Žalúdočné supernatant karcinóm spôsobuje apoptózu a fibrózu v peritoneálnej tkanív a vedie priaznivého prostredia pre peritoneálnej metastázy, in vitro a in vivo

žalúdka nádorové bunky supernatant spôsobuje apoptózu a fibrózu v peritoneálnej tkanív a vedie k vytváraniu prostredia priaznivého pre peritoneálnej metastázy, v vitro a in vivo
Abstract
pozadia
v tejto štúdii sme skúmali účinky rozpustných faktorov uvoľnených buniek karcinómu žalúdka z peritoneálnych mezoteliálnych buniek in vitro a in vivo

.
metódy
HMrSV5, ľudská peritoneálnej mesothelial bunková línia sa vyliahli sa supernatanty z buniek karcinómu žalúdka. boli pozorované morfologické zmeny HMrSV5 buniek. Apoptóza HMrSV5 buniek bola pozorovaná pod transmisnom elektrónovom mikroskope a kvantitatívne určená testom MTT a prietokovej cytometrie. Výrazy proteínov apoptózy súvisiace s (kaspázy-3, kaspázy-8, Bax, BCL-2) boli hodnotené imunochemicky.
Výsledky
Nápadné morfologické zmeny, ktoré naznačujú, apoptózy boli pozorované u HMrSV5 buniek 24 hodín po ošetrení supernatantu buniek karcinómu žalúdka. In vivo
, peritoneálnej tkanivá ošetrené supernatantom žalúdočné nádorových buniek boli v podstate zahustený a obsahuje rozsiahlu fibrózu.
Závery
Tieto zistenia ukazujú, že supernatanty buniek karcinómu žalúdka môže indukovať apoptózu a fibrózu v HMrSV5 human peritoneálnej mesothelial bunky prostredníctvom supernatanty v skorej peritoneálnej metastázy, v závislosti na čase, a ukazujú, že rozpustné faktory v peritoneálnej dutine vplyv na morfológiu a funkciu mezoteliálnych buniek, tak, aby výsledná prostredí môže byť priaznivé pre peritoneálnej metastáz.
kľúčové slová
peritoneálnej Karcinomatóza žalúdočné novotvary Mezotelová apoptózu buniek fibróza pozadí
peritoneálnej karcinosou výrazne obmedzuje zlepšenie prognózy pacientov s karcinómom žalúdka 'po operácii [1]. Peritoneálnej výsledky metastázy v metastatické kaskády, zvyčajne sa vyskytujúce na rozvoj nádoru neskorej fáze, čo významne prispieva k žalúdočným úmrtnosti súvisiacej s rakovinou. Mechanizmy peritoneálnej metastázy difúzne infiltrujúcej karcinóm ešte nie je presne známy.
Peritoneálnou stróma prostredie podporuje proliferáciu nádorových buniek tým, že slúži ako bohatý zdroj rastových faktorov a chemokiny známe, že sa podieľa na nádorových metastáz. Molekuly sprostredkujúce túto kaskádu ešte nebolo skúmané [2]. Údajne, mezoteliálnych buniek by mohlo zabrániť invázii rakoviny a prechádzajú morfologické zmeny v závislosti na rozpustných faktorov uvoľňovaných rakovinovými bunkami [3]. Špecifické molekuly zapojené do tohto procesu sú dané vnútornými charakteristikami metastatických nádorových buniek. Nádorové bunky potrebujú pripojiť pevne na submesothelial jednovrstvové a preniknúť mezotelových monovrstvu pre inváziu. Buck et al.
