Stickoxid-ein endogener Inhibitor der Magensäure-Sekretion in isolierten menschlichen Magen glands

Stickoxid-endogener Inhibitor der Magensäure-Sekretion in isolierten menschlichen Magendrüsen
Zusammenfassung
Hintergrund
endotheliale NO-Synthase (eNOS) hat zuvor wurde in dem glandulären Teil der menschlichen Magenschleimhaut nachgewiesen. Weiterhin hat Stickstoffmonoxid (NO) wurde Magensekretion in verschiedenen Tiermodellen gezeigt, zu beeinflussen. Die vorliegende Studie wurde durchgeführt, um den Einfluss von exogen zu untersuchen und endogen NO abgeleitet auf Histamin-und cAMP-stimulierte Magensäure-Sekretion in isolierten humanen oxyntic Drüsen.
Methoden
Oxyntic Drüsen wurden aus menschlichen Magen-Biopsien isoliert und wurden anschließend vor -behandelten mit NO-Donatoren und Stickstoffmonoxid-Synthase-Inhibitoren und dann ausgesetzt Histamin oder Dibutyryl-cAMP (db-cAMP). Die sekretorische Reaktion der Drüsen wurde als Ansammlung von [ 14C] Aminopyrin bestimmt.
Ergebnisse
die Histamin- oder db-cAMP-induzierte Säuresekretion von L-Arginin, einer bekannten Quelle von endogenem NO abgeschwächt wurde und auch durch die NO-Donatoren Natriumnitroprussid (SNP) und S-Nitroso-N-acetyl-Penicillamin (SNAP). Vorbehandlung mit entweder der NOS-Inhibitoren N G-nitro-L-argininmethylester (L-NAME) oder N G-nitro-L-Arginin (L-NNA) verstärkte die Sekretionsreaktion.
Fazit
Unsere Ergebnisse zeigen, dass NO die Sekretion von Magensäure in isolierten humanen Magendrüsen hemmt, und dass es die endogene Bildung von NO im Drüsenepithel in der Nähe der Belegzellen.
Hintergrund
Stickstoffmonoxid (NO) wird aus L-Arginin in einer Reaktion hergestellt, katalysiert durch das Enzym NO-Synthase (NOS) [1, 2]. NO ist ein wichtiger biologischer Signalmolekül, das Zirkulation beeinflusst durch vaskuläre glatte Muskeltonus regulieren und den systemischen Blutdruck zu modulieren. Ferner wird NO in der Neurotransmission beteiligt sind; es ist ein kritischer Faktor in der Entzündungsreaktion und Immunität [3-5]; und es hat sich positive Auswirkungen auf die Schleimhaut Verteidigung im Magen-Darm-System auszuüben gezeigt. In mehreren Studien (zur Übersicht siehe [6]), schien chemisch induzierte Schädigung der Schleimhaut durch gleichzeitige Zugabe von NO und beeinträchtigt durch die Entfernung von NO aus der Magenschleimhaut verringert werden. Eine Erklärung für diesen Befund könnte sein, dass NO Blutung der Schleimhaut [7] erhöht, und es wurde vorgeschlagen, dass NO die Freisetzung von Schleim [8] erweitert. Es ist wahrscheinlich, dass NO auch in der Regulation der anderen sekretorischen Prozessen im gastrointestinalen System beteiligt ist. Takeuchi und Mitarbeiter [9] haben berichtet, dass NO die Sekretion des Ulcus Bicarbonat hemmt, während andere Forscher vorgeschlagen haben, dass Bicarbonat-Sekretion von NO stimuliert wird [10, 11]. Darüber hinaus haben mehrere Studien gezeigt, dass NO die Sekretion von Magensäure beeinflusst [12-16].
Tierversuche widersprüchliche Informationen über die Interaktion zwischen NO und Magensäuresekretion zur Verfügung gestellt haben. Beispielsweise haben Studien in vitro gezeigt, dass NO Sekretion von Magensäure in der Maus stimuliert [17, 18] und Ochsenfrosch [19]. Darüber hinaus wurden ähnliche Ergebnisse wurden bei Hunden erhalten [12]. Allerdings haben andere Untersuchungen gezeigt, dass NO Magensäuresekretion bei der Ratte [13, 14], in Magendrüsen isoliert von Kaninchen [15], und in Schleimhäuten von Kröten [16] hemmt. Studien von Menschen zur Verfügung gestellten Daten haben darauf hinweist, dass NO sowohl hemmen und erhöhen intragastrischen pH [20, 21], aber es noch nicht bekannt ist, wie diese Verbindung in die Magensäuresekretion beim Menschen beteiligt ist.
