ossido nitrico un inibitore endogeno della secrezione acida gastrica in isolate ghiandole gastriche umane

ossido nitrico un inibitore endogeno della secrezione acida gastrica in isolate ghiandole gastriche umane
Abstract
sfondo
endoteliale dell'ossido nitrico sintasi (eNOS) non è stato accertato nella parte ghiandolare della mucosa gastrica umana. Inoltre, l'ossido nitrico (NO) ha mostrato di influenzare la secrezione gastrica in vari modelli animali. Il presente studio è stato condotto per studiare l'influenza della esogeno ed endogeno deriva NO sulla secrezione histamine- e cAMP stimolata acido gastrico in isolate ghiandole oxintiche umani.
Metodi
ghiandole oxintiche sono stati isolati da biopsie gastriche umane e sono stati successivamente pre -treated con donatori di NO e inibitori dell'ossido nitrico sintasi e quindi esposti all'istamina o dibutirril-cAMP (db-cAMP). La risposta secretoria delle ghiandole è stato determinato come l'accumulo di [ 14C] aminopyrine
. Risultati
Il histamine- o db-cAMP-indotta secrezione acida è stato attenuato da L-arginina, una fonte nota di NO endogeno , ed anche dalla nitroprussiato donatori di NO sodio (SNP) e S-nitroso-N-acetil-penicillamina (SNAP). Il pre-trattamento con uno degli inibitori di NOS N G-nitro-L-arginina estere metilico (L-NAME) o N G-nitro-L-arginina (L-NNA) migliorato la risposta secretoria.
Conclusione
nostri risultati mostrano che NO inibisce la secrezione di acido gastrico in isolate ghiandole gastriche umane, e che vi è formazione endogena di NO all'interno dell'epitelio ghiandolare in prossimità delle cellule parietali.
Sfondo
l'ossido nitrico (NO) è prodotto da L-arginina in una reazione catalizzata dal sintasi ossido enzima nitrico (NOS) [1, 2]. NO è un importante molecola di segnalazione biologica che influenza la circolazione regolando il tono della muscolatura liscia vascolare e la modulazione della pressione arteriosa sistemica. Inoltre, non è coinvolta nella neurotrasmissione; è un fattore critico nella risposta infiammatoria e immunità [3-5]; ed è stato dimostrato di esercitare effetti positivi sulla difesa mucosa nel sistema gastrointestinale. In diversi studi (per la revisione, vedi [6]), danno della mucosa indotto chimicamente sembrava essere ridotto di simultanea aggiunta di NO e compromessa dalla rimozione di NO dalla mucosa gastrica. Una spiegazione di questi risultati potrebbe essere che NO aumenta il flusso ematico della mucosa [7], ed è stato suggerito che NO aumenta l'emissione di muco [8]. E 'probabile che NO è anche coinvolto nella regolazione di altri processi di secrezione nel sistema gastrointestinale. Takeuchi e [9] collaboratori hanno riferito che NO inibisce la secrezione di bicarbonato duodenale, mentre altri ricercatori hanno proposto che la secrezione di bicarbonato è stimolata da NO [10, 11]. Inoltre, diversi studi hanno indicato che NO influenza la secrezione di acido gastrico [12-16].
Esperimenti su animali hanno fornito informazioni contrastanti circa l'interazione tra NO e la secrezione di acido gastrico. Per esempio, studi in vitro hanno dimostrato che l'NO stimola la secrezione di acido gastrico nel topo [17, 18] e bullfrog [19]. Inoltre, risultati simili sono stati ottenuti in cani [12]. Tuttavia, altre ricerche hanno dimostrato che l'NO inibisce la secrezione acida gastrica nel ratto [13, 14], in ghiandole gastriche isolati da conigli [15], e nella mucosa da rospi [16]. Studi di esseri umani hanno fornito dati che indicano che NO può sia inibire e aumentare il pH intragastrico [20, 21], ma non è ancora noto come questo composto partecipa secrezione acida gastrica negli esseri umani.
