Skrandžio vėžio ląstelių paviršinis sukelia apoptozę ir fibrozė pilvaplėvės audinių ir rezultatų palankios aplinkos pilvaplėvės metastazių, in vitro ir in vivo

skrandžio vėžio ląstelių paviršinis sukelia apoptozę ir fibrozė pilvaplėvės audinių ir rezultatų palankios aplinkos pilvaplėvės metastazių, į in vitro ir in vivo

Anotacija
faktai
šiame tyrime mes išnagrinėjo poveikį tirpių veiksnių išleistas skrandžio vėžio ląsteles nuo pilvaplėvės mesothelial ląstelių in vitro, parsisiųsti ir in vivo
.
metodai
HMrSV5, žmogaus pilvaplėvės mesothelial ląstelių linija, buvo inkubuojami su nuopile iš skrandžio vėžio ląsteles. buvo pastebėtas morfologiniai pokyčiai HMrSV5 ląsteles. Apoptozę HMrSV5 ląstelių buvo pastebėtas po perdavimo elektroniniu mikroskopu ir kiekybiškai nustatoma MTT ir tėkmės citometrijos. Išraiškos apoptozės susijusių baltymų (kaspazės-3, kaspazės-8, Bax, BCL-2) buvo immunochemically vertinami rezultatai.

Matomoje morfologiniai pokyčiai, nurodantys apoptozę nepastebėta HMrSV5 ląstelių 24 val po gydymo su nuopile skrandžio vėžio ląsteles. In vivo
, pilvaplėvės audiniai gydomi skrandžio vėžio ląstelių skysčio virš nuosėdų buvo gerokai sutirštės ir jame daug fibrozė.
Išvadas
Šie rezultatai rodo, kad supernatantai skrandžio vėžio ląstelių gali sukelti apoptozę ir fibrozė HMrSV5 žmogaus pilvaplėvės mesothelial ląstelės per supernatantus pradžioje peritoninės metastazių, tuo metu, priklausomu būdu, ir rodo, kad tirpūs veiksniai pilvaplėvės ertmę įtakos morfologija ir funkcijos mesothelial ląstelių, kad dėl aplinkos gali tapti palanki pilvaplėvės metastazių.
Raktiniai žodžiai
peritoninės karcinomatoze skrandžio navikai mesothelial ląstelių Apoptozę fibrozės faktai
peritoninės karcinomatoze labai riboja skrandžio vėžio pacientų prognozės pagerėjo po operacijos [1]. Peritoninės metastazės rezultatai metastazavusiu kaskados, paprastai pasireiškiantis esant vėlyvos stadijos navikų vystymąsi, kuris gerokai prisidėtų prie skrandžio vėžio susijusio mirtingumo. Peritoninės metastazės difuziškai infiltrating karcinoma nėra aiškiai suprantama mechanizmai.
Pilvaplėvės stromos aplinka palanki platinimu vėžinių ląstelių tarnauja kaip turtingas šaltinis augimo faktoriais ir chemokinus žinomoms dalyvauja naviko metastazių. Molekulės tarpininkauti šį kaskados nebuvo plačiai tirta [2]. Pranešama, mesothelial ląstelės gali užkirsti kelią vėžio invazijos ir atlikti morfologinius pokyčius reaguojant į tirpių veiksnių išleistas vėžinių ląstelių [3]. Konkretūs molekulės, dalyvaujančios šiame procese diktuoja būdingų savybių metastazavusiu vėžinių ląstelių. Naviko ląstelės turi pridėti tvirtai ant submesothelial monosluoksnio ir įsiskverbti į mesothelial monosluoksnį už invazijos. Bakas ir kt.
