Dušikov oksid-endogeni inhibitor izločanja želodčne kisline pri izoliranem človeške želodčne glands

dušikovega oksida-endogeni inhibitor izločanja želodčne kisline v izoliranih želodčnih žlez človeških
ima Abstract
Ozadje
endotelijski sintaze dušikovega oksida (eNOS) predhodno bila odkrita v žleznega delu želodčne sluznice ljudi. Poleg tega je bil dušikov oksid (NO) je prikazano, da vplivajo na izločanje želodčne pri različnih živalskih modelih. Sedanja Študija je bila izvedena, da razišče vpliv eksogeno in endogeno izhaja NO na histamine- in cAMP stimulira izločanje želodčne kisline v izoliranih človeških oxyntic žlez.
Metode
Oxyntic žleze so bile izolirane iz človeških želodčnih biopsije pa so nato pre zdravljene z NO donatorji in inhibitorjev sintaze dušikovega oksida in nato izpostavili histamina ali dibutyryl-cAMP (db-cAMP). Pri sekrecijski odziv žlez je bil določen kot kopičenje [ 14C] aminopyrine.
Rezultati
histamine- ali db-cAMP-povzroča izločanje kisline je zmanjšati z L-arginin, ki je znan vir endogenega NO in tudi NO-donatorji natrijevega nitroprusida (SNP) in s-nitrozo-N-acetil-penicilaminu (SNAP). Predobdelava z eno izmed inhibitorjev NOS N G-nitro-L-arginin metilester (L-NAME) ali N G-nitro-L-arginin (L-NNA) izboljšano sekretornih odziv.
Zaključek
Naši rezultati kažejo, da NO zavira izločanje želodčne kisline v izoliranih želodčnih žlez človeka, ter da je endogeno nastajanje NO v žleznega epitela v bližini parietalnih celic.
Ozadje
dušikovega oksida (NO), ki je proizvedena iz L-arginina v reakciji, ki jo sintaza encimom dušikovega oksida (NOS) katalizira [1, 2]. NO je pomemben biološki signalizacijo molekule, ki vpliva na pretok z uravnavanjem gladke mišični tonus in moduliranje sistemski krvni tlak. Poleg tega NO vpleten v nevrotransmisije; je ključni dejavnik pri vnetni odziv in imunitete [3-5]; in je bilo dokazano, da izvajajo pozitivne učinke na sluznico prestregli v prebavnem sistemu. V številnih študijah (za pregled glej [6]), zdelo kemično povzročene poškodbe sluznice, ki se zmanjša z istočasnim dodajanjem NO in oslabljena z odstranitvijo NO od želodčne sluznice. Razlaga teh ugotovitev je lahko, da je NO poveča dotok sluznični krvni [7], in je bilo predlagano, da NO poveča sproščanje sluzi [8]. Verjetno je, da je NO sodeluje tudi pri regulaciji drugih izločevalnih procesih v prebavnem sistemu. Takeuchi in [9] sodelavci so poročali, da NO zavira izločanje dvanajstnika bikarbonata, ker so drugi raziskovalci predlagala, da se bikarbona izločanje spodbudila NO [10, 11]. Poleg tega so številne študije so pokazali, da NE vpliva na izločanje želodčne kisline [12-16].
Poskusi na živalih so predložili nasprotujoče si informacije o interakciji med NO in izločanja želodčne kisline. Na primer, so študije in vitro so pokazale, da NO stimulira izločanje želodčne kisline pri miših [17, 18] in Bullfrog [19]. Poleg tega so bili podobni rezultati pri psih [12]. Vendar pa so druge raziskave pokazale, da NO zavira izločanje želodčne kisline pri podganah [13, 14], v želodčnih žlez izoliranih iz zajcev [15], in v sluznici od krastače [16]. Študije ljudi so zagotovili podatke, ki kažejo, da NO lahko tako zavirajo in bogatenje želodčni pH [20, 21], vendar še ni znano, kako je ta spojina sodeluje pri izločanja želodčne kisline pri ljudeh.