In un precedente studio, abbiamo trovato morfologica supporto che NO endogeno svolge un ruolo nella regolazione della funzione delle cellule parietali [22]. Inoltre, i dati immunoistochimici da tale indagine ha rivelato la presenza di endogena NOS in cellule epiteliali della mucosa ossintiche umano, più precisamente, sia surface cellule mucose e cellule endocrine. Inoltre, abbiamo osservato che ci sono stati stretti contatti tra le cellule eNOS-positive e cellule parietali sia perché i eNOS-positivi cellule contattato cellule parietali attraverso processi citoplasmatici o furono invaginato da una cellula parietale. Sulla base di questi risultati, insieme alle proprietà chimiche di NO, abbiamo concluso che NO derivato dalle cellule endocrine come potrebbe essere un regolatore paracrino della secrezione acida gastrica. Nel presente studio, il nostro scopo era quello di verificare l'effetto di NO esogeno sulla secrezione acida gastrica histamine- e cAMP-stimolò negli esseri umani, e anche per determinare se NO endogeno derivata ha un effetto funzionale su cellule parietali umane.
Metodi
Soggetti e approvazione etica
Ventiquattro uomini sani di età compresa tra i 22 ei 31 anni sono stati reclutati come volontari pagati. I criteri di selezione stabilito che i soggetti dovevano essere liberi da malattia e non avrebbe dovuto prendere tutte le medicine o assorbito alcool per almeno una settimana prima dell'esame. Gli uomini tenuti a digiuno per almeno sei ore prima dell'esame.
Anestesia faringea è stata indotta con spray lidocaina (xylocaina ®, AstraZeneca, Södertälje, Svezia), dopo di che gastroscopia di routine è stata eseguita utilizzando una Olympus GIF-100 endoscopio. Pinch pinze biopsia (Olympus FB 24K-1) sono stati usati per prendere campioni di tessuto dalla curvatura maggiore, immediatamente distale al fondo. In tutti i soggetti, la mucosa gastrica sembrava essere normale, sia macroscopicamente e istologicamente. Tutti i soggetti sono risultati negativi per Helicobacter pylori
infezione nel test dell'ureasi respiro (Diabact ® UBT 50 mg 13C-urea, Diabact AB, Uppsala, Svezia).
Le procedure sperimentali sono state approvate dal Comitato regionale Etico per la ricerca umana presso University Hospital, Linköping, Svezia (file n. 02-039), e tutti i soggetti hanno dato il consenso informato.
studio secretoria
isolamento e l'incubazione delle ghiandole gastriche
Gli esperimenti in corso sono stati basato su una tecnica che è stata descritta per la prima nel 1976 per l'uso in conigli in vitro [23] ed è ormai ben consolidata per la determinazione indiretta della secrezione acida gastrica indotta da vari stimoli. Il metodo di isolare ghiandole gastriche stato inizialmente sviluppato per tessuti animali, ma successivamente è stato perfezionato in modo che possa essere applicato anche a piccole quantità di tessuto umano [24].
I umane biopsie della mucosa oxintiche utilizzati nel nostro studio sono stati lavati e non più di 15 minuti memorizzato in tampone fosfato salino ossigenato ghiacciata (PBS). I campioni di tessuto sono stati tagliati in pezzi più piccoli, con un paio di forbici e trasferiti ossigenato (100% O 2) soluzione di collagenasi enzima (130,0 mM NaCl, 12.0 mM NaHCO 3, 3,0 mm Na 2HPO 4, 3,0 mm K 2HPO 4, 2,0 mm MgSO 4, 1,0 mm CaCl 2, 0.1 mm n (alfa) -tosyl-L-lisina clorometil chetone [ ,,,0],TLCK], 10 mM indometacina, 10 mM di glucosio, 2 mg /ml di siero albumina umana [HSA; Sigma], e 1 mg /ml di collagenasi tipo IA [Sigma]). La miscela viene posta in un bagno d'acqua 37 ° C ed è stato delicatamente agitata per 120 minuti, dopo di che la maggior parte dei campioni trattati era disintegrato, lasciando principalmente isolate ghiandole gastriche. La miscela viene quindi filtrato attraverso una maglia di 200 micron. Le ghiandole isolate sono state lavate e risospese in pre-riscaldato (37 ° C) media delle vie respiratorie (132,4 mM NaCl, 1,0 mm NaH 2PO 4, 1,2 mm MgSO 4, 5.4 mM KCl, 5,0 mM Na 2HPO 4, 1.0 mM CaCl 2, 10 mM indometacina, 10 mM di glucosio, e 2 mg /ml HSA). Le ghiandole sono stati poi trasferiti in fiale contenenti un mezzo respiratorio fresca a cui abbiamo aggiunto una delle seguenti operazioni: L'inibitore NOS N G-nitro-L-arginina metil estere (L-NAME; 1 mmol /L) o equivalenti quantità di suo enantiomero biologicamente inattivo N G-nitro-D-arginina metil estere (D-NAME); l'inibitore NOS N G-nitro-L-arginina (L-NNA; 0,1 mmol /L); una delle nitroprussiato sodico due donatori di NO (SNP; 1 mmol /l) e S-nitroso-N-acetil-penicillamina (SNAP; 0,1 mmol /L); il substrato per la produzione endogena di NO, L-arginina (0,1 mmol /L) [15]. Tutte le sospensioni ghiandola, incluse quelle che non sono state stimolate, sono state incubate in un bagno d'acqua a 37 ° C per 30 minuti, dopo di che abbiamo aggiunto istamina per una concentrazione finale di 50 mmol /L o dibutirril-cAMP (db-cAMP) per una concentrazione finale di 1 mmol /L. Per evitare il degrado di nucleotidi ciclici, abbiamo aggiunto 0,1 mmol /L 3-isobutil-1-methylxantine (IBMX) per tutte le stimolazioni.
