Oxid dusnatý-an endogénna inhibítor sekrécie žalúdočnej kyseliny v izolovaných ľudských žalúdočných žliaz

Oxid dusnatý-an endogénna inhibítor sekrécie žalúdočnej kyseliny v izolovaných ľudských žalúdočných žľazách
Abstract
pozadí
syntázy endotelového oxidu dusnatého (Enos) bola už predtým objavila v žľazovej časti ľudského žalúdočnej sliznice. Okrem toho, oxid dusnatý (NO), bolo preukázané, že vplyv na sekréciu žalúdočnej v rôznych zvieracích modeloch. Táto štúdia bola vykonaná s cieľom skúmať vplyv exogénne a endogénne odvodený NO na histamine- a cAMP stimulovanej sekrécie žalúdočnej kyseliny v izolovaných ľudských oxyntických žliaz.
Metódy
oxyntických žľazy boli izolované z ľudských žalúdočných biopsiou a následne boli predbežne -treated s donormi NO a inhibítorov syntézy oxidu dusnatého a potom vystavené histamínu alebo dibutyryl-camp (db-cAMP). Sekrečnú odozva žliaz bola stanovená ako akumulácia [ 14C] aminopyrínu.
Výsledky
histamine- alebo db-cAMP indukovanú sekréciu kyseliny bol zmiernený L-arginín, známeho zdroja endogénneho NO , a tiež tým, nitroprusidu NO-donormi sodného (SNP) a s-nitrózo-N-acetyl-penicilamínu (SNAP). Predúprava s niektorou z inhibítorov NOS N G-nitro-L-arginín metyl ester (L-NAME), alebo N G-nitro-L-arginín (L-NNA) zvýšená sekrečná odpoveď.
Záver
Naše výsledky ukazujú, že NO inhibuje sekréciu žalúdočnej kyseliny v izolovaných ľudských žalúdočných žliaz, a že je endogénna tvorba NO v glandulární epitel v blízkosti parietálnych buniek.
pozadí
oxidu dusnatého (NO) je vyrobený z L-arginínu v reakcii katalyzovanej syntázy oxidu dusnatého (NOS enzýmu) [1, 2]. NO je dôležitý biologický signálna molekula, ktorá ovplyvňuje cirkuláciu pomocou regulácie vaskulárneho hladkého svalstva tón a modulácie systémového krvného tlaku. Okrem toho, NO sa zúčastňuje nervového prenosu; je rozhodujúcim faktorom zápalové reakcie a imunity [3-5]; a bolo preukázané, že vyvinúť pozitívne účinky na slizničnej obrany v tráviacom systéme. V niekoľkých štúdiách (pre prehľad, viď [6]), sa zdalo chemicky indukovaných poškodení sliznice znížiť súčasným pridávaním NO a zhoršenie odstránením NO zo žalúdočnej sliznice. Vysvetlenie týchto zistení by mohlo byť, že NO zvyšuje prietok krvi sliznice [7], a bolo navrhnuté, že NO zvyšuje uvoľňovanie hlienu [8]. Je pravdepodobné, že NO sa tiež podieľa na regulácii ďalších sekrečných procesov v gastrointestinálnom systéme. Takeuchi a spolupracovníci [9] popísali, že NO inhibuje sekréciu bikarbonátu dvanástnika, zatiaľ čo iní výskumníci navrhli, že sekrécia bikarbonátov je stimulovaná NO [10, 11]. Okrem toho, niektoré štúdie ukázali, že NO má vplyv na sekréciu žalúdočnej kyseliny [12-16].
Pokusy na zvieratách za predpokladu, konfliktné informácie o interakcii medzi NO a sekrécie žalúdočnej kyseliny. Napríklad, štúdie in vitro preukázali, že NO stimuluje sekréciu žalúdočnej kyseliny u myší [17, 18] a [19] skokana. Okrem toho sa podobné výsledky boli získané u psov [12]. Avšak, iné výskumy ukázali, že NO inhibuje sekréciu žalúdočnej kyseliny u potkanov [13, 14], v žalúdočných žľazách izolovaných od králikov [15], a sliznice z ropuchy [16]. Štúdia ľudských jedincov poskytli údaje o tom, že NO môže inhibovať ako a rozširovať intragastrického pH [20, 21], ale to ešte nie je známe, ako táto látka podieľa na sekréciu žalúdočnej kyseliny u ľudí.
