sobrenadante de células de cancro gástrico causa apoptose e fibrose nos tecidos peritoneal e resulta em um ambiente favorável para as metástases peritoneais, in vitro e in vivo

sobrenadante de células de câncer gástrico causa apoptose e fibrose nos tecidos e resultados peritoneal em um ambiente favorável à metástases peritoniais, in vitro e in vivo
fundo
Abstract
Neste estudo, nós examinamos efeitos de fatores solúveis liberados por células cancerosas gástricas em células mesoteliais peritoneais in vitro e in vivo

.
Métodos
HMrSV5, uma linha de células de mesotélio peritoneal humana, foi incubado com sobrenadantes de células cancerosas gástricas. Foram observadas alterações morfológicas de células HMrSV5. A apoptose de células HMrSV5 foi observado sob um microscópio electrónico de transmissão e quantitativamente determinado pelo ensaio de MTT e citometria de fluxo. Expressão das proteínas relacionadas com a apoptose (caspase-3, caspase-8, Bax, Bcl-2) foram avaliadas. Imunoquimicamente
Resultados
alterações morfológicas Conspicuous indicando apoptose foram observadas em células HMrSV5 24 h após o tratamento com os sobrenadantes de células de câncer gástrico. In vivo
, tecidos peritoneal tratados com sobrenadante de células de câncer gástrico foram substancialmente mais espessa e continha fibrose extensa.
Conclusões
Estes resultados demonstram que os sobrenadantes de células cancerosas gástricas podem induzir apoptose e fibrose na HMrSV5 células mesoteliais peritoneais humanos através os sobrenadantes no início da metástase peritoneal, de uma forma dependente do tempo, e indicam que os factores solúveis presentes na cavidade peritoneal afectar a morfologia e função de células mesoteliais, para que o ambiente resultante pode tornar-se favorável a metástases peritoneais. Palavras-chave

peritoneal neoplasias carcinomatose estômago célula mesotelial apoptose fibrose fundo
carcinomatose peritoneal limita severamente a melhoria do prognóstico dos pacientes com câncer gástrico após a cirurgia [1]. Peritoneal metástases resulta em uma cascata metastática, geralmente ocorrendo em desenvolvimento de tumores em estágio avançado, o que contribui significativamente para a mortalidade relacionada com o cancro gástrico. Os mecanismos de metástase peritoneal de difusamente carcinoma invasivo não são claramente compreendido.
O ambiente estroma peritoneal favorece a proliferação de células tumorais, servindo como uma fonte rica de factores de crescimento e quimioquinas que se sabe estar envolvida na metástase tumoral. Moléculas que medeiam esta cascata não têm sido amplamente estudados [2]. Alegadamente, as células mesoteliais poderia evitar a invasão de câncer e sofrer alterações morfológicas em resposta a fatores solúveis libertados pelas células [3] câncer. As moléculas específicas envolvidas neste processo são ditadas por características intrínsecas das células tumorais metastáticas. As células tumorais precisa anexar firmemente na monocamada submesotelial e penetram a monocamada mesotelial para a invasão. Buck et ai.
[4] explorado o efeito protector da camada mesotelial, utilizando um modelo de rato em que o revestimento mesotelial de peritoneu parietal foi retirado nos ratos experimentais, deixando a membrana basal intacta. Anteriormente mostrou que a camada de confluentes, as células mesoteliais intactas dificulta a invasão de células de cancro da cavidade abdominal. No entanto, uma vez que a integridade dessa barreira é interrompido, metástase pode ocorrer, porque o peritônio proporciona um ambiente favorável para as células cancerosas gástricas a crescer [5-9]. Outros estudos têm mostrado que, antes da fixação das células cancerosas gástricas em peritônio, células mesoteliais adquirir forma hemisférica e começar a verter. Como resultado, áreas nuas do tecido conjuntivo submesotelial estão expostos para a cavidade peritoneal [10-12]. É provável que a penetração da monocamada mesotelial por células tumorais inicia com a apoptose de células de mesotélio induzida por tumor. Neste estudo, nós examinamos os efeitos de fatores solúveis liberados por células cancerosas gástricas sobre a morfologia e atividade biológica de células mesoteliais peritoneais in vitro e in vivo
.