[4] skúmali ochranný účinok mezotelových vrstve, za použitia potkana modelu, v ktorom bola mesothelial obloženie parietálnych peritoneum odparí vo experimentálnych potkanov, pričom bazálnej membrány neporušené. skôr sme ukázali, že vrstva konfluentní, intaktné bunky mezotelových bráni rakovinových buniek inváziu do dutiny brušnej. Avšak, akonáhle celistvosť tejto bariéry je narušená, môže dôjsť k metastáz, pretože peritoneum poskytuje priaznivé prostredie pre rakovinové bunky žalúdočné rast [5-9]. Ďalšie štúdie ukázali, že pred pripojením buniek karcinómu žalúdka do pobrušnice, mezotelových bunky získavajú pologuľovitý tvar a začať zbaviť. V dôsledku toho, nahé oblastí submesothelial spojivového tkaniva sú vystavené peritoneálnej dutiny [10-12]. Je pravdepodobné, že penetrácia mezotelových monovrstvy nádorovými bunkami iniciuje s nádorom indukovanú mezotelových apoptózu buniek. V tejto štúdii sme skúmali účinky rozpustných faktorov uvoľnených buniek karcinómu žalúdka na morfológiu a biologickou aktivitou peritoneálnych mezoteliálnych buniek in vitro a in vivo.
Metódy
činidiel
3- (4 v, 5-dimetyl-thiazol-2-yl) -2,5-difenyl tetrazoliumbromide (MTT) bol získaný od firmy Fluka, USA. Propidium jodidu (PI) sa získa z Biosharp, USA. Bcl-2, Bax, kaspázy-3, kaspázy-8 a aktínu primárnej protilátky a sekundárne protilátka, kozí anti-myší IgG boli získané od Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, USA. Dulbecco modifikovanom Eaglovho média (DMEM) a fetálne teľacie sérum (FCS) boli získané od Gibco BRL (Grand Island, NY, USA). Ďalšie laboratórne reagencie boli získané od firmy Sigma, USA. Bol použitý mikroskop s fázovým kontrastom (Japonsko Nikon), transmisný elektrónový mikroskop (Hitachi H-6001, Japonsko).
Bunkových línií a bunkové kultúry
ľudskej peritoneálnej mezotelových bunkové línie HMrSV5 bol získaný z oddelenia bunkovej biológie Čína lekárska univerzita, Čína. HMrSV5 bol pôvodne izolovaný z ľudskej omentum. Stručne povedané, omentum zhromažďované z súhlasu non-uremických pacientov, ktorí podstupovali elektívny operácii brucha, a bola inkubovaná na 0,05% (w /v), trypsínu a 0,01% (hmotnosť /objem) EDTA počas 20 minút pri teplote 37 ° C. Pozberané mezotelových Bunky boli centrifugovány pri 150 g počas 5 minút a potom sa prenesie do 75 cm 2 fľašiach pre tkanivové kultúry a kultivované vo zvlhčenej 5% CO 2 inkubátora, v médiu DMEM doplnenom 10% fetálnym teľacím sérom (FCS ), 100 U /ml penicilínu, 100 ug /ml streptomycínu, 2 mmol /L L-glutamínu a 20 mmol /l hydroxyetyl ​​piperazín ethansulfonové kyseliny (HEPES, Gibco BRL, USA). Medium bolo menené každé 2-3 dni.
Ľudských bunkových línií karcinómu žalúdka, MKN-45 MKN-1, SGC-7901, BGC-823 a MGC-803, boli získané z Ústavu bunkovej biológie, China Medical University , Čína. Tieto bunky boli kultivované v DMEM doplnenom 10% FCS, 100 U /ml penicilínu, 100 ug /ml streptomycínu a 2 mmol /L L-glutamínu vo zvlhčenej 5% CO 2 inkubátora pri teplote 37 ° C.
