Gastrisk kræftcelle supernatant forårsager apoptose og fibrose i de peritoneale væv og resulterer i et miljø, der er gunstigt for peritoneale metastaser, in vitro og in vivo

Gastric kræftcelle supernatant forårsager apoptose og fibrose i de peritoneale væv og resulterer i et miljø, der er gunstige for peritoneale metastaser, i vitro
og in vivo
Abstrakt
Baggrund
i denne undersøgelse undersøgte vi effekten af ​​opløselige faktorer frigivet af mavekræft celler på peritoneale mesothelial celler in vitro
og in vivo
. Salg Metoder
HMrSV5, en human peritoneal mesotelial cellelinie blev inkuberet med supernatanter fra gastriske cancerceller. blev observeret morfologiske ændringer af HMrSV5 celler. Apoptose af HMrSV5 celler blev observeret under et transmissions-elektronmikroskop og kvantitativt bestemt ved MTT-assay og flowcytometri. Udtryk for apoptose-relaterede proteiner (caspase-3, caspase-8, Bax, Bcl-2) blev immunokemisk evalueret.
Resultater
blev observeret iøjnefaldende morfologiske ændringer indikerer apoptose i HMrSV5 celler 24 timer efter behandling med supernatanterne fra gastriske cancerceller. In vivo
, peritoneale væv behandlet med mavekræft cellesupernatanten blev væsentligt fortykket og indeholdt omfattende fibrose.
Konklusioner
Disse resultater viser, at supernatanter af gastrisk kræftceller kan inducere apoptose og fibrose hos HMrSV5 humane peritoneale mesotelceller gennem supernatanter i de tidlige peritoneal metastaser, i en tidsafhængig måde, og indikerer, at opløselige faktorer i bughulen påvirker morfologi og funktion af mesotelceller således at den resulterende miljø kan blive gunstigt for peritoneale metastaser.
søgeord
Peritoneal carcinomatose Mave neoplasmer mesotelial celle Apoptose fibrose Baggrund
Peritoneal carcinomatose alvorligt begrænser forbedring af gastrisk kræftpatienters prognose efter kirurgi [1]. Peritoneal metastase resulterer i en metastatisk kaskade, sædvanligvis forekommer ved sene tumor udvikling, som i væsentlig grad bidrager til mavekræft dødelighed. Mekanismerne i peritoneal metastaser af diffust infiltrerende karcinom er ikke klart forstået.
Peritoneal stroma miljø favoriserer spredning af tumorceller ved at tjene som en rig kilde af vækstfaktorer og kemokiner vides at være involveret i tumor metastase. Molekyler der medierer denne kaskade er ikke blevet grundigt undersøgt [2]. Angiveligt kan mesotelceller forebygge kræft invasion og undergå morfologiske ændringer som reaktion på opløselige faktorer frigivet af cancerceller [3]. De specifikke molekyler, der er involveret i denne proces er dikteret af iboende egenskaber ved de metastatiske tumorceller. Tumor celler har brug for at vedhæfte fast på den submesothelial monolag og trænge ind i mesothelial monolag for invasion. Buck et al.
[4] udforsket den beskyttende virkning af mesothelial lag, ved anvendelse af en rottemodel, hvor mesothelial foring af parietal peritoneum blev afdrevet i de eksperimentelle rotter, der forlader basalmembranen intakt. Vi har tidligere vist, at laget af sammenflydende, intakte mesotelceller hindrer cancercelleinvasion af bughulen. Men når integriteten af ​​denne barriere er afbrudt, kan metastaser opstå, fordi bughinden giver et gunstigt miljø for gastriske kræftceller til at vokse [5-9]. Yderligere undersøgelser har vist, at før fastgørelsen af ​​gastriske cancerceller på peritoneum, mesotelceller erhverve halvkugleform og begynder at kaste. Som følge heraf er nøgne områder af submesothelial bindevæv udsat for bughulen [10-12]. Det er sandsynligt, at penetrering af mesothelial monolag af tumorceller initierer med tumorinduceret mesotelial celle apoptose. I denne undersøgelse var at undersøge effekten af ​​opløselige faktorer frigivet af mavekræft celler på morfologi og biologiske aktivitet peritoneale mesoteliale celler in vitro og in vivo
.