Métodos
Reagentes
3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazoliumbromide (MTT) foi obtido a partir de Fluka, EUA. iodeto de propídio (PI) foi obtido a partir de Biosharp, EUA. Bcl-2, Bax, caspase-3, caspase-8 e anticorpos primários de actina, e o anticorpo secundário, IgG anti-ratinho de cabra foram obtidos de Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, EUA. meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) e soro de vitelo fetal (FCS) foram obtidos a partir de GIBCO BRL (Grand Island, NY, EUA). Outros reagentes de laboratório foram obtidas a partir da Sigma, EUA. Foi utilizado um microscópio de contraste de fase (Japão Nikon), microscópio eletrônico de transmissão (Hitachi H-6001, Japão). As linhas celulares
e cultura de células in the linha de células de mesotélio peritoneal humana HMrSV5 foi obtida a partir do Departamento de Biologia Celular , China Medical University, China. HMrSV5 foi originalmente isolado a partir de omento humano. Resumidamente, a partir de omento recolhido consentindo pacientes não-urémicos que foram submetidos a cirurgia abdominal electiva, e foi incubada em 0,05% de tripsina e 0,01% (w /v) de EDTA durante 20 minutos a 37 ° C (v /w). As células mesoteliais colhidas foram centrifugadas a 150 g durante 5 min e em seguida transferida para 75 cm 2 frascos de cultura de tecidos e foram cultivadas numa atmosfera humidificada de CO a 5% 2 incubadora, em DMEM suplementado com soro de vitelo fetal a 10% (FCS ), 100 U /mL de penicilina, 100 ug /ml de estreptomicina, 2 mmol /l de L-glutamina e 20 mmol /L hidroxietil piperazina etanossulf único (HEPES, Gibco BRL, EUA). Meio foi trocado a cada 2-3 dias. Linhas de células de carcinoma gástrico humano
, MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 e MGC-803, foram obtidos do Departamento de Biologia Celular, China Medical University , China. Estas células foram cultivadas em DMEM suplementado com 10% FCS, 100 U /mL de penicilina, 100 ug /mL de estreptomicina, e 2 mmol /l de L-glutamina numa atmosfera humidificada de CO a 5% 2 incubadora a 37 ° C.
Preparação de meios condicionados isentos de soro
isento de soro de meio condicionado (CM-SF) foi preparado a partir de células gástricas cancerosas ou células epiteliais gástricas normais como relatado anteriormente [1]. Resumidamente, 5,0 × 10 5 células foram semeadas em placas de cultura de tecidos de 100 mm com 10 ml de DMEM, suplementado com 10% FCS e incubadas a 37 ° C durante 3 dias. Para obter SF-CM, as células foram lavadas duas vezes com solução tamponada com fosfato (PBS) e depois incubados durante 2 dias com 3 ml de DMEM livre de soro. O SF-CM foi eluida e centrifugado a 1000 g durante 5 min, passados ​​através de filtros (tamanho de poro: 0,45 pm) e armazenadas a -20 ° C até serem usadas
Animais
macho C57BL /6. (oito semanas de idade, pesando 20 ± 2 g), foram obtidos a partir biotério China Medical University e alimentados com água purificada e uma dieta estoque comercial em um quarto com ar condicionado em 20-22 ° C.Animals utilizados neste estudo foram mantidas de acordo com o Guia para Cuidado e Uso de Animais de laboratório publicado pelos Institutos Nacionais de Saúde (NIH Publication No. 85-23, revista em 1996) e na política de Uso e Cuidado animal Comitê da China Medical University.