V prejšnji raziskavi smo ugotovili, morfološka podpora, ki igra pomembno vlogo pri regulaciji delovanja parietalnih celic [22] endogeni NO. Prav tako so imunohistokemičnim podatki iz preiskave kažejo na prisotnost endogenega NOS v epitelnih celic normalne človeške oxyntic sluznico, natančneje v obe površini mukozne celice in endokrine celice. Poleg tega smo ugotovili, da so bili tesni stiki med eNOS-pozitivnih celic in parietalnih celic, bodisi zato, ker so eNOS-pozitivne celice stopiti v stik parietalnih celic preko citoplazme procesi ali pa so bili invaginirani z parietalnih celic. Na podlagi teh ugotovitev, skupaj s kemijskimi lastnostmi NO, smo ugotovili, da bi lahko NO izhaja iz endokrinih podobnih celic je parakrin regulator izločanja želodčne kisline. V tej študiji je bil naš cilj, da se preveri vpliv eksogenega NO na histamine- in cAMP stimulira izločanje želodčne kisline pri ljudeh, pa tudi ugotoviti, ali je endogeno izhaja NO funkcionalni učinek na parietalnih celic.
Metode
Predmeti in etično odobritev
štiriindvajset zdravih moških v starosti od 22 do 31 let, so bili zaposleni kot plačani prostovoljci. Merila za izbor določal, da morajo subjekti, da so brez bolezni in se ne sme jemati nobenih zdravil ali Cointreau alkohol za vsaj en teden pred pregledom. Možje postil vsaj šest ur pred pregledom.
Farinksa anestezijo bila povzročena z lidokain spray (Xylocain ®, AstraZeneca, Södertälje, Švedska), po katerem je rutinsko gastroskopija izvede na Olympus GIF-100 endoskop. Pinch biopsija klešče (Olympus FB 24K-1) so bile uporabljene, da se tkivne vzorce iz večje ukrivljenosti, takoj distalnem na fundusa. Pri vseh predmetih, želodčne sluznice zdi, da je normalno, tako z mikroskopom in histološko. Vse teme negativnemu rezultatu testa Helicobacter pylori
okužbe v testu ureaze izdihanega zraka (Diabact ® UBT 50 mg 13C-sečnina, Diabact AB, Uppsala, Švedska).
Eksperimentalni postopki so bili odobreni z regionalni Odbor za etiko za uporabo v humani raziskave na Univerzitetni kliniki, Linköping, Švedska (dokument št. 02-039), in vse predmete dal obveščeni soglasje.
Sekretorna študija
Izolacija in inkubacijo želodčnih žlez
sedanji poskusi so bili temelji na tehniki, ki je bil prvič opisan leta 1976 za uporabo pri kuncih in vitro [23] in je sedaj dobro uveljavljena pri indirektnem določanje izločanja želodčne kisline z različnimi dražljaji inducirane. Način izolacijo želodčne žleze je bil prvotno razvit za živalskega tkiva, vendar je bil kasneje rafinirano, tako da bi bilo treba uporabiti tudi za majhne količine človeškega tkiva [24].
Človekovih oxyntic biopsije sluznice, ki se uporabljajo v naši raziskavi so bile oprane in shranjena ne več kot 15 minut v ledeno mrzlo kisikom fosfatnim pufrom (PBS). Vzorce tkiva smo razrezali na manjše kose s škarjami in prenesemo s kisikom (100% O 2) kolagenaze encimsko raztopino (130,0 mM NaCl, 12,0 mM NaHCO 3, 3,0 mM Na 2HPO 4, 3,0 mM K 2HPO 4, 2,0 mM MgSO 4, 1,0 mM CaCl 2, 0,1 mM N (alfa) -tosyl-L-lizina klorometilketon [ ,,,0],TLCK], 10 uM indometacin, 10 mM glukoze, 2 mg /ml humani serum albumin [HSA, Sigma] in 1 mg /ml kolagenaze tipa IA [Sigma]). Zmes damo v 37 ° C vodni kopeli smo počasi mešali 120 minut, nakar je večina obdelanih primerka razpadla, pri čemer v glavnem izolirane želodčnih žlez. Zmes nato filtriramo skozi 200 um očesa. Izolirane žleze smo sprali in ponovno suspendiramo-v predhodno segretega (37 ° C) respiratorne mediju (132,4 mM NaCI, 1,0 mM NaH 2PO 4, 1,2 mM MgSO 4, 5,4 mM KCI, 5,0 mM Na 2HPO 4, 1,0 mM CaCl 2, 10 uM indometacin, 10 mM glukoze in 2 mg /ml HSA). Žleze smo nato prenesli v fiole, ki vsebujejo sveže dihalno medij, ki smo jim dodani eno od naslednjega: inhibitor NOS N G-nitro-L-arginin metilester (L-IME; 1 mmol /l) ali enakovredne zneske njegovo biološko neaktiven enantiomer N G-nitro-D-arginin metil estra (D-NAME); inhibitor NOS N G-nitro-L-arginin (L-NNA; 0,1 mmol /l); bodisi iz dveh NO donatorji natrijev nitroprusid (SNP; 1 mmol /l) in S-nitrozo-N-acetil-penicilamin (SNAP; 0,1 mmol /l); substrat za proizvodnjo endogenega NO, L-arginina (0,1 mmol /l) [15]. Vse suspenzije žleze, vključno s tistimi, ki niso bili stimulirani, inkubiramo v stresalni vodni kopeli pri 37 ° C za 30 minut, nakar smo dodali histamina do končne koncentracije 50 mol /L ali dibutyryl-cAMP (db-cAMP), da končno koncentracijo 1 mmol /L. Da bi preprečili degradacijo cikličnih nukleotidov smo dodali 0,1 mmol /L 3-izobutil-1-methylxantine (IBMX) za vse stimulacije.