[4] tyrinėjo apsauginį poveikį mesothelial sluoksniu, naudojant žiurkių modelį, kuriame mesothelial pamušalas Parietal pilvaplėvės buvo atskirtas nuo eksperimentiniuose žiurkių, paliekant bazinę membraną nepažeistas. Mes anksčiau parodė, kad susiliejimo sluoksnis, nepažeistos mesothelial ląstelės stabdo vėžinių ląstelių invaziją į pilvo ertmę. Tačiau, kai šios barjero vientisumą sutrinka, gali atsirasti metastazių, nes pilvaplėvės suteikia palankias sąlygas skrandžio vėžio ląstelės augti [5-9]. Papildomi tyrimai parodė, kad prieš skrandžio vėžio ląstelių areštas, į pilvaplėvės, mesothelial ląstelės įgyja pusrutulio formos ir pradėti mesti. Kaip rezultatas, plika sritys submesothelial jungiamojo audinio yra veikiami pilvaplėvės ertmę [10-12]. Tikėtina, kad įsiskverbimas į mesothelial monosluoksnio auglio ląstelių pradeda su naviko sukelta mesothelial ląstelių apoptozę. Šiame tyrime mes išnagrinėjo tirpių veiksnių poveikį išleistas skrandžio vėžio ląsteles apie morfologijos ir biologinio aktyvumo pilvaplėvės mesothelial ląstelių in vitro ir in vivo,
.
Metodai
Reagentai
3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazoliumbromide (MTT) buvo gauta iš Fluka, JAV. Propidiumo jodidas (PI), buvo gauta iš Biosharp, JAV. BCL-2, Bax, kaspazės-3, kaspazės-8 ir Aktinis pirminiai antikūnai, ir antrinės antikūnas, ožkos anti-pelės IgG buvo gauti iš Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, USA. Dulbecco modifikuota Eagle vidutinės (DMEM) ir serumas iš veršiuko embriono (FCS) buvo gauti iš GIBCO BRL (Grand Island, NY, JAV). Kiti laboratoriniai reagentai buvo gauti iš Sigma, JAV. buvo naudojamas fazės-kontrasto mikroskopu (Japonija "Nikon"), perdavimo elektroninis mikroskopas ( "Hitachi" H-6001, Japonija).
ląstelių linijų, ląstelių kultūrą
žmogaus peritoninės mesothelial ląstelių linijos HMrSV5 buvo gautas iš ląstelių biologijos departamento Kinija medicinos universitetas, Kinija. HMrSV5 iš pradžių buvo izoliuotas nuo žmogaus taukinės. Trumpai, taukinė surinkti iš sutikti ne-ureminiams pacientams, kurie buvo mokosi pagal pasirenkamą pilvo operacijos, ir buvo inkubuojami 0,05% (w /v) tripsinu ir 0,01% (w /v) EDTA 20 min 37 ° C temperatūroje. Surinkti mesothelial ląstelės buvo centrifuguojamas 150 g 5 min ir tada perkelti į 75 cm 2 audinių kultūrų kolbos ir kultivuojamos drėgnoje 5% CO 2 inkubatorius, DMEM papildyta su 10% serumas iš veršiuko embriono (FCS ), 100 V /ml penicilino, 100 mikrogramų /ml streptomicino, 2 mmol /l L-glutamino ir 20 mmol /l hidroksietil piperazino etansulfonrūgšties (HEPES, Gibco BRL, JAV). Vidutinio buvo keičiami kas 2-3 dienas.
Žmogaus skrandžio karcinoma ląstelių linijas, MKN-45 MKN-1, SGC-7901, BGC-823 ir MSV-803, buvo gauti iš ląstelių biologijos katedra, Kinijos medicinos universiteto Kinija. Šios ląstelės buvo auginamos DMEM, papildytoje 10% FCS, 100 V /ml penicilino, 100 mikrogramų /ml streptomicino, ir 2 mmol /l L-glutamino drėgmėje, 5% CO 2 inkubatorių 37 ° C temperatūroje.