V skoršej štúdii sme zistili, morfologické podpora, že endogénne NO hrá úlohu v regulácii funkcie parietálnych buniek [22]. Tiež imunohistochemické dáta z tohto vyšetrovania ukázala prítomnosť endogénneho NOS v epitelových bunkách normálnej ľudskej oxyntických sliznice, presnejšie, a to ako v povrchu sliznice bunky a endokrinné bunky. Okrem toho sme pozorovali, že existujú úzka Enos-pozitívnych buniek a parietálnych buniek buď preto, že Enos-pozitívne bunky kontaktované parietálnych buniek prostredníctvom cytoplasmatickými výbežky alebo boli invaginated pomocou parietálnej bunky. Na základe týchto zistení spolu s chemickými vlastnosťami Nie, záveru, že nie je možné odvodiť z endokrinných buniek podobných môže byť parakrinný regulátorom sekrécie žalúdočnej kyseliny. V tejto štúdii, naším cieľom bolo overiť vplyv exogénny NO na sekréciu histamine- a cAMP stimulovanej žalúdočnej kyseliny u ľudí, a tiež určiť, či endogénne odvodený NO má funkčné vplyv na ľudských parietálnych buniek.
Metódy
Predmety a etické schválenie
dvadsiatich štyroch zdravých mužov vo veku od 22 do 31 rokov, boli prijatí ako platené dobrovoľníkov. Kritériá pre výber stanovené, že subjekty museli byť bez choroby a nemali by vziať nejaké lieky alebo nasávaná alkohol, po dobu najmenej jedného týždňa pred skúškou. Muži na lačno aspoň šesť hodín pred skúškou.
Faryngeálne anestézie bola indukovaná s lidokaínom sprejom (Xylocain ®, AstraZeneca, Södertälje, Švédsko), po ktorom rutina gastroskopia bola vykonaná s použitím Olympus GIF-100 endoskop. Štipka bioptických klieští (Olympus FB 24K-1) boli použité, aby sa vzorky tkaniva z veľkého zakrivenie, okamžite distálnej na očnom pozadí. U všetkých pacientov sa žalúdočnej sliznice sa zdá byť normálne, a to ako makroskopicky a histologicky. Všetky subjekty negatívne testy na Helicobacter pylori
infekcie v teste Ureáza dychovej (Diabact ® UBT 50 mg 13C-močoviny, Diabact AB, Uppsala, Švédsko).
Experimentálne postupy boli schválené oblastné Etická komisia pre ľudskú výskumu na University Hospital, Linköping, Švédsko (č.j .. 02-039) a všetci pacienti dal informovaný súhlas.
sekrečnú štúdie
izoláciu a inkubácie žalúdočných žliaz
Súčasné experimenty založená na technike, ktorá bola prvýkrát popísaná v roku 1976 pre použitie u králikov in vitro [23] a je teraz dobre zavedené pre nepriame stanovenie sekrécie žalúdočnej kyseliny, vyvolanú rôznymi podnetmi. Spôsob izolácie žalúdočné žľazy bol pôvodne vyvinutý pre živočíšne tkanivá, ale to bolo neskôr upraviť tak, že môže byť tiež aplikovaný na malých množstiev ľudské tkanivá [24].