Določitev razmerja akumulacijskega aminopyrine [14C]
uveljavljeno metodo za posredno merjenje izločanje kisline, ki jih izoliranih želodčnih žlez je ugotoviti, kopičenje -14C označene aminopyrine (AP) v žlezah zase in supernatant po centrifugiranjem in nato izračunati razmerje med tema dvema vrednostma (imenovano razmerje AP) [23] . Na kratko smo kislina izločanje stimuliramo pri 37 ° C 40 minut in po tem 0,5 μCi [ 14C] označeni aminopyrine dodamo vial, ki so jih nato nadalje inkubiranih pri 37 ° C za 90 minut. Nato smo suspenzijo žlezo prenese na predhodno posušene in stehtane cevi, ki smo centrifugirali pri 4.000 obratih na minuto v dveh minutah. Supernatant smo odstranili in prenese v scintilacijske viale. Pelete (žleze) sušimo pri 100 ° C in je bila določena suhe teže, in žleze smo nato ponovno suspendirali v 0,5 mol /L NaOH pri 60 ° C in prenesemo v scintilacijske viale. Radioaktivnost žlez in supernatant je bila določena v tekočem scintilacijskem števcu (1214 Rackbeta, LKB) in razmerje AP je bila izračunana po naslednji formuli [24]:
kjer je IGW intraglandular količina vode (= 2 × suhe teže žlez mg). kopičenja
Ozadje AP je vključen v vrednosti, ki predstavljajo odziv sekrecijski. Razmerja AP za ozadje in histamin, in db-cAMP-stimuliranih pogoji razlikovale med posamezniki. Zato je treba za vsak predmet, smo določili razmerje AP za stimuliranih žlez in menila, da je vrednost 100% in ga uporabljal kot posamezne referenčne vrednosti. Vse vrednosti temeljijo na posameznih analiz.
Statistika
Podatki so bili analizirani s preskusi znak enem vzorcu primerjali mediano vrednosti prek MINITAB ™ statistični Software. P vrednosti manj kot 0,05 bile bistvenega pomena.
Imunohistokemija
Izolirani želodčnih žlez od petih testnih osebah so bili dani na zaračunali Super Frost * /Plus steklo diapozitive (Menzel-Glaser, Nemčija) in nato speremo s PBS in permeabiliziranih z 100 % etanola pri -70 ° C 5 minut. Zatem so drsi inkubiramo pri sobni temperaturi preko noči s kunčjim anti-NOS3 protitelesa (1: 1000; Santa Cruz Biochemicals) in nato temeljito speremo v PBS in inkubiramo 1 uro z biotiniranimi kozje anti-kunčje sekundarnega protitelesa. Diapozitivi, kjer je bila primarna protitelesa izpuščena služil kot negativne kontrole. Drsniki smo nato zopet sprali in biotinilirana protiteles je bila odkrita z izpostavljenostjo do 20 ug /ml Texas Red ® avidina (Vector Laboratories) za 1 h. Po tem zdravljenju, so diapozitivi oprati in coverslipped uporabo Vectashield ® montažo medij. Nikon Eclipse ® E800 fluorescenčni mikroskop z nastavkom za EPI-fluorescenčno VFM bila uporabljena preučiti in oceniti diapozitive. pasovno prepustni filter z valovnimi dolžinami od 520-560 nm in dolgo filtra s bilo zaposlenih cut-na valovni dolžini 590 nm (za oddane svetlobe) vizualizirati Texas Red a ® molekul.
