eng grouss cytoprotective Faktor iwwer dräi Joerzéngte virun proposéiert [ ,,,0],8] an hir Rollen extensiv studéiert goufen [36, 37]. D'Roll vun der prostaglandin-administrativ Enzymen, COX-1 an COX-2, huet am mucosal Schutz géint gastric irritants kontrovers goufen [7, 11, 32]. Mir iwwerpréift den Ausdrock vun COX an der virstellen an TG mucosae während Ethanol blesséiert. Den Ausdrock vun COX-1 net tëscht d'virstellen an TG mucosae, nach virun oder no der Ethanol blesséiert (Dorënner 5b) huet ënnerscheeden. COX-2 war an der virstellen mucosa net festgestallt, mä säin Ausdrock gouf 6 h der Ethanol blesséiert evident, a seng staining war bis den ënneschten glandular Regioun en der (Dorënner 5a an 5b). An der TG mucosa, war d'COX-2 immunostaining intensiv op der selwechter Regioun nach virun der blesséiert an nach positiv no der Verletzung (Dorënner 5a). Zanter COXs zu mesenchymal Zellen wéi Här iwert mech selwer an mononuclear Zellen am gastric mucosa [38], an der streptoavidin /biotin /HPR Method heiansdo falsch-positiv staining Kaddoen gewise goufen ausgedréckt gin, standing mir immunofluorescent staining engem gefruer Rubrik mat deem confirméiert COX Ausdrock ähnlech am ënneschten glandular Regioun vun der TG mucosa (Donnéeën net gewisen). Vun immunoblotting, COX-2 fräi no der Verletzung vun der virstellen mucosa hierkommen et duerchaus zu engem ähnleche Mooss nik war virun an no der Verletzung (Dorënner 5b). Konsequent, prostaglandin E 2 Niveauen sech vill méi héich an de TG mucosa wéi an der virstellen mucosa (Dorënner 5c).

• Nepgen Haaptrei vun Helicobacter sinn ënnerstëtzt seng Roll an gastric pathology
• Up-Regulatioun vun CLDN1 Up-Regulatioun vun CLDN1 zu gastric Kriibs ass mat reduzéierter survival