D'oxyde nitrique endogène d'un inhibiteur de la sécrétion d'acide gastrique en un oxyde inhibiteur gastrique humain isolé glands

nitrique endogène de la sécrétion d'acide gastrique chez des glandes gastriques humaines isolées
Résumé de l'arrière-plan
endothéliale de l'oxyde nitrique synthase (eNOS) a déjà été détectée dans la partie glandulaire de la muqueuse gastrique humaine. En outre, l'oxyde nitrique (NO) a été montré pour influencer la sécrétion gastrique chez divers modèles animaux. La présente étude a été menée pour étudier l'influence de manière exogène et endogène dérivé NO sur la sécrétion d'acide gastrique histamine et stimulé par l'AMPc dans les glandes oxyntiques humaines isolées.
Méthodes
glandes oxyntique ont été isolés à partir de biopsies gastriques humaines et ont ensuite été pré a traité des avec les donneurs de NO et les inhibiteurs de l'oxyde nitrique synthase, puis exposé à l'histamine ou dibutyryl-AMPc (db-AMPc). La réponse sécrétoire de la glande a été déterminée comme étant l'accumulation de [ 14C] aminopyrine
. Résultats
la sécrétion d'acide ou d'histamine db-AMPc induite a été atténuée par la L-arginine, une source connue de NO endogène et aussi par le nitroprussiate de donneurs de NO sodium (NPS) et S-nitroso-N-acétyl-pénicillamine (SNAP). Prétraitement avec soit des inhibiteurs de la NOS N G-nitro-L-arginine méthyl ester (L-NAME) ou N G-nitro-L-arginine (L-NNA) l'amélioration de la réponse sécrétoire.
Conclusion
Nos résultats montrent que le NO inhibe la sécrétion d'acide gastrique chez des glandes gastriques humaines isolées, et qu'il y a formation endogène de NO dans l'épithélium glandulaire au voisinage des cellules pariétales.
fond
oxyde nitrique (NO) est produit à partir de la l-arginine dans une réaction catalysée par l'enzyme synthase de l'oxyde nitrique (NOS) [1, 2]. Le NO est une molécule de signalisation biologique importante qui influe sur la circulation en régulant le tonus vasculaire, le muscle lisse et la modulation de la pression artérielle systémique. En outre, le NO est impliqué dans la neurotransmission; il est un facteur critique dans la réponse inflammatoire et l'immunité [3-5]; et il a été démontré que pour exercer des effets positifs sur la défense de la muqueuse du système gastro-intestinal. Dans plusieurs études (pour revue, voir [6]), lésions de la muqueuse induite chimiquement semblait être réduite par addition simultanée de NO et de facultés affaiblies par l'élimination de NO à partir de la muqueuse gastrique. Une explication de ces résultats pourrait être que le NO augmente le flux sanguin de la muqueuse [7], et il a été suggéré que le NO augmente la libération de mucus [8]. Il est probable que le NO est également impliquée dans la régulation d'autres processus sécrétoires dans le système gastro-intestinal. Takeuchi et ses collègues [9] ont rapporté que le NO inhibe la sécrétion de bicarbonate duodénal, alors que d'autres chercheurs ont proposé que la sécrétion de bicarbonate est stimulée par NO [10, 11]. En outre, plusieurs études ont montré que le NO affecte la sécrétion d'acide gastrique [12-16].
Expériences sur les animaux ont fourni des informations contradictoires au sujet de l'interaction entre le NO et la sécrétion d'acide gastrique. Par exemple, des études in vitro ont montré que le NO stimule la sécrétion d'acide gastrique chez la souris [17, 18] et ouaouaron [19]. En outre, des résultats similaires ont été obtenus chez des chiens [12]. Cependant, d'autres études ont montré que le NO inhibe la sécrétion d'acide gastrique chez le rat [13, 14], dans les glandes gastriques isolées chez des lapins [15] et dans la muqueuse de crapauds [16]. Des études sur l'homme ont fourni des données indiquant que le NO peut aussi inhiber et augmenter le pH intragastrique [20, 21], mais il ne sait pas encore comment ce composé participe à la sécrétion d'acide gastrique chez l'homme.
