Azoto oksido-endogeninio inhibitorius skrandžio rūgšties sekrecija Išskirtas žmogaus skrandžio liaukų

Azoto oksido endogeninė inhibitorius skrandžio rūgšties sekrecijos pavieniais žmogaus skrandžio liaukų
Anotacija
faktai
endotelio azoto oksido (eNOS) anksčiau buvo aptikta liaukų dalis žmogaus skrandžio gleivinę. Be to, azoto oksido (NO) buvo įrodyta, kad įtakos skrandžio sekreciją su įvairiais gyvūnų modeliais. Šis tyrimas buvo atliktas siekiant ištirti išoriškai įtaką ir organizme kilęs Nr histamine- ir cAMP skatino skrandžio rūgšties sekrecijos pavieniais žmogaus oxyntic liaukos.
Metodai
Oxyntic liaukų išskirtos iš žmogaus skrandžio biopsijos, o vėliau buvo iš anksto gydomiems su NO donorai ir azoto oksido synthase inhibitorių ir po to paveikiami histamino ar dibutyryl stovykla (dB-cAMP). Sekrecijos atsakas liaukos buvo nustatyta kaip kaupimo [ 14C] aminopyrine.
Rezultatai Viesbutis The histamine- ar DB-cAMP sukeltos rūgšties sekrecijos buvo sumažintos L-arginino, žinomo šaltinio endogeninio NO , o taip pat iš NO-donorai natrio nitroprusidu (SNP) ir S-nitrozo-N-acetil-penicilamino (SNAP). Iš anksto apdoroti su bet kuriuo iš AOS inhibitorių N G-nitro-L-argininas metilo esterio (L-PAVADINIMAS) arba N G-nitro-L-argininas (L-NNA) padidintas sekrecijos atsaką.
Išvada
Mūsų rezultatai rodo, kad NE slopina skrandžio rūgšties sekreciją pavieniais žmogaus skrandžio liaukų, ir kad yra endogeninė formavimas NO per liaukinio epitelio į pakauškaulio ląstelių kaimynystėje.
Background
azoto oksido (NO) yra pagamintas iš L-arginino, reakcijai katalizuojamos fermentui azoto oksido sintazės (NOS) [1, 2]. NO yra svarbus biologinis signalizacijos molekulė, kuri turi įtakos cirkuliaciją, reguliuojant kraujagyslių lygiųjų raumenų tonusą ir moduliuojant sisteminį kraujospūdį. Be to, jokia dalyvauja nervinių impulsų perdavimą; , jis yra svarbus veiksnys uždegiminio atsako ir imunitetą [3-5]; ir tai buvo įrodyta, kad daryti teigiamą poveikį gleivinės gynybos virškinimo sistemą. Keliuose tyrimuose (peržiūrėti žr [6]), chemiškai sukeltos gleivinės pažeidimas atrodė būti sumažintas vienu metu to NO ir sumažėja pašalinus NO iš skrandžio gleivinę. Paaiškinimas dėl šių argumentų gali būti, kad NE padidina gleivinės kraujotaką [7], ir buvo pasiūlyta, kad NE padidina gleivių išsiskyrimą [8]. Ji yra tikėtina, kad NO taip pat dalyvauja kitų sekrecijos procesų reguliavimo virškinimo sistemos. Takeuchi ir [9] bendradarbiai, pranešė, kad NE slopina dvylikapirštės žarnos bikarbonato sekreciją, o kiti tyrėjai pasiūlė bikarbonatas sekreciją skatina ne [10, 11]. Be to, keli tyrimai parodė, kad NE įtakos skrandžio rūgšties [12-16] sekreciją.
Gyvūnų eksperimentai pateikė prieštaringą informaciją apie tarp NO ir skrandžio rūgšties sekrecijos sąveika. Pavyzdžiui, tyrimai in vitro parodė, kad NE stimuliuoja sekreciją skrandžio rūgšties pele [17, 18] ir BULLFROG [19]. Be to, panašūs rezultatai buvo gauti šunims [12]. Tačiau kiti tyrimai parodė, kad NE slopina skrandžio rūgšties sekreciją žiurkėms [13, 14], skrandžio liaukų išskirtų iš triušių [15], ir gleivinės nuo rupūžių [16]. Tyrimai žmonėms teikiama informacija, rodanti, kad joks gali tiek slopina ir padidinti intragastrinį pH [20, 21], tačiau ji dar nėra žinoma, kaip šis junginys dalyvauja skrandžio rūgšties sekreciją žmonėms.