morfológica avaliação sob um microscópio de contraste de fase
células mesoteliais peritoneais Humanos (HPMC) foram cultivadas a subconfluência em um-cm 50 2 prato com DMEM contendo 10% de FCS. O meio foi em seguida alterado para (1) DMEM isento de soro, ou (2) SF-CM a partir de linhas celulares de cancro gástrico. As HPMC em câmaras de 24 alvéolos foram expostas a soluções de teste, durante 24 h, e suavemente lavadas com PBS. Eles foram então examinadas sob um microscópio de contraste de fase para o tamanho, forma e a integridade da membrana celular, citoplasma e núcleo. Microscopia electrónica de transmissão

As HPMC foram cultivadas a subconfluência em um 50-cm 2 prato com DMEM contendo 10% de FCS. O meio foi em seguida alterado para (1) DMEM isento de soro, ou (2) SF-CM a partir de linhas celulares de cancro gástrico. Após incubação durante 24 h, as células foram tratadas com tripsina e depois fixadas em glutaraldeído grau de microscopia electrónica de 2,5% arrefecido em gelo em PBS (pH 7,3). As amostras foram enxaguadas com PBS, pós-fixadas em tetróxido de ósmio a 1%, com ferricianeto de potássio 0,1%, desidratadas através de uma série de etanol graduada (30% -90%) e embebidos em Epon. Semi-finas (300 nm) secções foram cortadas usando uma Reichart Ultracut (Reichart Ultracut (Leica, Alemanha), coradas com 0,5% de azul de toluidina, e examinadas com um microscópio de luz. Secções ultrafinas (65 nm) foram coradas com 2% de acetato de uranilo e citrato de chumbo de Reynold, e examinadas com um microscópio electrónico de transmissão de × 5000 ou 8000 × ampliação.
determinação quantitativa do dano celular por ensaio MTT
O ensaio de MTT foi realizado para avaliar a viabilidade das células mesoteliais peritoneais humanas após tratamento com SF-CM a partir de linhas celulares de cancro gástrico. As células em culturas em placas de 96 poços, depois de exposição para controlar ou soluções de ensaio para um determinado período de tempo (observada em 12 h, 24 h e 48 h), foram incubadas com 50 ug /mL MTT a uma diluição de 1:10, com base no volume do meio de cultura durante 3 h a 37 ° C. no final do tempo de incubação, a solução de MTT foi removido e 150 mL de DMSO foi adicionado a cada poço e agitou-se a dissolver os cristais formazon azul-escuro que se formou. A percentagem de células viáveis ​​foi determinado medindo a densidade óptica de cada amostra a 480 nm com um espectrofotómetro. Três culturas foram expostas a cada solução a cada período de tempo. Os meios de culturas de cada grupo foram comparados.
Citometria de fluxo
Após a incubação em soluções de ensaio durante 24 h, 48 h e 72 h, as células foram colhidas utilizando tripsinização. As células foram ressuspensas em PBS a uma concentração de 1 × 10 6 /mL e fixadas em 2 mL de metanol durante 30 min a 4 ° C. Depois as células foram fixadas CNE2, a mistura foi incubada em 0,5 ml de solução de PI (0,05 mg /mL em citrato 3,8 mol /L de Na) e 0,5 ml de RNAse A (0,5 mg /mL) à temperatura ambiente durante 30 min. Finalmente, as células foram ressuspensas em 1 mL de PBS e analisadas por citometria de fluxo de acordo com as instruções do fabricante. As células no pico subdiploid foram considerados apoptótica.