Dans une étude antérieure, nous avons trouvé morphologique NO endogène support qui joue un rôle dans la régulation de la fonction des cellules pariétales [22]. En outre, les données immunohistochimiques de cette enquête ont révélé la présence endogène NSA dans les cellules épithéliales de la muqueuse oxyntique humaine normale, plus précisément, dans les eaux de surface des cellules muqueuses et les cellules endocrines. En outre, nous avons observé qu'il y avait des contacts étroits entre les cellules eNOS-positives et les cellules pariétales, soit parce que les eNOS-positifs cellules contacté cellules pariétales via cytoplasmiques ou ont été invaginée par une cellule pariétale. Sur la base de ces résultats, ainsi que les propriétés chimiques de NO, nous avons conclu que le NO dérivé des cellules endocrines comme pourrait être un régulateur paracrine de la sécrétion d'acide gastrique. Dans la présente étude, notre objectif était de vérifier l'effet de NO exogène sur la sécrétion d'acide gastrique histamine et stimulé par l'AMPc chez l'homme, et aussi pour déterminer si NO endogène dérivé a un effet fonctionnel sur les cellules pariétales humaines.
Méthodes
Sujets et approbation éthique
Vingt-quatre hommes en bonne santé âgés de 22 à 31 ans ont été recrutés comme volontaires payés. Les critères de sélection stipulé que les sujets devaient être exempts de la maladie et ne doivent pas avoir pris des médicaments ou imbibée d'alcool pendant au moins une semaine avant l'examen. Les hommes à jeun pendant au moins six heures avant l'examen.
Pharyngée l'anesthésie a été induite avec de la lidocaïne pulvérisation (xylocaïne ®, AstraZeneca, Södertälje, Suède), après quoi gastroscopie de routine a été effectuée à l'aide d'un Olympus GIF-100 endoscope. Pincez pince à biopsie (Olympus FB 24K-1) ont été utilisés pour prélever des échantillons de tissus provenant de la grande courbure, immédiatement distale du fundus. Chez tous les sujets, la muqueuse gastrique semble être normal, à la fois macroscopiquement et histologiquement. Tous les sujets testés négatifs pour l'infection de Helicobacter pylori dans le test uréase d'haleine (Diabact ® UBT 50 mg 13C-urée, Diabact AB, Uppsala, Suède).
Les procédures expérimentales ont été approuvées par le Comité régional d'éthique de la recherche humaine à l'Hôpital universitaire, Linköping, Suède (Dossier no. 02-039), et tous les sujets ont donné leur consentement éclairé.
étude sécrétoire
Isolement et incubation des glandes gastriques
Les expériences actuelles sont basée sur une technique qui a été décrite la première fois en 1976 pour une utilisation chez le lapin in vitro [23] et est maintenant bien établi pour la détermination indirecte de la sécrétion d'acide gastrique induite par divers stimuli. Le procédé d'isolement de glandes gastriques a été initialement développé pour le tissu animal, mais il a été affiné afin qu'il puisse également être appliquée à de petites quantités de tissus humains [24].
Les biopsies muqueuses oxyntiques humaines utilisées dans cette étude ont été lavées et stocké ne dépassant pas 15 minutes dans une solution saline oxygénée tamponnée au phosphate glacée (PBS). Les échantillons de tissus ont été découpés en petits morceaux avec une paire de ciseaux et on les transfère à oxygénées (100% O 2) Solution enzyme collagénase (NaCl 130,0 mM, NaHCO 12,0 3, Na 3,0 mM 2HPO 4 mM, 3,0 K 2HPO 4 mM, sulfate de magnésium 2,0 4 mM CaCl 1,0 2, 0,1 mM de N (alfa) tosyl-L-lysine chlorométhyl cétone [ ,,,0],TLCK], 10 pM d'indométhacine, du glucose 10 mM, 2 mg /ml de sérum-albumine humaine [SAH; Sigma] et 1 mg /ml de collagénase de type IV [Sigma]). Le mélange a été placé dans un bain-marie à 37 ° C et a été agité doucement pendant 120 minutes, après quoi la majeure partie de l'échantillon traité était désintégré, laissant les glandes gastriques isolées principalement. Le mélange a été ensuite filtré à travers un tamis de 200 um. Les glandes isolées ont été lavées et remises en suspension dans préchauffé (37 ° C) milieu respiratoire (NaCl 132,4 mM NaH 1,0 2PO 4 mM MgSO 1.2 4, KCl 5.4, 5.0 mM de Na 2HPO 4 mM CaCl 1,0 2, 10 pM d'indométhacine, 10 mM de glucose et 2 mg /ml de HSA). Les glandes ont été ensuite transférés dans des flacons contenant du milieu de respiration