Ľudské sliznice oxyntických biopsiou použité v našej štúdii boli premyté a skladované dlhšie ako 15 minút v ľadovo studenej okysličenej fyziologickým roztokom pufrovaným fosfáty (PBS). Vzorky tkaniva boli narezané na malé kúsky s nožnicami a prevedené na okysličený (100% O 2), kolagenáza roztok enzýmu (130,0 mM NaCl, 12,0 mM NaHCO 3, 3,0 mM Na 2HPO 4, 3,0 mM K 2HPO 4, 2,0 mM MgSO 4, 1,0 mM CaCl 2, 0,1 mM N (alfa) -tosyl-L-lyzín chlormetylketon [ ,,,0],TLCK], 10 uM indometacín, 10 mM glukózy, 2 mg /ml ľudského sérového albumínu [HSA, Sigma] a 1 mg /ml kolagenázy typu IA [Sigma]). Táto zmes bola umiestnená do 37 ° C vodného kúpeľa a bol mierne mieša počas 120 minút, potom sú niektoré z ošetrených vzorky sa rozpadli, takže najmä izolované žalúdočné žľazy. Reakčná zmes sa filtruje cez 200 um mesh. Izolované žľazy boli premyté a re-suspendovaná v dopredu ohriatom (37 ° C), respiračné médiá (132,4 mM NaCl, 1,0 mM NaH 2Po 4, 1,2 mM MgSO 4, 5,4 mM KCI, 5,0 mM Na 2HPO 4, 1,0 mM CaCl 2, 10 uM indometacín, 10 mM glukózy, a 2 mg /ml HSA). Žľazy boli potom prenesené do fľaštičiek obsahujúcich čerstvé respiračné médium, na ktoré sme pridali jeden z nasledujúcich krokov: inhibítor NOS N G-nitro-L-arginín metyl ester (L-NAME, 1 mmol /l), alebo ekvivalentné množstvo jeho biologicky inaktívny enantiomér N G-nitro-D-arginín metyl ester (D-NAME); inhibítor NOS N G-nitro-L-arginín (L-NNA, 0,1 mmol /l); jeden z dvoch NO donormi nitroprusidu sodného (SNP, 1 mmol /l) a S-nitrózo-N-acetyl-penicilamín (SNAP, 0,1 mmol /l); substrát pre produkciu endogénneho NO, L-arginínu (0,1 mmol /l) [15]. Všetky žľazy suspenzie, vrátane tých, ktoré neboli stimulované, boli inkubované v trepacom vodnom kúpeli pri teplote 37 ° C počas 30 minút, po ktorej sme pridali histamín do konečnej koncentrácie 50 umol /l alebo dibutyryl-cAMP (db-cAMP) na konečnej koncentrácie 1 mmol /l. Nedochádzalo k zhoršeniu cyklických nukleotidov, sme pridali 0,1 mmol /l 3-izobutyl-1-metylxantín (IBMX) na všetky podnety.
Určenie [14C] akumulačné aminopyrínu pomere
dobre zavedenú metódu používanú k nepriamemu zmerať sekréciu kyseliny izolovanými žalúdočnými žľazami je určiť akumuláciu 14C-značeného aminopyrínu (AP) v žľazách seba, tak aj v supernatantu po centrifugáciu a potom vypočítať pomer medzi týmito dvoma hodnotami (tzv pomer AP) [23] , Stručne povedané, sekrécie kyseliny bola stimulovaná pri teplote 37 ° C počas 40 minút, a po tomto 0,5 učia [ 14C] označeného aminopyrínu bol pridaný do fľaštičiek, ktoré sa potom ďalej inkubujú pri 37 ° C počas 90 minút. Potom sa suspenzia žľaza sa prenesie do vopred vysušia a zvážia trubiek, ktoré boli centrifugovány pri 4000 otáčkach za minútu po dobu dvoch minút. Supernatant bol odstránený a prenesený do scintilačných fľaštičiek. Pelety (žľazy) sa suší pri teplote 100 ° C, a sušina bola stanovená, a žľazy boli následne resuspendované v 0,5 mol /l roztoku hydroxidu sodného pri teplote 60 ° C a prenesené do scintilačných fľaštičiek. Rádioaktivita žliaz a supernatant sa stanoví v kvapalinovom oscilačnom počítadlu (1214 Rackbeta, LKB) a pomer AP bola vypočítaná pomocou nasledujúceho vzorca [24]: kde
IGW je intraglandular objem vody (= 2 x suchej hmotnosti žliaz v mg). akumulácia
Doterajší stav AP je obsiahnutý v hodnotách, ktoré predstavujú odozvu sekrečnú. V AP pomery pre pozadie a histamín a db-cAMP-stimulovaných podmienok líšila medzi jednotlivcami. Preto pre každý predmet, sme stanovili pomer AP pre stimulovaných žliaz a za to, že hodnotu 100% a používal ho ako individuálne referenčná hodnota. Všetky hodnoty sú založené na jednotlivých analýz. Štatistiky
Údaje boli analyzované pomocou jednej vzorky znamení skúšok nákupný medián hodnoty pomocou Minitab ™ štatistickým softvérom. Hodnoty P menšie ako 0,05 boli považované za významné.