Aparência histológica do peritoneu
Masculino ratinhos C57BL /6 (oito semanas de idade, pesando 20 ± 2 g) foram usadas no presente estudo. O experimento seguiu as diretrizes para o uso de animais de laboratório em pesquisa e ensino. Os ratos foram alimentados com uma ração de laboratório pellet padrão e foram fornecidos com água ad libitum
. Os murganhos foram distribuídos aleatoriamente para um dos três grupos (n = 5 ou 6 em cada grupo). Os ratinhos no grupo de DMEM foram tratados com DMEM (100 ml /kg) através de injecções intraperitoneais, nos dias 1, 3, 5 e 7. Os ratinhos no grupo SF-MC foram tratados com 100 ml /kg de SF-CM a partir de células de cancro gástrico linhas por injecções intraperitoneal nos dias 1, 3, 5 e 7. Nada foi adicionado às injecções para os ratinhos de controlo. Após 29 dias, os ratinhos foram anestesiados com éter etílico e sacrificados. peritoneums parietais foram coradas com hematoxilina e eosina (H & E) e coloração Masson. alterações morfológicas do peritônio parietal foram observados por microscopia de luz. A espessura da matriz extracelular submesotelial foi determinado após as secções de tecido tinha H & E e coloração de Masson. A média de 10 medições independentes foi calculado para cada secção; em seguida, os dados foram resumidos.
Western blotting
células mesoteliais peritoneais humanas foram cultivadas a subconfluência em um-cm 50 2 prato com DMEM contendo 10% de FCS. Os meios foram então alterado para (1) SF-CM a partir de células de cancro gástrico MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 e MGC-803; e (2) DMEM isento de soro que serve como controlo. A proteína foi extraído num tampão de lise padrão com inibidores de proteinase (ortovanadato de sódio, fluoreto de fenilmetilsulfonilo, leupeptina, aprotinina e obtidos a partir de BioShop, Burlington, ON, Canadá). Alíquotas de 20 ^ g de lisado de proteína foi sujeito a electroforese com gel SDS-PAGE 12%, transferidos para uma membrana de nylon e sondou-se separadamente com anticorpos para a proteína Bcl-2, Bax, caspase-3 e caspase-8. A seguir à incubação com o anticorpo secundário, blots foram desenvolvidos utilizando um Kit de ECL Western Blot Substrato (Abcam, EUA). A análise estatística

Todos os dados são expressos como X
± SD
. Comparações dos efeitos de drogas foram feitas usando t de Student
-teste. Um valor P <
; 0,05 foi considerado significativo.

Resultados da Avaliação morfológica sob um microscópio de contraste de fase
Enquanto HPMC tratados apenas em DMEM isento de soro mostrou um típico poligonal e padrão de calçada (Figura 1A.), As células tratadas com SF-CM a partir de células de cancro gástrico MKN45 durante 24 h começou a ter alterações morfológicas, o mais óbvio dos quais foram esfoliação e o aparecimento de áreas nuas (Figura 1B). Figura 1 As alterações morfológicas de células mesoteliais peritoneais humanos sob o microscópio de contraste de fase.
(A) monocamada de HPMC poligonais e paralelepípedos-like cultivadas em DMEM isento de soro. (B-D) aparência esfoliada de áreas nuas após o tratamento com SF-CM a partir de linhas celulares de cancro gástrico MKN45, SGC7901 e BGC823. (Ampliação: × 40).
Microscopia Eletrônica de Transmissão
Após 24 h de SF-CM do tratamento de células de câncer gástrico, características apoptóticos (tais como a condensação da cromatina nuclear, o enrugamento das membranas nucleares, dilatação do retículo endoplasmático, e estrutura relativamente normal da mitocôndria) foram observadas ao microscópio electrónico de transmissão (TEM; as Figuras 2A, B). De acordo com TEM, a membrana nuclear foi visto para ser intacto, a cromatina condensa-se em massas, e no limite da membrana ou formação de arco (Figura 2C). Também foram observadas a floração e a formação dos corpos de apoptose (Figura 2C). Figura 2 As células humanas mesoteliais peritoneais (HPMC) 24 h após a incubação com e sem SF-CM a partir de células de cancro gástrico. As células de controlo
(A) exibir núcleos normais e retículo endoplasmático. (B) As células tratadas com SF-CM a partir de células de cancro gástrico MKN1 mostram cromatina condensada em massas, e no limite da membrana ou formação de arco. Brotamento e a formação dos corpos de apoptose foram observadas em (setas B). (C) .Cells tratados com SF-CM de MKN45 células cancerosas gástricas mostrar a condensação da cromatina nuclear (setas em C). (D) As células tratadas com linha celular de cancro gástrico MGC-803 foram semelhantes ao B. brotamento e a formação dos corpos de apoptose, também foram observados.