Pasirengimas serumo kondicionieriai žiniasklaidos
serumo sąlygoja žiniasklaidos (SF-CM) buvo parengta iš skrandžio vėžio ląstelių arba normalioms skrandžio epitelinių ląstelių kaip buvo pranešta anksčiau [1]. Trumpai, 5,0 × 10 5 ląstelės buvo pasėjamos į 100-mm audinio kultūrų patiekalai su 10 ml DMEM, po to papildomai su 10% FCS ir inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 3 dienų. Gauti SF-cm, ląstelės buvo plaunama du kartus fosfato buferinis tirpalas (PBS), ir inkubuojami 2 dienas su 3 ml DMEM serumo neturinčioje. SF-CM buvo išplauti ir centrifuguojamas 1000 g 5 min, pro filtrą (porų dydis: 0,45 mkm) ir saugomi -20 ° C iki naudojami
Gyvūnai
Vyras C57BL /6 pelių. (aštuonių savaičių, sveria 20 ± 2 g), buvo gauti iš Kinijos medicinos universiteto gyvūnų galimybe ir šeriami išgryninto vandens ir komercinio akcijų dietos į kambarį su oro kondicionieriumi 20-22 ° C.Animals naudojami šiame tyrime buvo palaikomi pagal už priežiūros ir naudojimo laboratorinių gyvūnų vadovas paskelbė JAV nacionalinių sveikatos institutų (NIH Nr 85-23, peržiūrėta 1996) ir gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto Kinijos medicinos universiteto politika.
Morfologinis vertinimo pagal fazinio kontrasto mikroskopu pervežimas Žmogaus pilvaplėvės mesothelial ląstelių (HPMCs) buvo auginamos siekiant subconfluence į 50 cm 2 indą su DMEM, kurių sudėtyje yra 10% FCS. Vidutinės tada buvo pakeistas į (1) serumo neturinčioje DMEM arba (2) SF-cm atstumu nuo skrandžio vėžio ląstelių linijų. Laiką 24 duobučių kamerų HPMCs buvo veikiami bandomųjų tirpalų už 24 h, ir švelniai nuplauti su PBS. Jie tada buvo tiriamas fazinio kontrasto mikroskopu dydį, formą, ir vientisumo ląstelės membranos, citoplazmos ir branduolio.
elektronine mikroskopija
HPMCs buvo auginamos siekiant subconfluence į 50 cm 2 patiekalas su DMEM, kurių sudėtyje yra 10% FCS. Vidutinės tada buvo pakeistas į (1) serumo neturinčioje DMEM arba (2) SF-cm atstumu nuo skrandžio vėžio ląstelių linijų. Po inkubacijos 24 h, ląstelės buvo tripsinizuojamos ir tada tvirtinama į ledinio 2,5% elektroninės mikroskopijos laipsnio glutaraldehido PBS (pH 7,3). Egzemplioriai buvo skalaujami PBS, po nustatoma 1% Osmio Tetraoksidas su 0,1% kalio Fericianidas, dehidratuoti per rūšiavo etanolio serijos (30% -90%), o nematomas EPON. Pusiau plonas (300 nm) skyriai buvo sumažinti naudojant REICHART Ultracut (REICHART Ultracut (Leica, Vokietija), tamsintas su 0,5% toluidino mėlyna ir tiriamas šviesos mikroskopu. Plono skyrius (65 Nm) buvo tamsintas su 2% uranilo acetato ir Reynold pirmavo citratas, ir nagrinėjamas perdavimo elektronų mikroskopu × 5000 ar × 8000 didinimo.
buvo atliktas kiekybinis nustatymas ląstelių pažeidimą pagal MTT Viesbutis The MTT įvertinti gyvybingumą žmogaus pilvaplėvės mesothelial ląstelių po gydymo su SF-cm nuo skrandžio vėžio ląstelių linijas. Ląstelės 96 šulinėlių plokštelė kultūrų, po kontakto kontroliuoti ar bandymų sprendimai tam tikrą laiko tarpą (pasireiškė 12 h, 24 h ir 48 h), buvo inkubuojami 50 mikrogramų /ml MTT 1:10 praskiedimo, grindžiamą mitybinės terpės tūrio 3 h 37 ° C temperatūroje. tuo inkubacijos metu pabaigoje, MTT tirpalas buvo pašalintas ir 150 pL DMSO buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį, ir maišomas į ištirptų tamsiai mėlyna formazon kristalus, kurie buvo suformuota. Gyvybingų ląstelių dalis buvo nustatomas matuojant optinį tankį, kiekvieno mėginio 480 nm su spektrofotometru. Trys kultūros buvo veikiami kiekvieno tirpalo kiekviename laiko laikotarpį. buvo palyginti Kiekvieno kultūrų grupės priemonėmis.