frais auquel on a ajouté un des éléments suivants: l'inhibiteur de NOS N G-nitro-L-arginine méthyl ester (L-NAME, 1 mmol /L) des quantités ou équivalentes son énantiomère biologiquement inactif N G-nitro-D-arginine, l'ester méthylique de (D-NAME); l'inhibiteur de NOS N G-nitro-L-arginine (L-NNA; 0,1 mmol /L); soit du nitroprussiate de sodium NO deux donateurs (PNS; 1 mmol /l) et de la S-nitroso-N-acétyl-pénicillamine (SNAP; 0,1 mmol /L); le substrat pour la production endogène de NO, la L-arginine (0,1 mmol /L) [15]. Toutes les suspensions des glandes, y compris ceux qui ne sont pas stimulés, ont été incubés dans un bain d'eau sous agitation à 37 ° C pendant 30 minutes, après quoi nous avons ajouté l'histamine à une concentration finale de 50 pmol /L ou dibutyryl-AMPc (db-AMPc) à une concentration finale de 1 mmol /L. Pour éviter la dégradation des nucléotides cycliques, nous avons ajouté 0,1 mmol /L 3-isobutyl-1-methylxantine (IBMX) à toutes les stimulations.
Détermination de la [14C] rapport d'accumulation de aminopyrine
Une méthode bien établie utilisée pour indirectement mesurer la sécrétion d'acide par les glandes gastriques isolées est de déterminer l'accumulation de aminopyrine marqué au 14C (AP) dans les glandes elles-mêmes et dans le surnageant après centrifugation et ensuite calculer le rapport entre ces deux valeurs (appelé le rapport AP) [23] . En bref, la sécrétion d'acide est stimulée à 37 ° C pendant 40 minutes, après quoi 0,5 uCi [ 14C] aminopyrine marqué a été ajouté aux flacons qui ont ensuite été encore incubées à 37 ° C pendant 90 minutes. Par la suite, la suspension de la glande a été transféré dans des tubes préalablement séché et pesé, qui ont été centrifugés à 4000 tours par minute pendant deux minutes. Le surnageant a été enlevé et transféré à des flacons à scintillation. Les pellets (glandes) ont été séchés à 100 ° C, et le poids sec a été déterminé et les glandes ont ensuite été remises en suspension dans du NaOH /L à 0,5 mol à 60 ° C et transférés dans des flacons de scintillation. La radioactivité des glandes et le surnageant a été déterminée dans un compteur à scintillation liquide (1214 Rackbeta, LKB), et le rapport AP a été calculé selon la formule suivante [24]:
où IGW est le volume d'eau intraglandulaire (= 2 × la poids sec des glandes en mg). d'accumulation
d'arrière-plan de l'AP est inclus dans les valeurs représentant la réponse sécrétoire. Les ratios AP pour le fond et les conditions de l'histamine et db-AMPc stimulées différaient entre les individus. Par conséquent, pour chaque sujet, nous avons déterminé le rapport AP pour glandes stimulées et considéré que la valeur à 100% et utilisé comme une valeur de référence individuelle. Toutes les valeurs sont basées sur des analyses simples. Les données de Statistique ont été analysés par des tests signe un échantillon de comparaison des valeurs médianes utilisant Minitab Statistical Software ™. Les valeurs de P inférieures à 0,05 ont été considérées comme significatives.
immunohistochimie
glandes gastriques isolées de cinq sujets de test ont été placés sur le gel chargé de Super * /Plus des lames de verre (Menzel-Gläser, Allemagne), puis lavées avec du PBS et perméabilisées avec 100 % d'éthanol à -70 ° C pendant 5 min. Ensuite, les lames ont été incubées à température ambiante pendant une nuit avec un anticorps anti-lapin NOS3 (1: 1000; Santa Cruz Biochemicals), puis soigneusement lavés dans du PBS et incubées pendant 1 h avec une chèvre biotinylé anticorps secondaire anti-lapin. Diapositives où l'anticorps primaire avait été laissé de côté ont servi de contrôles négatifs. Les lames ont ensuite été lavées de nouveau, et de l'anticorps biotinylé a été détectée par l'exposition à 20 pg /ml de rouge Texas ® avidine (Vector Laboratories) pendant 1 h. Après ce traitement, les lames ont été lavées et sous une lamelle en utilisant Vectashield moyen ® de montage. Un microscope Nikon Eclipse ® E800 de fluorescence avec un attachement EPI-fluorescence VFM a été utilisé pour examiner et évaluer les diapositives. Un filtre passe-bande avec une plage de longueur d'onde de 520-560 nm et un filtre passe-temps avec découpe sur la longueur d'onde à 590 nm (pour la lumière émise) ont été utilisées pour visualiser le Texas Red ® molécules.
