óxido nítrico un inhibidor endógeno de la secreción de ácido gástrico en glándulas gástricas humanas aisladas

óxido nítrico un inhibidor endógeno de la secreción de ácido gástrico en glándulas gástricas humanas aisladas
Abstract
Antecedentes
óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS) previamente se ha detectado en la parte glandular de la mucosa gástrica humana. Además, el óxido nítrico (NO) se ha demostrado que influyen en la secreción gástrica en diversos modelos animales. El presente estudio se realizó para investigar la influencia de forma exógena y endógena derivada NO a la secreción de ácido gástrico histamina y cAMP estimulada en las glándulas aisladas oxínticas humanos.
Métodos
glándulas oxínticas fueron aisladas de biopsias gástricas humanas y posteriormente fueron pre tratadas con donadores de NO y los inhibidores de la óxido nítrico sintasa y luego se exponen a la histamina o dibutiril-AMPc (db-cAMP). La respuesta secretora de las glándulas se determinó como la acumulación de [ 14C] aminopirina.
Resultados
la secreción de ácido histamina o db-cAMP inducida fue atenuada por la L-arginina, una fuente conocida de NO endógeno , y también por el nitroprusiato de donadores de NO de sodio (SNP) y S-nitroso-N-acetil-penicilamina (SNAP). Pre-tratamiento con cualquiera de los inhibidores de la NOS N G-nitro arginina-L-éster metílico de (L-NAME) o N G-nitro-L-arginina (L-NNA) mejorado la respuesta secretora.
Conclusión
Nuestros resultados muestran que el nO inhibe la secreción de ácido gástrico en glándulas gástricas humanas aisladas, y que no hay formación endógena de nO en el epitelio glandular en las proximidades de las células parietales.
Antecedentes
óxido nítrico (NO) se produce a partir de L-arginina en una reacción catalizada por la enzima óxido nítrico sintasa (NOS) [1, 2]. NO es una importante molécula de señalización biológica que influye en la circulación por la regulación del tono del músculo liso vascular y la modulación de la presión arterial sistémica. Por otra parte, el NO está implicado en la neurotransmisión; es un factor crítico en la respuesta inflamatoria y la inmunidad [3-5]; y se ha demostrado que ejercen efectos positivos en la defensa de la mucosa en el sistema gastrointestinal. En varios estudios (para una revisión, ver [6]), daño de la mucosa inducida químicamente parecía ser reducido mediante la adición simultánea de NO y alteración de la eliminación de NO a partir de la mucosa gástrica. Una explicación para estos resultados podría ser que el NO aumenta el flujo sanguíneo de la mucosa [7], y se ha sugerido que el NO aumenta la liberación de moco [8]. Es probable que el NO también está involucrado en la regulación de otros procesos secretores en el sistema gastrointestinal. Takeuchi y compañeros de trabajo [9] han informado de que el NO inhibe la secreción de bicarbonato duodenal, mientras que otros investigadores han propuesto que la secreción de bicarbonato es estimulada por NO [10, 11]. Además, varios estudios han indicado que el NO afecta a la secreción de ácido gástrico [12-16].
Los experimentos con animales han dado información contradictoria sobre la interacción entre el NO y la secreción de ácido gástrico. Por ejemplo, los estudios in vitro han demostrado que el NO estimula la secreción de ácido gástrico en el ratón [17, 18] y rana toro [19]. Además, los resultados similares se han obtenido en los perros [12]. Sin embargo, otras investigaciones han demostrado que el NO inhibe la secreción de ácido gástrico en la rata [13, 14], en glándulas gástricas aisladas de conejos [15], y en mucosa de sapos [16]. Los estudios de los seres humanos han proporcionado datos que indican que el NO puede inhibir como aumentar el pH intragástrico [20, 21], pero todavía no se sabe cómo este compuesto participa en la secreción de ácido gástrico en los seres humanos.