tėkmės citometrijos
Po inkubacijos bandomaisiais tirpalais 24 h, 48 h ir 72 h, ląstelės buvo nuimta naudojant trypsinization. Ląstelės resuspenduojamos PBS esant nuo 1 × 10 6 /ml koncentracijos ir fiksuoto 2 ml metanolio 30 min, esant 4 ° C temperatūroje. Po to, kai CNE2 ląstelės buvo nustatyti, mišinys inkubuojamas 0,5 ml PI tirpalo (0,05 mg /ml, o 3,8 mol /l Na citrato) ir 0,5 ml RNaze A (0,5 mg /ml) kambario temperatūroje 30 min. Pagaliau, ląstelės buvo resuspenduotos 1 ml PBS ir analizuojami tėkmės citometrijos pagal gamintojo instrukcijas. Į subdiploid piko ląstelės buvo laikomos aprotoninis.
Histologinis išvaizdą pilvaplėvės
Vyras C57BL /6 pelėms (aštuonių savaičių, sveriantiems 20 ± 2 g) buvo naudojami šiame tyrime. Eksperimentas sekė dėl laboratorinių gyvūnų naudojimo mokslinių tyrimų ir mokymo gaires. Pelėms buvo šeriami standartinį granulių laboratorinį čiau ir buvo aprūpinti vandens iki soties
. Pelių buvo atsitiktinai suskirstyti į vieną iš trijų grupių (n = 5 arba 6 kiekvienoje grupėje). Pelių DMEM grupės buvo gydomi DMEM (100 ml /kg) pagal pilvaplėvės injekcijų dėl, 3, 5 dienų 1, ir 7. pelių SF-CM grupės buvo gydomi 100 ml /kg SF-cm atstumu nuo skrandžio vėžio ląstelių linijos pagal pilvaplėvės injekcijų tomis dienomis, 1, 3, 5 ir 7. Jokia buvo įtraukta į injekcijas kontrolinės pelių. Po to, kai 29 dienų, pelės buvo anestezuoti etilo eteriu ir paaukotos. Pakauškaulio peritoneums buvo tamsintas hematoksilinu ir eozinu (H & E) ir Masson trispalvis dažymo. Morfologiškai pakito parietalinių pilvaplėvės nepastebėta šviesos mikroskopu. Storis submesothelial tarpląsteliniame buvo nustatyta po audinių skyriai turėjo H & E ir MASSON dažymo. Už 10 nepriklausomų matavimų vidurkis buvo apskaičiuojamas kiekvienai sekcijai; duomenys buvo tada sutraukta.
Imunoblotingo
Žmogaus pilvaplėvės mesothelial ląstelės buvo auginamos siekiant subconfluence į 50 cm 2 indą su DMEM, kurių sudėtyje yra 10% FCS. Tuomet žiniasklaida buvo pakeistas į (1) SF cm nuo skrandžio vėžio ląstelių MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 ir MSV-803; ir (2) serumo neturinti DMEM tarnauja kaip kontrolės. Baltymų buvo išgauta standartiniame lizės buferiniame tirpale su proteinazių inhibitorių (natrio orthovanadate, fenilmetilsulfonilfluoridą fluorido, leupeptiną ir aprotinino gautų iš BioShop, Burlington, ON, Kanada). Mėginiai, 20 mikrogramų baltymų lizato elektroforeze su 12% SDS-PAGE metodu, perkeltas į nailono membranos, ir atskirai zonduotos su antikūnų BCL-2, Bax, kaspazės-3 ir kaspazės-8. Po inkubacijos su antriniais antikūnais, dėmės buvo sukurtas naudojant ECL Vakarų dėmė Pagrindo komplektas (Abcam, JAV).
Statistinė analizė
Visi duomenys yra išreikštas x
± SD
. Palyginimai narkotikų poveikis buvo pagamintas naudojant Stjudento t
-test. P
vertė < 0,05 buvo laikomas reikšmingu.