ankstesnio tyrimo, mes nustatėme, morfologinė parama, kad endogeninė NE vaidina svarbų vaidmenį reguliuojant Išorinis ląstelių funkciją [22]. Be to, imunohistocheminius duomenys tą tyrimą atskleidė endogeninio NOS buvimą epitelinių ląstelių normaliam žmogaus oxyntic gleivinės, tiksliau, tiek paviršinius gleivinės ląsteles ir endokrininių ląstelių. Be to, mes nustatėme, kad buvo artimi ryšiai eNOS teigiamų ląstelių ir pakauškaulio ląstelių arba dėl to, kad eNOS teigiamas ląsteles kreiptasi pakauškaulio ląsteles per citoplazmos procesų ar buvo invaginated pagal Parietal langelį. Remiantis šiais duomenimis, kartu su chemines savybes NO, mes išvada, kad nėra kilęs iš endokrininių-kaip ląstelių gali būti paracrine reguliatorius skrandžio rūgšties sekrecijos. Šioje studijoje, mūsų tikslas buvo patikrinti egzogeninės jokio poveikio histamine- ir cAMP skatino skrandžio rūgšties sekreciją žmonėms, o taip pat siekiant nustatyti, ar organizme Išvestinis turi funkcinį poveikį žmogaus pakauškaulio ląsteles.
Metodai
Dalykai ir etinį patvirtinimą
dvidešimt keturių sveikų vyrų kurių amžius nuo 22 iki 31 metų buvo įdarbinti kaip mokamos savanorių. Atrankos kriterijai buvo nustatyta, kad tiriamieji turėjo būti laisvas nuo ligų ir neturėtų vartojote vaistus ar užsikrėtęs alkoholio bent vieną savaitę prieš egzaminą. Vyrai pasninkavo bent šešias valandas prieš tyrimą.
Gerklės anestezija buvo sukeltas su lidokaino aerozoliu (Xylocain ®, "AstraZeneca", Södertälje, Švedija), po kurio įprastas gastroskopija buvo atliktas naudojant Olympus GIF-100 endoskopą. Žiupsnelis biopsijos žnyplės ( "Olympus" FB 24K-1) buvo naudojama imtis audinių pavyzdžius iš didesnio kreivumo, iš karto distalinio į dugno. Visų dalykų, skrandžio gleivinės atrodė normalu, tiek makroskopinis ir histologiškai. Visos temos, neužkrėsti Helicobacter pylori
infekcijos ureazės iškvepiamo oro testu (Diabact ® ubt 50 mg 13C-karbamido, Diabact AB Upsala, Švedija).
Eksperimentinės procedūros buvo patvirtinta Regioninis etikos komitetas žmogaus tyrimų University Hospital, Linköping, Švedija (. byla Nr 02-039), ir visi dalykai davė informuoti sutikimą.
secretory tyrimas
izoliaciją ir inkubacijos skrandžio liaukų Viesbutis The dabartiniai eksperimentai buvo remiantis techniką, kad pirmą kartą buvo aprašyta 1976 naudoti su triušiais in vitro [23] ir yra dabar aiškiai nustatytas netiesioginio nustatymo skrandžio rūgšties sekrecijos, kurią sukelia įvairių dirgiklių. iš pradžių buvo sukurta, kad būtų izoliuoti skrandžio liaukų metodas gyvūnų audinių, tačiau vėliau buvo patikslinti, kad jis taip pat gali būti taikomas mažais žmogaus audinių [24].