Ensaio MTT para avaliar o potencial de efeitos supressores de células de cancro gástrico SF-CM em HPMC, examinamos sua curva de crescimento na linha de HPMC HMrSV5. células de cancro gástrico SF-CM induzida a supressão do crescimento em células de HPMC, e fê-lo de uma forma (Figura 3A) dependente do tempo. Este efeito foi observado em 0 h, 12 h, 24 he 48 h. Estes resultados indicam que o sobrenadante do tumor induz danos nas células de mesotélio ou apoptose. A Figura 3 A apoptose foi quantificada por dois métodos: MTT e citometria de fluxo.
(A) Viabilidade de HMrSV5 células mesoteliais após o tratamento com SF-CM a partir de células de câncer gástrico. (B) A apoptose foi quantificada por citometria de fluxo após tratamento com SF-CM a partir de células de cancro gástrico.
Citometria de fluxo
Para quantificar a percentagem de células apoptóticas após o tratamento em vários períodos de tempo, as células mesoteliais foram coradas com PI. células de cancro gástrico SF-CM eficazmente induzida apoptose em células mesoteliais e fê-lo de uma forma dependente da dose depois de 48 h (Figura 3B). Estes resultados foram os mesmos que para o ensaio de MTT
análise morfométrica e histologia
alterações morfológicas do peritoneu parietal foram analisados ​​utilizando H &. Coloração tricromo de Masson e E. Entre os ratinhos normais, uma monocamada de células mesoteliais cobriam a superfície peritoneal sem qualquer espessamento (Figura 4, um d). Devido à incompatibilidade aparente, os ratos que receberam injecções intraperitoneais de DMEM teve ligeiro espessamento na zona de colágeno submesotelial peritoneal (Figura 4 b, e); aqueles injectados intraperitonealmente com células de cancro gástrico SF-CM tinha marcado espessamento da zona compacta submesotelial e celularidade aumentada (Figura 4-C, F). Figura 4 hematoxilina /eosina (H & E) e coloração de Masson de tecidos peritoneu. tecidos
Peritônio de diferentes grupos foram obtidos cirurgicamente e submetido a H & E e coloração de Masson. (A) Todas as fotos foram obtidas a ampliação de 40 ×. peritoneu normal consiste em apenas uma monocamada de mesotélio com pouca fibrose (a, d). Peritônio tratado com DMEM também mostraram pequenas quantidades de tecido conjuntivo sob as células mesoteliais (setas em b, e). Em contraste, peritônio tratado por SF-CM a partir de células de câncer gástrico foi substancialmente engrossada e continha extensa fibrose (setas em c, f). parâmetros (B) morfométricas de tecidos peritoneal. Os dados são expressos como a média ± erro padrão da média de pelo menos 3 experiências em separado. * P Art < 0,05.
Western blot
Em seguida, procurou delinear mais pormenorizadamente os mecanismos subjacentes aos efeitos combinados da célula de câncer gástrico SF-CM em proteínas relacionadas à apoptose (caspase-3, caspase-8, Bax, Bcl-2) . Os níveis destas proteínas foram avaliadas utilizando análise de Western blot. Os níveis de proteína Bax caspase-3, caspase-8, e aumentou após 48 h de tratamento com SF-cm da maioria das células de cancro gástrico, enquanto que os níveis de proteína Bcl-2 diminuiu (Figura 5). Beta-actina foi utilizado como controlo de carga. Figura 5 Análise por Western blot dos níveis de proteína relacionada com apoptose (caspase-3, caspase-8, Bax e Bcl-2) em HPMC com SF-CM de tratamento diferentes linhas celulares de cancro gástrico.
privadas de soro HPMC foram incubadas com SF-CM a partir de diferentes linhas celulares de cancro gástrico para até 48 h; proteína celular total foi extraído e submetido a análise de Western blot.