Metoder
Reagenser Salg 3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazoliumbromide (MTT) blev opnået fra Fluka, USA. Propidiumiodid (PI) blev opnået fra Biosharp, USA. Bcl-2, Bax, caspase-3, blev caspase-8 og actin primære antistoffer, og det sekundære antistof, ged anti-mus IgG opnået fra Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, USA. Dulbeccos modificerede Eagles medium (DMEM) og føtalt kalveserum (FCS) blev opnået fra Gibco BRL (Grand Island, NY, USA). Andre laboratoriereagenser blev opnået fra Sigma, USA. En fasekontrastmikroskop (Japan Nikon), transmission elektron mikroskop (Hitachi H-6001, Japan) blev anvendt.
Cellelinjer og cellekultur
menneskelige peritoneal mesothelial cellelinie HMrSV5 blev opnået fra Institut for Cell Biology Kina Medical University, Kina. HMrSV5 blev oprindeligt isoleret fra humant omentum. Kort fortalt, omentum opsamlet fra samtykkende ikke-uræmiske patienter, der gennemgår elektiv abdominal kirurgi, og blev inkuberet i 0,05% (vægt /volumen) trypsin og 0,01% (w /v) EDTA i 20 minutter ved 37 ° C. De høstede mesotelceller blev centrifugeret ved 150 g i 5 minutter og derefter overført til 75 cm 2 vævskulturkolber og dyrkes i en befugtet 5% CO 2 inkubator i DMEM suppleret med 10% føtalt kalveserum (FCS ), 100 U /ml penicillin, 100 ug /ml streptomycin, 2 mmol /l L-glutamin og 20 mmol /l hydroxyethylpiperazin ethansulfonsyre (HEPES, Gibco BRL, USA). Medium blev skiftet hver 2-3 dage.
Humane gastriske carcinoma cellelinier, MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 og MGC-803, blev opnået fra Institut for cellebiologi, Kina Medical University , Kina. Disse celler blev dyrket i DMEM suppleret med 10% FCS, 100 U /ml penicillin, 100 ug /ml streptomycin, og 2 mmol /l L-glutamin i en befugtet 5% CO 2 inkubator ved 37 ° C.
Fremstilling af serumfrie konditionerede medier
serumfrit konditionerede medier (SF-CM) blev fremstillet ud fra gastriske cancerceller eller normale gastriske epitelceller som tidligere rapporteret [1]. Kort fortalt, 5,0 × 10 5-celler blev podet i 100-mm vævskulturskåle med 10 ml DMEM, suppleret med 10% FCS og inkuberet ved 37 ° C i 3 dage. Til opnåelse SF-CM, blev cellerne vasket to gange med phosphatbufret opløsning (PBS) og derefter inkuberet i 2 dage med 3 ml serum-frit DMEM. SF-CM blev elueret og centrifugeret ved 1000 g i 5 min, ledes gennem filtre (porestørrelse: 0,45 um) og opbevaret ved -20 ° C indtil anvendelse
Dyr Salg Male C57BL /6-mus. (otte uger gamle, vejer 20 ± 2 g), blev opnået fra Kina Medical University dyr facilitet og fodret med renset vand og en kommerciel bestand kost i et airconditioneret værelse på 20-22 ° C.Animals anvendt i denne undersøgelse blev opretholdt i overensstemmelse med vejledningen for pleje og anvendelse af forsøgsdyr udgivet af det amerikanske National Institutes of Health (NIH publikation nr 85-23, revideret 1996), og den politik af Animal Care og brug Udvalg Kina Medical University.