Hematoxylin in eozin obarvanje
za morfološki oceni so bili žleze pritrjena na stekelca in obarvajo z Harris hematoksilinom pet minut in 0,5% eozin Y za dve minuti. Vsak korak je sledilo izpiranje v vodi iz pipe.
Rezultati
smo preučevali učinke NO na izločanje kisline različnih poživil v želodčnih žlez, izoliranih iz želodca biopsije iz človeške inducirane. Morfološka pregled hematoksilin-eozin-obarvanih diapozitivov, je pokazala, da se je postopek izolacije uspešno dala cele-žleza priprave in da parietalnih celicah so bili prisotni v želodčnih žlez. Imunohistokemijsko analiza je pokazala, da so izolirani žleze vsebuje Enos-imunološko celic (sl. 1), ki se ujema z rezultati, pridobljenimi z uporabo drugih vrst pripravkov sluznice [22]. Kontrolni poskusi so bili primarno protitelo je bil izključen ni pokazala radioinkorporacijo. Slika 1 imunofluorescenca izoliranega želodca žleze. Immunolocalization od eNOS (puščice) v želodcu žleze izolirana iz človeškega oxyntic sluznice je bilo doseženo z uporabo zajca anti-eNOS poliklonska protiteles. Rezultate smo vizualizirali z Texas Red®-konjugirano kozje anti-kunčje IgG. Bar = 30 mikrometrov
Ozadje AP-akumulacije
akumulacija Ozadje AP opazili v izoliranih žlez, s povprečnim razmerjem AP 8,6. (Razpon od 2.5-22.1; n = 19). Po dajanju 50 umol /L histamina ali 1 mmol /L db-cAMP, so mediana razmerja AP 24,7 (5.8-64.5; n = 16) in 38,2 (razpon 7,6-47,8; n = 11) oziroma. Odziv tako histamin in db-cAMP presegla ozadje s faktorjem približno 2-4 v vseh pripravkih (sl. 2 in 3). Slika 2 Kopičenje 14C-označenega aminopyrine in-histamina spodbudila želodčnih žlez. Vse vrednosti so izražene kot odstotek izločanja želodčne kisline s histaminom induciranih (šteje 100%), ki je bila izračunana posebej za zdravljenje želodčnih žlez, izoliranih iz vsake od zdravih prostovoljcih. Vsak simbol predstavlja rezultate za posameznika. a) Kopičenje 14C-aminopyrine v žlezah predhodno zdravljeni z NO natrijevega donator nitroprusidu (SNP, 1 mmol /l) ali L-arginina (0,1 mmol /l), substrat za endogeno NO proizvodnje. Razvidno je, da SNP znatno zmanjša AP kopičenju (mediana = 48%; p 0.05), kar kaže, da NO zavira izločanje kisline iz izoliranih žlez. se kaže tudi v ozadju kopičenje 14C-aminopyrine (bg). b) Kopičenje 14C-aminopyrine v želodčnih žlez predhodno zdravljeni z NOS inhibitorji L-organizacije medicinskih sester (0,1 mmol /L) in L-NAME (1 mmol /l), v tem zaporedju. L-NAME povzročil povečano kopičenje (mediana = 147%; p < 0,05), kar kaže, da je kislina izločanje dvignjene prepreči proizvodnje endogenega NO, kar kaže na zaviralni vlogo za endogeno NO v človeške želodčnih žlez. D-NAME, ki je biološko neaktiven stereo izomer L-NAME, ni imela vpliva na izločanje kisline, in je bila zato uporabljena kot kontrolni snovi.
Slika 3. Akumulacija v 14-C označenega aminopyrine v db- cAMP stimulira želodčne žleze. Vse vrednosti so izražene kot odstotek vrednost, ki predstavlja izločanje želodčne kisline, ki ga db-cAMP inducirana (šteje 100%), ki smo izračunali ločeno za vsakega od preučevanih predmetov. Vsak simbol predstavlja podatke za posameznika. a) Predhodna obdelava s SNP (mediana = 63%; p < 0,05) ali SNAP (mediana = 81%; p < 0,05), da sprostite eksogene NO pred dodajanjem DB-cAMP spodbuja izločanje kisline zmanjša nabiranje 14C-aminopyrine v želodčne žleze, v primerjavi z ravnmi iz izločanja videli pri nezdravljenih žleze. To kaže, da NO lahko zavirajo izločanje kisline v želodcu žlez izoliranih iz ljudi. b) Zdravljenje z L-NAME, da zavira NOS v želodčnih žlez povečano kopičenje 14C-aminopyrine po stimulaciji z db-cAMP (mediana = 152%; p < 0,05). Ti rezultati kažejo, da NO zavira izločanje db-cAMP inducirano kisline. NO substrat L-arginin zmanjša nabiranje 14C-aminopyrine pri db-cAMP stimuliranih žlez (mediana = 77%; p &0.05). Prikazan je tudi kopičenje ozadja (bg).