Determinazione della [14C] tasso di accumulo aminopyrine
Un metodo consolidato utilizzato per indirettamente misurare la secrezione acida isolato ghiandole gastriche è determinare accumulo di 14C-marcato aminopyrine (AP) nelle ghiandole stessi e nel supernatante dopo centrifugazione e quindi calcolare il rapporto tra questi due valori (chiamato rapporto AP) [23] . In breve, la secrezione acida veniva stimolata a 37 ° C per 40 minuti, e dopo che 0,5 pCi [ 14C] aminopyrine marcato è stato aggiunto ai flaconi, che sono stati poi ulteriormente incubate a 37 ° C per 90 minuti. Successivamente, la sospensione ghiandola stata trasferita ai tubi preventivamente asciugato e pesato, che sono stati centrifugati a 4000 rpm per due minuti. Il surnatante è stato rimosso e trasferito in fiale di scintillazione. Il pellet (ghiandole) sono stati essiccati a 100 ° C, e il peso a secco è stata determinata, e le ghiandole stati successivamente risospese in 0,5 mol /L NaOH a 60 ° C e trasferiti in fiale di scintillazione. La radioattività delle ghiandole e il surnatante è stato determinato in un contatore a scintillazione liquida (1214 Rackbeta, LKB), e il rapporto di AP è stata calcolata usando la seguente formula [24]:
dove IGW è il volume di acqua intraghiandolari (= 2 × il peso a secco di ghiandole in mg). accumulo
Sfondo di AP è incluso nei valori che rappresentano la risposta secretoria. I rapporti di AP per lo sfondo e le condizioni di istamina e db-cAMP stimolati differivano tra gli individui. Pertanto, per ogni soggetto, abbiamo determinato il rapporto di AP per ghiandole stimolati e considerato che il valore di essere al 100% e l'ho usato come un valore di riferimento individuale. Tutti i valori si basano su singole analisi. &Statistiche
dati sono stati analizzati con test segno di un campione di confronto valori mediani utilizzando MINITAB Statistical Software ™. valori di p inferiori a 0,05 sono stati considerati significativi.
immunoistochimica
ghiandole gastriche isolati da cinque soggetti per i test sono stati immessi sul carico Super gelo * /più vetrini (Menzel-Glaser, Germania) e quindi lavati con PBS e permeabilizzate con 100 % di etanolo a -70 ° C per 5 min. Successivamente, i vetrini sono stati incubati a temperatura ambiente per una notte con coniglio anti-NOS3 anticorpi (1: 1000; Santa Cruz Biochemicals) e quindi lavati accuratamente con PBS e incubate per 1 h con biotinilato di capra anticorpo secondario anti-coniglio. Slides dove anticorpo primario era stato lasciato fuori serviti come controlli negativi. I vetrini sono stati successivamente lavati di nuovo, e l'anticorpo biotinilato è stato rilevato mediante esposizione a 20 ug /ml Texas Red ® avidina (Vector Laboratories) per 1 h. In seguito a tale trattamento, i vetrini sono stati lavati e coprioggetto utilizzando Vectashield medio ® di montaggio. Una Nikon Eclipse ® E800 microscopio a fluorescenza con un allegato di EPI-fluorescenza VFM è stato utilizzato per esaminare e valutare le diapositive. Un filtro passa-banda con una lunghezza d'onda di 520-560 nm ed un filtro passa-lunga con cut-on lunghezza d'onda a 590 nm (per luce emessa) sono stati impiegati per visualizzare il Texas Red ® molecole.