Imunohistochémia
izolované žalúdočné žľazy z piatich testovaných osôb boli umiestnené na nabitý Super Frost * /Plus sklíčka (Menzel-Glaser, Nemecko), a potom sa premyje PBS a permeabilizovány 100 % etanolu pri teplote -70 ° C po dobu 5 min. Potom boli doštičky inkubované pri izbovej teplote cez noc s králičím anti-NOS3 protilátky (1: 1000, Santa Cruz Biochemicals), a potom dôkladne premyté v PBS a inkubované po dobu 1 hodiny s biotinylizované kozie anti-králičie sekundárne protilátkou. Šmýkačky, kde sa primárne protilátka vynechané slúžili ako negatívne kontroly. Sklíčka bola následne znovu premyté a biotinylizované protilátka bola detekovaná expozíciou 20 ug /ml Texas Red ® avidínu (Vector Laboratories) po dobu 1 hodiny. V nadväznosti na toto spracovanie, bola sklíčka umytá a posunie s prekrytím pomocou Vectashield ® montážne médium. Nikon Eclipse ® E800 fluorescenčný mikroskop s prílohou EPI-fluorescenčné VFM bol použitý na preverenie a vyhodnotenie sklíčok. Kapela-pass filter s rozsahom vlnových dĺžok 520-560 nm a dlho-pass filter s cut-o vlnovej dĺžke 590 nm (pre vyžarovaného svetla) boli použité na vizualizáciu Texaská červeň ® molekúl.
Hematoxylin a eosínu
pre morfologické hodnotenie žľazy boli stanovené na sklíčka a zafarbené hematoxylínom Harris po dobu piatich minút a 0,5% eozín Y po dobu dvoch minút. Každý krok bol nasledovaný opláchnite vodou z kohútika.
Výsledky
sme študovali účinky NO na sekréciu kyseliny vyvolanú rôznymi povzbudzujúcimi prostriedkami v žalúdočných žľazách izolovaných od žalúdočných biopsií od človeka. Morfologické vyšetrenie hematoxylín-eozín-nafarbená bolo zistené, že postup izolácie úspešne získa celých-žľazy prípravky a že parietálnej bunky boli prítomné v žalúdočných žliaz. Imunohistochemické analýza ukázala, že izolované žľazy obsiahnuté Enos-imunoreaktívnych buniek (Obr. 1), čo súhlasí s výsledkami získanými s použitím iných typov slizníc prípravkov [22]. Kontrolné pokusy boli primárne protilátka bola vylúčená nevykazovali žiadnu imunoreaktivitu. Obrázok 1 imonufluoreskujúca izolované žalúdočné žľazy. Immunolocalization Enos (šípok) v žalúdočnej žľazy izolovanej z ľudského oxyntických sliznice bolo dosiahnuté použitím králičie anti-Enos polyklonálne protilátky. Výsledky boli vizualizované s Texas Red®-konjugovanou kozí anti-králičí IgG. Bar = 30 um
pozadia AP akumulácie
pozadí AP akumulácia bola pozorovaná v izolovaných žľazy, s priemerným pomerom AP 8,6. (Rozmedzie 2.5-22.1; n = 19). Po aplikácii 50 umol /l histamínu alebo 1 mmol /l db-cAMP, medián pomery AP boli 24,7 (5.8-64.5; n = 16) a 38,2 (rozmedzie 7,6 až 47,8; n = 11), resp. Reakcia na oboch histamín a db-cAMP prekročila pozadia o faktor asi 2-4 vo všetkých prípravkoch (obr. 2 a 3). Obrázok 2 Akumulácia označeného 14 C aminopyrínu v histamínom stimulovanej žalúdočnej žľazy. Všetky hodnoty sú vyjadrené ako percentá sekrécie žalúdočnej kyseliny vyvolanú histamínom (považované za 100%), ktorý sa vypočíta pre žalúdočných žliaz izolovaných