Príprava kondicionovanie médiu bez séra
bezsérového kondicionovaného média (SF-CM) sa pripraví zo žalúdočné rakovinových buniek alebo normálnych žalúdočných epiteliálnych buniek, ako bolo oznámené predtým [1]. Stručne, 5,0 x 10 5 bunky boli vrúbľovať do 100 mm misky pre tkanivové kultúry s 10 ml DMEM, doplnenom 10% FCS a inkubované pri 37 ° C počas 3 dní. Pre získanie SF-CM, boli bunky dvakrát premyté fosfátom pufrovanom roztoku (PBS) a potom inkubované počas 2 dní s 3 ml DMEM bez séra. SF-CM sa vymýva a odstredí pri 1000 g počas 5 minút, prešiel cez filtre (veľkosť pórov 0,45 um) a skladovať pri teplote -20 ° C až do doby použitia
Zvieratá
Muž C57BL /6 myší. (osem týždňov, s hmotnosťou 20 ± 2 g), boli získané z Číny Medical University živočíšneho zariadení a privádza prečistené vody a komerčným akciovej stravy v klimatizovanej miestnosti pri 20-22 ° C.Animals použitých v tejto štúdii boli udržiavané v súlade s príručkou pre starostlivosť a používanie laboratórnych zvierat zverejnenej US National Institutes of Health (NIH Publication No. 85-23, revidované 1996) a politika starostlivosti o zvieratá a používania výboru Čínskej lekárskej univerzity.
morfologická vyhodnotenie pod mikroskopom s fázovým kontrastom
Human peritoneálnej mezoteliálnych buniek (HPMC), boli kultivované na subconfluence v 50-cm 2 misky s DMEM obsahujúcim 10% FCS. Médium potom bolo zmenené na (1) bez séra DMEM, alebo (2), SF-cm od žalúdka nádorových bunkových línií. Tieto HPMC v 24-jamkových komôr boli vystavené skúšobného roztoku po dobu 24 hodín, a jemne premyté PBS. Tie potom boli skúmané pod mikroskopom s fázovým kontrastom na veľkosti, tvaru a integrity bunkovej membrány, cytoplazmy a jadra.
Transmisný elektrónovej mikroskopie
HPMC boli kultivované na subconfluence v 50-cm 2 misky s DMEM obsahujúcim 10% FCS. Médium potom bolo zmenené na (1) bez séra DMEM, alebo (2), SF-cm od žalúdka nádorových bunkových línií. Po inkubácii po dobu 24 hodín boli bunky trypsinizovány a potom fixované v ľadovo chladného 2,5% pre elektrónovú mikroskopiu stupeň glutaraldehydu v PBS (pH 7,3). Vzorky boli opláchnuté PBS, post-fixované v 1% oxidu osmičelého s 0,1% krvnej soli, dehydrované pomocou odstupňované rade etanolu (30% -90%), a vložený do EPONE. Semi-tenký (300 NM), rezy boli rezané za použitia Reichart UltraCut (Reichart UltraCut (Leica, Nemecko) napustené 0,5% toluidínová modrá, a skúmal pod svetelným mikroskopom. Ultratenké rezy (65 nm) boli zafarbené 2% uranylacetátem a citrátom olovnatým Reynoldsovo, a skúmal na transmisnom elektrónovom mikroskope v x 5000 alebo 8000 × zväčšenie.
Kvantitatívne stanovenie poškodenie buniek testom MTT
MTT test bol vykonaný, aby posúdila životaschopnosť ľudských peritoneálnych mezoteliálnych buniek po ošetrení s SF-cm od žalúdka nádorových bunkových línií. Bunky v 96-jamkových kultúr doskových, po expozícii na kontrolu alebo testovacie riešenie pre určité časové obdobie (pozorované u 12 h, 24 h a 48 h), boli inkubované s 50 ug /ml MTT pri zriedení 1:10, vztiahnuté na objem živného prostredia počas 3 hodín pri teplote 37 ° C. na konci inkubačnej doby sa MTT roztok bol odstránený a 150 ul DMSO sa pridá do každej jamky, a mieša, aby sa rozpustenie tmavo modré formazon kryštály, ktoré si vybudovali. Podiel živých buniek sa stanoví meraním optickej hustoty každej vzorky pri 480 nm pomocou spektrofotometra. Tri kultúry boli vystavené každého roztoku v každom časovom období. boli porovnané prostriedky každej skupiny kultúr.