žmogaus oxyntic gleivinės biopsijos naudojami mūsų tyrime buvo nuplauti ir saugomi ne ilgiau kaip 15 minučių ledinio deguonies fosfato-buferio druskų tirpalo (PBS). Audinių mėginiai buvo supjaustyti į mažesnius gabalėlius su žirklėmis ir perkelti į deguonies (100% O 2) kolagenazės fermento tirpalo (130,0 mmol NaCl 12,0 mmol NaHCO 3, 3,0 mM Na 2HPO 4, 3,0 mM K 2HPO 4, 2,0 mm MgSO 4, 1,0 mm CaCl 2, 0,1 mm F (alfa) -tosyl L-lizinas chlormetil ketonas [ ,,,0],TLCK], 10 mkm indometacino, 10 mM gliukozės, 2 mg /ml žmogaus serumo albuminas [HSA; Sigma], ir 1 mg /ml kolagenazės IA tipo [Sigma]). Mišinys supilamas į 37 ° C vandens vonią, kurioje buvo maišomas 120 minutes, po to dauguma gydytų pavyzdį buvo dezintegravo, paliekant daugiausia izoliuotas skrandžio liaukų. Mišinys vėliau buvo filtruojamas per 200 mikronų tinklelio. Izoliuoti liaukos buvo plaunami ir vėl sustabdytas pašildytame (37 ° C) kvėpavimo terpės (132,4 mmol NaCl 1,0 mm NaH 2PO 4, 1,2 mm MgSO 4, 5.4 mM KCl, 5,0 mM Na 2HPO 4, 1,0 mM CaCl 2, 10 mkm indometacino, 10 mM gliukozės, ir 2 mg /ml HSA). Tuomet liaukos buvo perkelti į buteliukuose šviežią kvėpavimo terpę, į kurią mes pridėjome vieną iš šių veiksmų: NOS inhibitoriai N G-nitro-L-argininas metilo esteris (L pavadinimas; 1 mmol /l) arba lygiavertės sumos jo biologiškai neaktyvus enantiomeras N G-nitro-D-arginino metilo esterio (D-PAVADINIMAS); NOS inhibitorius N G-nitro-L-argininas (L-NNA; 0,1 mmol /l); į abi puses nuo du NO donorais natrio nitroprusido (SNP; 1 mmol /l) ir S-nitrozo-N-acetil-penicilamino (SNAP; 0,1 mmol /l); už endogeninis NO gamybai, L-arginino (0,1 mmol /L) [15] substratas. Visi liaukų suspensijos, įskaitant tuos, kurie buvo nestimuliuotos, buvo inkubuojami kratymo vandens vonioje iki 37 ° C temperatūroje 30 minučių, po kurio mes įdėta histamino, kad galutinė koncentracija 50 mkmol /L arba dibutyryl-cAMP (DB-cAMP), kad būtų galutinės koncentracijos 1 mmol /L. Norėdami išvengti degradacijos ciklinių nukleotidų, mes pridėjome 0,1 mmol /l 3-izobutil-1-methylxantine (IBMX) visiems dirginimų.
Nustatymas [14C] aminopyrine kaupimo santykis
nusistovėjęs metodas, naudojamas netiesiogiai išmatuoti sulčių sekreciją izoliuotų skrandžio liaukų yra nustatyti kaupimosi 14C žymėto aminopyrine (AP) yra liaukų savo ir virš nuosėdų po centrifugavimo ir tada apskaičiuoja skirtumą tarp šių dviejų dydžių santykis (vadinamą AP santykis) [23] , Trumpai tariant, rūgšties sekrecijos buvo stimuliuojama 37 ° C temperatūroje 40 minučių, o po to 0,5 μCi [ 14C] ženklinti aminopyrine buvo įtraukta į buteliukų, kurie buvo tada toliau inkubuojamas 37 ° C temperatūroje 90 minučių. Po to, liaukos pakaba buvo perkeltas į prieš tai buvo išdžiovintas ir pasvertus vamzdžių, kurie buvo centrifuguojamos 4000 apsisukimų per minutę dvi minutes. Supernatantas buvo pašalintas ir perkelti į scintiliacijos buteliukus. Granulės (liaukos) buvo džiovinamas 100 ° C, ir buvo nustatyta sausos masės, ir kad liaukos vėliau buvo resuspenduotas 0,5 mol /L NaOH esant 60 ° C ir perkelti į scintiliacijos buteliukus. Iš liaukų radioaktyvumas ir viršutinis sluoksnis buvo nustatytas scintiliaciniame skaitiklis (1214 RackBeta, "LKB), ir AP santykis buvo apskaičiuojamas pagal šią formulę [24]:
kur IGW yra intraglandular vandens tūris (= 2 × sausas svoris liaukos mg).
faktai kaupimas AP yra įtrauktas į vertybių, išreiškiančių sekrecijos atsakymą. AP santykis fone ir histamino-ir DB-cAMP skatino sąlygų skyrėsi tarp individų. Taigi, kiekvieno dalyko, nustatėme, AP santykis skatino liaukų ir manė, kad vertė būtų 100% ir naudojo jį kaip individualią pamatinę vertę. Visos vertės paremtos atskirų analizių.