Ematossilina e eosina
per la valutazione morfologica, le ghiandole sono stati fissati su vetrini e colorati con ematossilina di Harris per cinque minuti e 0,5% eosina Y per due minuti. Ogni passo è stato seguito da un risciacquo in acqua di rubinetto.
Risultati
Abbiamo studiato gli effetti di NO sulla secrezione acida indotta da vari stimolanti in ghiandole gastriche isolate da biopsie gastriche da umana. esame morfologico delle slitte ematossilina-eosina-macchiate rivelato che la procedura di isolamento aveva ceduto con successo i preparativi intere-ghiandola e che le cellule parietali erano presenti nelle ghiandole gastriche. L'analisi immunoistochimica ha mostrato che le ghiandole isolate contenevano eNOS-immunoreattive cellule (Fig. 1), che concorda con i risultati ottenuti con altri tipi di preparati mucose [22]. Esperimenti di controllo erano anticorpo primario è stato escluso non ha mostrato alcuna immunoreattività. Figura 1 immunofluorescenza di una ghiandola gastrica isolato. Immunolocalizzazione di eNOS (frecce) in una ghiandola gastrica isolato dal mucosa ossintiche umano è stato realizzato utilizzando un coniglio-eNOS contro anticorpo policlonale. I risultati sono stati visualizzati con capra Texas Red®-coniugato anti-IgG di coniglio. Bar = 30 micron
Sfondo AP-accumulo
accumulo Sfondo AP è stato osservato nelle ghiandole isolate, con un rapporto medio di AP 8.6. (Range 2,5-22,1; n = 19). Dopo la somministrazione di 50 micromol /L di istamina o di 1 mmol /L di db-cAMP, i rapporti mediani AP sono stati 24,7 (5,8-64,5; n = 16) e 38,2 (range 7,6-47,8; n = 11), rispettivamente. La risposta sia istamina e db-cAMP superato lo sfondo di un fattore di circa 2-4 in tutte le preparazioni (figg. 2 e 3). Figura 2 L'accumulo di 14 aminopyrine C-marcato in ghiandole gastriche istamina-stimolata. Tutti i valori sono espressi come percentuale della secrezione acida gastrica indotta da istamina (considerati 100%), che è stato calcolato separatamente per ghiandole gastriche isolati da ciascuno dei volontari sani. Ogni simbolo rappresenta i risultati per un individuo. a) L'accumulo di 14C-aminopyrine in ghiandole pretrattati con il donatore di NO sodio nitroprusside (SNP, 1 mmol /L) o con L-arginina (0,1 mmol /L), il substrato per endogena NO produzione. Si può notare che SNP marcatamente ridotto accumulo AP (mediana = 48%; p < 0,05), che indica che l'NO inibisce la secrezione acida dalle ghiandole isolate. è anche mostrato sfondo accumulo 14C-aminopyrine (bg). b) L'accumulo di 14C-aminopyrine in ghiandole gastriche pretrattati con il NOS inibitori L-NNA (0,1 mmol /L) e L-NAME (1 mmol /L), rispettivamente. L-NAME causato un aumento di accumulo (mediana = 147%; p < 0,05), il che suggerisce che la secrezione acida è elevata quando viene impedito produzione endogena NO, indicando un ruolo inibitorio per NO endogeno ghiandole gastriche umane. D-nome, che è l'isomero stereo biologicamente inattivo di L-NAME, non ha avuto un effetto sulla secrezione acida, ed è stato quindi utilizzato come sostanza di controllo.