Prietoková cytometria
Po inkubácii v testovaných roztokoch po dobu 24 h, 48 h a 72 h boli bunky zozbierané za použitia trypsinizací. Bunky boli resuspendované v PBS s koncentráciou 1 x 10 6 /ml a fixované v 2 ml metanolu počas 30 minút pri 4 ° C. Potom, čo boli bunky CNE2 pevné, zmes sa inkubuje v 0,5 ml PI roztoku (0,05 mg /ml v 3,8 mol /l citrátu sodného) a 0,5 ml RNázy A (0,5 mg /ml) pri izbovej teplote po dobu 30 minút. Nakoniec boli bunky resuspendované v 1 ml PBS a analyzované prietokovou cytometriou v súlade s pokynmi výrobcu. Bunky v subdiploid píku boli považované za apoptotické.
Histologické vzhľad pobrušnice
Muž C57BL /6 myší (osem týždňov staré, s hmotnosťou 20 ± 2 g) boli použité v tejto štúdii. Pokus sa riadila sprievodcu inštrukciami laboratórnych zvierat vo výskume a výučbe. Myši boli kŕmené štandardnou pelety laboratórne potravou a bol opatrený vodou ad libitum
. Myši boli náhodne rozdelení do jednej z troch skupín (n = 5 alebo 6 v každej skupine). Myši v skupine DMEM boli liečení DMEM (100 ml /kg) intraperitoneálnou injekciou v dňoch 1, 3, 5 a 7. Myši v skupine SF-CM boli ošetrené 100 ml /kg SF-CM žalúdočné nádorové bunky linky intraperitoneálnou injekciou v deň 1, 3, 5 a 7. Nič sa pridá k injekcie pre kontrolných myší. Po 29 dňoch bola myšiam podaná anestézia s etyléterom a usmrtí. Parietálnej peritoneums boli zafarbené hematoxylínom a eosínu (H &E) a farbením trichromat Massonova. Morfologické zmeny v parietálnych peritoneum boli pozorované svetelným mikroskopom. Hrúbka submesothelial extracelulárnej matrix bola stanovená po tkanivové rezy mali H &E a Masson farbenie. Priemerná 10 nezávislých meraní bola vypočítaná pre každú sekciu; Dáta boli potom zhrnuté.
Western blotting
ľudských peritoneálnych mezotelových bunky boli kultivované na subconfluence v 50-cm 2 misky s DMEM obsahujúcim 10% FCS. Médiá potom boli zmenené na (1) SF-CM od žalúdka nádorové bunky MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 a MGC-803; a (2) DMEM bez séra, ktoré slúžia ako kontrola. Proteín sa extrahuje v štandardnom lyzačním pufri s inhibítormi proteinázy (orthovanadičnanu sodného, ​​fenylmetylsulfonyl fluorid, leupeptinu, aprotinínu a získaných z BioShop, Burlington, ON, Kanada). Alikvótne 20 ug proteínového lyzátu sa podrobí elektroforéze na 12% SDS-PAGE gélu, prenesú na nylonovú membránu, a samostatne testované s protilátkami k Bcl-2, Bax, kaspázy-3 a kaspázy-8. Po inkubácii so sekundárnou protilátkou, bloty boli vyvinuté pomocou ECL Western Blot substrátu Kit (abca, USA).
Štatistická analýza
Všetky údaje sú vyjadrené ako x
± sd
. Porovnanie účinku lieku boli vyrobené za použitia Studentovho t-test
. P Č
hodnota < 0,05 bola považovaná za významnú.
Výsledky
Morfologické hodnotenie pod mikroskopom s fázovým kontrastom
Kým HPMC liečení len v DMEM bez séra vykazoval typickú polygonálne a dlažobné kocky vzor (obrázok 1A). Bunky ošetrené SF-CM od žalúdka nádorových buniek MKN45 za 24 hodín začal mať morfologické zmeny, z ktorých najzreteľnejší sú exfoliácia a vzhľad nahých oblastí (Obrázok 1B). Obrázok 1 morfologické zmeny, ľudských peritoneálnych mezoteliálnych buniek pod mikroskopom s fázovým kontrastom.