Morfologiske Evaluering under et fasekontrastmikroskop
Humane peritoneale mesothelial celler (HPMC'er) blev dyrket til subkonfluens i en 50 cm 2 fad med DMEM indeholdende 10% FCS. Mediet blev derefter ændret til (1) serum-frit DMEM eller (2) SF-CM fra gastriske cancercellelinier. De HPMC'er i 24-brønds kamre blev udsat for testopløsninger i 24 timer, og forsigtigt vasket med PBS. De blev derefter undersøgt under et fasekontrastmikroskop til størrelse, form, og integritet af cellemembranen, cytoplasma, og kernen.
Transmissionselektronmikroskopi Salg The HPMC'er blev dyrket til subkonfluens i en 50 cm 2 fad med DMEM indeholdende 10% FCS. Mediet blev derefter ændret til (1) serum-frit DMEM eller (2) SF-CM fra gastriske cancercellelinier. Efter inkubation i 24 timer blev cellerne trypsineret og derefter fikseret i iskold 2,5% elektronmikroskopi klasse glutaraldehyd i PBS (pH 7,3). Prøverne blev skyllet med PBS, post-fikseret i 1% osmiumtetroxid med 0,1% kaliumferricyanid, dehydreret gennem en gradueret ethanolserie (30% -90%), og indlejret i Epon. Semi-tynde (300 nm) snit blev skåret under anvendelse af en Reichart Ultracut (Reichart Ultracut (Leica, Tyskland), farvet med 0,5% toluidinblåt og undersøgt under et lysmikroskop. Ultratynde snit (65 nm) blev farvet med 2% uranylacetat og Reynolds blycitrat og undersøgt på en transmission elektron mikroskop ved × 5000 eller × 8000 forstørrelse.
Kvantitativ bestemmelse af celleskader ved MTT-assay
MTT-assayet blev udført for at vurdere levedygtigheden af ​​de humane peritoneale mesoteliale celler efter behandling med SF-CM fra mavekræft cellelinjer. Celler i 96-brønds plade kulturer, efter udsættelse at kontrollere eller test løsninger til en bestemt periode (observeret ved 12 timer, 24 timer og 48 timer), blev inkuberet med 50 ug /ml MTT i en fortynding på 1:10, baseret på volumenet af dyrkningsmediet i 3 timer ved 37 ° C. ved slutningen af ​​inkubationstiden blev MTT-opløsning fjernet, og 150 pi DMSO blev sat til hver brønd, og omrørt til opløse de mørke-blå formazon krystaller, som var dannet. Andelen af ​​levedygtige celler blev bestemt ved måling af den optiske densitet af hver prøve ved 480 nm med et spektrofotometer. Tre kulturer blev eksponeret for hver opløsning ved hver tidsperiode. Midlerne til hver gruppe af kulturer blev sammenlignet.
Flowcytometri
Efter inkubation i testopløsningerne i 24 timer, 48 timer og 72 timer, celler blev høstet under anvendelse af trypsinisering. Cellerne blev resuspenderet i PBS ved en koncentration på 1 x 10 6 /mL og fikseret i 2 ml methanol i 30 min ved 4 ° C. Efter CNE2 cellerne blev fikseret, blev blandingen inkuberet i 0,5 ml PI-opløsning (0,05 mg /ml i 3,8 mol /l Na-citrat) og 0,5 ml RNAse A (0,5 mg /ml) ved stuetemperatur i 30 min. Endelig blev cellerne resuspenderet i 1 ml PBS og analyseret ved flowcytometri ifølge producentens anvisninger. Cellerne i subdiploid toppen, blev anset apoptotiske.