En un estudio anterior, encontramos morfológica apoyo que NO endógeno juega un papel en la regulación de la función celular parietal [22]. Además, los datos inmunohistoquímicos de que la investigación revelaron la presencia de NOS endógena en las células epiteliales de la mucosa oxíntica humano normal, más precisamente, tanto en las células mucosas y las células endocrinas superficie. Además, se observó que había un estrecho contacto entre las células eNOS-positivas y células parietales ya sea porque los eNOS-positivos células puestas en contacto a través de las células parietales procesos citoplásmicos o fueron invaginado por una célula parietal. Basándose en estos resultados, junto con las propiedades químicas de NO, llegamos a la conclusión de que el NO derivado de las células endocrinas-como podría ser un regulador de paracrina de la secreción de ácido gástrico. En el presente estudio, nuestro objetivo era comprobar el efecto de NO exógeno sobre la secreción de ácido gástrico histamina y cAMP estimulada en los seres humanos, y también para determinar si NO endógena derivada tiene un efecto funcional sobre las células parietales humanos.
Métodos
Los sujetos y la aprobación ética
Veinticuatro hombres sanos de edades comprendidas entre 22 y 31 años fueron reclutados como voluntarios pagados. Los criterios de selección se estipula que los sujetos tenían que estar libre de enfermedad y no deberían haber tomado algún medicamento o bebido alcohol por lo menos una semana antes del examen. Los hombres en ayunas durante al menos seis horas antes del examen. Se indujo la anestesia faríngea
con spray de lidocaína (Xylocain ®, AstraZeneca, Södertälje, Suecia), después de lo cual la gastroscopia de rutina se realizó utilizando una Olympus GIF-100 endoscopio. Una pizca de pinzas de biopsia (Olympus FB 24K-1) se utiliza para tomar muestras de tejido de la curvatura mayor, inmediatamente distal al fondo de ojo. En todos los sujetos, la mucosa gástrica que parecía ser normal, tanto macroscópica e histológicamente. Todos los sujetos dieron negativo para la infección por Helicobacter pylori
en la prueba de aliento ureasa (Diabact ® 50 mg UBT 13C-urea, Diabact AB, Uppsala, Suecia).
Los procedimientos experimentales fueron aprobados por el Comité regional de Ética de Investigación humana en el hospital Universitario, Linköping, Suecia (archivo no. 02-039), y todos los sujetos dieron su consentimiento informado.
estudio secretora
El aislamiento y la incubación de las glándulas gástricas México La experimentos actuales eran basado en una técnica que fue descrita por primera vez en 1976 para su uso en conejos in vitro [23] y está ahora bien establecida para la determinación indirecta de la secreción de ácido gástrico inducida por diversos estímulos. El método de aislamiento de glándulas gástricas se desarrolló inicialmente para el tejido animal, pero más tarde se refina de manera que también se podría aplicar a pequeñas cantidades de tejido humano [24].
Las biopsias de la mucosa oxínticas humanos utilizados en nuestro estudio fueron lavadas y ya no se almacena de 15 minutos en solución salina tamponada con fosfato oxigenado enfriado con hielo (PBS). Las muestras de tejido se cortaron en trozos más pequeños con un par de tijeras y se transfirieron a oxigenada (100% O 2) solución de enzima colagenasa (NaCl mM 130.0, NaHCO 12,0 mM 3, Na 3,0 mM 2HPO 4, 3,0 mM de K 2HPO 4, 2,0 mM MgSO 4, 1,0 mM CaCl 2, 0,1 mM de N (alfa) tosil-L-lisina clorometil cetona [ ,,,0],TLCK], 10 mM indometacina, glucosa 10 mM, 2 mg /ml de albúmina de suero humano [HSA; Sigma], y 1 mg /ml de colagenasa tipo IA [Sigma]). La mezcla se colocó en un baño de agua C 37 ° y se agitó suavemente durante 120 minutos, después de lo cual la mayor parte de la muestra tratada se había desintegrado, dejando principalmente glándulas gástricas aisladas. La mezcla se filtró posteriormente a través de una malla de 200 micras. Las glándulas aisladas se lavaron y se volvieron a suspender en pre-calentado (37 ° C) medio respiratoria (NaCl 132,4 mM, NaH 1,0 mM 2 PO 4, sulfato de magnesio 1,2 mM mM KCl 4, 5.4, 5.0 Na mM 2HPO 4, CaCl 1,0 mM 2, 10 mM indometacina, glucosa 10 mM, y 2 mg /ml de HSA). Las glándulas se transfirieron luego a viales que contenían medio respiratorio fresco a