Statistics
Duomenys buvo analizuojami vieno pavyzdžio ženklas testus lyginant vidutinė reikšmė per Minitab ™ statistikos programinė įranga. P vertes mažesnis nei 0,05 buvo laikomas reikšmingu.
Imunohistocheminis
Izoliuoti skrandžio liaukos iš penkių tiriamųjų buvo pateikti kaltinamas Super Frost * /Plius stikliukų (Menzel-Glaser, Vokietija) ir nuplaunami PBS ir membranos pralaidumu 100 % etanolio -70 ° C temperatūroje 5 min. Po to, skaidres buvo inkubuojamos kambario temperatūroje per naktį su triušio anti-NOS3 antikūno (1: 1000; Santa Cruz Biochemicals) ir tada kruopščiai išplauti PBS ir inkubuojami 1 h su biotinilintu ožkos anti-triušio antrinio antikūno. Skaidrės, kur pirminis antikūnas buvo paliktas tarnavo kaip neigiamos kontrolės. Skaidrės vėliau buvo išplauti ir vėl biotinilinto antikūnų buvo aptikta poveikio 20 mikrogramų /ml, Teksasas Red ® avidino (Vector Laboratories) 1 val. Po šio gydymo, skaidrės buvo plaunami ir coverslipped naudojant Vectashield ® montavimo terpę. Nikon Eclipse " ® E800 fluorescencijos mikroskopijos su VFM EKI-fluorescencijos areštas buvo išnagrinėti ir įvertinti skaidres. Praleidimo dažnių filtras su bangos ilgio diapazone 520-560 nm ir ilgą perdavimą filtru, kurio atskirtos nuo bangos ilgiui 590 nm (už skleidžiamos šviesos) dirbo vizualizuoti Texas Red ® molekulių.
Hematoksilinu ir eozinas dažymo
dėl morfologinės vertinimą liaukos buvo fiksuotas ant stiklo tepinėlių ir nudažomos su Harris hematoksilinu penkias minutes ir 0,5% eozino Y dvi minutes. Kiekvienas žingsnis sekė iš čiaupo vandeniu išskalauti.
Rezultatai
Mes studijavo NE poveikį rūgšties sekrecijos sukelto įvairių stimuliatorių skrandžio liaukų išskirtų iš skrandžio biopsijos iš žmogaus. Morfologinis nagrinėjimas iš hematoksilinu-eozinas-tamsintas skaidres parodė, kad izoliacija procedūra buvo sėkmingai davė visą liaukų preparatai ir kad parietalinės ląstelės buvo pateikti skrandžio liaukų. Imunohistocheminis analizė parodė, kad atskiri liaukos esančios Eno-imunoreaktyviųjų ląsteles (1 pav.), Kurios sutinka su rezultatais, gautais naudojant kitų tipų gleivinės preparatų [22]. Kontrolės eksperimentai buvo pagrindinis antikūnų buvo pašalintas neparodė reaktyvumas. 1 pav IMUNOFLUORESCENCIJOS izoliuotos skrandžio liaukos. Immunolocalization Taigi Eno (rodykles) A ​​skrandžio liaukos, izoliuoto nuo žmogaus oxyntic gleivinės buvo pasiektas naudojant triušio prieš eNOS polikloninis antikūnas. Rezultatai buvo ryškinamos su Teksaso Red®-konjuguoto ožkos anti-triušio IgG. Baras = 30 mkm
Bendroji AP-kaupimosi
faktai A. kaupimas buvo pastebėtas izoliuotų liaukų, kurių vidutinis AP santykis 8.6. (Diapazonas 2.5-22.1; n = 19). Davus 50 mikromoliai /L histamino ar db-Camp 1 mmol /l, mediana AP santykis buvo 24,7 (5.8-64.5; n = 16) ir 38,2 (ribos 7,6-47,8; n = 11), atitinkamai. Atsakas į tiek histamino ir DB-cAMP viršijo fone maždaug 2-4 visiems preparatams, faktoriaus (2 pav. Ir 3). 