Hématoxyline et éosine
pour l'évaluation morphologique, les glandes ont été fixés sur des lames de verre et colorées avec Harris hématoxyline pendant cinq minutes et 0,5% éosine Y pour deux minutes. Chaque étape a été suivie par un rinçage à l'eau du robinet.
Résultats
Nous avons étudié les effets du NO sur la sécrétion acide induite par divers stimulants dans les glandes gastriques isolées à partir de biopsies de l'estomac de l'homme. L'examen morphologique des lames hématoxyline-éosine colorées ont révélé que la procédure d'isolement a donné avec succès les préparations entières de la glande et que les cellules pariétales étaient présents dans les glandes gastriques. L'analyse immunohistochimique a montré que les glandes isolées contenaient des cellules immunoréactives eNOS (fig. 1), ce qui concorde avec les résultats obtenus en utilisant d'autres types de préparations des muqueuses [22]. Des expériences de contrôle étaient l'anticorps primaire a été exclu montré aucune immunoréactivité. Figure 1 immunofluorescence d'une glande gastrique isolée. Immunolocalisation de eNOS (pointes de flèches) dans une glande gastrique isolée de la muqueuse oxyntique humaine a été obtenue en utilisant un lapin d'anticorps polyclonaux-eNOS contre. Les résultats ont été visualisés avec le Texas Red® chèvre conjugué IgG anti-lapin. Bar = 30 pm Contexte AP l'accumulation de
Contexte AP-accumulation a été observée dans les glandes isolées, avec un ratio AP médian de 8,6. (Plage de 2,5 à 22,1; n = 19). Après l'administration de 50 pmol /L d'histamine ou 1 mmol /L de db-AMPc, les ratios médians AP étaient 24,7 (5,8 à 64,5; n = 16) et 38,2 (intervalle de 7,6 à 47,8; n = 11), respectivement. La réponse à la fois à l'histamine et db-AMPc a dépassé le fond par un facteur d'environ 2 à 4 dans toutes les préparations (fig. 2 et 3). Figure 2 Accumulation de 14 C marqué aminopyrine dans les glandes gastriques stimulée par l'histamine. Toutes les valeurs sont exprimées en pour cent de la sécrétion d'acide gastrique induite par l'histamine (considéré comme 100%), qui a été calculée séparément pour les glandes gastriques isolées à partir de chacun des volontaires sains. Chaque symbole représente les résultats pour une seule personne. a) L'accumulation de 14C-aminopyrine dans les glandes prétraitées avec le nitroprussiate donneur de NO de sodium (NPS, 1 mmol /L) ou avec de la L-arginine (0,1 mmol /L), le substrat pour la production de NO endogène. On peut voir que PNS nettement réduit l'accumulation AP (médiane = 48%; p < 0,05), ce qui indique que le NO inhibe la sécrétion d'acide à partir des glandes isolées. Contexte 14C-aminopyrine accumulation (bg) est également affiché. b) L'accumulation de 14C-aminopyrine dans les glandes gastriques prétraités avec la NOS inhibiteurs L-NNA (0,1 mmol /L) et L-NAME (1 mmol /L), respectivement. L-NAME a provoqué une accumulation accrue (médiane = 147%; p < 0,05), ce qui suggère que la sécrétion acide est élevée lorsque la production endogène de NO est empêché, ce qui indique un rôle inhibiteur de NO endogène dans les glandes gastriques humaines. D-NAME, qui est l'isomère stéréo biologiquement inactif de L-NAME, n'a pas eu d'effet sur la sécrétion acide, et il a donc été utilisé comme substance de contrôle.