Rezultatai
Morfologinis vertinimas pagal fazinio kontrasto mikroskopu
Nors HPMCs gydyti tik DMEM serumo neturinčioje parodė tipišką daugiakampio ir grindiniu modelio (1a pav.), Ląstelės gydomi SF-cm nuo skrandžio vėžio ląstelių MKN45 už 24 val pradėjo turėti morfologinius pokyčius, akivaizdžiausias iš jų buvo pilingas ir atviros srityse (1b paveikslėlis) išvaizda. 1 pav morfologiniai pokyčiai žmogaus pilvaplėvės mesothelial ląstelių pagal fazinio kontrasto mikroskopu.
(A), monosluoksniui iš daugiakampių ir akmenimis-kaip HPMCs išaugintų DMEM serumo nemokamai. (B-D), Akytasis išvaizda nuogų srityse po gydymo SF-cm nuo skrandžio vėžio ląstelių linijų MKN45, SGC7901 ir BGC823. (Didinimas: × 40).
Perdavimo elektronų mikroskopija
Po 24 h SF-cm nuo skrandžio vėžio ląstelių gydymo Apoptozinės savybės (pavyzdžiui, kondensacijos branduolinės chromatino, raukšlių branduolinių membranų, išsiplėtimas Endoplazminis tinklas, ir gana normalus struktūra mitochondrijas) buvo stebima perdavimo elektronų mikroskopu (TEM; skaičiai 2A B). Pagal TEM, branduolinės membrana buvo matyti, kad sveika, chromatino kondensuotas į masių, ir membranos sienos ar formavimui, arkos (2C pav). Jaunieji ir apoptozę organų formavimasis taip pat buvo pastebėta (2C pav.) 2 paveikslas žmogaus pilvaplėvės mesothelial ląstelių (HPMC) 24 h po inkubacijos su ir be SF-cm nuo skrandžio vėžio ląsteles.
(a) kontrolinių ląstelių rodyti normalius branduolius ir endoplasmic reticula. (B) Ląstelės gydomiems SF-cm atstumu nuo MKN1 skrandžio vėžio ląstelių parodyti chromatino kondensuotas į masių, ir membranos sienos ar formavimui, arkos. Jaunieji ir apoptozę organų formavimasis buvo pastebėta (rodykles į B). (C) .Cells gydomi SF cm nuo MKN45 skrandžio vėžio ląstelės rodo kondensacijos branduolinės chromatino (rodykles C). (D) Ląstelės gydomi skrandžio vėžio ląstelių linija MSV-803 buvo panašus į B. jaunieji ir apoptozę organų susidarymo taip pat buvo pastebėta.
MTT
įvertinti galimą slopinimas, skrandžio vėžio ląstelių SF cm nuo HPMCs, mes išanalizavome savo augimo kreivė HPMC linija HMrSV5. Skrandžio vėžio ląstelių SF cm sukeltas augimo slopinimą HPMC ląstelių, ir tai darė laiko priklausomu būdu (3a pav.) Šis poveikis buvo stebėtas esant 0 h, 12 h, 24 h ir 48 h. Šie rezultatai rodo, kad navikas paviršinis skatina mesothelial ląstelių pažeidimą arba apoptozę. 3 pav Apoptozę buvo įvertintas dviem būdais: MTT ir tėkmės citometrijos.
(A), gyvybingumas mesothelial ląstelių HMrSV5 po gydymo SF-cm nuo skrandžio vėžio ląsteles. (B), Apoptozę buvo įvertintas, tėkmės citometrijos po gydymo SF-cm nuo skrandžio vėžio ląsteles.
Tėkmės citometrijos
kiekybiškai įvertinti apoptozinių ląstelių procentas po gydymo įvairiais laikotarpiais, mesothelial ląstelės buvo tamsintas su PI. Skrandžio vėžio ląstelių SF-CM efektyviai sukeltos apoptozės mesothelial ląsteles ir darė nuo dozės priklausomu būdu po 48 h (3.B paveikslas). Šie rezultatai buvo tokie patys kaip ir
histologija ir morfometrinis analizė
morfologiškai pakito parietalinių pilvaplėvės buvo analizuojami naudojant H &į MTT,. E ir Masson trispalvis dažymo. Tarp įprastų pelių A mesothelial ląstelių monosluoksniui apėmė peritoninė paviršių be jokių sustorėjimas (4 pav A, D). Dėl akivaizdaus nesuderinamumo, pelės, gaunantys intraperitonines injekcijų DMEM turėjo nedidelį sustorėjimą į pilvaplėvės submesothelial kolageninio zonoje (4 pav B, E); tie pilvo plėvę suleidžiama skrandžio vėžio ląstelių SF-CM buvo pažymėta sustorėja submesothelial kompaktišką zonoje ir padidėjęs ląstelių skaičius (4 pav c, f). 4 pav hematoksilinu /eozinas ( "H & R) ir Masson dažymo pilvaplėvės audiniuose.