Figura 3 Accumulo di 14 aminopyrine C-marcato in db- cAMP-stimolò ghiandole gastriche. Tutti i valori sono espressi come percentuale del valore rappresentativo della secrezione acida gastrica indotta da db-cAMP (considerate 100%), che è stato calcolato separatamente per ciascuno dei soggetti studiati. Ogni simbolo rappresenta i dati di un individuo. a) Il pretrattamento con SNP (mediana = 63%; p < 0,05) o SNAP (mediana = 81%; p < 0,05) per rilasciare NO esogeno prima di aggiungere db-cAMP per stimolare la secrezione acida ha ridotto l'accumulo di 14C-aminopyrine in ghiandole gastriche, rispetto ai livelli di secrezione visti in ghiandole non trattati. Questo indica che non può inibire la secrezione acida in ghiandole gastriche isolati dalle persone. b) Il trattamento con L-NAME per inibire NOS nelle ghiandole gastriche aumentato l'accumulo di 14 C-aminopyrine dopo stimolazione con db-cAMP (mediana = 152%; p < 0,05). Questi risultati indicano che non inibisce la secrezione acida db-cAMP-indotta. Il NO substrato L-arginina ha ridotto l'accumulo di 14C-aminopyrine nelle ghiandole db-cAMP stimolati (mediana = 77%; p < 0,05). è anche mostrato accumulo di sfondo (bg).
Effetto di donatori di NO e NOS inibitori sulla secrezione acida gastrica istamina stimolata
pre-trattamento delle ghiandole isolate con il esogeno NO SNP donatore (1 mmol /L) ha ridotto l'istamina risposta ad una media di 48% (n = 7) della risposta visto in ghiandole non pre-trattati (100%). In quattro dei cinque preparati ghiandola, il substrato per endogena NO formazione, L-arginina (0,1 mmol /L), è diminuito il rapporto di AP. Questo effetto tuttavia non era statisticamente significativa (Fig. 2a). Quando ghiandole isolati sono stati pre-trattati con NOS inibitore L-NAME (1 mmol /L), e quindi esposti all'istamina, il rapporto di AP era marcatamente elevata a un valore medio di 147% (n = 13). Sebbene un piccolo numero di individui sono stati testati, L-NNA (0,1 mmol /L) ha prodotto un risultato simile; 172% (n = 2). A titolo di confronto, in esperimenti di controllo, la L-NAME analogico D-NAME (1 mmol /L) ha avuto alcun effetto sulla secrezione acida istamina-stimolata (Fig. 2b).
Effetto di donatori di NO e gli inibitori della NOS sui db -Camp stimolata la secrezione acida gastrica
Esporre le ghiandole isolate al db-cAMP aumenta la secrezione di acido gastrico rispetto al livello di fondo. Rispetto alle ghiandole non trattati, quelli che sono stati pre-trattati con SNP (1 mmol /L) o SNAP (0,1 mmol /L) accumulato meno AP dopo stimolazione con db-cAMP; 63% (n = 9) e 81% (n = 8), rispettivamente (Fig. 3a). Inoltre, simile alla secrezione di istamina-stimolata, la secrezione db-cAMP-indotta è stato aumentato a una media di 152% (n = 9) in ghiandole che erano stati pre-trattati con L-NAME (1 mmol /L). Sebbene nessun effetto su L-arginina sulla secrezione acida istamina stimolata poteva vedere, c'è stato un significativo effetto di L-arginina sulla secrezione db-cAMP-indotta. uscita Acid era inibita ad una mediana di 77% (n = 10) in quelli pre-trattati con L-arginina (0,1 mmol /L) (Fig. 3b).