Figure 3 Accumulation de 14 aminopyrine C-étiquetés db- AMPc stimulée par les glandes gastriques. Toutes les valeurs sont exprimées en pour cent d'une valeur représentant la sécrétion d'acide gastrique induite par db-AMPc (considérés comme 100%), qui a été calculé séparément pour chacun des sujets étudiés. Chaque symbole représente les données pour une seule personne. a) Prétraitement avec SNP (médiane = 63%; p < 0,05) ou SNAP (médiane = 81%; p < 0,05) pour libérer NO exogène avant d'ajouter db-AMPc pour stimuler la sécrétion d'acide réduit l'accumulation de 14C-aminopyrine dans glandes gastriques, par rapport aux niveaux de sécrétion observés dans les glandes non traitées. Cela indique que le NO peut inhiber la sécrétion d'acide dans les glandes gastriques isolées chez l'homme. b) Le traitement avec L-NAME pour inhiber la NOS dans les glandes gastriques augmente l'accumulation de 14C-aminopyrine après stimulation par db-AMPc (médiane = 152%; p < 0,05). Ces résultats indiquent que le NO inhibe la sécrétion d'acide db-AMPc induite. Le NO substrat L-arginine réduit l'accumulation de 14C-aminopyrine dans les glandes db-AMPc stimulées (médiane = 77%; p < 0,05). Effet des donneurs de NO et NNO de l'accumulation de fond (bg) est également indiquée. Inhibiteurs sur la sécrétion d'acide gastrique stimulée par l'histamine
pré-traitement des glandes isolées avec le NO exogène SNP donneur (1 mmol /L) a réduit l'histamine réponse à une médiane de 48% (n = 7) de la réponse observée dans les glandes non prétraités (100%). Dans quatre des cinq préparations de la glande, le substrat endogène formation de NO, L-arginine (0,1 mmol /L), a diminué le rapport AP. Cet effet n'a cependant pas été statistiquement significative (fig. 2a). Lorsque les glandes isolées ont été pré-traitées avec un inhibiteur SAI L-NAME (1 mmol /L), puis exposée à l'histamine, le rapport AP a été nettement élevée à une valeur moyenne de 147% (n = 13). Bien qu'un petit nombre d'individus ont été testés, la L-NNA (0,1 mmol /l) a donné un résultat similaire; 172% (n = 2). Par comparaison, dans des expériences de contrôle, le L-NAME analogique D-NAME (1 mmol /L) n'a eu aucun effet sur la sécrétion d'acide stimulée par l'histamine (fig. 2b) Effet
. Donneurs de NO et des inhibiteurs de NOS db la sécrétion d'acide gastrique -AMPc stimulée
Exposer les glandes isolées db-AMPc augmente la sécrétion d'acide gastrique par rapport au niveau de fond. Par rapport aux glandes non traitées, celles qui ont été pré-traitée avec SNP (1 mmol /L) ou SNAP (0,1 mmol /L) accumulé moins AP après stimulation par db-AMPc; 63% (n = 9) et 81% (n = 8), respectivement (Fig. 3a). Par ailleurs, similaire à la sécrétion stimulée par l'histamine, la sécrétion db-AMPc induite a été augmentée à une valeur médiane de 152% (n = 9) dans les glandes qui ont été pré-traités par la L-NAME (1 mmol /L). Bien qu'aucun effet sur la L-arginine sur la sécrétion d'acide stimulée par l'histamine peut être vu, il y avait un effet significatif de la L-arginine sur la sécrétion db-AMPc induite. la production d'acide a été inhibée à une médiane de 77% (n = 10) chez ceux prétraitées avec la L-arginine (0,1 mmol /L) Analyse
(Fig. 3b).