učinkujejo donatorji in NOS inhibitorji on-histamina stimulirano izločanje želodčne kisline
predobdelava izoliranih žlez z eksogenih NO donor SNP (1 mmol /L) znižal na histamin odziv na mediano 48% (n = 7) odziva vidimo v ne-predhodno zdravljeni žlez (100%). V pripravkih štirih od petih žlez, substrat za endogenega NO tvorba, L-arginina (0,1 mmol /l), zmanjšanje razmerja AP. Ta učinek pa ni bila statistično signifikantna (sl. 2a). Ko izolirane žleze so bili predhodno zdravljeni z NOS zaviralcem L-NAME (1 mmol /L), nato pa so izpostavljeni histamin, je razmerje med AP močno povišane na srednjo vrednostjo 147% (n = 13). Čeprav so bili testirani majhno število posameznikov, L-NNA (0,1 mmol /l) je dala podobne rezultate; 172% (n = 2). Za primerjavo, v kontrolnih poskusih, je imela L-NAME analogni D-NAME (1 mmol /L), ne vpliva na vse na izločanje kisline-histamina stimulirano (sl. 2b).
Učinkujejo donatorji in zaviralci NOS na db -cAMP-stimulirano izločanje želodčne kisline
Odkrivanje izolirane žleze na dB-cAMP povečano izločanje želodčne kisline v primerjavi s stopnjo ozadja. V primerjavi z nezdravljenimi žlez, tisti, ki so bili predhodno zdravljeni z SNP (1 mmol /l) ali SNAP (0,1 mmol /l) nabralo manj AP po stimulaciji z db-cAMP; 63% (n = 9) in 81% (n = 8) oziroma (sl. 3a). Poleg tega, kar je podobno, histamin stimulirano izločanje, je db-cAMP povzroča izločanje poveča na mediano 152% (n = 9), v žlezah, ki je bila predhodno zdravljeni z L-NAME (1 mmol /L). Čeprav bi bilo nobenega vpliva na L-arginin na izločanje kisline-histamina stimulirane videli, je bil pomemben učinek L-arginina na db-cAMP-inducirane izločanja. Acid proizvodnja je bila inhibirana z mediano 77% (n = 10), pri tistih, ki predhodno zdravljeni z L-arginina (0,1 mmol /l) (sl. 3b).
Pogovor
Metoda uporabe izoliranih želodčnih žlez in vitro je zelo primerna za preučevanje interakcijo med izločanja želodčne kisline in različne endokrine signalov. Ta tehnika je bila temeljito ocenili, predvsem pri poskusih na živalih, in so poročali, da ponujajo dobre ponovljivosti [23]. Poleg tega so v študiji želodčnih žlez izoliranih iz želodca biopsije, vzetih iz ljudi [24], je bilo ugotovljeno, da sta histamin in db-cAMP povzroča sekretornih odzivov, ki so ponovljivi, če ponovimo z uporabo pripravkov žleze z isto temo, čeprav je bilo precej interindividualno variacije. Fellenius sod. [24] in Haglund sod. [25], so poročali, da sta histamin in db-cAMP stimulirano izločanje želodčne kisline iz izoliranih želodčnih žlez človeka, in to je bilo opaziti kot dvo- do trikratno povečanje akumulacije AP glede na raven ozadja. Ti rezultati se ujemajo z našimi podatki, pridobljenimi s histamina in DB-cAMP. Znano je, da SNP sprošča NO [26], in v naših eksperimentih SNP zmanjša izločanje želodčne kisline iz izoliranih žlez. Zato NE zavira izločanje kisline v izoliranih želodčnih žlez ljudi. Nekateri učinki SNP je lahko posledica citotoksičnih interakcije, čeprav je bil tak vpliv ni najti v študiji izoliranih kunčjih želodčnih žlez [15]. Da bi izključili možnost vpliva citotoksična, smo izvedli dopolnilne poskuse s pomočjo NO donatorjev snap, ki ima kemične lastnosti, ki se