z každej zo zdravých dobrovoľníkov. Každý symbol predstavuje výsledky pre jedného človeka. a) Akumulácia 14C-aminopyrínu v žľazách predbežne NO nitroprusidu sodného (SNP darcu, 1 mmol /l), alebo s L-arginínu (0,1 mmol /l), substrátu pre endogénnej produkcie NO. Je vidieť, že SNP výrazne znižuje akumuláciu AP (medián = 48%, p menšie ako 0,05), čo ukazuje, že NO inhibuje sekréciu kyseliny z izolovaných žliaz. je tiež zobrazený na pozadí akumulácie 14C-aminopyrínu (bg). b) Akumulácia 14C-aminopyrínu v žalúdočných žľazách vopred zadovážiť NOS inhibítory L-NNA (0,1 mmol /l) a L-NAME (1 mmol /l), resp. L-NAME spôsobila zvýšená akumulácia (medián = 147%, p menšie ako 0,05), čo naznačuje, že sekrécia kyseliny je zvýšený, keď je zabránené endogénnej produkcie NO, čo ukazuje inhibičný úlohu endogénneho NO v ľudských žalúdočných žliaz. D-NAME, ktorý je biologicky neaktívny stereo izomér L-NAME, nemala mať vplyv na sekréciu kyseliny, a preto bol použitý ako kontrolná látka.
Obrázok 3 Kumulácia vo výške 14 aminopyrínu C-značené v DB cAMP stimulovanej žalúdočnej žľazy. Všetky hodnoty sú vyjadrené ako percentá hodnotu, ktorá predstavuje sekréciu žalúdočnej kyseliny, vyvolanú db-cAMP (považované za 100%), ktorý sa vypočíta pre každú zo skúmaných subjektov. Každý symbol predstavuje dáta pre jednu osobu. a) Predbežné ošetrenie SNP (medián = 63%, p menšie ako 0,05) alebo SNAP (medián = 81%, p menšie ako 0,05), aby sa uvoľnil exogénny NO Pred pridaním db-cAMP k stimulácii sekrécie kyseliny znižuje akumuláciu 14C-aminopyrínu v žalúdočné žľazy, v porovnaní s úrovňou sekrécie vidieť v neošetrených žliaz. To znamená, že NO môže inhibovať sekréciu kyseliny v žalúdočných žliaz izolovanej z ľudí. b) Liečba L-NAME, že inhibujú NOS v žalúdočných žľazách zvýšenej kumulácii 14C-aminopyrínu po stimulácii db-cAMP (medián = 152%; p menšie ako 0,05). Tieto výsledky naznačujú, že NO inhibuje sekréciu kyseliny db-cAMP indukovanú. NO substrát L-arginín znižuje akumuláciu 14C-aminopyrínu v db-cAMP stimulovanej žliaz (medián = 77%, p menšie ako 0,05). je tiež uvedená akumulácia Background (bg).
efekt NO donorov a NOS inhibítorov na sekréciu žalúdočnej kyseliny histamínom stimulovanej
Predúprava izolovaných žliaz s exogénne NO donor SNP (1 mmol /l) redukoval histamín reakcia na mediánu 48% (n = 7) v odpovedi pozorovanej pri non-pre-ošetrených žliaz (100%). V štyroch z piatich prípravkov žľazy, substrát pre endogénne NO formácie, L-arginín (0,1 mmol /l), sa znížil pomer AP. Tento účinok však nebol štatisticky významný (obr. 2a). Keď izolované žľazy boli predbežne ošetrené NOS inhibítor L-NAME (1 mmol /l), a potom vystavené histamínu, pomer AP bola významne zvýšená na strednej hodnote 147% (n = 13). Aj keď malý počet jednotlivcov boli testované, L-NNA (0,1 mmol /l) sa získa podobný výsledok; 172% (n = 2). Pre porovnanie, v kontrolných experimentoch L-NAME analógový D-NAME (1 mmol /l) nemala žiaden účinok vôbec na histamínom stimulovanej sekrécie kyseliny (obr. 2b).