In einer früheren Studie fanden wir morphologische Unterstützung, dass endogene NO spielt eine Rolle bei der Regulation der Belegzellen Funktion [22]. Auch die immunhistochemische Daten aus dieser Untersuchung zeigte die Anwesenheit von endogenen NOS in Epithelzellen der normalen menschlichen oxyntic mucosa, genauer gesagt, in beiden Schleimhautzellen und endokrinen Zellen Oberfläche. Außerdem beobachteten wir, dass es enge Kontakte zwischen eNOS-positiven Zellen und Belegzellen entweder weil die eNOS-positiven Zellen Belegzellen über zytoplasmatische Prozesse in Kontakt gebracht oder wurden von einem Belegzellen stülpt. Aufbauend auf diesen Erkenntnissen, zusammen mit den chemischen Eigenschaften von NO, schlossen wir, dass NO aus den endokrinen artigen Zellen abstammen könnte eine parakrine Regulator der Magensäuresekretion sein. In der vorliegenden Studie war es unser Ziel, die Wirkung von exogenen NO auf Histamin-und cAMP-stimulierte Magensäure-Sekretion beim Menschen zu überprüfen, und auch eine funktionale Wirkung zu bestimmen, ob endogen abgeleiteten NO auf die menschliche Belegzellen hat.
Methoden
Themen und ethische Genehmigung
Vierundzwanzig gesunde Männer im Alter von 22 bis 31 Jahre wurden als bezahlte Freiwillige rekrutiert. Die Auswahlkriterien festgelegt, dass die Themen von der Krankheit frei zu sein hatte und sollten keine Medikamente oder aufgesaugt für mindestens eine Woche vor der Prüfung Alkohol genommen haben. Die Männer gefastet für mindestens sechs Stunden vor der Prüfung.
Pharyngeal Anästhesie wurde mit Lidocain-Spray (Xylocain ®, Astrazeneca, Södertälje, Schweden) induziert, wonach Routine Gastroskopie wurde ein Olympus GIF-100 Endoskop durchgeführt werden. Einklemmen Biopsiezange (Olympus FB 24K-1) wurden verwendet, Proben zu nehmen Gewebe von der großen Kurvatur, unmittelbar distal des Fundus. In allen Fächern erschien die Magenschleimhaut sowohl makroskopisch und histologisch normal zu sein. Alle Probanden getestet negativ für Helicobacter-pylori-Infektion
im Urease-Atemtest (Diabact ® UBT 50 mg 13C-Harnstoff, Diabact AB, Uppsala, Schweden)., Die experimentellen Verfahren durch die genehmigt Regional Ethikkommission für Humanforschung an der Universitätsklinik, Linköping, Schweden (File-Nr. 02-039), und alle Probanden gaben ihr Einverständnis.