razlikujejo od tistih, SNP. V teh poskusih smo ugotovili enako zmanjšanje kopičenja AP po stimulaciji z db-cAMP, kar je še ugoden za sklepanje, da je NO v resnici je odgovoren za opazovanih rezultatov. V db-cAMP-stimulirane žlez, je bila povzročena sekretorni odziv zmanjša za L-arginina, spojine, ki je odvisen od endogenega faktorja (tj eNOS) za ustvarjanje NO, čeprav to zmanjšanje ni bilo tako izrazito kot zmanjšanje jo SNP in inducirane SNAP. Obstaja več možnih razlag za to ugotovitev. Če ne bi bilo že dovolj L-arginin v žleze za ohranitev NO proizvodnje v času poskusa, je dodatek L-arginina torej brez učinka. Poleg tega lahko L-arginin imeli šibek vpliv zaradi učinka NO zgodila skozi regulacijo navzgor ali navzdol encima NOS in ni vplivala dostop do substrat. Ne glede na L-arginin se zmanjša nabiranje AP, čeprav ne toliko kot eksogeni donatorji NO naredili na tem odmerkih. To pomeni, da se nekateri specifični proces odgovoren za generiranje NO iz L-arginina v izoliranih želodčnih žlez. Ti rezultati so v skladu s študijami, ki kažejo, da je SNP, SNAP, in L-arginin zaviral-histamina izločanje kisline iz želodca žlez, pridobljene iz živali [13, 15]. Opazili so tudi L-arginin, da se zmanjša izločanje kisline-karbahol stimulirane v krastače [16].
V prejšnji raziskavi, ki ga naše raziskovalne skupine poteka [22], pregled žleznega epitela osebkov človeške oxyntic sluznice je pokazala, da je eden posebno vrsto celic vsebuje NOS. Te eNOS-imunološko celice, ki so opredeljeni kot endokrine celice, so bili v tesnem stiku z parietalnih celic. Ti dve lastnosti kažejo, da celice v tej izdaji tipa NO, ki tako bi bil lahko parakrin regulator, ki neposredno vpliva na delovanje parietalnih celic. Da predpostavko lahko podprt s številnimi drugimi pogoji. Na primer, lahko NO zlahka prodrejo celične membrane, ki bi lahko kazali znotrajcelični mesto delovanja. Tudi NO ima precej kratko življenjsko dobo, kar pomeni, da viri so potrebni za ustvarjanje tega oksida mora biti na voljo v bližini NO ciljni celici. V tej študiji je prikazano pojav eNOS v žlez, ampak prej obsežne raziskave z uporabo protiteles proti obema nNOS in iNOS niso pokazale prisotnosti katere koli od obeh izooblik iz žleznega epitela običajnih ljudeh (neobjavljeni opazovanje). Podobno kot pri rezultatih, doseženih v študiji izoliran kunčjih želodčnih žlez [15], smo ugotovili, da NOS inhibitorji L-NAME in L-NNA, vendar ne D-NAME, ojačan učinek, izločanje spodbujanje histamina, kar še dodatno kaže, da je izoliranih človeških žleze smo uporabili vsebuje encim NOS. Tako povečanje deleža AP, da smo opazili po inhibicijo NOS in zmanjšanja izločevalnih odzivov, ki smo jo navedli v žlezah, zdravljenih z L-arginin okrepiti hipotezo, da je NO, ki ga celice v žleznega epitela in, ko se sprosti, se moti z izločanjem stimulirane kisline. Zanimivo je, da omenjene ugotovitve kažejo, da je sproščanje NO trajno, glede na to, ali je kislina izločanje stimulirani, kar pomeni, da NE deluje kot endogeni inhibitor izločanja želodčne kisline. Intenzivnost te inhibicije verjetno odvisna od števila eNOS-vsebuje endokrinih podobne celice, ki so prisotne v bližini parietalnih celicah.