Histologisk udseende af bughinden
Male C57BL /6-mus (otte uger gamle, der vejede 20 ± 2 g) blev anvendt i den foreliggende undersøgelse. Forsøget fulgte retningslinjerne for brugen af ​​forsøgsdyr i forskning og undervisning. Musene blev fodret med en standard pellet laboratoriefoder og blev forsynet med vand ad libitum
. Mus blev randomiseret til en af ​​tre grupper (n = 5 eller 6 i hver gruppe). Mus i DMEM gruppe blev behandlet med DMEM (100 ml /kg) ved intraperitoneal injektion på dag 1, 3, 5 og 7. Mus i SF-CM gruppe blev behandlet med 100 ml /kg SF-CM fra gastrisk cancercellelinie linjer ved intraperitoneale injektioner på dag 1, 3, 5 og 7. Intet blev tilsat til injektioner til kontrolmusene. Efter 29 dage blev musene bedøvet med ethylether og aflivet. Parietale peritoneums blev farvet med hematoxylin og eosin (H &E) og Massons trichromfarvning. Morfologiske forandringer af den parietale peritoneum blev observeret af lysmikroskop. Tykkelse af submesothelial ekstracellulære matrix blev bestemt efter vævssnittene havde H &E og Masson-farvning. Gennemsnittet for 10 uafhængige målinger blev beregnet for hver sektion; data blev derefter samlet.
Western blotting
Humane peritoneale mesoteliale celler blev dyrket til subkonfluens i en 50-cm 2 fad med DMEM indeholdende 10% FCS. Medierne blev derefter ændret til (1) SF-CM fra mavekræft celle MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 og MGC-803; og (2) serum-frit DMEM, der tjener som kontrol. Protein blev ekstraheret i en standard lysis buffer med proteinaseinhibitorer (natriumorthovanadat, phenylmethylsulfonylfluorid, leupeptin og aprotinin opnået fra BioShop, Burlington, ON, Canada). Alikvoter på 20 ug protein lysat blev elektroforesebehandlet med en 12% SDS-PAGE-gel, overført til en nylonmembran, og separat probet med antistoffer for Bcl-2, Bax, caspase-3 og caspase-8. Efter inkubering med det sekundære antistof, blev blots fremkaldt under anvendelse af en ECL Western Blot Substrate Kit (Abcam, USA).
Statistisk analyse
Alle data er udtrykt som x
± sd
. Sammenligninger af lægemiddelvirkninger blev foretaget ved hjælp af Students t
-test. En P
værdi < 0,05 blev anset for at være betydelig.
Resultater
Morfologisk evaluering under et fasekontrastmikroskop
Mens HPMC'er kun behandlet i serum-frit DMEM viste en typisk polygonalt og brosten mønster (figur 1A.), Celler behandlet med SF-CM fra mavekræft celle MKN45 i 24 timer begyndte at have morfologiske ændringer, den mest oplagte af disse var eksfoliering og fremkomsten af ​​nøgne områder (Figur 1B). Figur 1 Morfologiske ændringer af humane peritoneale mesotelceller under fasekontrastmikroskop.
(A) monolag af polygonale og brosten-lignende HPMC'er dyrket i serum-frit DMEM. (B-D) Ekspanderet udseende nøgne områder efter behandling med SF-CM fra gastrisk cancer cellelinjer MKN45, SGC7901, og BGC823. (Forstørrelse: x 40).
Transmissionselektronmikroskopi
Efter 24 timers SF-CM fra gastrisk cancercellelinie behandling, apoptotiske funktioner (såsom kondensation af nukleare kromatin, rynkning af nukleare membraner, dilatation af endoplasmatisk reticulum, og relativt normale struktur mitokondrierne) blev observeret under transmission (TEM; figur 2A, B). Under TEM blev kernemembranen ses at være intakt, chromatinet kondenseret i masserne, og på grænsen af ​​membranen eller danner bue (figur 2C). Den spirende og dannelsen af ​​apoptose organer blev også observeret (figur 2C). Figur 2 Humane peritoneale mesoteliale celler (HPMC) 24 timer efter inkubation med og uden SF-CM fra gastriske cancerceller. Hotel (a) Kontrollen celler vise normale kerner og endoplasmatiske reticula. (B) Celler behandlet med SF-CM fra MKN1 gastrisk cancerceller viser kromatin kondenseret i masserne, og på grænsen af ​​membranen eller danner bue. Knopskydning og dannelsen af ​​apoptose organer blev observeret (pile i B). (C) .Cells behandlet med SF-CM fra MKN45 gastriske cancerceller viser kondensering af nukleare kromatin (pile i C). (D) Celler behandlet med gastrisk cancercellelinie MGC-803 lignede B. Spirende og dannelsen af ​​apoptose organer blev også observeret.