2 pav kaupimasis 14 C žymėto aminopyrine į histamino-skatino skrandžio liaukų. Visi dydžiai yra išreikšti kaip proc skrandžio rūgšties sekrecijos, kurią sukelia histamino (laikomi 100%), kuri buvo apskaičiuota atskirai nuo skrandžio liaukų, išskirtų iš kiekvienos iš sveikų savanorių. Kiekvienas simbolis atstovauja vienam atskiram rezultatus. a) kaupimas 14C-aminopyrine liaukomis gydytiems su donoro natrio nitroprusidu (SNP, 1 mmol /l) arba L-arginino (0,1 mmol /l), pagal endogeninio NE gamybos substrato. Tai galima pastebėti, kad SNP ženkliai sumažintas AP kaupimosi (mediana = 48%; p < 0,05), o tai rodo, kad NE slopina rūgšties sekreciją iš izoliuotų liaukų. Fono 14C aminopyrine kaupimas (bg) taip pat parodė. b) kaupimas 14C-aminopyrine skrandžio liaukų gydytiems su NOS inhibitoriai L-NNA (0,1 mmol /l) ir L-vardas (1 mmol /l), atitinkamai. L PAVADINIMAS didino kaupimosi (mediana = 147%; p < 0,05), rodo, kad rūgšties sekrecijos yra padidėjusi, kai endogeninė NE gamyba negali, nurodydamas slopinančiu vaidmenį endogeninio nėra žmogaus skrandžio liaukų. D-name, kuris yra biologiškai neaktyvūs aparatūra izomeras L-name, neturėjo įtakos rūgšties sekrecijos poveikį, todėl ji buvo naudojama kaip kontrolės medžiagą.
3 paveikslas kaupimas 14 C žymėto aminopyrine į db- cAMP skatino skrandžio liaukos. Visi dydžiai yra išreikšti kaip proc vertė, nurodanti skrandžio rūgšties sekrecijos sukelto DB-cAMP (laikomi 100%), kuri buvo apskaičiuota pagal kiekvieną iš studijuojamų dalykų. Kiekvienas simbolis atstovauja vienam atskiram duomenis. a) Apdorojimo su SNP (mediana = 63%; p < 0,05) arba SNAP (mediana = 81%; p < 0,05), kad atlaisvintumėte egzogeninės NO prieš pridedant DB-stovykla skatinti rūgšties sekreciją sumažino 14C-aminopyrine kaupimąsi skrandžio liaukos, palyginti su lygiais sekrecijos matyti neapdorotų liaukų. Tai rodo, kad jokio gali rūgšties sekrecijos slopinimo skrandžio liaukų, išskirtų iš žmonėms. b) apdorojimas L-NAME slopina NOS skrandžio liaukų padidino 14C-aminopyrine kaupimosi po stimuliacijos db-cAMP (mediana = 152%; p < 0,05). Šie rezultatai rodo, kad NE slopina DB-cAMP sukeltą rūgšties sekreciją. NO substratas L-argininas sumažino 14C-aminopyrine kaupimosi DB-cAMP, stimuliuotų liaukų (mediana = 77%; p < 0,05). Fono kaupimas (bg) taip pat parodė.
Poveikis NO donorų ir NOS inhibitoriai apie histamino skatino skrandžio rūgšties sekrecijos
Paruošiamasis izoliuotų liaukų su egzogeninės donoro SNP (1 mmol /l) sumažino histamino atsakas į 48% (n = 7) į gydymo efektyvumo ne iš anksto gydytų liaukų (100%) mediana. Keturiose iš penkių liaukų preparatų, dėl endogeninės substratas NE formavimas, L-argininas (0,1 mmol /l), sumažėjo AP santykį. Tačiau šis poveikis nebuvo statistiškai reikšmingas (pav. 2a). Kai izoliuoti liaukos iš anksto buvo gydomi NOS inhibitoriaus L-vardas (1 mmol /l), ir po to paveikiami histamino, AP santykis buvo žymiai padidėjusi iki vidutiniškai vertės 147% (n = 13). Nors buvo išbandytas nedidelis skaičius asmenų, L-NNA (0,1 mmol /l), gautos panašų rezultatą; 172% (n = 2). Palyginimui, kontrolės eksperimentų, L-PAVADINIMAS analoginis D-name (1 mmol /l) neturėjo įtakos ne viskas histamino skatino rūgšties sekrecijos (pav. 2b).