pilvaplėvės audiniai iš įvairių grupių gautos chirurginiu būdu ir taikomos H & E ir Masson dažymo. (A) Visos nuotraukos buvo gautos 40 × priartinimas. Normalus pilvaplėvės sudaro tik apie mesothelium monosluoksnio su mažai fibroze (a, d). Pilvaplėvės gydomi DMEM taip pat parodė, nedidelis kiekis jungiamojo audinio pagal mesothelial ląstelių (rodyklės B, E). Priešingai, pilvaplėvės gydomi SF cm nuo skrandžio vėžio ląstelių buvo gerokai sutirštės ir jame platų fibrozės (rodykles c, f). (B) morfometriniai parametrai peritoninės audinių. Duomenys yra išreikšti kaip vidurkis ± standartinė paklaida ne mažiau kaip 3 atskirų eksperimentų vidurkio. * P
< 0,05.
Imunoblotingu
Mes tada siekė toliau apibrėžti mechanizmus, kuriais remiasi bendrą poveikį skrandžio vėžio ląstelių SF cm apie apoptozę susiję baltymų (kaspazės-3, kaspazės-8, Bax, BCL-2) , Lygiai šių baltymų buvo įvertintas naudojant Vakarų dėmė analizė. Kaspazės-3, kaspazės-8, ir BAX baltymų kiekis padidėjo po 48 val gydymo SF cm nuo daugelio skrandžio vėžio ląsteles, o BCL-2 baltymo koncentracija sumažėjo (5 paveikslas). Beta-aktino buvo naudojamas kaip krovimo valdymu. 5 pav Western blot analizė apoptozę susijusių baltymų koncentracijos (kaspazė-3, kaspazės-8, Bax, ir BCL-2) HPMCs su SF-CM iš skirtingų skrandžio vėžio ląstelių linijas, gydymui.
Serumas alksta HPMCs buvo inkubuojami su SF-CM iš įvairių skrandžio vėžio ląstelių linijų iki 48 h; Iš viso ląstelių baltymas išgaunamas ir taikomos Vakarų dėmė analizė.
Diskusijos
Dauguma tyrimų pooperacinio naviko recidyvo rodo, kad traumuotos mesothelial paviršiai yra pageidaujama svetaines naviko ląstelių sukibimą. Neseniai atskirta vėžines ląsteles viduje pilvaplėvės ertmes, ir baltymų konkrečiai išreikštų peritoninės metastazių skrandžio karcinoma buvo nustatyta, kad susijęs su vėžio prognozės. Nors immunogenetic požiūriai rodo didelį pažadą į pilvaplėvės metastazių skrandžio karcinoma [13-15] gydymui, skrandžio vėžio ląstelių poveikis mesothelial ląstelių yra menkai suprantamas.
Tyrimas parodė, kad mesothelial ląstelės numatyta apsauga nuo pilvaplėvės metastazės naviko nepažeistomis mesothelia [9, 16, 17]. Paget kt
pasiūlė "sėklos ir dirvos" teorija: metastazės atsiranda tik tada, kai naviko ląstelės gyvena ir auga palankioje aplinkoje [18]. Pilvaplėvės gali būti tokia palanki aplinka Tarpikliai skrandžio vėžio ląsteles; galbūt mesothelial ląstelės išvengti vėžio ląsteles nuo patekę į submesothelial jungiamojo audinio. Marcus ir kt.
[1] parodė, kad gretimų susiliejantis mesothelial ląstelės stabdo invazija vėžio ląsteles. Be to, Kiyasu ir kt.