MTT assay
Til bedømmelse potentielle undertrykkende virkninger af gastrisk cancercellelinie SF-CM på HPMC'er undersøgte vi dens vækst kurve på HPMC linjen HMrSV5. Gastrisk cancer cell SF-CM-induceret vækst suppression i HPMC-celler, og gjorde det på en tidsafhængig måde (Figur 3A). Denne virkning blev observeret ved 0 timer, 12 timer, 24 timer og 48 timer. Disse resultater viser, at tumor supernatant inducerer mesotelial cellebeskadigelse eller apoptose. Figur 3 Apoptose blev kvantificeret ved to metoder: MTT og flowcytometri. Hotel (A) levedygtighed mesothelial celle HMrSV5 efter behandling med SF-CM fra gastriske kræftceller. (B) Apoptose blev kvantificeret ved flowcytometri efter behandling med SF-CM fra gastriske cancerceller.
Flowcytometri
For at kvantificere procentdelen af ​​apoptotiske celler efter behandling med forskellige tidsintervaller blev mesotelceller farvet med PI. Gastrisk cancer cell SF-CM effektivt induceret apoptose i mesotelceller og gjorde det på en dosisafhængig måde efter 48 timer (figur 3.B). Disse resultater var de samme som for MTT-assayet
Histologi og morfometrisk analyse
morfologiske forandringer af parietale peritoneum blev analyseret ved anvendelse H &. E og Massons trichromfarvning. Blandt normale mus, en mesothelial cellemonolag omfattede peritoneal overflade uden nogen fortykkelse (figur 4 a, d). På grund af tilsyneladende uforenelighed, mus, der modtager intraperitoneale injektioner af DMEM havde lille fortykkelse i den peritoneale submesothelial kollagen- zone (figur 4 B, E); dem injiceret intraperitonealt med gastrisk cancercellelinie SF-CM havde markeret fortykkelse af submesothelial kompakt zone og forøget cellularitet (Figur 4 C, f). Figur 4 Hematoxylin /eosin (H &E) og Masson-farvning af peritoneum væv.
peritoneum væv fra forskellige grupper blev opnået kirurgisk og underkastet H &E og Masson-farvning. (A) Alle billeder blev opnået ved 40 × forstørrelse. Normal peritoneum kun består af et monolag af mesothelium med lidt fibrose (a, d). Bughinden behandlet med DMEM viste også små mængder af bindevæv under mesotelceller (pile i B, E). I modsætning hertil blev peritoneum behandlet ved SF-CM fra gastriske cancerceller væsentligt fortykket og indeholdt omfattende fibrose (pile i C, F). (B) morfometriske parametre for peritoneale væv. Data er udtrykt som middelværdi ± standardfejlen på middelværdien af ​​mindst 3 separate eksperimenter. * P
< 0,05.
Western blotting
Vi derefter forsøgt at afgrænse de mekanismer, der ligger til grund de kombinerede virkninger af gastrisk cancercellelinie SF-CM på apoptose-relaterede proteiner (caspase-3, caspase-8, Bax, Bcl-2) . Niveauer af disse proteiner blev vurderet ved anvendelse western blot analyse. Caspase-3, caspase-8, og Bax proteinniveauer forøget efter 48 timers behandling med SF-CM fra de fleste gastriske cancerceller, mens bcl-2 protein niveauer faldt (figur 5). Beta-actin blev anvendt som indlæsning kontrol. Figur 5 Western blot-analyse af apoptose-relaterede proteinniveauer (caspase-3, caspase-8, Bax og Bcl-2) i HPMC'er med SF-CM fra forskellige gastrisk cancercellelinier behandling.
Serum-udsultede HPMC'er blev inkuberet med SF-CM fra forskellige gastriske cancercellelinier i op til 48 timer; totale cellulære protein blev ekstraheret og underkastet western blot-analyse.
