-óxido nítrico um inibidor endógeno da secreção de ácido gástrico, em glândulas gástricas isoladas humanos

-óxido nítrico um inibidor endógeno da secreção de ácido gástrico, em glândulas gástricas isoladas humanos
Resumo
fundo
óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) anteriormente foi detectado na parte glandular da mucosa gástrica humana. Além disso, tem sido mostrado de óxido nítrico (NO) para influenciar a secreção gástrica em vários modelos animais. O presente estudo foi realizado para investigar a influência da exogenamente e endogenamente derivado NO sobre a secreção de ácido gástrico histamina e estimulou-cAMP nas glândulas oxínticas humanos isolados.
Métodos
glândulas oxínticas foram isolados a partir de biópsias gástricas humanas e foram posteriormente pré tenha sido tratada com com dadores de NO e inibidores da sintase do óxido nítrico e, em seguida, expostos a histamina ou dibutiril-AMPc (db-cAMP). A resposta de secreção das glândulas foi determinada como acumulação de [ 14C] aminopirina.
Resultados
A secreção de ácido histamina ou db-cAMP induzida foi atenuada pela L-arginina, uma fonte conhecida de NO endógeno , e também por o nitroprussiato de nO-dadores de sódio (SNP) e S-nitroso-N-acetil-penicilamina (SNAP). Pré-tratamento com qualquer um dos inibidores de NOS N L-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME) ou N L-nitro-L-arginina (L-NNA) aumentou a resposta secretora.
Conclusão
os nossos resultados mostram que o nO inibe a secreção de ácido gástrico em glândulas gástricas isoladas humanos, e que não há formação endógena de nO no epitélio glandular na vizinhança das células parietais.
fundo
óxido nítrico (nO) é produzido a partir de L-arginina, numa reacção catalisada pela enzima óxido nítrico sintase (nOS) [1, 2]. O NO é uma molécula de sinalização biológica importante que influencia a circulação através do controlo do tono do músculo liso vascular e modulação da pressão arterial sistémica. Além disso, o NO está envolvido em neurotransmissão; é um fator crítico na resposta inflamatória ea imunidade [3-5]; e tem sido demonstrado exercer efeitos positivos sobre a defesa da mucosa no sistema gastrointestinal. Em vários estudos (para revisão, ver [6]), lesão da mucosa induzida quimicamente parecia ser reduzida por adição simultânea de NO e prejudicada pela remoção de NO a partir da mucosa gástrica. Uma explicação para estes resultados pode ser que o NO aumenta o fluxo sanguíneo da mucosa [7], e tem sido sugerido que o NO aumenta a libertação de muco [8]. É provável que o NO também está envolvido na regulação de outros processos de secreção no sistema gastrointestinal. Takeuchi e colaboradores [9] relataram que o NO inibe a secreção de bicarbonato duodenal, ao passo que outros investigadores propuseram que a secreção de bicarbonato é estimulada por NO [10, 11]. Além disso, vários estudos têm indicado que não afeta a secreção de ácido gástrico [12-16]. As experiências com animais
forneceram informações conflitantes sobre a interação entre NO e secreção de ácido gástrico. Por exemplo, estudos in vitro têm demonstrado que o NO estimula a secreção de ácido gástrico no rato [17, 18] e rã gigante [19]. Além disso, resultados semelhantes foram obtidos em cães [12]. No entanto, outras investigações têm demonstrado que o NO inibe a secreção de ácido gástrico no rato [13, 14], em glândulas gástricas isoladas de coelhos [15], e na mucosa do sapos [16]. Estudos de seres humanos apresentaram dados indicando que o NO pode inibir tanto aumentar o pH intragástrico e [20, 21], mas que ainda não se sabe como este composto participa na secreção do ácido gástrico em seres humanos.