[3] pranešė, kad, prieš peritoninės implantacijos vėžinių ląstelių, mesothelial ląstelės tampa pusrutulio ir pleiskanomis iš pilvaplėvės. Mūsų hipotezė yra, kad po serosa yra veikiami, nemokama vėžinės ląstelės išskiriamas nuo pirminių skrandžio vėžio svetainių į pilvo ertmę sukelti apoptozę pilvaplėvės mesothelial ląstelių [19-21]. Kaip rezultatas, mesothelial ląstelės tampa pusrutulio ir eksfoliacija vyksta. taip Naked sritys submesothelial jungiamojo audinio yra veikiami pilvaplėvės ertmę; tai nukentėjęs pilvaplėvės svetainė tampa palanki aplinka peritoninės metastazių [22-24].
Mes anksčiau parodyta skrandžio vėžio ląstelių skysčio virš nuosėdų žymiai sumažinti mesothelial ląstelių gyvybingumą, bet normalus skrandžio epitelio ląstelių linija GES-1 daro jokios įtakos mesothelial ląstelės [5]. Mūsų dabartinis tyrimas taip pat rodo, kad išauginti mesothelial ląstelės tampa pusrutulio ir eksfoliacija įvyksta tada, kai buvo įtraukta serumo vidutinio lemia skrandžio vėžio ląsteles, taip, kaip parodyta priešingai fazės mikroskopu. Be to, citoplazmos sumažinimas, branduolinės kondensatas, ir formavimas ekstraląsteliniuose ir /ar ląstelėje apoptozinių įstaigoms buvo pastebėtas po perdavimo elektroniniu mikroskopu. Apoptozė buvo įvertintas dviem būdais: MTT ir tėkmės citometrijos. Mes spėlioti, kad nemokama skrandžio vėžio ląsteles pilvo ertmę sukelti apoptozę mesothelial ląstelių ir sukelti eksfoliacija, galiausiai vedantis į metastazių. Tai gali būti mechanizmas, pagal kurį vėžinės ląstelės laikytis submesothelial jungiamąjį audinį, nors mesothelial ląstelės vis dar gerai organizuota ir susiliejantis. Tolesni tyrimai yra reikalingi apibūdinti SF cm išleistas iš skrandžio vėžio ląsteles.
Skrandžio vėžio ląsteles gali sukelti apoptozę per mitochondria- ir mirties receptorių priklauso nuo apoptozinių kelius. Skrandžio vėžio ląstelės slopinti mesothelial ląstelių augimą proliferacijos slopinimui per kaspazės-priklauso nuo apoptozės skatinimo. Kaspazių yra citoplazmos aspartatas konkrečių cisteino proteazės ir vaidina svarbų vaidmenį apoptozės [25]. Mirties receptoriaus-priklauso aprotoninis kelias yra užfiksuojamas prie ląstelės paviršiaus ir reikalauja aktyvacijos kaspazės-8, kadangi Mitochondrija-priklauso kelias inicijuoja mitochondrinio citochromo c išleidimo į citoplazmą ir reikalauja aktyvacijos kaspazės-9. Vėliau kaspazės-8 arba -9 galite įjungti kaspazės-3, kuris, savo ruožtu, tikslus ir pablogina konkrečių ir gyvybines ląstelių baltymus, galiausiai sukelia branduolinės DNR degradacijos ir apoptozės ląstelių mirtis [26]. BCL-2, nuoroda į mitochondrijų apoptozė keliu inhibitorius, daro savo veiksmus blokuojant proapoptotic kolegomis, kurie savo ruožtu neleidžia citochromo c spaudai ir kaspazių [27] aktyvacijos. Bax yra mirtis promotorius, kuris neutralizuoja heterodimerization su Bcl-2. Bax translocates į išorinį mitochondrijų membranos po nutekėjimo citochromo c iš mitochondrijų į citozolyje [28]. Kaspazė-9 ir kaspazės-3 yra aktyvuota iš eilės, ir šių įvykių sukelti chromosomų DNR suskirstymą. Kaip ten yra reikšmingas galimybė, kad skrandžio vėžio ląstelės medijuojamo apoptozę mesothelial ląstelių yra reguliavimo Bcl-2 ir Bax rezultatas, identifikavimas jų tikslinius junginius, yra būtina.