la que hemos añadido uno de los siguientes: el inhibidor de la NOS N G-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME; 1 mmol /L) o equivalentes cantidades de su enantiómero biológicamente inactivo N G-nitro-D-arginina metil éster (D-NAME); el inhibidor de la NOS N G-nitro-L-arginina (L-NNA; 0,1 mmol /L); ya sea de la nitroprusiato de sodio dos donadores de NO (SNP; 1 mmol /l) y S-nitroso-N-acetil-penicilamina (SNAP; 0,1 mmol /L); el sustrato para la producción de NO endógeno, L-arginina (0,1 mmol /L) [15]. Todas las suspensiones de la glándula, incluyendo aquellos que no fueron estimulados, se incubaron en un baño de agua con agitación a 37 ° C durante 30 minutos, después de lo cual hemos añadido histamina a una concentración final de 50 mmol /L o dibutiril-AMPc (db-cAMP) a una concentración final de 1 mmol /L. Para evitar la degradación de los nucleótidos cíclicos, añadimos 0,1 mmol /L 3-isobutil-1-metilxantinas (IBMX) a todos los estímulos.
Determinación de la relación de acumulación aminopirina [14C]
Un método bien establecido utilizado para indirecta medir la secreción de ácido por las glándulas gástricas aisladas es para determinar la acumulación de aminopirina marcado con 14C (AP) en las glándulas sí mismos y en el sobrenadante después de la centrifugación y luego calcular la relación entre estos dos valores (llamado la relación AP) [23] . En resumen, la secreción de ácido se estimuló a 37 ° C durante 40 minutos, y después de que 0,5 Ci [ 14C] se añadió aminopirina marcado a los viales, que luego se incubaron adicionalmente a 37 ° C durante 90 minutos. Después de eso, la suspensión de la glándula se transfirió a tubos previamente secado y pesado, que se centrifugaron a 4000 rpm durante dos minutos. Se eliminó el sobrenadante y se transfiere a viales de centelleo. Los gránulos (glándulas) se secaron a 100 ° C, y se determinó el peso seco, y las glándulas fueron posteriormente resuspendidas en /L de NaOH 0,5 mol a 60 ° C y se transfirieron a viales de centelleo. La radiactividad de las glándulas y el sobrenadante se determinó en un contador de centelleo líquido (1214 Rackbeta, LKB), y la relación de AP se calculó utilizando la siguiente fórmula [24]:
donde IGW es el volumen de agua intraglandular (= 2 × la peso en seco de las glándulas en mg). acumulación
Antecedentes de AP está incluido en los valores que representan la respuesta secretora. Las relaciones de AP para el fondo y las condiciones estimuladas con db-cAMP histamina y difirieron entre los individuos. Por lo tanto, para cada sujeto, se determinó la relación de AP para las glándulas estimuladas y se consideró que el valor de ser 100% y lo usamos como un valor de referencia individual. Todos los valores se basan en análisis individuales. Estadísticas
Los datos se analizaron mediante pruebas de signos de una muestra que comparan los valores medios utilizando el software estadístico Minitab ™. Los valores de p inferior a 0,05 se consideraron significativos.
inmunohistoquímica
glándulas gástricas aisladas de cinco sujetos de prueba se colocaron en el Super cargada de Frost * /Plus portaobjetos de vidrio (Menzel-Gläser, Alemania) y después se lavaron con PBS y permeabilized con 100 % de etanol a -70 ° C durante 5 min. Después de esto, los portaobjetos se incubaron a temperatura ambiente durante la noche con anticuerpo de conejo anti-NOS3 (1: 1000; Santa Cruz Biochemicals) y después se lavaron a fondo en PBS y se incubaron durante 1 h con biotina de cabra anti-conejo anticuerpo secundario. Diapositivas, donde el anticuerpo primario había sido dejado fuera sirvieron como controles negativos. Los portaobjetos se lavaron subsiguientemente de nuevo, y el anticuerpo biotinilado se detectó por la exposición a 20 mg /ml Texas Red ® avidina (Vector Laboratories) durante 1 h. Después de que el tratamiento, los portaobjetos se lavaron y se cubrieron usando Vectashield medio de ® de montaje. Un microscopio de fluorescencia Nikon Eclipse ® E800 con un accesorio de epifluorescencia VFM se utilizó para examinar y evaluar las diapositivas. Un filtro de paso de banda con un rango de longitud de onda de 520-560 nm y un filtro de paso largo con corte fueron empleados en la longitud de onda a 590 nm (para la luz emitida) para visualizar el Texas Red ® moléculas.