sekretorischen Studie
Isolierung und Inkubation von Magendrüsen
Die aktuellen Versuche waren basiert auf einer Technik, die erstmals 1976 für die Verwendung in Kaninchen in vitro beschrieben wurde [23] und ist nun gut etabliert für die indirekte Bestimmung der Magensäuresekretion durch verschiedene Stimuli induziert. Verfahren nach Magendrüsen Isolierung wurde zunächst für tierischem Gewebe entwickelt, aber es wurde später verfeinert, so dass es auch kleine Mengen an menschlichem Gewebe [24] angewandt werden. Die menschliche oxyntic Schleimhautbiopsien in unserer Studie verwendet wurden gewaschen und
nicht mehr als 15 Minuten in eiskaltem oxygenierten phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) gelagert. Die Gewebeproben wurden mit einer Schere in kleine Stücke geschnitten und an oxygenierten (100% O 2), Kollagenase-Enzymlösung (130,0 mM NaCl, 12,0 mM NaHCO 3, 3,0 mM Na 2HPO 4, 3,0 mM K 2HPO 4, 2,0 mM MgSO 4, 1,0 mM CaCl 2, 0,1 mM N (alfa) Tosyl-L-Lysin-chlormethylketon [ ,,,0],TLCK], 10 uM Indomethacin, 10 mM Glucose, 2 mg /ml humanes Serumalbumin [HSA, Sigma] und 1 mg /ml Kollagenase Typ IA [Sigma]). Die Mischung wurde in einem 37 ° C Wasserbad gestellt und wurde 120 Minuten lang sanft gerührt, wonach die meisten der behandelten Probe aufgelöst war, hauptsächlich isolierten Magendrüsen zu verlassen. Das Gemisch wurde anschließend durch ein 200 um Sieb filtriert. Die isolierten Drüsen wurden gewaschen und in vorgewärmten (37 ° C) Atmungsmedium (132,4 mM NaCl, 1,0 mM NaH 2PO 4, 1,2 mM MgSO 4, 5,4 mM KCl, 5,0 resuspendiert mM Na 2HPO 4, 1,0 mM CaCl 2, 10 &mgr; M Indomethacin, 10 mM Glucose und 2 mg /ml HSA). Die Drüsen wurden dann in Ampullen überführt, die frischen Atem Medium, dem haben wir eine der folgenden Möglichkeiten: die NOS-Inhibitor N G-Nitro-L-Arginin-Methylester (L-NAME, 1 mmol /l) oder äquivalente Mengen seine biologisch inaktive Enantiomer N G-Nitro-D-Arginin-Methylester (D-NAME); der NOS-Inhibitor N G-nitro-L-Arginin (L-NNA; 0,1 mmol /L); entweder der beiden NO Donatoren Natriumnitroprussid (SNP, 1 mmol /l) und S-Nitroso-N-acetyl-Penicillamin (SNAP; 0,1 mmol /L); das Substrat für endogene NO-Produktion, L-Arginin (0,1 mmol /L) [15]. Alle gland Suspensionen, auch solche, die nicht stimuliert wurden, wurden bei 37 ° C für 30 Minuten in einem Schüttelwasserbad inkubiert, wonach man Histamin in einer Endkonzentration von 50 &mgr; mol /L oder Dibutyryl-cAMP (db-cAMP) hinzugefügt um eine Endkonzentration von 1 mmol /L. Um den Abbau von zyklischen Nukleotide zu verhindern, haben wir 0,1 mmol /L 3-Isobutyl-1-methylxantine (IBMX) an alle Stimulationen.
Bestimmung der [14C] Aminopyrin Akkumulation Verhältnis
Eine gut etablierte Methode verwendet, um indirekt Säuresekretion von isolierten Magendrüsen messen ist Anhäufung von 14C-markiertes Aminopyrin (AP) in den Drüsen selbst zu bestimmen und in dem Überstand nach Zentrifugation und dann das Verhältnis zwischen diesen beiden Werten berechnet werden (genannt der AP-Verhältnis) [23] . Kurz gesagt, wurde die Säuresekretion für 40 Minuten bei 37 ° C stimuliert und danach 0,5 uCi [ 14C] -markierten Aminopyrin zu den Fläschchen hinzugegeben, die 90 Minuten, dann weiter bei 37 ° C inkubiert wurden. Danach wurde die Drüse Suspension vorher getrocknet und gewogen Röhrchen überführt, die zwei Minuten lang bei 4000 rpm zentrifugiert wurden. Der Überstand wurde in Szintillationsfläschchen entfernt und übertragen. Die Pellets (Drüsen) wurden bei 100 ° C getrocknet und das Trockengewicht wurde bestimmt, und die Drüsen wurden anschließend in 0,5 mol /L NaOH bei 60 ° C und überführt in Szintillationsfläschchen resuspendiert. Die Radioaktivität der Drüsen und der Überstand wurde in einem Flüssigszintillationszähler (1214 Rackbeta, LKB) bestimmt, und die AP-Verhältnis wurde anhand der folgenden Formel berechnet [24]:
wo IGW ist intraglanduläre Wasservolumen (= 2 × Trockengewicht von Drüsen in mg).