Šiame tyrime, mes panaudojo pelės eksperimentinio modelį pilvaplėvės sklerozė sukelia pakartotinis injekcijų skrandžio vėžio ląstelių SF cm. Eksperimentinis pilvaplėvės fibrozė, sukelti pakartotinai pilvaplėvės ertmę suleista skrandžio vėžio ląstelių SF-CM gali ne visiškai imituoti pilvaplėvės sklerozė stebėta pacientams (difuzinį infiltrating karcinoma ar Bormanno tipas VI karcinoma). Tiesą sakant, patologiniai radiniai peritoninės karcinomatoze ir pilvaplėvės sklerozės nėra vienodas ir įvairūs veiksniai dalyvauti. Be to, tam tikri bendri požymiai yra stebimi per pilvaplėvės skleroze tarp skrandžio vėžio ląstelių SF-CM-sukeltų eksperimentinių gyvūnų modelių ir žmogaus pacientams, kuriems atliekama peritoninė karcinomatoze plėtrai. Šie bendri histologiniai duomenys yra padidėjęs kaupimosi Tarpusienio kolagenų tokių kaip I tipo ir III kolageno, infiltracija monocitų /makrofagų, padidėjęs a-SMA + miofibroblastus ir kraujagyslių tankio pilvaplėvės [7, 8]. Šie pasikeitimai pilvaplėvės membranos tarp eksperimentiniais modeliais ir žmogaus pilvaplėvės karcinomatoze pacientų panašumai rodo, kad tai yra tinkamas modelis nagrinėti įvairių galimą terapinį reagentų efektyvumas reguliavimo peritoninė karcinomatoze.
Išvadas
Šie rezultatai rodo, kad skrandžio vėžys ląstelės gali sukelti apoptozę ir fibrozė žmogaus pilvaplėvės mesothelial ląsteles per nuopile pradžioje peritoninės metastazių, o rodo, kad tirpūs veiksniai pilvaplėvės ertmę, gali turėti įtakos morfologija ir funkcijos mesothelial ląstelių, kad dėl aplinka tampa palankesnė pilvaplėvės metastazių.
Santrumpos
HPMCs: Rīga, žmogaus pilvaplėvės mesothelial ląstelių
SF cm.
Serumas be sąlyginės žiniasklaidos

pareiškimai
Padėka Viesbutis The autoriai nori išreikšti savo nuoširdžią padėką dr Yan Song jo techninę pagalbą. Šis tyrimas parėmė suteikimo iš nacionalinio Gamtos mokslų fondo Kinijos (NR. 81071956 ir 81101884).
Autorių originalios pateikiami failai vaizdų
Žemiau išvardintos nuorodos į autorių originalus pateiktų failų vaizdų. 12876_2011_768_MOESM1_ESM.jpeg Autorių originalus failas 1 pav 12876_2011_768_MOESM2_ESM.jpeg Autorių originalaus failo 2 pav 12876_2011_768_MOESM3_ESM.bmp Autorių originalios 3 pav 12876_2011_768_MOESM4_ESM.jpeg Autorių originalaus failo 4 pav 12876_2011_768_MOESM5_ESM.bmp Autorių originalaus failo 5 paveiksle konkuruojančių interesų Viesbutis The autoriai deklaruoja, kad jie neturi jokių konkuruojančių interesų.
autorių indėlį
DN Z-DL ir F-NL atliktus tyrimus apie morfologijos ir biologinio aktyvumo pilvaplėvės mesothelial ląstelių in vitro
ir in vivo
. ZS, Z-FM ir FL dalyvavo in vivo
studijas. YX ir C-GJ dalyvavo morfologijos tyrimais. DN ir HX dalyvavo planuojant tyrimą ir atlikti statistinę analizę. HX DN sumanyta Tyrimo ir dalyvavo jo sandarą ir koordinavimo ir padėjo parengti rankraštį. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Ar kartu splenektomija naudingas ilgalaikiam išlikimui pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, kuriems atliekama gydomoji pašalintas skrandis? Vieno institucija tyrimas
• Išraiška ir klinikinė reikšmė ilgą nekoduojanti RNR HNF1A-AS1 žmogaus skrandžio vėžio