Hematoxilina y la tinción eosina
para la evaluación morfológica, las glándulas se fijaron en portaobjetos de vidrio y se tiñeron con hematoxilina de Harris durante cinco minutos y 0,5% y eosina durante dos minutos. Cada paso fue seguido de un enjuague con agua del grifo.
Resultados
Se estudiaron los efectos del NO sobre la secreción de ácido inducida por diversos estimulantes de las glándulas gástricas aisladas de biopsias de estómago de humanos. El examen morfológico de las diapositivas teñidas con hematoxilina-eosina reveló que el procedimiento de aislamiento había cedido con éxito preparaciones enteros-glándula y que las células parietales estaban presentes en las glándulas gástricas. El análisis inmunohistoquímico demostró que las glándulas aislados contenidos eNOS inmunorreactivas células (Fig. 1), lo que concuerda con los resultados obtenidos utilizando otros tipos de preparaciones de la mucosa [22]. Los experimentos de control fueron anticuerpo primario fue excluido no mostró inmunoreactividad. Figura 1 La inmunofluorescencia de una glándula gástrica aislado. Inmunolocalización de la eNOS (puntas de flecha) en una glándula gástrica aislada de la mucosa oxínticas humana se logró utilizando un conejo-eNOS anticuerpo policlonal anti. Los resultados se visualizaron con conjugado de cabra-Red® de Texas IgG anti-conejo. Bar = 30 micras se observó
Antecedentes AP-acumulación
acumulación de AP de fondo en las glándulas aisladas, con una relación media en AP de 8.6. (Rango 2,5 a 22,1; n = 19). Después de la administración de 50 mmol /L de histamina o 1 mmol /L de db-cAMP, los ratios de la mediana de AP fueron 24,7 (5,8-64,5; n = 16) y 38,2 (intervalo de 7,6 a 47,8; n = 11), respectivamente. La respuesta a ambos histamina y db-cAMP supera el fondo por un factor de aproximadamente 2 a 4 en todas las preparaciones (. Figs 2 y 3). Figura 2 La acumulación de 14 aminopirina C-etiquetados en glándulas gástricas de histamina estimulada. Todos los valores se expresan como porcentaje de la secreción de ácido gástrico inducida por histamina (considerados como 100%), que se calcula por separado para las glándulas gástricas aisladas de cada uno de los voluntarios sanos. Cada símbolo representa los resultados de un individuo. a) Acumulación de 14C-aminopirina en las glándulas pretratadas con el NO nitroprusiato de donantes de sodio (SNP, 1 mmol /L) o con L-arginina (0,1 mmol /L), el sustrato para la producción de NO endógeno. Se puede observar que SNP reduce notablemente la acumulación de AP (mediana = 48%; p < 0,05), lo que indica que el NO inhibe la secreción de ácido a partir de las glándulas aisladas. También se muestra el fondo de acumulación 14C-aminopirina (BG). b) La acumulación de 14C-aminopirina en glándulas gástricas pretratadas con la NOS inhibidores de L-NNA (0,1 mmol /L) y L-NAME (1 mmol /L), respectivamente. L-NAME causó aumento de la acumulación (mediana = 147%; p < 0,05), lo que sugiere que la secreción de ácido se eleva cuando se impide la producción endógena de NO, indicando un papel inhibitorio de NO endógeno en glándulas gástricas humanas. D-NAME, que es el estereoisómero biológicamente inactivo de L-NAME, no tenía un efecto sobre la secreción de ácido, y por lo tanto fue usado como una sustancia de control.