Hintergrund Ansammlung von AP ist in den Werten, die die sekretorischen Antwort enthalten. Die AP-Verhältnisse für Hintergrund und Histamin-und db-cAMP-stimulierte Bedingungen unterschieden sich zwischen den Individuen. Daher wird für jeden Probanden stellten wir fest, die AP-Verhältnis für stimulierte Drüsen und diesen Wert als 100% sein und verwendet es als individueller Referenzwert. Alle Werte basieren auf Einzelanalysen. Statistik
Daten von einer Stichprobe Zeichen Tests analysiert wurden verglichen Medianwerte mit MINITAB ™ Statistical Software. P-Werte von weniger als 0,05 wurden als signifikant angesehen.
Immunhistochemie
Isolierte Magendrüsen von fünf Testpersonen wurden auf geladene platziert Super-Frost * /Plus Objektträger aus Glas (Menzel-Gläser, Deutschland) und dann mit PBS gewaschen und mit 100 permeabilisiert % Ethanol bei -70 ° C für 5 min. (:; Santa Cruz Biochemicals 1000 1) und dann gründlich in PBS gewaschen und 1 h mit biotinyliertem Ziege-anti-Kaninchen-Sekundärantikörper inkubiert, danach wurden die Objektträger bei Raumtemperatur über Nacht mit Kaninchen-Anti-NOS3 Antikörper inkubiert. Slides, wo primäre Antikörper gedient hatte weggelassen ist als negative Kontrollen. Die Objektträger wurden anschließend wieder gewaschen und biotinylierten Antikörper wurde durch Exposition gegenüber 20 ug /ml Texas Red ® Avidin (Vector Laboratories) für 1 h festgestellt. Nach dieser Behandlung wurden die Objektträger gewaschen und Eindecken Vectashield ® Montagemedium. Es wurde eine Nikon Eclipse- ® E800 Fluoreszenzmikroskop mit einem VFM EPI-Fluoreszenzaufsatz verwendet, um die Folien zu untersuchen und zu bewerten. Ein Bandpassfilter mit einem Wellenlängenbereich von 520-560 nm und einem langen Passfilter mit Cut-on-Wellenlänge bei 590 nm (für emittierte Licht) wurden die Texas-Rot zu visualisieren beschäftigt ® Moleküle.
Hematoxylin und Eosin-Färbung
für morphologische Auswertung wurden Drüsen auf Glasobjektträger fixiert und mit Harris Hämatoxylin für fünf Minuten und 0,5% Eosin Y für zwei Minuten. Jeder Schritt wurde von einer Spülung in Leitungswasser.
Ergebnisse
wir die Auswirkungen von NO auf die Säuresekretion durch verschiedene Stimulanzien in Magendrüsen isoliert von Magen-Biopsien von Menschen verursachte untersucht. Morphologische Untersuchung der Hämatoxylin-Eosin-gefärbten Objektträger ergeben, dass die Isolationsverfahren erfolgreich ganze Drüsen Vorbereitungen nachgegeben hatte und dass die Belegzellen waren in den Magendrüsen. Immunhistochemische Analyse zeigte, dass die isolierten Drüsen enthalten eNOS-immunoreaktive Zellen (Fig. 1), was mit den Ergebnissen übereinstimmt, erhalten unter Verwendung anderer Arten von Schleimhaut Zubereitungen [22]. Kontrollexperimente wurden primäre Antikörper ausgeschlossen wurde keine Immunreaktivität zeigte. Abbildung 1 Immunofluoreszenz einer isolierten Magendrüsen. Immunolokalisation von eNOS (Pfeilspitzen) in einer Magen aus humanen oxyntic Schleimhaut isoliert Drüse wurde anti-eNOS polyklonalen Antikörper unter Verwendung eines Kaninchen erreicht. Die Ergebnisse wurden mit Texas Red ®-konjugiertem Ziege-anti-Kaninchen-IgG sichtbar gemacht. Bar = 30 &mgr; m
Hintergrund AP-Akkumulation