Discussão
maioria dos estudos de show de recidiva tumoral pós-operatória que traumatizou superfícies mesoteliais são locais para a adesão de células tumorais preferidos. Recentemente, dissociado células cancerosas no interior das cavidades peritoneais, e proteínas especificamente expressos na metástase peritoneal de carcinoma gástrico foram encontrados para ser ligada ao prognóstico de cancro. Enquanto que as abordagens imunogenéticos mostram uma grande promessa no tratamento de metástases de carcinoma gástrico peritoneal [13-15], os efeitos de células de cancro gástrico em células mesoteliais são mal compreendidos.
Estudo mostrou que as células mesoteliais fornecida protecção contra a metástase de tumor peritoneal em mesothelia intactas [9, 16, 17]. Paget et al
propôs uma "semente e solo" teoria: metástase só ocorre quando células tumorais viver e crescer em um ambiente favorável [18]. O peritônio pode ser um ambiente tão favorável para as células cancerosas gástricas cirrosos; possivelmente células mesoteliais evitar que as células cancerosas de se infiltrar no tecido conjuntivo submesotelial. Masakazu et al.
[1] mostraram que as células mesoteliais confluentes adjacentes impedido a invasão de células cancerosas. Além disso, Kiyasu et ai.
[3] relataram que, antes do implante peritoneal de células cancerosas, células mesoteliais e tornar-se hemisférica esfoliar a partir do peritoneu. Nossa hipótese é que, depois de serosa estão expostos, as células cancerosas sem derramar a partir de sites primários câncer gástrico na cavidade abdominal induzir a apoptose em células de mesotélio peritoneal [19-21]. Como resultado, as células mesoteliais tornar hemisférica e esfoliação ocorre. áreas nuas de tecido conjuntivo submesotelial são assim exposta para a cavidade peritoneal; este site peritoneal ferido torna-se um ambiente favorável para a metástase peritoneal [22-24].
Nós tínhamos mostrado anteriormente sobrenadante de células de câncer gástrico para reduzir significativamente a viabilidade das células mesoteliais, mas linhagem de células epiteliais gástricas normais GES-1 exerce nenhum efeito sobre células mesoteliais [5]. O nosso estudo também demonstra que as células mesoteliais em cultura se tornam hemisférica, e esfoliação ocorrer quando o meio isento de soro condicionado por células de cancro gástrico foi adicionado, como mostrado por microscopia de contraste de fase. Além disso, a redução do citoplasma, condensação nuclear e a formação de corpos apoptóticos extracelulares e /ou intracelulares foram observadas ao microscópio electrónico de transmissão. A apoptose foi quantificada por dois métodos: MTT e citometria de fluxo. Nós especulamos que as células cancerosas gástricas livres na cavidade abdominal induzir a apoptose de células mesoteliais e causa esfoliação, eventualmente levando à metástase. Este pode ser o mecanismo pelo qual as células cancerígenas aderem à submesotelial tecido conjuntivo, embora as células mesoteliais ainda são bem organizada e confluente. Mais estudos são necessários para caracterizar SF-CM lançado a partir de células de câncer gástrico.