Figura 3 Acumulación de aminopirina 14 C-etiquetados de db- cAMP estimulada glándulas gástricas. Todos los valores se expresan como porcentaje de un valor que representa la secreción de ácido gástrico inducida por db-cAMP (considerados como 100%), que se calcula por separado para cada uno de los sujetos estudiados. Cada símbolo representa los datos de un individuo. a) El pretratamiento con SNP (mediana = 63%; p < 0,05) o SNAP (mediana = 81%; p < 0,05) para liberar NO exógeno antes de añadir db-cAMP para estimular la secreción de ácido reduce la acumulación de 14C-aminopirina en glándulas gástricas, en comparación con los niveles de secreción visto en las glándulas no tratados. Esto indica que el NO puede inhibir la secreción de ácido en glándulas gástricas aisladas de seres humanos. b) El tratamiento con L-NAME para inhibir la NOS en las glándulas gástricas aumentó la acumulación de 14C-aminopirina después de la estimulación con db-cAMP (mediana = 152%; p < 0,05). Esos resultados indican que el NO inhibe la secreción de ácido inducida-db-cAMP. El NO sustrato L-arginina reduce la acumulación de 14C-aminopirina en las glándulas estimuladas con db-cAMP (mediana = 77%; p < 0,05). También se muestra la acumulación de fondo (BG).
efecto del NO NOS donantes y los inhibidores de la secreción de ácido gástrico estimulada por histamina
Pre-tratamiento de las glándulas aisladas con el NO exógeno SNP donante (1 mmol /L) redujo la histamina respuesta a una mediana de 48% (n = 7) de la respuesta observada en las glándulas no pre-tratadas (100%). En cuatro de cinco preparaciones de la glándula, el sustrato para la formación de NO endógeno, L-arginina (0,1 mmol /L), disminución de la relación de AP. Este efecto, sin embargo no fue estadísticamente significativa (Fig. 2a). Cuando las glándulas aislados fueron pre-tratados con inhibidor de NOS L-NAME (1 mmol /L), y después se expone a la histamina, la relación de AP fue marcadamente elevada a un valor medio de 147% (n = 13). Aunque se pusieron a prueba un pequeño número de individuos, L-NNA (0,1 mmol /L) dio un resultado similar; 172% (n = 2). En comparación, en los experimentos de control, el análogo de L-NAME-D NOMBRE (1 mmol /L) no tuvo ningún efecto sobre la secreción de ácido estimulada por histamina (Fig. 2b).
Efecto de donadores de NO y los inhibidores de NOS sobre db la secreción de ácido gástrico estimulada por -cAMP
la exposición de las glándulas aisladas a DB-cAMP aumentó la secreción de ácido gástrico en comparación con el nivel de fondo. En comparación con las glándulas no tratados, los que fueron tratadas previamente con SNP (1 mmol /L) o SNAP (0,1 mmol /L) acumulado menos AP después de la estimulación con db-cAMP; 63% (n = 9) y 81% (n = 8), respectivamente (Fig. 3a). Por otra parte, similar a la secreción estimulada por histamina, la secreción inducida por db-cAMP se aumentó a una media de 152% (n = 9) en las glándulas que había sido pre-tratados con L-NAME (1 mmol /L). Aunque ningún efecto sobre la L-arginina sobre la secreción de ácido estimulada por histamina podría ser visto, hubo un efecto significativo de la L-arginina sobre la secreción inducida por db-cAMP. la producción de ácido se inhibió a una mediana de 77% (n = 10) en los pre-tratados con L-arginina (0,1 mmol /L) (Fig. 3b).