Hintergrund AP Akkumulation wurde in den isolierten Drüsen beobachtet, mit einer medianen AP-Verhältnis von 8,6. (Bereich 2,5-22,1; n = 19). Nach der Verabreichung von 50 &mgr; mol /l Histamin oder 1 mmol /l db-cAMP wurden die mittleren Verhältnisse AP 24,7 (5,8-64,5; n = 16) und 38,2 (Bereich 7,6 bis 47,8; n = 11) sind. Die Reaktion auf sowohl Histamin und db-cAMP über dem Hintergrund, der durch einen Faktor von etwa 2-4 in allen Zubereitungen (Fig. 2 und 3). Abbildung 2 Anreicherung von 14 C-markierten Aminopyrin in Magendrüsen Histamin-stimulierte. Alle Werte als Prozentsatz der Magensäuresekretion durch Histamin induziert exprimiert werden (als 100% sein), die separat für jedes der gesunden Probanden isoliert Magendrüsen berechnet. Jedes Symbol stellt die Ergebnisse für eine Einzelperson. a) Die Akkumulation von 14C-Aminopyrin in Drüsen mit dem NO-Donator Natriumnitroprussid (SNP, 1 mmol /l) oder mit L-Arginin (0,1 mmol /L), das Substrat für die endogene NO-Produktion vorbehandelt. Es ist ersichtlich, dass SNP deutlich AP Akkumulation reduziert (Median = 48%; p < 0,05), was anzeigt, dass NO Säuresekretion aus den isolierten Drüsen hemmt. Hintergrund 14C-Aminopyrin Akkumulation (bg) ist ebenfalls gezeigt. b) Akkumulation von 14C-Aminopyrin in Magendrüsen vorbehandelt mit dem NOS-Inhibitoren L-NNA (0,1 mmol /l) und L-NAME (1 mmol /L) sind. L-NAME verursacht Gesteigerte Akkumulation (Median = 147%; p < 0,05), was darauf hindeutet, dass die Säuresekretion erhöht wird, wenn die endogene NO-Produktion verhindert wird, eine hemmende Rolle von endogenem NO in menschlichen Magendrüsen anzeigt. D-NAME, welche die biologisch inaktive Stereoisomer von L-NAME ist, hatte keinen Effekt auf die Säuresekretion, und es wurde daher als Kontrollsubstanz verwendet.
Figur 3 Accumulation von 14 C-markiertem Aminopyrin in db- Magendrüsen cAMP-stimulierte. Alle Werte in Prozent eines Wertes ausgedrückt werden, um die Sekretion von Magensäure durch db-cAMP induzierte darstellt (als 100% sein), die für jede der untersuchten Probanden separat berechnet. Jedes Symbol stellt die Daten für eine Einzelperson. a) Die Vorbehandlung mit SNP (Median = 63%; p < 0,05) oder SNAP (Median = 81%; p < 0,05) exogene NO freizugeben, bevor db-cAMP Zugabe reduziert Säuresekretion stimulieren die Akkumulation von 14C-Aminopyrin in Magendrüsen, wie auf ein Niveau von Sekret in unbehandelten Drüsen gesehen verglichen. Dies weist darauf hin, dass NO Säuresekretion in Magendrüsen isoliert von den Menschen hemmen können. b) Die Behandlung mit L-NAME zu hemmen NOS in den Magendrüsen erhöht die Akkumulation von 14C-Aminopyrin nach Stimulation mit db-cAMP (Median = 152%; p < 0,05). Diese Ergebnisse zeigen, dass NO db-cAMP-induzierte Säuresekretion inhibiert. Das NO Substrat L-Arginin verringert die Akkumulation von 14C-Aminopyrin in db-cAMP-stimulierte Drüsen (Median = 77%; p < 0,05). Hintergrund Akkumulation (bg) wird auch Wirkung von NO-Donatoren und NOS-Inhibitoren auf die Histamin-stimulierte Magensäuresekretion gezeigt. Bei
Vorbehandlung von isolierten Drüsen mit dem exogenen NO-Donator SNP (1 mmol /L) reduziert die Histamin Antwort auf einen Medianwert von 48% (n = 7) der Reaktion in nicht-vorbehandelten Drüsen (100%) zu sehen. In vier von fünf gland Präparationen, das Substrat für endogene NO-Bildung, L-Arginin (0,1 mmol /L), verringert, um die AP-Verhältnis. Dieser Effekt war jedoch statistisch nicht signifikant (Fig. 2a). Wenn wurden isoliert Drüsen mit NOS-Inhibitors L-NAME (1 mmol /L) vorbehandelt und dann auf Histamin ausgesetzt wurde die AP-Verhältnis auf einen Medianwert von 147% deutlich erhöht (n = 13). Obwohl eine kleine Anzahl von Individuen wurden getestet, L-NNA (0,1 mmol /L) ergab ein ähnliches Ergebnis; 172% (n = 2). Zum Vergleich: In Kontrollexperimenten, die L-NAME-Analogon D-NAME (1 mmol /L) hatte keinen Effekt auf Histamin-stimulierte Säuresekretion (Fig. 2b).