(A) monolayer polygonálne a dláždených podobné HPMC kultivované v DMEM bez séra. (B-D) Expandovaný vzhľad nahých plôch po liečbe SF-CM z bunkových línií karcinómu žalúdka MKN45, SGC7901 a BGC823. (Zväčšenie: 40 x).
Transmisný elektrónová mikroskopia
Po 24 hodinách SF-CM z liečby karcinómu žalúdka bunky, apoptotické vlastnosti (napríklad kondenzáciou jadrového chromatínu, vrások jadrových membrán, dilatácií endoplazmatického retikula, a pomerne bežná štruktúra mitochondrií) boli pozorované v transmisnom elektrónovom mikroskope (TEM, Obrázky 2A, B). Podľa TEM, jadrová membrána bol videný byť intaktné, chromatín kondenzuje do hmoty, a na rozhraní membrány alebo tvoriace oblúk (Obrázok 2C). Očkovanie a tvorba apoptózu tela bola tiež pozorovaná (Obrázok 2C). Obrázok 2 Human peritoneálnej mesothelial bunky (HPMC) 24 hodín po inkubácii s a bez SF-CM z buniek karcinómu žalúdka.
(A) Kontrolné bunky zobrazí normálne jadra a endoplazmatického reticulata. (B) Bunky ošetrené SF-CM z MKN1 rakovina žalúdka buniek ukazujú, chromatín kondenzuje do hmoty, a na rozhraní membrány alebo k vytvoreniu oblúka. Pučania a tvorba apoptózu orgánov boli pozorované (šípky v B). (C) .Cells liečení SF-CM z MKN45 rakovinové bunky žalúdočné ukazujú kondenzáciu jadrového chromatínu (šípky v jazyku C). (D) Bunky ošetrené žalúdka bunková línia rakoviny MGC-803 boli podobné B. nádejné a formovanie tiel apoptózy boli pozorované.
MTT test
Na vyhodnotenie potenciálnych tlmivé účinky na žalúdočné rakovinu bunky SF-CM na HPMC sme sa zaoberali svojou rastovú krivku na trati HPMC HMrSV5. Karcinómu žalúdka bunky SF-CM indukovanej potlačenie rastu v HPMC bunkách, ktoré sa uskutočnilo v závislosti na čase (obrázok 3A). Tento efekt bol pozorovaný pri 0 h, 12 h, 24 h a 48 h. Tieto výsledky ukazujú, že supernatant nádoru vyvoláva mezotelových poškodenie buniek alebo apoptózy. Obrázok 3 Apoptóza bola kvantifikovaná pomocou dvoch metód: MTT a prietokovej cytometrie.
(A) Životaschopnosť buniek mezotelových HMrSV5 po ošetrení SF-CM z buniek karcinómu žalúdka. (B) Apoptóza bola kvantifikovaná pomocou prietokovej cytometrie po ošetrení SF-CM z buniek karcinómu žalúdka.
Prietoková cytometria
Ku kvantifikácii percento apoptotických buniek po ošetrení v rôznych časových obdobiach, mezotelových bunky boli zafarbené s PI. Karcinómu žalúdka bunky SF-CM účinne indukovanú apoptózu v bunkách mezotelové ktoré sa uskutočnilo v spôsobom závislým od dávky po 48 hodinách (obr 3 b). Tieto výsledky boli rovnaké ako tie, ktoré pre MTT testom
histológie a morfometrická analýza
morfologické zmeny parietálnych peritoneum boli analyzované za použitia H &. E a Massonova trichromat farbenie. Medzi normálne myši, je mesothelial Bunková monovrstva sa vzťahuje peritoneálnej povrch bez zosilnenia (obrázok 4 a, d). Vzhľadom k zjavnej nezlučiteľnosti, myší, ktoré dostávali intraperitoneálna injekcia DMEM mali mierne zosilnenie v peritoneálnej submesothelial kolagénne oblasti (Obrázok 4 b, e); tie, intraperitoneálne karcinómu žalúdka bunky SF-CM označil zhrubnutie submesothelial kompaktné zóny a zvýšenej celularita (Obrázok 4 c, f). Obrázok 4 Hematoxylin /eozín (H &E) a Masson farbenie pobrušnice tkanív.