Discusión Francia El método de uso de las glándulas gástricas aisladas in vitro es muy adecuado para el estudio de la interacción entre la secreción de ácido gástrico y varias señales endocrinas. Esta técnica se ha evaluado a fondo, principalmente en experimentos con animales, y se ha informado de que ofrecer una buena reproducibilidad [23]. Por otra parte, en un estudio de las glándulas gástricas aisladas de biopsias de estómago tomadas de los seres humanos [24], se encontró que tanto la histamina y db-cAMP inducido respuestas secretoras que eran reproducibles cuando se repite el uso de preparaciones de la glándula del mismo sujeto, aunque hubo una considerable interindividual variación. Fellenius et al. [24] y Haglund et al. [25] han informado de que tanto la histamina y db-cAMP estimulan la secreción de ácido gástrico de las glándulas gástricas humanas aisladas, y esto se observó como un aumento de dos a tres veces en la acumulación de AP en comparación con el nivel de fondo. Estos resultados están de acuerdo con nuestros datos obtenidos usando histamina y db-cAMP. Se sabe que SNP libera NO [26] y, en nuestros experimentos SNP reducción de la secreción de ácido gástrico a partir de glándulas aisladas. Por lo tanto, el NO inhibe la secreción de ácido en glándulas gástricas humanas aisladas. Algunos de los efectos del SNP puede ser debido a las interacciones citotóxicas, aunque no se encontró tal impacto en un estudio de aislados de conejo glándulas gástricas [15]. Para descartar la posibilidad de una influencia citotóxica, hemos realizado experimentos complementarios utilizando el SNAP donante de NO, que tiene propiedades químicas que difieren de las de los SNP. En esos experimentos, se observó la misma reducción en la acumulación de AP después de la estimulación con db-cAMP, lo que favorece aún más la conclusión de que NO es de hecho responsable de los resultados observados. En las glándulas db-cAMP estimulada, la respuesta secretora inducida se redujo en L-arginina, un compuesto que depende de un factor endógeno (es decir, eNOS) para generar NO, aunque que la reducción no fue tan pronunciada como la disminución inducida por SNP y CHASQUIDO. Hay un número de posibles explicaciones para esta observación. Si había ya suficiente L-arginina en las glándulas para sostener la producción de NO en el momento del experimento, la adición de L-arginina era por lo tanto sin efecto. Por otra parte, la L-arginina puede haber tenido un impacto débil debido a que el efecto del NO se produjo a través de la regulación por incremento o disminución de la enzima NOS y no fue influenciado por el acceso al sustrato. No obstante, la L-arginina no disminuyó la acumulación de AP, aunque no tanto como los dadores de NO exógenos condujeron a los presentes dosis. Esto indica que algún proceso específico es responsable de generar NO a partir de L-arginina en glándulas gástricas aisladas. Estos resultados son consistentes con estudios que muestran que SNP, SNAP, y L-arginina inhibe la secreción de ácido estimulada por histamina de las glándulas gástricas aisladas de animales [13, 15]. L-arginina se ha observado también para reducir la secreción de ácido estimulada por carbacol en sapos [16].
En un estudio previo realizado por nuestro grupo de investigación [22], el examen del epitelio glandular de especímenes de mucosa oxíntica humano reveló que una tipo particular de células contenía NOS. Estas células inmunorreactivas eNOS, definidas como células endocrinas, estaban en estrecho contacto con las células parietales. Estas dos características sugieren que las células de este tipo liberan NO, que por lo tanto podría ser un regulador paracrino que afecta directamente a la función de las células parietales. Esta suposición puede ser apoyado por una serie de otras condiciones. Por ejemplo, nadie puede penetrar fácilmente las membranas celulares, lo que puede indicar un sitio de acción intracelular. Además, no tiene una vida útil bastante corta, lo que implica que las fuentes necesarias para generar este óxido debe estar disponible cerca de la célula diana NO. En este estudio, se muestra la ocurrencia de eNOS en las glándulas, pero a principios de extensas investigaciones utilizando anticuerpos contra ambos nNOS e iNOS no han revelado la presencia de cualquiera de las dos isoformas en el epitelio glandular de sujetos humanos normales (observación no publicada). Similar a los resultados obtenidos en un estudio de conejo aisladas glándulas gástricas [15], se encontró que la NOS inhibidores de L-NAME y L-NNA, pero no D-NAME, amplifican el efecto de la secreción de la estimulación de la histamina, lo que indica además que la glándulas humanas aisladas que utilizamos contenían la enzima nOS. Tanto el aumento en la relación AP que se observó después de la inhibición de la NOS y la disminución de respuestas secretoras que hemos observado en las glándulas tratados con L-arginina fortalecer la hipótesis de que NO es producido por las células en el epitelio glandular y, cuando se libera, que interfiere con la secreción de ácido estimulada. Curiosamente, las observaciones mencionadas sugieren que la liberación de NO se mantiene, independientemente de si la secreción de ácido se estimula, lo que implica que el NO funciona como un inhibidor endógeno de la secreción de ácido gástrico. La intensidad de esta inhibición probablemente depende del número de eNOS que contienen células endocrinas similares que están presentes en la vecindad de las células parietales.