Natančne mehanizmi v ozadju tega sklepa parakrin izločanja želodčne kisline je treba še pojasnjen. Obstaja več različnih poti znotraj parietalnih celic, ki bi lahko vplivali NO. To lahko povzroči ADP-RIBOZILACIJA HISTONOV G-aktin [27], s čimer vplivajo na skeleta. To bi lahko bilo ključnega pomena za morfološke spremembe, ki parietalnih celicah razstavo v izločanje kisline. V skladu s tem, če je NO ima trajni vpliv na element, kot je citoskeleta, bi lahko igra vlogo pri hipotezi membranskega recikliranje, ki jo Forte in sod. [28]. Na kratko, ta teorija predlaga, da parietalnih celicah opraviti naslednje morfoloških sprememb: imajo veliko aktivno površino sekretornih med stimulatorne faze ter imajo minimalno aktivno sekretornih površino med počitkom
Ker je znano, da je gvanilat ciklaze. splošni cilj NO v mnogih celičnih sistemih, nekateri raziskovalci predlagali, da NO doseže svoj učinek preko cikličen gvanozin 3 ', 5'-monofosfat (cGMP) pri podganah in kuncih parietalnih celicah [13, 15]. V teku študija v našem laboratoriju bo pokazala, ali je to primer v parietalnih celic. Nadaljnji učinki cGMP lahko vključujejo aktivacijo številnih efektorjev, kot ionskih kanalov, protein kinaz in fosfodiesteraz [29]. Prav tako je verjetno, da lahko NO izvajajo svoj učinek šele, ne deluje preko drugih signalnih molekul. Pod eksperimentalnih pogojih, lahko NO povzroči nitrosylation in nitriranja celičnih proteinov, čeprav to verjetno ni tako in vivo, ker ti postopki pogosto povzroči trajne poškodbe vitalnih funkcij [30]. Obstaja možnost, da pride do zatiranje izločanja želodčne kisline, ne le na ravni parietalnih celic, ampak prek drugih tipov celic. ECL-celice so verjetno prisotni v žleznega pripravi in ​​pri podganah, te celice imajo sposobnost, da sproščanje histamina v odziv na povečane znotrajceličnih stopnjah cAMP [31]. NO lahko zavirajo to histamina sproščanje [14] in s tem še dodatno prispeva k zaviranja izločanja želodčne kisline. Čeprav je malo znanega o človekovih ECL-celic in učinkov NO na histamin sproščanjem obstajajo študije, ki kažejo razlik v vrsti, v drugih celicah-histamina izločajo. Na primer, so bile podgane mastociti prikazano proizvajati "NO podoben faktor", ki inhibira histamin sproščanje [32], medtem ko so raziskave, ki nakazujejo, da NO ne vpliva histamina-izločanje človeških bazofilcih [33]. Trenutno lahko ugotovimo le razlike v zaviralnega odzivu na L-arginin za histamin in stimulacijo db-cAMP.
So potrebne nadaljnje preiskave za razjasnitev vloge NO v funkciji parietalnih celic.
Sklepe
ugotovitev pričujoči študiji kažejo, da NO proizvaja endogeno v človeškem oxyntic sluznico lahko zmanjšali stimulatorne učinke histamina ali db-cAMP na izločanje želodčne kisline. Dobili smo enotne rezultate za zdravljenje želodčnih žlez izoliranih iz različnih zdravih ljudeh, kar pomeni, da NO izpuščen iz posebnih celic v sekretorni sluznice ima pomembno fiziološko vlogo pri uravnavanju izločanja želodčne kisline.
Izjave
Zahvale
zahvaljujemo Ulf Hannestad za izvedbo preskusov dih ureaze, Inga-Lill Andersson in Gunilla Strand za pomoč pri gastroscopic postopkov in Marja Tjädermo za tehnično pomoč. To delo je bilo podprto s AstraZeneca R & D, Švedska.
Avtorjev originalnih predloženi datoteke za slike
Spodaj so povezave do avtorjev izvirnih predloženih spisov za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 12876_2004_88_MOESM2_ESM.ppt avtorjev 12876_2004_88_MOESM1_ESM.ppt avtorjev prvotne datoteke za izvirno datoteko Slika 2 12876_2004_88_MOESM3_ESM.ppt avtorjev za sliko 3 Konkurenca interesov
Noben prijavljeni.

• Nepopolna želodca metaplazija pri otrocih s sladkorno boleznijo insulina neodvisna in celiakijo. Ultrastrukturni študija
• Izražanje v serumu pokoj-20a-5p, naj-7a in miR-320a in njihove korelacije z pepsinogen v atrofični gastritis in rak želodca: študije primerov in kontrol