Diskussion
fleste studier af postoperativ tumortilbagevenden viser, at traumatiserede mesoteliale overflader er foretrukne steder for tumorcelleadhæsion. For nylig adskilles cancerceller inde peritoneale hulrum og proteiner specifikt udtrykkes i peritoneal metastase af gastrisk karcinom viste sig at være knyttet til kræft prognoser. Mens immunogenetisk tilgange viser meget lovende i behandlingen af ​​peritoneale metastaser af gastrisk karcinom [13-15], er virkningerne af gastriske cancerceller på mesotelceller dårligt forstået.
Undersøgelse viste, at mesotelceller billede beskyttelse mod peritoneal metastase af tumoren i intakte mesothelia [9, 16, 17]. Paget et al
foreslået en "frø og jord" teori: metastase kun opstår, når tumorceller leve og vokse i et gunstigt miljø [18]. Den bughinden kan være sådan et gunstigt miljø for scirrhous gastriske kræftceller; muligvis mesotelceller forhindre kræftceller i at infiltrere ind submesothelial bindevæv. Masakazu et al.
[1] viste, at hosliggende sammenflydende mesotelceller hindret invasion ved cancerceller. Desuden Kiyasu et al.
[3] rapporterede, at før peritoneal implantation af cancerceller, mesotelceller bliver halvkugleformede og exfoliate fra peritoneum. Vores hypotese er, at efter serosa udsættes, frie cancerceller kaste fra primære mavekræft sites i bughulen inducere apoptose i peritoneale mesoteliale celler [19-21]. Som et resultat, mesotelceller bliver halvkugleformede og delaminering finder sted. Naked områder af submesothelial bindevæv er således udsat for den peritoneale kavitet; dette skadede peritoneal websted bliver et gunstigt miljø for peritoneal metastaser [22-24].
Vi havde tidligere vist mavekræft cellesupernatant at reducere levedygtigheden af ​​mesothelial celler, men normal gastrisk epitelial cellelinje GES-1 udøver ingen effekt på mesotelceller [5]. Vores nuværende undersøgelse viser også, at dyrkede mesotelceller bliver halvkugleformet, og delaminering forekomme, når serum-frit medium konditioneret med gastriske cancerceller blev tilsat som vist derimod fasemikroskopi. Endvidere blev cytoplasmatisk reduktion, cellekernekondensation, og dannelse af ekstracellulære og /eller intracellulære apoptotiske legemer observeret under transmission elektronmikroskop. Apoptose blev kvantificeret ved to metoder: MTT og flowcytometri. Vi spekulere, at frie gastriske kræftceller i bughulen inducere apoptose af mesotelceller og forårsage delaminering, til sidst fører til metastase. Dette kan være den mekanisme, ved hvilken cancerceller overholder submesothelial bindevæv, selvom mesotelceller stadig velorganiseret og sammenflydende. Yderligere undersøgelser er nødvendige for at karakterisere SF-CM frigivet fra gastriske cancerceller.
Mavekræft celler kan inducere apoptose gennem mitokondrierelateret og dødsreceptor-afhængig apoptotiske veje. Gastrisk cancer celler undertrykker mesotelial cellevækst ved at inhibere proliferation ved at fremme caspase-afhængig apoptose. Caspaser er cytoplasmatiske aspartat-specifikke cysteinproteaser, og spiller en vigtig rolle i apoptose [25]. Død receptor-afhængige apoptosecyklus udløses ved celleoverfladen og kræver aktivering af caspase-8, hvorimod mitochondriet-afhængige vej initieres ved frigivelsen af ​​mitokondrie cytochrom c i cytoplasmaet og kræver aktivering af caspase-9. Efterfølgende kan caspase-8 eller -9 aktivere caspase-3, som igen mål og nedbryder specifikke og vitale cellulære proteiner, i sidste ende resulterer i nuklear DNA-nedbrydning og apoptotisk celledød [26]. Bcl-2, en inhibitor af mitokondriel apoptose pathway, udøver sin virkning ved at blokere proapoptotiske modstykker, som igen forhindrer frigivelsen af ​​cytochrom c og aktiveringen af ​​caspaser [27]. Bax er et død-promotor, som er neutraliseret med heterodimerisering med Bcl-2. Bax translokerer ind i den ydre mitokondriemembran efterfulgt af lækage af cytochrom c fra mitokondrier i cytosolen [28]. Caspase-9 og caspase-3 aktiveres sekventielt, og disse begivenheder fører til nedbrydning af kromosomale DNA. Da der er en betydelig mulighed for, at gastrisk cancer cellemedieret apoptose af mesotelceller er resultatet af reguleringen af ​​Bcl-2 og Bax, identifikation af deres målforbindelser er nødvendig.