peritoneum tkaniva z rôznych skupín boli získané chirurgicky a podrobené H &E a Masson farbenie. (A) Všetky fotky boli získané pri 40-násobku. Normálne pobrušnice sa skladá iba z monovrstvy mezotelem s malým fibrózou (A, D). Pobrušnice liečení DMEM tiež ukázala malé množstvo spojivového tkaniva pod mesothelial buniek (šípky v B, E). Naproti tomu, peritoneum liečená SF-CM z buniek karcinómu žalúdka bol v podstate zahustené a obsahoval rozsiahle fibróza (šípky v c, f). (B) morfometrické parametre peritoneálnej tkanív. Údaje sú vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka priemeru aspoň 3 samostatných experimentov. * P Hotel < 0.05.
Western blotting
Potom sme sa snažili ďalej vymedziť mechanizmy, ktoré sú základom kombinovaných účinkov rakovina žalúdka bunky SF-CM na proteíny apoptózy súvisiace s (kaspázy-3, kaspázy-8, Bax, BCL-2) , Hladiny týchto proteínov bola hodnotená pomocou analýzy Western blot. Kaspázy-3, kaspázy-8 a proteínov Bax hladina zvýšila po 48 hodinách liečby SF-CM od väčšiny buniek karcinómu žalúdka, zatiaľ čo bcl-2 sa znížila hladina proteínov (obrázok 5). Beta-aktínu bol použitý ako kontrola nanášania. Obrázok 5 Western blot analýza proteínových hladín apoptózy súvisiace s (kaspázy-3, kaspázy-8, Bax, a Bcl-2) v HPMC s SF-CM z rôznych žalúdočné liečbe nádorových bunkových línií.
Serum-vyhladované HPMC boli inkubované s SF-CM z rôznych žalúdočných nádorových bunkových línií po dobu až 48 hodín; Celkový bunkový proteín bol extrahovaný a podrobený western blot analýze.
Diskusia
Väčšina štúdií pooperačné recidívy ukazujú, že traumatizované mezotelových plochy sú výhodné miesta pre adhéziu nádorových buniek. V poslednej dobe sa odlúčil rakovinové bunky vnútri peritoneálnej dutiny, a proteíny špecificky exprimované v peritoneálnej metastázy karcinómu žalúdka bolo zistené, že je spojená s rakovinou prognózy. Kým imunogenicity prístupy ukazujú veľký prísľub pri liečbe peritoneálnej metastázy karcinómu žalúdka [13-15], účinky buniek karcinómu žalúdka na mezoteliálnych buniek sa zle rozumie.
Štúdie ukázali, že mezoteliálnych buniek za predpokladu, ochranu proti peritoneálnej metastázy tumoru neporušené mesothelia [9, 16, 17]. Paget et al
navrhla "osiva a pôdy" teóriu: metastáza dochádza iba vtedy, keď nádorové bunky žiť a rásť v priaznivého prostredia [18]. The peritoneum môže byť tak priaznivé prostredie pre scirrhous buniek karcinómu žalúdka; prípadne mezoteliálnych buniek zabrániť rakovinové bunky infiltrovať do submesothelial spojivového tkaniva. Masakazu et al.
[1] ukázal, že susedné konfluentní mezoteliálnych buniek bráni inváziu rakovinových buniek. Okrem toho Kiyasu et al.