Wirkung von NO-Donoren und NOS-Inhibitoren auf db -cAMP-Magensäuresekretion
die isolierten Drüsen aussetzt db-cAMP erhöht die Sekretion von Magensäure im Vergleich zur Hintergrundebene. Im Vergleich zu unbehandelten Drüsen, diejenigen, die mit SNP (1 mmol /L) oder SNAP (0,1 mmol /L) akkumulierte weniger AP nach Stimulation mit db-cAMP vorbehandelt wurden; 63% (n = 9) und 81% (n = 8), die jeweils (Fig. 3a). Außerdem ähnlich wie Histamin-stimulierte Sekretion, die db-cAMP-induzierte Sekretion wurde einem Median von 152% erhöht (n = 9) in Drüsen, die mit L-NAME (1 mmol /L) vorbehandelt worden war. Obwohl kein Effekt auf die L-Arginin auf die Histamin-stimulierte Säuresekretion gesehen werden konnte, gab es eine signifikante Wirkung von L-Arginin auf db-cAMP-induzierte Sekretion. Säure-Produktion wurde auf einen Mittelwert von 77% gehemmt (n = 10) in diesen vorbehandelten mit L-Arginin (0,1 mmol /L) (Fig. 3b).
Discussion
die Methode der Verwendung von isolierten Magendrüsen in vitro ist die Wechselwirkung zwischen Magensäuresekretion und verschiedene endokrine Signale für die Untersuchung gut geeignet. gründlich untersucht, vor allem in Tierversuchen Diese Technik wurde, und es wurde berichtet, eine gute Reproduzierbarkeit zu bieten [23]. Weiterhin isoliert in einer Untersuchung von Magendrüsen von Magenbiopsien von Menschen entnommen [24], wurde gefunden, daß sowohl Histamin und db-cAMP sekretorischen Antworten induziert, die reproduzierbar waren, wenn sie aus dem gleichen Thema Verwendung gland Präparationen wiederholt, obwohl es beträchtlich war inter Variation. Fellenius et al. [24] und Haglund et al. [25] haben berichtet, daß sowohl Histamin und db-cAMP Magensäuresekretion aus isolierten menschlichen Magendrüsen stimuliert, und dies wurde als zwei- bis dreifachen Anstieg der AP Akkumulation im Vergleich zum Hintergrundpegel beobachtet. Diese Ergebnisse stimmen mit unseren Daten Histamin und db-cAMP erhalten werden. Es ist bekannt, dass SNP frei NO [26], und in unseren Experimenten SNP verminderte Sekretion von Magensäure aus isolierten Drüsen. Daher hemmt NO Säuresekretion in isolierten humanen Magendrüsen. Einige der Wirkungen von SNP kann aufgrund von zytotoxischen Wechselwirkungen sein, obwohl keine solche Wirkung in einer Untersuchung von isolierten Kaninchen-Magendrüsen gefunden wurde [15]. Um die Möglichkeit eines zytotoxischen Einfluss auszuschließen, führten wir komplementären Experimenten unter Verwendung des NO-Donator SNAP, die chemischen Eigenschaften aufweist, die sich von denen unterscheiden SNP. In diesen Experimenten beobachteten wir die gleiche Reduktion der AP Akkumulation nach Stimulation mit db-cAMP, was die Schlussfolgerung begünstigt, dass NO in der Tat ist verantwortlich für die beobachteten Ergebnisse. In db-cAMP-stimulierte Drüsen, wurde die induzierte sekretorischen Reaktion von L-Arginin reduziert, eine Verbindung, die auf einem endogenen Faktor abhängt (dh eNOS) zu erzeugen, NO, obwohl die Reduktion als nicht als die Abnahme induziert durch SNP ausgesprochen und SNAP. Es gibt eine Anzahl von möglichen Erklärungen für diese Beobachtung. Wenn es bereits ausreichend L-Arginin in den Drüsen war die NO-Produktion zum Zeitpunkt des Experiments zu erhalten, Zugabe von L-Arginin war daher ohne Wirkung. Weiterhin ist eine schwache Wirkung hatte L-Arginin haben kann, da die Wirkung