I denne undersøgelse anvendte vi en mus eksperimentel model for peritoneal sklerose induceret af gentagne injektioner af gastrisk cancercellelinie SF-CM. Eksperimentel peritoneal fibrose fremkaldt ved gentagne intraperitoneale injektioner af mavekræft celle SF-CM måske ikke helt efterligne peritoneal sklerose hos patienter (diffust infiltrerende karcinom eller Bormann s type VI karcinom). Faktisk patologiske fund af peritoneal carcinomatose og peritoneal sklerose er ikke ensartede og forskellige faktorer er involveret. Desuden er visse fælles træk observeret under udviklingen af ​​peritoneal sklerose mellem mavekræft celle SF-CM-induceret eksperimentelle dyremodeller og menneskelige patienter, der gennemgår peritoneal carcinomatose. Disse fælles histologiske fund indbefatter forøget akkumulering af interstitielle collagener såsom type I og III kollagen, infiltration af monocytter /makrofager, stigning i a-SMA + myofibroblaster og vaskulær densitet i peritoneum [7, 8]. Disse ligheder i ændringer af de peritoneale membraner mellem eksperimentelle modeller og menneskelige peritoneale carcinomatose patienter tyder på, at dette er en passende model for behandlingen af ​​effekten af ​​forskellige potentielle terapeutiske reagenser til regulering peritoneal carcinomatose.
Konklusioner
Disse resultater viser, at mavekræft celler kan inducere apoptose og fibrose af humane peritoneale mesoteliale celler gennem supernatanter i de tidlige peritoneal metastase, og viser, at opløselige faktorer i bughulen kan påvirke morfologi og funktion af mesotelceller således at den resulterende miljø bliver gunstigt for peritoneale metastaser.
Forkortelser
HPMC'er:
Humane peritoneale mesotelceller
SF-CM:.
Serum-fri betingede medier

erklæringer
Taksigelser
forfatterne ønsker at udtrykke deres tak til Dr. Yan Song for sin tekniske bistand. Denne undersøgelse blev støttet af en bevilling fra National Naturvidenskab Foundation of China (NO. 81.071.956 og 81.101.884).
Forfattere 'originale indsendt filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 12876_2011_768_MOESM1_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12876_2011_768_MOESM2_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 2 12876_2011_768_MOESM3_ESM.bmp Forfatternes oprindelige fil til figur 3 12876_2011_768_MOESM4_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 4 12876_2011_768_MOESM5_ESM.bmp Forfatternes oprindelige fil til figur 5 konkurrerende interesser
forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende interesser.
forfattere bidrag
DN, Z-DL og F-NL gennemførte undersøgelserne på morfologi og biologiske aktivitet peritoneale mesothelial celler in vitro
og in vivo
. ZS, Z-FM og FL deltog i in vivo
undersøgelser. YX og C-GJ deltog i morfologi studier. DN og HX deltaget i udformningen af ​​undersøgelsen og udførte den statistiske analyse. HX og DN udtænkt af undersøgelsen, og deltog i sit design og koordinering og været med til at udarbejde manuskriptet. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Er samtidig splenektomi gavnligt for overlevelsen af ​​patienter med gastrisk cancer undergår helbredende gastrektomi langsigtet? En enkelt-institution studie
• Ekspression og kliniske betydning af lange ikke-kodende RNA HNF1A-AS1 i human gastrisk cancer