, [3] uvádzajú, že pred peritoneálnej implantáciu nádorových buniek, a mezoteliálnych bunky sa stávajú v tvare pologule a odlupovať od pobrušnice. Naša hypotéza je, že po serosa sú vystavené, voľné rakovinové bunky prístrešok z primárnych rakovinových miest žalúdka do dutiny brušnej indukovať apoptózu v peritoneálnych mezoteliálnych buniek [19-21]. V dôsledku toho, mezotelových bunky sa stávajú v tvare pologule a exfoliácia prebieha. Nahé oblasti submesothelial spojivového tkaniva sú tak vystavené peritoneálnej dutiny; tento poškodený peritoneálnej miesto sa stáva priaznivé prostredie pre peritoneálnej metastázy [22-24].
My sme skôr ukázali žalúdočné supernatant rakovinových buniek k výraznému zníženiu životaschopnosti mezoteliálnych buniek, ale normálne žalúdočnej epiteliálne bunková línia GES-1 vykazuje žiadny vplyv na mezoteliálnych buniek [5]. Naša súčasná štúdia tiež ukazuje, že kultivované mezotelových bunky sa stávajú v tvare pologule, a vrstevnaté nastať, keď sa pridá médium prosté séra podmienená buniek karcinómu žalúdka, ako je znázornené na rozdiel od fázového mikroskopu. Okrem toho, zníženie cytoplazmatická, nukleárna kondenzácie a tvorba extracelulárnych a /alebo intracelulárnu apoptotických teliesok boli pozorované v transmisnom elektrónovom mikroskope. Apoptóza bola kvantifikovaná pomocou dvoch metód: MTT a prietokovej cytometrie. Domnievame sa, že voľné žalúdočné rakovinové bunky v brušnej dutine indukovať apoptózu mezotelových buniek a spôsobiť exfoliácia, nakoniec viesť k metastáz. To môže byť mechanizmus, ktorý rakovinové bunky držať submesothelial spojivového tkaniva, aj keď mezotelových bunky sú stále dobre organizované a zhlukovania. Ďalšie štúdie sú potrebné k charakterizovať SF-CM prepustený z buniek karcinómu žalúdka.
Žalúdočné rakovinové bunky môžu indukovať apoptózu prostredníctvom mitochondria- a smrti apoptotických dráh receptoru závislá. Žalúdočné rakovinové bunky potláčajú mezotelových rast buniek tým, že zabráni šíreniu prostredníctvom podpory kaspasy závislé apoptózy. Kaspázy sú cytoplazmatickej aspartátu špecifické pre cysteinové proteázy, a hrajú dôležitú úlohu pri apoptóze [25]. Smrť receptor-dependentný proapoptotický dráha je spustená na povrchu buniek a vyžaduje aktiváciu kaspázy-8, vzhľadom k tomu, mitochondrie závislé dráha je iniciovaná uvoľňovanie mitochondriálneho cytochrómu c do cytoplazmy a vyžaduje aktiváciu kaspázy-9. Následne, kaspázy-8 alebo -9 môže aktivovať kaspázy-3, ktorý podľa poradia cieľov a degraduje špecifické a životne dôležité bunkové proteíny, čo v konečnom dôsledku degradácie jadrovej DNA a apoptotické bunkovej smrti [26]. Bcl-2, inhibítor mitochondriálnej apoptózy dráhy, Pôsobí tak, že blokuje proapoptotických náprotivky, čo zabraňuje uvoľňovaniu cytochrómu C a aktiváciu kaspázy [27]. Bax je smrť promótor, ktorý je neutralizovaný heterodimerizaci s Bcl-2. Bax translokuje do vonkajšej mitochondriálnej membráne s následným únikom cytochrómu c z mitochondrií do cytosolu [28]. Kaspázy-9 a kaspázy-3 sú aktivované postupne, a tieto udalosti vedú k zrúteniu chromozomálnej DNA. Pretože existuje významná možnosť, že rakovina žalúdka bunková apoptóza mezoteliálnych buniek je výsledkom regulácia Bcl-2 a Bax, je nutná ich identifikácia cieľových zlúčenín.