La méthode d'utilisation des glandes gastriques isolées in vitro est bien adapté à l'étude de l'interaction entre la sécrétion d'acide gastrique et divers signaux endocriniens. Cette technique a été évaluée en profondeur, principalement dans des expériences sur les animaux, et il a été rapporté pour offrir une bonne reproductibilité [23]. En outre, dans une étude des glandes gastriques isolées à partir de biopsies gastriques prélevés chez des humains [24], il a été constaté que l'histamine et la db-AMPc induit des réponses sécrétoires qui étaient reproductibles quand il est répété en utilisant des préparations de glandes à partir du même sujet, bien qu'il y ait interindividuelle variation. Fellenius et al. [24] et Haglund et al. [25] ont rapporté que les deux histamine et db-AMPc stimulé la sécrétion d'acide gastrique par les glandes gastriques humains isolés, et cela a été observé que deux à triple augmentation de l'accumulation AP par rapport au niveau de fond. Ces résultats sont en accord avec nos données obtenues en utilisant l'histamine et db-AMPc. Il est connu que des SNP libère NO [26] et dans nos expériences SNP réduit la sécrétion d'acide gastrique à partir de glandes isolées. Par conséquent, NO inhibe la sécrétion d'acide dans les glandes gastriques humaines isolées. Certains des effets du SNP peut être due à des interactions cytotoxiques, bien qu'aucun tel impact n'a été trouvée dans une étude de lapin glandes gastriques isolées [15]. Pour exclure la possibilité d'une influence cytotoxique, nous avons effectué des expériences complémentaires en utilisant le donneur de NO SNAP, qui a des propriétés chimiques qui diffèrent de celles des SNP. Dans ces expériences, nous avons observé la même réduction de l'accumulation AP après stimulation par db-AMPc, ce qui favorise en outre la conclusion que le NO est en fait responsable des résultats observés. Dans les glandes-AMPc stimulée db, la réponse sécrétoire induite a été réduite de L-arginine, un composé qui dépend d'un facteur endogène (ie, eNOS) pour générer NO, bien que la réduction n'a pas été aussi prononcée que la diminution induite par SNP et CASSER. Il y a un certain nombre d'explications possibles pour cette observation. S'il y avait déjà assez de L-arginine dans les glandes pour soutenir la production de NO au moment de l'expérience, l'addition de L-arginine est donc sans effet. En outre, la L-arginine peut avoir eu un impact faible car l'effet de NO a eu lieu grâce à la réglementation en amont ou en de l'enzyme NOS et n'a pas été influencée par l'accès au substrat. Nonobstant, L-arginine ne diminue l'accumulation de AP, mais pas autant que les donneurs de NO exogènes ont fait aux présentes doses. Ceci indique qu'un processus spécifique est responsable de la production de NO L-arginine dans les glandes gastriques isolées. Ces résultats sont cohérents avec des études montrant que SNP SNAP et la L-arginine inhibe la sécrétion d'acide stimulée par l'histamine à partir de glandes gastriques isolées des animaux [13, 15]. L-arginine a également été observé pour réduire la sécrétion d'acide carbachol stimulée dans les crapauds [16].
Dans une étude antérieure menée par notre groupe de recherche [22], l'examen de l'épithélium glandulaire de spécimens de muqueuse oxyntique humaine a révélé que l'un type particulier de cellules contenues NOS. Ces cellules eNOS-immunoréactives, définies comme des cellules endocrines, étaient en contact étroit avec les cellules pariétales. Ces deux caractéristiques suggèrent que les cellules de ce type de presse NO, ce qui pourrait donc être un régulateur paracrine qui affecte directement la fonction des cellules pariétales. Cette hypothèse peut être soutenu par un certain nombre d'autres conditions. Par exemple, NO peut facilement pénétrer les membranes cellulaires, ce qui peut indiquer un site d'action intracellulaire. En outre, NO a une durée de vie assez courte, ce qui implique que les sources nécessaires pour générer cet oxyde doit être disponible à proximité de la cellule NO cible. Dans cette étude, l'apparition de la eNOS dans les glandes est montré, mais plus tôt des recherches approfondies en utilisant des anticorps contre à la fois la nNOS et iNOS n'a pas révélé la présence d'aucune des deux isoformes dans l'épithélium glandulaire de sujets humains normaux (observation non publiée). Similaires aux résultats obtenus dans une étude de lapin isolé glandes gastriques [15], nous avons trouvé que la NSA inhibiteurs L-NAME et L-NNA, mais pas D-NAME, amplifié l'effet de la sécrétion de stimulation de l'histamine, qui indique en outre que la glandes humaines isolées, nous avons utilisé contenait l'enzyme NOS. À la fois l'augmentation du rapport AP que nous avons observée suite à l'inhibition de la NOS et la diminution des réponses sécrétoires que nous avons observé dans les glandes traitées avec de la L-arginine renforcer l'hypothèse selon laquelle le NO est produit par les cellules de l'épithélium glandulaire et, lorsqu'il est libéré, il interfère avec la sécrétion d'acide stimulée. Fait intéressant, les observations mentionnées suggèrent que la libération de NO est maintenue, indépendamment du fait que la sécrétion d'acide est stimulée, ce qui implique que le NO fonctionne comme un inhibiteur endogène de la sécrétion d'acide gastrique. L'intensité de cette inhibition dépend probablement du nombre de eNOS contenant des cellules endocrines-like qui sont présents dans le voisinage des cellules pariétales.