Poveikis NO donorai ir NOS inhibitoriai DB -cAMP-stimuliuotą skrandžio rūgšties sekrecijos
atidengimas izoliuotas liaukų dB-cAMP padidėjo skrandžio rūgšties sekrecijos, palyginti su foninio lygio. Palyginti su neapdorotų liaukų, tie, kurie iš anksto buvo gydomi SNP (1 mmol /l) arba SNAP (0,1 mmol /L) sukaupta mažiau AP po stimuliacijos DB-cAMP; 63% (n = 9) ir 81% (n = 8) atitinkamai (. 3a pav). Be to, panašus į histamino-stimuliuojama sekrecijos, db-cAMP sukeltas sekrecijos buvo didinama iki 152% (n = 9) vidurinės linijos dalyje liaukų kurie buvo iš anksto apdorotas su L-vardas (1 mmol /l). Nors ne dėl L-arginino dėl histamino-stimuliuojama rūgšties sekrecijos poveikis gali būti vertinamas, buvo didelė L-arginino poveikis DB-cAMP sukeltos sekrecijos. Rūgštis produkcija buvo slopinamas iki 77% (n = 10), vidutiniškai tose valytas su L-argininas (0,1 mmol /l) (pav. 3b).
Diskusija
naudojant izoliuotas skrandžio liaukų metodu in vitro yra gerai tinka mokytis tarp skrandžio rūgšties sekrecijos ir įvairių endokrininių signalų sąveiką. Šis metodas buvo įvertinta, daugiausia eksperimentuose su gyvūnais, ir tai buvo pranešta pasiūlyti gerą atgaminimas [23]. Be to, iš skrandžio liaukų išskirtų iš skrandžio biopsijos paimti iš žmonių tyrime [24], buvo nustatyta, kad tiek histamino ir db-Camp sukeltas sekrecijos atsakymus, kurie buvo atkuriamas, kai pakartojama, naudojant liaukų preparatai nuo to paties dalyko, nors buvo labai interindividiniai variacija. Fellenius ir kt. [24] ir Haglund ir kt. [25], pranešė, kad abu histamino ir DB-cAMP stimuliuojama skrandžio rūgšties išsiskyrimą iš izoliuotų žmogaus skrandžio liaukų, ir tai buvo pastebėta, kaip nuo dviejų iki tris kartus padidinti AP kaupimo, palyginti su foninio lygio. Šie rezultatai sutinkate su mūsų gautais duomenimis naudojant histaminą ir db-stovyklą. Ji yra žinoma, kad SNP išleidžia ne [26], ir mūsų eksperimentų SNP sumažintas skrandžio rūgšties sekrecija iš izoliuotų liaukų. Taigi, NE slopina rūgšties sekreciją izoliuotų žmogaus skrandžio liaukų. Kai kurie iš SNP poveikis gali būti dėl citotoksinių sąveiką, nors toks poveikis nėra buvo rastas izoliuotų triušių skrandžio liaukų [15] tyrime. Norėdami paneigti citotoksinio poveikio galimybę, mes atliekame papildomas eksperimentus per donoro SNAP, kuri cheminių savybių, kurios skiriasi nuo tų, SNP. Tuose eksperimentuose, mes nustatėme tą patį sumažinimą AP kaupimo po stimuliacijos db-stovyklą, o tai dar labiau palankioje išvadą, kad NO iš tiesų atsakingai pastebėto rezultatus. DB-cAMP-stimuliuojama liaukų, indukuotas sekrecijos atsakas buvo sumažintas L-arginino, junginio, kuris priklauso nuo to, endogeninio faktoriaus (ty, eNOS) generuoti NE, nors toks sumažinimas ne tiek daug, kaip mažėja, sukeltos SNP ir akimirksniu. Yra daug galimų paaiškinimų šios stebėsenos skaičius. Jei ten buvo pakankamai jau L-arginino liaukų išlaikyti NO gamybą eksperimento metu, L-arginino todėl buvo be poveikio. Be to, L-argininas gali turėjo silpną poveikį, nes NO efektas gaunamas, per tiekėjų arba žemyn reguliavimo fermento NOS ir buvo neturi įtakos prieigos prie substrato. Nepaisant to, L-argininas nebuvo sumažinti AP kaupimą, nors ne tiek, kiek padarė Šiuo dozių egzogeninės NO donorai. Tai rodo, kad kai kurie specifinių procesų yra atsakingas už gamybos jokio iš L-arginino, atskirtose skrandžio liaukų. Šie rezultatai sutampa su tyrimų rezultatus, rodančius, kad SNP, SNAP, ir L-arginino slopinamas histamino-skatino rūgšties sekreciją iš skrandžio liaukų išskirtų iš gyvūnų [13, 15]. L-argininas taip pat buvo pastebėta, kad sumažinti carbachol stimuliuojama rūgšties sekreciją rupūžių [16].