V tejto štúdii sme použili myši experimentálny model peritoneálnej skleróza vyvolané opakovanými injekciami karcinómu žalúdka bunky SF-CM. Experimentálne peritoneálnej fibrózy vyvolanej opakovanými intraperitoneálnou injekciou žalúdka nádorových buniek SF-CM nemusí úplne napodobniť peritoneálnej skleróza pozorovanej u pacientov (difúzne infiltrácia alebo karcinómom typu VI Bormannův). V skutočnosti, patologické nálezy peritoneálnej karcinosou a peritoneálnej skleróza nie sú jednotné a rôzne faktory sú zapojené. Okrem toho, niektoré spoločné rysy sú počas vývoja peritoneálnej sklerózy medzi karcinómu žalúdka bunky SF-CM-indukovaných experimentálnych zvieracích modeloch a ľudských pacientov podstupujúcich peritoneálnej karcinomatózu pozorované. Tieto spoločné histologické nálezy zahŕňajú zvýšenú akumuláciu intersticiálnych kolagénov, ako je typ I a III kolagén, infiltráciu monocytov /makrofágov, zvýšenie a-SMA + myofibroblastů a cievne hustotu v pobrušnice [7, 8]. Tieto podobnosti v zmenách peritoneálnych membrán medzi pokusných modeloch a ľudských pacientov s peritoneálnej karcinomatózu ukazujú, že sa jedná o vhodný model pre skúmanie účinnosti rôznych potenciálny terapeutická činidlá pre reguláciu peritoneálnej karcinomatózu.
Závery
Tieto zistenia ukazujú, že rakovina žalúdka bunky môžu indukovať apoptózu a fibrózu ľudských peritoneálnych mezoteliálnych buniek cez supernatantov na začiatku peritoneálnej metastázy, a ukazujú, že rozpustné faktory v peritoneálnej dutine môže mať vplyv na morfológiu a funkciu mezoteliálnych buniek, tak, aby výsledná prostredie stane priaznivé pre peritoneálnej metastáz.
Skratky
HPMC:
Human peritoneálnej mesothelial buniek
SF-CM :.
sérum bez podmieneného média

vyhlásenie
Poďakovanie
autori chcú vyjadriť svoje úprimné poďakovanie Dr. Yan pieseň pre svoju technickú pomoc. Táto štúdia bola podporená grantom od National vo vedeckom Foundation Číny (č. 81071956 a 81101884).
Autorov pôvodné predložený súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodnej predložených súborov pre obrázky. "Pôvodný súbor pre Obrázok 1 12876_2011_768_MOESM2_ESM.jpeg autorského 12876_2011_768_MOESM1_ESM.jpeg autorov pôvodného súboru pre obrázok 2 'originálneho súboru pre Obrázok 3 12876_2011_768_MOESM4_ESM.jpeg autorského 12876_2011_768_MOESM3_ESM.bmp autorského pôvodného súboru na Obrázok 4 pôvodného súboru 12876_2011_768_MOESM5_ESM.bmp autorského na obrázku 5 konkurenčné záujmy
autori vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy. príspevky
autorov
DN, z-DL a F-NL vykonávané štúdie na morfológiu a biologickej aktivity peritoneálnej mesothelial buniek in vitro
a in vivo
. ZS, Z-FM a FL sa podieľala na in vivo
štúdií u. YX a C-GJ podieľala na štúdiách morfológie. DN a HX sa podieľal na návrhu štúdie a vykonaná štatistická analýza. HX a DN predstavil štúdiu, a podieľal sa na jeho konštrukciu a koordináciu a pomohol navrhnúť rukopis. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Je súbežná splenektómia prospešné pre dlhodobé prežitie pacientov s karcinómom žalúdka podstupujúcich liečebný gastrektómii? Jeden-inštitúcie štúdie
• Expresie a klinický význam dlhé nekódujúca RNA HNF1A-AS1 v ľudskej rakovine žalúdka