Células cancerosas gástricas podem induzir apoptose através de vias de apoptose dependente do receptor mitochondria- e morte. células cancerosas gástricas suprimir o crescimento de células de mesotélio inibindo a proliferação através da promoção de apoptose dependente da caspase. As caspases são proteases de cisteína citoplasmáticos específicos de aspartato, e desempenham um papel importante na apoptose [25]. O circuito apoptótico de morte do receptor-dependente é disparado na superfície da célula e requer a activação de caspase-8, ao passo que a via dependente de mitocôndria é iniciado pela libertação de citocromo c mitocondrial para o citoplasma e requer a activação de caspase-9. Subsequentemente, a caspase-8 ou -9 pode activar a caspase-3, que por sua vez alvos e degrada proteínas celulares específicas e vitais, resultando na degradação do ADN nuclear e morte celular por apoptose [26]. Bcl-2, um inibidor da via de apoptose mitocondrial, exerce a sua acção através do bloqueio homólogos pró-apoptóticos, que por sua vez impede a libertação do citocromo c e a activação de caspases [27]. Bax é um promotor da morte, o qual é neutralizado pela heterodimerização com Bcl-2. Bax transloca-se para a membrana mitocondrial externa seguido de vazamento de citocromo c das mitocôndrias para o citosol [28]. Caspase-9 e caspase-3 são ativados sequencialmente, e esses eventos levam à quebra de DNA cromossômico. Como existe uma possibilidade significativa que a apoptose mediada por células do cancro gástrico de células mesoteliais é o resultado da regulação de Bcl-2 e Bax, a identificação dos seus compostos-alvo é necessária.
Neste estudo, utilizou-se um modelo experimental de ratinho de esclerose peritoneal induzida por repetidas injeções de células de câncer gástrico SF-CM. fibrose peritoneal experimental induzida por injecções intraperitoneais repetidas de células de câncer gástrico SF-CM pode esclerose peritoneal não completamente mímica observada em pacientes (difusamente infiltrando carcinoma ou carcinoma VI Tipo de Bormann). Na verdade, os achados patológicos de carcinomatose peritoneal e esclerose peritoneal não são uniformes e vários fatores estão envolvidos. Além disso, certas características comuns são observados durante o desenvolvimento da esclerose peritoneal entre os modelos animais experimentais induzidas por SF-CM de células de cancro gástrico e pacientes humanos submetidos carcinomatose peritoneal. Estes achados histológicos comuns incluem o aumento da acumulação de colágenos intersticiais como o colágeno I e III, infiltração de monócitos /macrófagos, aumento da a-SMA + miofibroblastos, e densidade vascular no peritônio [7, 8]. Estas semelhanças em alterações das membranas peritoneais entre modelos experimentais e pacientes carcinomatose peritoneal humanos sugerem que este é um modelo adequado para examinar a eficácia de vários potenciais reagentes terapêuticos para regular carcinomatose peritoneal.
Conclusões
Estes resultados demonstram que o câncer gástrico as células podem induzir a apoptose e fibrose de células mesoteliais peritoneais humanas através sobrenadantes no início da metástase peritoneal, e indicam que os factores solúveis presentes na cavidade peritoneal podem afectar a morfologia e função de células mesoteliais, para que o ambiente resultante torna-se favorável para metástases peritoneais.
abreviações
HPMC:
células mesoteliais peritoneais Humanos
SF-CM:.
media condicional livre de soro

Declarações
agradecimentos
Os autores desejam expressar seus sinceros agradecimentos ao Dr. Yan Song for a sua assistência técnica. Este estudo foi apoiado por uma bolsa da Ciências Naturais da Fundação Nacional da China (NO. 81071956 e 81101884).
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os autores declaram que não têm interesses conflitantes. contribuições
dos autores
DN, Z-DL e F-NL realizados os estudos sobre a morfologia e atividade biológica de células mesoteliais peritoneais in vitro
e in vivo
. ZS, Z-FM e FL participaram das in vivo
estudos. YX e C-GJ participaram nos estudos de morfologia. DN e HX participou no desenho do estudo e realizada a análise estatística. HX e DN concebeu o estudo, e participou de sua elaboração e coordenação e ajudou a redigir o manuscrito. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

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