Les mécanismes exacts derrière cette régulation paracrine de la sécrétion d'acide gastrique est encore à élucider. Il existe plusieurs voies différentes au sein de la cellule pariétale qui pourraient être touchés par le NO. Il peut induire l'ADP ribosylation de l'actine G [27], ce qui influe sur le cytosquelette. Cela pourrait être essentiel pour les changements morphologiques qui pariétales cellules présentent pendant la sécrétion acide. Par conséquent, si NO a un impact persistant sur un élément tel que le cytosquelette, il pourrait jouer un rôle dans l'hypothèse de recyclage de la membrane proposée par Forte et al. [28]. En bref, cette théorie suggère que les cellules pariétales subir des altérations morphologiques suivantes: ils ont une grande surface sécrétoire actif pendant la phase de stimulation, et qui présentent une surface sécrétoire actif minimale pendant la phase de repos
Comme on sait que la guanylate cyclase est. un objectif général de NO dans de nombreux systèmes cellulaires, certains chercheurs ont suggéré que le NO exerce ses effets par l'intermédiaire de la guanosine 3 ', 5'-monophosphate cyclique (cGMP) dans les cellules pariétales de rat et de lapin [13, 15]. Une étude en cours dans notre laboratoire montrera si tel est le cas dans les cellules pariétales humaines. Les effets en aval de GMPc peuvent comprendre l'activation d'un certain nombre d'effecteurs, tels que des canaux ioniques, des protéines kinases et des phosphodiestérases [29]. Il est également plausible que le NO peut exercer son effet seul, sans passer par d'autres molécules de signalisation. Dans des conditions expérimentales, NO peut induire nitrosation et nitration des protéines cellulaires, bien que ce soit probablement pas le cas in vivo, puisque ces deux processus entraînent souvent des dommages permanents aux fonctions vitales [30]. Il existe une possibilité que la suppression de la sécrétion d'acide se produit non seulement au niveau de la cellule pariétale, mais par d'autres types de cellules. Les cellules ECL sont probablement présents dans la préparation glandulaire et chez le rat, ces cellules ont la capacité de libérer de l'histamine en réponse à l'augmentation des taux intracellulaires d'AMPc [31]. NO peut inhiber cette histamine libération [14] et, partant, contribuer davantage à l'inhibition de la sécrétion acide. Bien qu'il existe peu connu sur ECL-cellules humaines et les effets de NO sur l'histamine à libération il y a des études qui indiquent les différences entre espèces dans d'autres cellules de l'histamine-sécrétrices. Par exemple, les mastocytes de rat ont été montré pour produire un «facteur NO-like" qui inhibe l'histamine libération [32] alors qu'il ya des enquêtes qui indiquent que NO ne modifie pas l'histamine-sécrétion basophiles humains [33]. À l'heure actuelle, nous ne pouvons établir des différences de réponse inhibitrice à l-arginine pour l'histamine et la stimulation db-AMPc.
D'autres recherches sont nécessaires pour clarifier le rôle du NO dans la fonction des cellules pariétales.
Conclusions
Les conclusions de la présente étude suggèrent que le NO produit de façon endogène dans la muqueuse oxyntique humaine peut réduire les effets stimulateurs de l'histamine ou db-AMPc sur la sécrétion d'acide gastrique. Nous avons obtenu des résultats uniformes pour glandes gastriques isolées à partir de différents sujets humains en bonne santé, ce qui implique que NO libéré à partir de cellules spécifiques au sein de la muqueuse sécrétoire joue un rôle physiologique important dans la régulation de la sécrétion d'acide gastrique.
Déclarations
Remerciements
Nous remercions Ulf Hannestad pour la réalisation des tests d'haleine d'uréase, Inga-Lill Andersson et Gunilla Strand pour l'aide avec les procédures gastroscopie et Marja Tjädermo pour l'assistance technique. Ce travail a été soutenu par AstraZeneca R & D, la Suède.
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