Discussione
Il metodo di utilizzo isolati ghiandole gastriche in vitro è adatto per studiare l'interazione tra la secrezione di acido gastrico e vari segnali endocrini. Questa tecnica è stata attentamente valutata, soprattutto in esperimenti su animali, ed è stato riportato da offrire buona riproducibilità [23]. Inoltre, in uno studio di ghiandole gastriche isolate da biopsie gastriche presi da esseri umani [24], è stato rilevato che sia l'istamina e db-cAMP indotto risposte di secrezione che erano riproducibili quando ripetuto usando preparati ghiandola dallo stesso soggetto, anche se c'era una notevole interindividuale variazione. Fellenius et al. [24] e Haglund et al. [25] hanno riferito che sia l'istamina e db-cAMP stimolato la secrezione acida gastrica da isolate ghiandole gastriche umane, e questo è stato osservato come un due a tre volte superiore accumulo AP rispetto al livello di fondo. Questi risultati concordano con i nostri dati ottenuti con istamina e db-cAMP. È noto che SNP rilascia NO [26], e nei nostri esperimenti SNP ridotta secrezione di acido gastrico dalle ghiandole isolate. Quindi, NO inibisce la secrezione di acido nello isolati ghiandole gastriche umane. Alcuni degli effetti di SNP può essere dovuto alle interazioni citotossici, anche se tale impatto è stato trovato in uno studio di ghiandole isolate coniglio gastriche [15]. Per escludere la possibilità di un'influenza citotossico, abbiamo eseguito esperimenti complementari utilizzando il donatore di NO SNAP, che ha proprietà chimiche diverse da quelle di SNP. In questi esperimenti, abbiamo osservato la stessa riduzione di accumulo AP dopo stimolazione con db-cAMP, che favorisce ulteriormente la conclusione che NO è in realtà responsabile per i risultati osservati. In ghiandole db-cAMP stimolata, la risposta secretoria indotta è stata ridotta di L-arginina, un composto che dipende da un fattore endogeno (cioè, eNOS) per generare NO, anche se tale riduzione non era così pronunciata come la diminuzione indotta da SNP e SNAP. Ci sono un certo numero di possibili spiegazioni per tale osservazione. Se ci fosse già abbastanza L-arginina nelle ghiandole per sostenere la produzione di NO al momento dell'esperimento, aggiunta di L-arginina è quindi privo di effetto. Inoltre, L-arginina può aver avuto un impatto debole, perché l'effetto di NO è avvenuto attraverso la regolamentazione alto o verso il basso dell'enzima NOS e non è stato influenzato da accesso al substrato. Nonostante, L-arginina è diminuita l'accumulo di AP, anche se non quanto i donatori di NO esogeni fatto al presente dosi. Questo indica che un processo specifico è responsabile della generazione NO da L-arginina in isolate ghiandole gastriche. Questi risultati sono coerenti con studi che dimostrano che SNP, SNAP, e L-arginina inibito la secrezione acida istamina stimolata da ghiandole gastriche isolati da animali [13, 15]. L-arginina è stato osservato anche per ridurre carbachol stimolata la secrezione acida in rospi [16].
In un precedente studio condotto dal nostro gruppo di ricerca [22], l'esame del epitelio ghiandolare di esemplari di mucosa ossintiche umana ha rivelato che uno particolare tipo di cellule contenute NOS. Queste cellule eNOS-immunoreattive, definiti come cellule endocrine, sono in stretto contatto con le cellule parietali. Queste due caratteristiche suggeriscono che le cellule di questo tipo di rilascio NO, che quindi potrebbe essere un regolatore paracrino che influenza direttamente la funzione delle cellule parietali. Tale ipotesi può essere supportato da una serie di altre condizioni. Per esempio, non può facilmente penetrare le membrane delle cellule, che possono indicare un sito intracellulare di azione. Inoltre, NO ha una piuttosto breve durata, il che implica che le fonti necessarie per generare questo ossido deve essere disponibile vicino alla cella NO bersaglio. In questo studio, la presenza di eNOS nelle ghiandole è mostrato, ma all'inizio approfondite indagini utilizzando anticorpi contro sia nNOS e iNOS non hanno rivelato la presenza di una qualsiasi delle due isoforme nell'epitelio ghiandolare di soggetti umani normali (osservazioni non pubblicate). Simile a risultati ottenuti in uno studio di isolati di coniglio ghiandole gastriche [15], abbiamo scoperto che il NOS inibitori L-NAME e L-NNA, ma non D-NAME, amplificati l'effetto della secrezione-stimolante di istamina, che indica inoltre che il isolati ghiandole umane che abbiamo usato contenevano l'enzima NOS. Sia l'aumento del rapporto AP che abbiamo osservato dopo l'inibizione della NOS e la diminuzione risposte secretorie che abbiamo notato in ghiandole trattati con L-arginina rafforzare l'ipotesi che NO è prodotto dalle cellule dell'epitelio ghiandolare e, quando rilasciato, interferisce con secrezione acida stimolata. È interessante notare, le osservazioni citate suggeriscono che il rilascio di NO è sostenuta, indipendentemente dal fatto secrezione acida è stimolata, che implica che nessuna funziona come un inibitore endogeno della secrezione acida gastrica. L'intensità di questa inibizione probabilmente dipende dal numero di eNOS contenenti cellule endocrine-like che sono presenti in prossimità delle cellule parietali.