Num estudo anterior, verificou-se morfológica de suporte que o nO endógeno desempenha um papel na regulação da função da célula parietal [22]. Além disso, os dados de imuno-histoquímica de investigação que revelou a presença de NOS endógena nas células epiteliais da mucosa oxíntica humano normal, mais precisamente, na superfície tanto células mucosas e células endócrinas. Além disso, observou-se que houve contactos estreitos entre as células eNOS-positivas e células parietais ou porque os eNOS-positivos células contactadas células parietais via prolongamentos citoplasmáticos ou foram invaginado por uma célula parietal. Com base nestes resultados, juntamente com as propriedades químicas de NO, concluiu-se que o NO derivado das células endócrinas-like pode ser um regulador parácrina da secreção de ácido gástrico. No presente estudo, o nosso objectivo foi verificar o efeito de NO exógeno sobre a secreção de ácido gástrico estimulada pela histamina e cAMP em seres humanos, e também para determinar se NÃO endogenamente derivada tem um efeito funcional em células parietais humanos.
Métodos
sujeitos e aprovação ética
Vinte e quatro homens saudáveis, com idade entre 22 e 31 anos foram recrutados como voluntários pagos. Os critérios de selecção estipulado que os indivíduos tinham que estar livre de doença e não deveria ter tomado qualquer medicação ou bebido álcool durante pelo menos uma semana antes do exame. Os homens em jejum por pelo menos seis horas antes do exame. Anestesia Pharyngeal
foi induzida com spray de lidocaína (xilocaína ®, AstraZeneca, Södertälje, Suécia), após o qual gastroscopia de rotina foi realizada utilizando um Olympus GIF-100 endoscópio. Comprima pinça de biópsia (Olympus FB 24K-1) foram usadas para tomar amostras de tecido a partir da curvatura maior, imediatamente distal ao fundo. Em todos os assuntos, a mucosa gástrica parecia ser normal, tanto macroscopicamente e histologicamente. Todos os indivíduos apresentaram resultados negativos para infecção pelo Helicobacter pylori
no teste da urease respiração (Diabact ® UBT 50 mg 13 C-ureia, Diabact AB, Uppsala, Suécia).
Os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê Regional de Ética para Pesquisa em Seres Humanos do Hospital Universitário, Linköping, Suécia (arquivo não 02-039.), e todos os sujeitos deram consentimento informado.
estudo secretora
Isolamento e incubação de glândulas gástricas
Os experimentos atuais foram com base numa técnica que foi descrita pela primeira vez em 1976 para uso em coelhos in vitro [23] e está agora bem estabelecido para a determinação indirecta da secreção de ácido gástrico induzida por vários estímulos. O método de isolamento de glândulas gástricas foi inicialmente desenvolvido para tecido animal, mas foi posteriormente refinado de modo a que também poderia ser aplicada a pequenas quantidades de tecidos humanos [24].
As biópsias da mucosa oxínticas humanos utilizados no nosso estudo foram lavadas e não armazenado do que 15 minutos em solução salina tamponada com fosfato oxigenado gelado (PBS). As amostras de tecido foram cortadas em pedaços pequenos com um par de tesouras e transferido para oxigenada (100% O 2) (NaCl 130,0 mM de solução de enzima colagenase, NaHCO 12,0 mM de 3, de Na 3,0 mM 2HPO 4, 3,0 mM K 2HPO 4, MgSO 2,0 mM 4, CaCl 1,0 mM 2, mM N 0,1 (alfa) tosil-L-lisina clorometil cetona [ ,,,0],TLCK], 10 uM de indometacina, 10 mM de glucose, 2 mg /ml de albumina de soro humano [HSA; Sigma], e 1 mg /ml de colagenase de tipo IA [Sigma]). A mistura foi colocada num banho de água a 37 ° C e foi suavemente agitada durante 120 minutos, após o que a maior parte das amostras tratadas se desintegrou, deixando glândulas gástricas isoladas principalmente. A mistura foi subsequentemente filtrada através de uma malha de 200 um. As glândulas isoladas foram lavadas e re-suspensas em pré-aquecido (37 ° C) forma respiratória (NaCl 132,4 mM, NaH 1,0 mM 2 PO? 4, MgSO 1,2 mM 4, KCl 5,4 mM, 5,0 Na mM 2HPO 4, CaCl 1,0 mM 2, 10

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