Mahalaukun syöpäsolun supernatantti aiheuttaa apoptoosin ja fibroosia vatsakalvon kudosten ja johtaa suotuisan ympäristön vatsakalvon etäpesäkkeitä, in vitro ja in vivo

mahasyövässä solusupernatantti aiheuttaa apoptoosin ja fibroosia vatsakalvon kudosten ja johtaa suotuisan ympäristön vatsakalvon etäpesäkkeitä, vuonna vitro
ja in vivo
tiivistelmä
tausta
tässä tutkimuksessa tutkimme sisältämän liukoisen tekijöiden vapautuu mahalaukun syövän solujen vatsakalvon mesoteelisolujen in vitro
ja in vivo
. Tool menetelmät
HMrSV5, ihmisen vatsakalvon mesothelial solulinjassa, inkuboitiin supernatantteja mahalaukun syöpäsoluja. Morfologiset muutokset HMrSV5 soluja, havaittiin. Apoptoosin HMrSV5 solujen havaittiin alle transmissioelektronimikroskoopilla ja määritetään kvantitatiivisesti MTT-määrityksellä ja virtaussytometrialla. Ilmaisuja apoptoosiin liittyvien proteiinien (kaspaasi-3, kaspaasi-8, Bax, bcl-2) on immunokemiallisesti arvioitiin.
Tulokset
Conspicuous morfologiset muutokset osoittavat apoptoosin havaittiin HMrSV5 soluissa 24 h käsittelyn jälkeen supernatantit mahalaukun syöpäsoluja. In vivo
, vatsakalvon kudoksia käsiteltiin mahasyöpä solusupernatantissa tuntuvasti paksuuntunut ja sisälsi laaja fibroosia.
Johtopäätökset
Nämä havainnot osoittavat, että supernatantit mahalaukun syöpäsolut voivat aiheuttaa apoptoosin ja fibroosia HMrSV5 ihmisen vatsakalvon mesoteelisolut kautta supernatantit alussa vatsakalvon etäpesäke, on ajasta riippuva tavalla, ja osoittavat, että liukoinen tekijöitä vatsaonteloon vaikuttavat morfologiaan ja toimintaan mesoteelisolujen niin, että tuloksena ympäristössä voi olla suotuisa vatsakalvon etäpesäkkeitä.
avainsanat
peritoneaalisille carcinomatosis Vatsa kasvaimet mesothelial solujen Apoptoosi fibroosia Background
vatsakalvon carcinomatosis rajoittaa huomattavasti parantamisen mahasyövän potilaiden ennusteet leikkauksen jälkeen [1]. Vatsakalvon etäpesäke johtaa metastaattisessa cascade, tavallisesti esiintyvät myöhemmän vaiheen kasvainten kehittymiseen, joka edistää merkittävästi mahalaukun syöpään liittyvää kuolleisuutta. Mekanismit vatsakalvon etäpesäke hajanaisesti soluttautuminen syöpä ei ymmärretty.
Vatsakalvon strooman ympäristö suosii kasvainsolujen lisääntymistä toimimalla runsaasti kasvutekijöitä ja kemokiinien tiedetään osallistuvan tuumorimetastaasissa. Välittävien molekyylien tämä Cascade ei tutkittu laajalti [2]. Kertoman, mesoteelisolujen voisi estää syöpää invaasiota ja tehdään morfologisia muutoksia vastauksena liukoisen tekijät vapauttaa syöpäsoluja [3]. Erityinen molekyylit mukana tässä prosessissa sanelee ominaispiirteet etäpesäketuumorikudoksen soluihin. Kasvainsolujen täytyy kiinnittää lujasti submesothelial yksikerroksista ja tunkeutuvat mesothelial yksikerroksella hyökkäystä. Buck et al.
[4] tutkitaan suojaava vaikutus mesothelial kerros, käyttäen rotan malli, jossa mesothelial limakalvon päälaen vatsakalvon haihdutettiin pois kokeellisessa rotilla, jolloin tyvikalvon ehjä. Osoitimme aikaisemmin, että kerros confluent, ehjä mesoteelisolujen estää syöpäsolujen invaasiota vatsaontelon. Kuitenkin, kun eheys tämän esteen häiriintyy, etäpesäkkeitä voi tapahtua, koska vatsakalvon tarjoaa suotuisat olosuhteet mahasyövän solut voivat kasvaa [5-9]. Lisätutkimukset ovat osoittaneet, että ennen kiinnitystä mahasyövän solujen päälle vatsakalvon, mesoteelisolujen hankkia puolipallon muotoinen ja alkaa irtoa. Tämän seurauksena paljaalla alueilla submesothelial sidekudoksen altistuvat vatsakalvononteloon [10-12]. On todennäköistä, että tunkeutuminen mesothelial yksisolukerroksen kasvainsolujen aloittaa joilla oli kasvaimen aiheuttama mesothelial solujen apoptoosia. Tässä tutkimuksessa tutkimme vaikutuksia liukoisen tekijöiden vapautuu mahalaukun syövän solujen morfologia ja biologista aktiivisuutta vatsakalvon mesoteelisolujen in vitro ja in vivo
.