von NO Up- oder Down-Regulation des Enzyms erfolgte durch NOS und wurde nicht durch den Zugang zu Substrat beeinflußt. Ungeachtet hat L-Arginin die Ansammlung von AP zu verringern, wenn auch nicht so viel wie die exogenen NO-Donoren hat bei den heutigen Dosen. Dies zeigt an, dass einige spezifische Verfahren zur Erzeugung von NO aus L-Arginin in isolierten Magendrüsen verantwortlich ist. Diese Ergebnisse stehen im Einklang mit Untersuchungen, die zeigen, dass SNP, SNAP und L-Arginin-Histamin-stimulierte Säuresekretion von Magendrüsen von Tieren [13, 15] isoliert gehemmt. L-Arginin hat auch Carbachol-stimulierte Säuresekretion in Kröten zu reduzieren [16] beobachtet.
In einer früheren Studie von unserer Arbeitsgruppe durchgeführt [22], Prüfung des Drüsenepithels von Exemplaren der menschlichen Schleimhaut oxyntic ergab, dass ein bestimmte Art von Zellen NOS enthalten. Diese eNOS-immunoreaktive Zellen, definiert als endokrine Zellen waren in engem Kontakt mit der Belegzellen. Diese beiden Eigenschaften legen nahe, dass Zellen dieser Art Release NO, die somit könnte ein parakrine Regler sein, der direkt die Funktion der Belegzellen beeinflusst. Diese Annahme kann durch eine Anzahl von anderen Bedingungen unterstützt. Beispielsweise können NO penetrieren leicht Zellmembranen, die eine intrazelluläre Wirkungsstelle hinweisen. Auch hat NO eine relativ kurze Lebensdauer, was bedeutet, dass benötigten Quellen dieses Oxid zu erzeugen, müssen verfügbar nahe der NO Zielzelle sein. In dieser Studie wird das Auftreten von eNOS in den Drüsen gezeigt, aber früher umfangreiche Untersuchungen Antikörper gegen sowohl nNOS und iNOS nicht offenbart Vorliegen einer der beiden Isoformen in dem Drüsenepithel von normalen menschlichen Probanden (nicht veröffentlichte Beobachtung) verwendet wird. Ähnlich zu den Ergebnissen in einer Untersuchung von isolierten Kaninchenmagendrüsen erhalten [15], fanden wir, dass die NOS-Inhibitoren L-NAME und L-NNA, aber nicht D-NAME, die Sekretion stimulierenden verstärkten Wirkung von Histamin, das der anzeigt, ferner, dass isolierten humanen Drüsen wir enthielt das verwendete Enzym NOS. Sowohl die Erhöhung der AP-Verhältnis, das wir folgende Hemmung der NOS und die Abnahme in sekretorische Reaktionen beobachtet, die in Drüsen mit behandeltem bemerkt L-Arginin, die Hypothese zu stärken, dass keine von den Zellen in den glandulären Epithel produziert wird und, wenn er losgelassen wird, es stört mit stimulierte Säuresekretion. Interessanterweise schlagen die genannten Beobachtungen, dass die Freisetzung von NO aufrechterhalten wird, unabhängig davon, ob die Säuresekretion stimuliert wird, der als ein endogener Inhibitor der Magensäuresekretion, dass keine Funktionen beinhaltet. Die Intensität dieser Hemmung hängt wahrscheinlich von der Anzahl der eNOS haltigen endokrinen artigen Zellen, die in der Nähe der Belegzellen vorhanden sind., Die genauen Mechanismen hinter dieser parakrine Regulation der Sekretion von Magensäure ist noch nicht geklärt. Es gibt verschiedene Wege in der Belegzellen, die durch NO betroffen sein könnten. Es kann ADP-Ribosylierung von G-Actin [27] zu induzieren, wodurch das Zytoskelett beeinflussen. Dies könnte für die morphologischen Veränderungen notwendig sein, die Zellen zeigen während Säuresekretion parietale. Dementsprechend wird, wenn NO eine persistente Auswirkungen auf ein Element hat wie das Zytoskelett, könnte es eine Rolle bei der Membran-Recycling-Hypothese von Forte et al spielen. [28]. Kurz gesagt, deutet darauf hin, dass die Theorie, dass die Belegzellen die folgenden morphologischen Veränderungen unterzogen: sie eine große aktive sekretorischen Oberfläche während der Stimulationsphase, und sie während der Ruhephase eine minimale aktive sekretorischen Oberfläche anzuzeigen