Los mecanismos exactos detrás de esta regulación paracrina de la secreción de ácido gástrico aún no se ha dilucidado. Hay varios caminos diferentes dentro de la célula parietal que pueda estar afectado por el NO. Puede inducir ADP ribosilación de G-actina [27], lo que influye en el citoesqueleto. Esto podría ser esencial para los cambios morfológicos que las células parietales exhibición durante la secreción de ácido. En consecuencia, si NO tiene un impacto persistente en un elemento tal como el citoesqueleto, que podría desempeñar un papel en la hipótesis de reciclaje membrana propuesto por Forte et al. [28]. En pocas palabras, que la teoría sugiere que las células parietales someterse a las siguientes alteraciones morfológicas: tienen una superficie de secreción activa grande durante la fase de estimulación, y muestran una superficie de secreción activa mínima durante la fase de reposo
Puesto que se sabe que es la guanilato ciclasa. un objetivo general de NO en muchos sistemas de células, algunos investigadores han sugerido que el NO ejerce sus efectos a través de guanosina cíclica 3 ', 5'-monofosfato (cGMP) tanto en las células parietales rata y conejo [13, 15]. Un estudio en curso en nuestro laboratorio mostrará si este es el caso en las células parietales humanos. efectos aguas abajo de cGMP pueden incluir la activación de una serie de efectores, tales como canales de iones, proteínas quinasas, fosfodiesterasas y [29]. También es posible que el NO puede ejercer su efecto por sí solo, sin necesidad de pasar otras moléculas de señalización. En condiciones experimentales, el NO puede inducir nitrosilación y nitración de proteínas celulares, aunque eso no es probablemente el caso in vivo, puesto que estas dos procesos a menudo resultan daños permanentes en las funciones vitales [30]. Hay una posibilidad de que la supresión de la secreción de ácido se produce no sólo en el nivel de célula parietal, pero a través de otros tipos de células. ECL-células son probablemente presente en la preparación glandular y en la rata, estas células tienen la capacidad de liberación de histamina en respuesta al aumento de los niveles intracelulares de AMPc [31]. NO puede inhibir esta liberación de histamina [14] y de este modo contribuir aún más a la inhibición de la secreción ácida. Aunque no se sabe poco acerca de ECL-células humanas y los efectos del NO sobre la liberación de histamina, hay estudios que indican que las diferencias entre especies en otras células secretoras de histamina. Por ejemplo, se ha demostrado que los mastocitos de rata para producir un "factor de NO-como" que inhibe la liberación de histamina [32] mientras que hay investigaciones que indican que el NO no afecta la secreción de histamina en basófilos humanos [33]. En la actualidad sólo podemos establecer diferencias en la respuesta inhibitoria a la L-arginina para la histamina y la estimulación db-cAMP.
Se necesitan más investigaciones para aclarar el papel del NO en función de la célula parietal.
Conclusiones Las conclusiones de
el presente estudio sugieren que el NO producido de forma endógena en la mucosa oxínticas humana puede reducir los efectos estimulantes de la histamina o db-cAMP sobre la secreción de ácido gástrico. Se obtuvieron resultados uniformes de las glándulas gástricas aisladas de diferentes sujetos humanos sanos, lo que implica que NO liberado a partir de células específicas dentro de la mucosa secretora juega un importante papel fisiológico en la regulación de la secreción de ácido gástrico.
Declaraciones
Agradecimientos
agradecemos a Ulf Hannestad para llevar a cabo las pruebas de aliento de ureasa, Inga-Lill Andersson y Gunilla Strand para obtener ayuda con los procedimientos gastroscopia y Marja Tjädermo para la asistencia técnica. Este trabajo fue apoyado por AstraZeneca R & D, Suecia.
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intereses Ninguno declarado en competencia.

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