L'esatto meccanismo alla base di questa regolazione paracrina della secrezione acida gastrica è ancora da chiarire. Ci sono diversi percorsi diversi all'interno delle cellule parietali che potrebbe essere influenzata da NO. Si può indurre ADP ribosilazione di G-actina [27], influenzando così il citoscheletro. Questo potrebbe essere essenziale per i cambiamenti morfologici parietali cellule presentano durante secrezione acida. Pertanto, se NO ha un impatto persistente un elemento come citoscheletro, potrebbe svolgere un ruolo nella ipotesi riciclaggio membrana proposta da Forte et al. [28]. In breve, questa teoria suggerisce che le cellule parietali sottoposti alle seguenti alterazioni morfologiche: hanno una grande superficie secretoria attivo durante la fase di stimolazione, e che una superficie secretoria attiva minima durante la fase di riposo
Poiché è noto che la guanilato ciclasi è. un obiettivo generale di NO in molti sistemi cellulari, alcuni ricercatori hanno suggerito che NO esercita i suoi effetti attraverso guanosina ciclica 3 ', 5'-monofosfato ciclico (cGMP) in entrambe le cellule parietali di ratto e coniglio [13, 15]. Uno studio in corso nel nostro laboratorio mostrerà se questo è il caso in cellule parietali umane. effetti a valle di cGMP possono includere l'attivazione di una serie di effettori, come canali ionici, protein chinasi e fosfodiesterasi [29]. È anche plausibile che NO può esercitare il suo effetto alone, senza agire attraverso altre molecole di segnalazione. In condizioni sperimentali, NO può indurre nitrosilazione e nitrazione delle proteine ​​cellulari, anche se questo non è probabilmente il caso in vivo, poiché queste due processi spesso il risultato danni permanenti alle funzioni vitali [30]. C'è la possibilità che la soppressione della secrezione acida si verifica non solo a livello delle cellule parietali, ma tramite altri tipi di cellule. ECL-cellule sono probabilmente presenti nel preparato ghiandolare e nel ratto, queste cellule hanno la capacità di rilasciare istamina in risposta ad un aumento dei livelli intracellulari di cAMP [31]. NO può inibire questo istamina-release [14] e, quindi, un ulteriore contributo alla inibizione della secrezione acida. Anche se c'è poco conosciuto circa umani ECL-cellule e gli effetti del NO su dell'istamina-release ci sono studi che indicano differenze di specie in altre cellule istamina-secernenti. Ad esempio, le cellule di ratto mastociti hanno dimostrato di produrre un "fattore NO-like" che inibisce l'istamina release [32] mentre ci sono ricerche che indicano che NO non influisce istamina secrezione basofili umani [33]. Al momento possiamo solo stabilire le differenze di risposta inibitoria per l-arginina per l'istamina e la stimolazione db-cAMP.
Ulteriori indagini sono necessari per chiarire il ruolo di NO in funzione delle cellule parietali.
Conclusioni
I risultati di il presente studio suggeriscono che NO prodotta a livello endogeno nella mucosa ossintiche umano in grado di ridurre gli effetti stimolatori di istamina o di db-cAMP sulla secrezione acida gastrica. Abbiamo ottenuto risultati uniformi per ghiandole gastriche isolati da diversi soggetti umani sani, il che implica che nessuna rilasciato dalle cellule specifiche all'interno della mucosa secretoria svolge un importante ruolo fisiologico nella regolazione della secrezione acida gastrica
. Dichiarazioni
Ringraziamenti
ringraziamo Ulf Hannestad per lo svolgimento delle prove respiro ureasi, Inga-Lill Andersson e Gunilla Strand per un aiuto con le procedure gastroscopic, e Marja Tjädermo per l'assistenza tecnica. Questo lavoro è stato sostenuto da AstraZeneca R & D, Svezia.
Autori fascicoli presentati originali per
di seguito sono riportati i link ai degli autori fascicoli presentati originali per immagini. 'file originale per la figura 1 12876_2004_88_MOESM2_ESM.ppt Autori 12876_2004_88_MOESM1_ESM.ppt autori file originale per il file originale figura 2 12876_2004_88_MOESM3_ESM.ppt degli autori per la figura 3 Competere interessi
Nessuno dichiarati.

• Incomplete metaplasia gastrica nei bambini con diabete mellito insulino-dipendente e malattia celiaca. Uno studio ultrastrutturale
• Espressione di siero miR-20a-5p, let-7 bis, e miR-320a e le loro correlazioni con pepsinogen in gastrite atrofica e cancro gastrico: un caso-controllo study