Ankstesniame tyrime, kurį atliko mūsų tyrimų grupės [22], nagrinėjimas liaukinio epitelio egzempliorių žmogaus oxyntic gleivinės atskleidė, kad vienas tikro tipo ląstelių, kurių numeriai. Šie eNOS-imunoreaktyvių ląstelės, apibrėžiamos kaip endokrininių ląstelių, buvo glaudžiai liečiasi su pakauškaulio ląsteles. Šie du charakteristikos rodo, kad ląstelės Tokio tipo išleidimo NO, kuris taip gali būti paracrine reguliatorius, kad tiesiogiai veikia parietalinių ląstelių funkciją. Ši prielaida gali būti remiama pagal kitų sąlygų. Pavyzdžiui, NE gali lengvai prasiskverbti ląstelių membranas, kurios gali reikšti ląstelėje puslapį veiksmų. Be to, NE yra gana trumpa gyvenimo trukmė, kuri reiškia, kad šaltiniai reikia generuoti šį oksidas turi būti prieinami arti NE tikslinės langelį. Šiame tyrime Taigi Eno pasitaiko liaukų yra rodomas, bet anksčiau platus tyrimai, naudojant antikūnus tiek nNOS ir iAOS neparodė kokių nors dviejų izoformų į liaukinio epitelio įprastų žmogaus organizmui (neskelbtas stebėjimo). Panašus į gautų rezultatų nuo izoliuotų triušių skrandžio liaukų [15] Tyrimas, mes nustatėme, kad NOS inhibitoriai L-PAVADINIMAS ir L-NNA, bet nėra D-PAVADINIMAS, papildyta sekrecijos stimuliuojančio poveikį histamino, kuris taip pat parodo, kad atskiri žmogaus liaukos mes naudojome esančius fermentą NOS. Tiek į AP santykio padidėjimą, kad mes stebima slopinimo NOS ir sekrecinėse atsakymų sumažėjimas kad mes pažymėta liaukų gydomiems L-arginino sustiprinti hipotezę, kad NO gaminamas ląstelių liaukinio epitelio ir, kai išleido, ji trukdo su priverstine rūgšties sekreciją. Įdomu tai, kad minėti pastebėjimai rodo, kad NO išsiskyrimas pastovus, nepriklausomai nuo to, ar rūgšties sekrecija stimuliuojama, o tai reiškia, kad nė vienas veikia kaip endogeninis inhibitorių skrandžio rūgšties sekreciją. Šio slopinimo intensyvumas tikriausiai priklauso nuo skaičiaus eNOS-, kurių sudėtyje yra endokrininę sistemą kaip ląsteles, kurios yra toje parietalinių ląstelių apylinkės.