Efekt NO donorov a inhibítorov NOS na db -cAMP stimulovanej sekrécie žalúdočnej kyseliny
Vystavenie izolované žľazy DB-cAMP zvyšuje sekréciu žalúdočnej kyseliny v porovnaní s úrovňou pozadia. V porovnaní s neliečenými žliaz, že sa ošetria SNP (1 mmol /l) alebo SNAP (0,1 mmol /l) nahromadené menej AP po stimulácii db-cAMP; 63% (n = 9) a 81% (n = 8), v danom poradí (obr. 3a). Okrem toho, podobne ako histamínom stimulovanej sekrécie je db-cAMP indukovanej sekrécie bola zvýšená na medián 152% (n = 9) v žľazách, ktorá bola vopred ošetrené s L-NAME (1 mmol /l). Aj keď žiadny vplyv na L-arginín na histamínom stimulovanej sekrécie kyseliny, ktorú možno vidieť, došlo k výraznému účinok L-arginínu na db-cAMP-indukovanej sekrécie. Obsah kyseliny bol inhibovaný k mediánu o 77% (n = 10) u pacientov, ktorým vopred ošetrené s L-arginínu (0,1 mmol /l) (viď obr. 3b).
Diskusia
spôsobe použitia izolované žalúdočné žľazy in vitro je veľmi vhodná pre skúmanie interakcie medzi sekrécie žalúdočnej kyseliny a rôznych endokrinných signály. Táto technika bola dôkladne vyhodnotená, najmä v experimentoch na zvieratách, a bolo publikované, ponúknuť dobré reprodukovateľnosti [23]. Okrem toho v štúdii žalúdočných žliaz izolovaných od žalúdočných biopsií z ľudí [24], bolo zistené, že oba histamín a db-cAMP indukovanej sekrečnú reakcie, ktoré boli reprodukovateľné pri opakovaný s použitím žľazy prípravkov od rovnakého subjektu, hoci tam bol značný interindividuálne variácie. Fellenius et al. [24] a Haglund et al. [25] uvádzajú, že ako histamín a db-cAMP stimulovanú sekréciu žalúdočnej kyseliny z izolovaných ľudských žalúdočných žliaz, čo bolo pozorované ako dvoch až trojnásobný nárast akumulácie AP v porovnaní s úrovňou pozadia. Tieto výsledky sa zhodujú s našimi dátami získanými pomocou histamín a DB-Camp. Je známe, že SNP uvoľňuje NO [26], a v našich experimentoch SNP znižuje sekréciu žalúdočnej kyseliny z izolovaných žliaz. Z tohto dôvodu NO inhibuje sekréciu kyseliny v izolovaných ľudských žalúdočných žliaz. Niektoré z týchto účinkov SNP môže byť v dôsledku cytotoxické pôsobenie, aj keď žiadna taká vplyv bol nájdený v štúdii izolovaných králičích žalúdočných žľazách [15]. Aby sa vylúčila možnosť vplyvu cytotoxické sme vykonali doplňujúce experimenty pomocou NO darcu SNAP, ktorý má chemické vlastnosti, ktoré sa líšia od tých SNP. V týchto experimentoch sme pozorovali rovnaký zníženie akumulácie AP po stimulácii db-cAMP, čo ďalej zvýhodňuje k záveru, že NO je v skutočnosti zodpovedný za pozorované výsledky. V db-cAMP stimulovanej žliaz, indukovaný sekrečnú odpoveď bola znížená o L-arginínu, zlúčeniny, ktorá je závislá na endogénny faktor (tj Enos) pre generovanie NO, aj keď toto zníženie nebolo tak výrazné, ako pokles vyvolané SNP a SNAP. Existuje niekoľko možných vysvetlení pre toto pozorovanie. V prípade, že bol už dosť L-arginín v žliaz pre udržanie produkcie NO v čase experimentu, prídavok L-arginín je teda bez účinku. Okrem toho, L-arginín môže mal slabý vplyv, pretože účinok NO došlo prostredníctvom up- alebo down reguláciu enzýmu NOS a nebola ovplyvnená prístup k substrátu. Bez ohľadu, L-arginín sa znižujú akumuláciu AP, aj keď nie toľko ako exogénne donormi NO urobil v súčasnej dávkach. To znamená, že niektoré konkrétne proces je zodpovedný za generovanie NO z L-arginínu v izolovaných žalúdočných žliaz. Tieto výsledky sú v súlade so štúdiami ukazujúcimi, že SNP, SNAP, a L-arginín inhibuje sekréciu kyseliny stimulovanú histamínom od žalúdočných žliaz, izolované zo zvierat [13, 15]. L-arginín bol zaznamenaný tiež k zníženiu sekrécie kyseliny karbacholom stimulovanej v ropuchy [16].