Da es, dass Guanylatcyclase bekannt ist. ein allgemeines Ziel von NO in vielen Zellsysteme haben einige Forscher vorgeschlagen, dass NO ihre Wirkungen über cyclisches Guanosin-3 'ausübt, 5'-monophosphat (cGMP) in beiden Ratten und Kaninchen Belegzellen [13, 15]. Eine aktuelle Studie in unserem Labor zeigen, ob dies der Fall in der menschlichen Belegzellen ist. Downstream-Effekte von cGMP kann die Aktivierung einer Anzahl von Effektoren umfassen, wie Ionenkanäle, Proteinkinasen, Phosphodiesterasen und [29]. Es ist auch plausibel, dass NO ihre Wirkung allein ausüben kann, ohne durch andere Signalmoleküle wirken. Unter experimentellen Bedingungen kann NO Nitrosylierung und Nitrierung von zellulären Proteinen induzieren, obwohl dies wahrscheinlich nicht der Fall in vivo ist, da oft diese beiden Prozesse zu dauerhaften Schäden an lebenswichtigen Funktionen führen [30]. Es gibt eine Möglichkeit, dass die Unterdrückung der Säuresekretion tritt nicht nur an Parietalzellen Ebene, sondern über andere Zelltypen. ECL-Zellen wahrscheinlich in der glandulären Herstellung sind und in der Ratte, haben diese Zellen die Fähigkeit, Histamin in Reaktion auf erhöhte intrazelluläre Niveaus von cAMP zu lösen [31]. NO kann dieses Histamin-release [14] hemmen und dadurch auf die Hemmung der Säuresekretion bei. Obwohl es nur wenig über die menschliche ECL-Zellen und die Wirkungen von NO auf die Histamin-Freisetzung bekannt ist, gibt es Studien, die Speziesunterschiede in anderen Histamin-sezernierenden Zellen zeigen. Zum Beispiel wurden Ratten-Mastzellen wurde ein "NO-like factor", die Histamin-Freisetzung hemmt [32] gezeigt zu erzeugen, während es Untersuchungen, die zeigen, dass NO nicht Histamin-Sekretion in menschlichen Basophilen nicht beeinträchtigt [33]. Derzeit können wir nur Unterschiede in hemmende Reaktion auf L-Arginin für Histamin und db-cAMP Stimulation etablieren. Was sind weitere Untersuchungen notwendig, um die Rolle von NO in Belegzellen Funktion zu klären.
Schlussfolgerungen
Die Ergebnisse in der vorliegenden Studie legen nahe, dass NO endogen in der menschlichen Schleimhaut oxyntic erzeugt wird, kann die stimulierende Wirkung von Histamin oder db-cAMP auf die Sekretion von Magensäure verringern. Wir erhielten einheitliche Ergebnisse für Magen aus verschiedenen gesunden Probanden isoliert Drüsen, die das NO aus spezifischen Zellen innerhalb der sekretorischen Schleimhaut freigesetzt impliziert spielt eine wichtige physiologische Rolle bei der Regulation der Sekretion von Magensäure.
Erklärungen
Danksagung
Wir danken Ulf Hannestad für die Urease-Atemtests durchgeführt, Inga-Lill Andersson und Gunilla Strand für die Hilfe bei der Gastroskopie Verfahren und Marja Tjädermo für technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde von Astrazeneca R &unterstützt; D, Schweden.
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Keine erklärt.

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