Tikslius mechanizmus už šio paracrine reguliavimo skrandžio rūgšties sekrecijos yra dar turi būti išaiškintas. Yra keletas skirtingų grandžių parietalinių ląstelių, kurios gali būti paveiktos Nr. Tai gali sukelti ADP ribosylation G-aktino [27], taip darydami įtaką citoskeleto. Tai gali būti svarbu morfologinių pokyčių, pakauškaulio ląstelių eksponuoti per rūgšties sekreciją. Todėl, jei NE Ar turite nuolatinį poveikį elemento, kaip antai citoskeleto, ji gali vaidinti svarbų vaidmenį pasiūlytą Forte et al membrana perdirbimo hipotezę. [28]. Trumpai tariant, kad teorija teigia, kad parietalinės ląstelės atlikti šiuos morfologinius pokyčius: jie turi didelę aktyvaus sekrecijos paviršių stimuliavimo fazės metu, ir jie parodys minimalų aktyviai sekrecijos paviršių ramybės fazėje
Kadangi yra žinoma, kad guanilatciklazės yra. bendrasis tikslas NO ir daugelio ląstelių sistemų, kai tyrėjai pasiūlė, kad jokio daro savo poveikį per, ciklinio guanozino-3 ', 5'-monofosfatas (cGMP) abiem žiurkių ir triušių parietalinėse ląstelėse [13, 15]. Nuolatinis tyrimas mūsų laboratorijoje parodys, ar tai yra žmogaus pakauškaulio ląsteles. Tolesni poveikis GMP gali apimti aktyvavimo iš vykdomuosius, pavyzdžiui, jonų kanalais, baltymų kinazės ir fosfodiesterazių [29] skaičius. Taip pat tikėtina, kad NE gali daryti jos poveikį vieni, be veikdama per kitų signalinių molekulių. Pagal eksperimentinių sąlygų, NE gali sukelti nitrosylation ir nitracijai mobiliųjų baltymų, nors tai tikriausiai ne in vivo atveju, nes šie du procesai dažnai lemia ilgalaikę žalą gyvybinių funkcijų [30]. Yra galimybė, kad rūgšties sekrecijos slopinimo įvyksta ne tik parietalinių ląstelių lygiu, bet per kitų ląstelių tipų. ECL-ląstelės yra turbūt esančių liaukų preparato ir žiurkėms, šios ląstelės turi galimybę išleisti histamino reaguojant į [31] padidėjo ląstelėje lygių stovyklą. NE gali slopinti šį histamino išsiskyrimą [14] ir taip toliau prisidėti prie rūgšties sekrecijos slopinimo. Nors yra mažai žinoma apie žmogaus ECL ląstelių ir Nr histamino atpalaidavimo poveikio yra tyrimų, kurie rodo, rūšinių skirtumų kitose histamino išskiriančių ląstelių. Pavyzdžiui, buvo įrodyta, žiurkė putliųjų ląstelių gaminti "ne-kaip veiksnys", kuris slopina histamino išsiskyrimą [32], nors yra tyrimų, kurie rodo, kad nė neturi įtakos histamino sekreciją žmogaus bazofilų [33]. Šiuo metu mes galime
nustatyti skirtumus tik slopinančio atsakas į L-argininas histamino ir DB-Camp stimuliacijos.
Tolesni tyrimai reikalingi išaiškinti jokio vaidmens Išorinis ląstelių funkciją. Išvados
išvadų Šis tyrimas rodo, kad NE gaminamas organizme žmogaus oxyntic gleivinės gali sumažinti stimuliavimo poveikis histamino ar db-camp skrandžio rūgšties sekreciją. Gavome vienodus rezultatus skrandžio liaukų išskirtų iš įvairių sveikų žmogaus organizmui, o tai reiškia, kad NE paleistas iš specifinių ląstelių per sekrecijos gleivinės vaidina svarbų fiziologinį vaidmenį skrandžio rūgšties sekrecijos reguliavimas.
Deklaracijos
Padėka
dėkojame Ulf Hannestad atlikti ureazės kvėpavimas bandymus Inga-Lill Andersson ir Gunilla Strand pagalbos su gastroscopic procedūras ir Marja Tjädermo techninei pagalbai. Šis darbas buvo remiamas AstraZeneca R & D, Švedija.
Autorių originalios pateikti failai vaizdų
Žemiau išvardintos nuorodos į autorių originalių pateiktų failų vaizdų. 12876_2004_88_MOESM1_ESM.ppt Autorių originalus failas 1 pav 12876_2004_88_MOESM2_ESM.ppt Autorių originalaus failo 2 pav 12876_2004_88_MOESM3_ESM.ppt Autorių originalaus failo 3 pav konkuruojančių interesų
Nėra deklaruotus.

• Nepilna skrandžio metaplazija vaikams, sergantiems nuo insulino priklausomu cukriniu diabetu ir celiakija. Ultrastruktūriniai study
• Išraiška serume miR-20a-5P, tegul-7a ir Pasaulis-320A ir jų koreliacija su pepsinogen į atrofinį gastritu ir skrandžio vėžio: atvejo ir kontrolės study