V predchádzajúcej štúdii uskutočnenej našej výskumnej skupiny [22], vyšetrenie žliaz epitelu exemplárov ľudského oxyntických sliznice bolo zistené, že jeden konkrétny typ buniek obsahoval NOS. Tieto Enos-imunoreaktívnych buniek, ktoré sú definované ako endokrinné bunky, boli v úzkom kontakte s parietálnych bunkách. Tieto dve charakteristiky naznačujú, že bunky tohto typu release Nie, ktorá sa tak mohlo ísť o parakrinný regulátor, ktorý priamo ovplyvňuje funkciu parietálnych buniek. Tento predpoklad môže byť podporená celou radou ďalších podmienok. Napríklad NO môže ľahko prenikať bunkovými membránami, čo môže znamenať vnútrobunkové miesto pôsobenia. Tiež NO má pomerne krátku životnosť, čo znamená, že zdroje potrebné k tvorbe Tento oxid, musí byť k dispozícii v blízkosti NO cieľové bunky. V tejto štúdii, je uvedené výskyt Enos v žliaz, ale menej rozsiahle výskumy s použitím protilátok proti ako nNOS a INOS nepreukázali prítomnosť niektorej z týchto dvoch izoforiem v glandulární epitel normálnych ľudských subjektov (nepublikovaná pozorovanie). Podobne ako u výsledkov získaných v štúdii izolovaných králičích žalúdočných žľazách [15], sme zistili, že NOS inhibítory L-NAME a L-NNA, ale nie D-NAME, zosilnený na sekréciu stimulujúci účinok histamínu, ktorý ďalej udáva, že izolovaná ľudská žľazy sme použili obsahoval enzým NOS. Ako zvýšenie pomeru AP, ktorý sme pozorovali po inhibíciu NOS a poklesu sekrečných reakcií, ktoré sme zaznamenali v žľazách ošetrených L-arginínu posilnenie hypotézu, že NO je produkovaný bunkami v glandulární epitel, a pri uvoľnení, to sa stretáva s sekrécie kyseliny stimulovanej. Zaujímavé je, že uvedené pozorovania naznačujú, že uvoľňovanie NO sa udržuje, bez ohľadu na to, či je sekrécia kyseliny stimulovanej, čo znamená, že žiadna funguje ako endogénna inhibítor sekrécie žalúdočnej kyseliny. Intenzita tejto inhibícia pravdepodobne závisí od počtu Enos obsahujúcich endokrinné bunky podobné, ktoré sú prítomné v blízkosti parietálnych buniek.
Presný mechanizmus, ktoré viedli k tomuto parakrinný regulácii sekrécie žalúdočnej kyseliny je potrebné ešte objasniť. Existuje niekoľko rôznych ciest vo vnútri parietálnych buniek, ktoré by mohli byť ovplyvnené NO. To môže vyvolať ADP ribosylaci G-aktínu [27], čím sa ovplyvňuje cytoskeletu. To by mohlo byť dôležité, aby sa morfologické zmeny, ktoré parietálnej bunky vykazujú v priebehu sekrécie kyseliny. V súlade s tým, ak je NO má mať trvalý vplyv na prvok, ako je cytoskeletu, môže hrať úlohu v recyklačnom membrány hypotézy navrhnuté Forte et al. [28]. Stručne povedané, že teória naznačuje, že parietálnej bunky podstúpi nasledujúce morfologické zmeny: majú veľký aktívny povrch, sekrečnú v priebehu stimulačný fázy, a vykazujú minimálnu aktívny sekrečnú povrchu počas pokojovej fázy
Vzhľadom na to, že je známe, že je guanylátcyklázu. všeobecný cieľ NO v mnohých bunkových systémoch, niektorí výskumníci navrhli, že NO účinkuje prostredníctvom cyklického guanozín-3 ', 5'-monofosfát (cGMP) v potkanov aj králikov parietálnych bunkách [13, 15]. Prebiehajúcej štúdie v našom laboratóriu ukáže, či to tak je v ľudských parietálnych bunkách. Následnými účinky cGMP môže zahŕňať aktiváciu radu efektory, ako sú iónové kanály, proteínkinázy a fosfodiesterázy [29]. Je tiež pravdepodobné, že NO môže uplatniť svoj vplyv sám, bez toho aby pritom postupoval ďalších signálnych molekúl. V experimentálnych podmienkach, NO môže vyvolať nitrosylation a nitrácii bunkových proteínov, hoci to pravdepodobne nie je tento prípad in vivo, pretože tieto dva procesy majú často za následok trvalé poškodenie životne dôležitých funkcií [30]. Existuje možnosť, že potlačenie sekrécie kyseliny sa vyskytuje nielen na úrovni parietálnych buniek, ale prostredníctvom iných typov buniek. ECL-buniek sú pravdepodobne prítomné v glandulární prípravku a Potkan, tieto bunky majú schopnosť uvoľňovanie histamínu v reakcii na zvýšený intracelulárny hladiny cAMP [31]. NO môže inhibovať tento histamínu uvoľňovanie [14], a tým ďalej prispievajú k inhibíciu sekrécie žalúdočnej kyseliny. Hoci tam je málo známe o ľudských buniek ECL a účinky histamínu nie na uvoľňovanie existujú štúdie, ktoré naznačujú, rozdiely medzi druhmi iných buniek histamínu-vylučovať. Napríklad, krysích žírnych buniek bolo preukázané, že produkujú "NO, ako je faktor", ktorý inhibuje uvoľňovanie histaminu- [32], zatiaľ čo tam sú výskumy, ktoré ukazujú, že nie je nemá vplyv na sekréciu histamínu-v ľudských bazofilov [33]. V súčasnej dobe môžeme nadviazať iba rozdiely v inhibičnú reakciu na L-arginín pre histamín a stimuláciu db-cAMP.
Sú potrebné ďalšie výskumy na objasnenie úlohy NO vo funkcii parietálnej bunky.
Závery
zisteniami Táto štúdia naznačuje, že endogénne NO produkovaný v ľudskom oxyntických sliznice môže viesť k zníženiu stimulačné účinky histamínu alebo db-cAMP na sekréciu žalúdočnej kyseliny. Získali sme rovnaké výsledky pre žalúdočných žliaz izolovaných z rôznych zdravých ľudských subjektov, čo znamená, že NO uvoľňuje z určitých buniek v sekrečnej sliznice hrá dôležitú fyziologickú úlohu v regulácii sekrécie žalúdočnej kyseliny.
Vyhlásenie
poďakovanie
ďakujeme Ulf Hannestad pre vykonávanie skúšok ureasové dychom Inga-Lill Andersson a Gunilla Strand o pomoc s gastroskopicky postupmi, a Marja Tjädermo pre technickú pomoc. Táto práca bola podporená AstraZeneca R & D, Švédsko.
Autorov pôvodné predloženej súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodných predložených súbory pre obrazy. "Pôvodný súbor na obrázku 1 12876_2004_88_MOESM2_ESM.ppt autorského 12876_2004_88_MOESM1_ESM.ppt autorov pôvodného súboru na pôvodnom súboru Obrázok 2 12876_2004_88_MOESM3_ESM.ppt autorského na obrázok 3 protichodnými záujmami
Žiadne deklarované.

• Neúplné žalúdočné metaplázia u detí s inzulín-dependentného diabetu mellitus a celiakiou. Ultrastrukturální study
• Expresie sérového MIR-20a-5p, nechajte-7a, a mier-320A a ich korelácia s pepsinogénu v atrofickú gastritídu a rakovinou žalúdka: a case-control štúdie