Menetelmät
Reagenssit
3- (4, 5-dimetyylitiatsol-2-yyli) -2,5-difenyyli tetrazoliumbromide (MTT) saatiin Fluka, USA. Propidiumjodidia (PI) saatiin Biosharp, USA. Bcl-2, Bax, kaspaasi-3, kaspaasi-8 ja aktiini primaarisilla vasta-aineilla, ja sekundaarista vasta-ainetta, vuohen anti-hiiri-IgG saatiin Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, USA. Dulbeccon modifioitu Eaglen väliaine (DMEM) ja vasikan sikiön seerumia (FCS) saatiin GIBCO BRL (Grand Island, NY, USA). Muut laboratorio- reagenssit saatiin Sigma, USA. Faasikontrastimikroskoopissa (Japani Nikon), siirto elektronimikroskoopilla (Hitachi H-6001, Japani) käytettiin.
Solulinjat ja soluviljelmä
Ihmisen vatsakalvon mesothelial solulinjassa HMrSV5 saatiin Department of Cell Biology , Kiina Medical University, Kiina. HMrSV5 alun perin eristettiin ihmisen omentum. Lyhyesti, omentum kerätään suostuu ei-potilaan hoito, jotka tehtiin elektiivinen vatsaleikkaus, ja inkuboitiin 0,05% (w /v) trypsiinillä ja 0,01% (paino /tilavuus) EDTA: ssa 20 minuuttia 37 ° C: ssa. Korjatut mesoteelisolujen sentrifugoitiin 150 g: llä 5 minuutin ajan ja siirrettiin sitten 75 cm: 2 kudosviljelypulloissa ja viljeltiin kostutetussa 5% CO 2-inkubaattorissa, DMEM, jota oli täydennetty 10% vasikan sikiön seerumia (FCS ), 100 U /ml penisilliiniä, 100 ug /ml streptomysiiniä, 2 mmol /L L-glutamiinia ja 20 mmol /L hydroksietyylipiperatsiini etaanisulfonihappo (HEPES, Gibco BRL, USA). Medium vaihdettiin joka 2-3 päivä.
Ihmisen mahalaukun karsinooma solulinjat, MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 ja MGC-803, saatiin Department of Cell Biology, China Medical University , Kiina. Näitä soluja viljeltiin DMEM: ssä, jota oli täydennetty 10% FCS: ää, 100 U /ml penisilliiniä, 100 ug /ml streptomysiiniä, ja 2 mmol /l L-glutamiinia kostutetussa 5% CO 2-inkubaattorissa 37 ° C: ssa.
valmistaminen seerumitonta elatusainetta
Serum-free medium (SF-CM) valmistettiin mahalaukun syöpäsolujen tai normaali mahan epiteelisolujen, kuten aiemmin on raportoitu [1]. Lyhyesti, 5,0 x 10 5-solut ympättiin 100 mm: n kudosviljelymaljoille 10 ml DMEM, jota on täydennetty 10% FCS ja inkuboitiin 37 ° C: ssa 3 päivää. Saamiseksi SF-CM, solut pestiin kaksi kertaa fosfaattipuskuroidulla liuoksella (PBS) ja sitten inkuboitiin 2 päivää 3 ml: lla seerumitonta DMEM. SF-CM eluoitiin ja sentrifugoitiin 1000 g: ssa 5 minuutin ajan, johdetaan suodattimien läpi (huokoskoko: 0,45 um) ja säilytettiin -20 ° C: ssa, kunnes ne käytettiin.
Eläimet
C57BL /6-hiirten (kahdeksan viikon ikäisiä, paino 20 ± 2 g), saatiin Kiinasta Medical University eläinpalvelussa ja syötetään puhdistettu vesi ja kaupallinen varastossa ruokavalio ilmastoidussa huoneessa 20-22 ° C.Animals tässä tutkimuksessa käytetyt säilyivät mukaisesti opas hoito ja käyttö Laboratory Animals julkaiseman Yhdysvaltain National Institutes of Health (NIH-julkaisu nro 85-23, tarkistettu 1996) ja politiikka Animal Care ja käyttö komitean Kiinan Medical University.
Morfologiset arviointi alla faasikontrastimikroskoopissa
Ihmisen vatsakalvon mesoteelisolujen (HPMC) viljeltiin ja alakonfluenssista 50 cm 2 malja DMEM, joka sisälsi 10% FCS. Elatusaine sitten muutettiin (1) seerumivapaassa DMEM tai (2) SF-CM mahalaukun syövän solulinjoista. HPMC 24 kuopan kammiot altistettiin testata ratkaisuja 24 tuntia, ja varovasti pestiin PBS: llä. Sitten ne tutkitaan faasikontrastimikroskoopissa koon, muodon ja eheyden solukalvon, soluliman ja tuman.
Transmissioelektronimikroskopia
HPMC viljeltiin sen alakonfluenssista 50 cm 2 malja DMEM, joka sisälsi 10% FCS. Elatusaine sitten muutettiin (1) seerumivapaassa DMEM tai (2) SF-CM mahalaukun syövän solulinjoista. Kun oli inkuboitu 24 tuntia, solut trypsinoitiin ja kiinnitettiin sitten jääkylmään 2,5% elektronimikroskoopilla luokka glutaraldehydillä PBS: ssä (pH 7,3). Näytteet huuhdeltiin PBS, jälkifiksattiin 1% osmiumtetroksidiin 0,1% kaliumferrisyanidilla, kuivattu kautta porrastettu etanolia sarja (30% -90%), ja upotettiin Epon. Semi-ohut (300 nm) leikattiin käyttäen Reichart Ultracut (Reichart Ultracut (Leica, Saksa), värjättiin 0,5% toluidiinisinisellä ja tutkittiin valomikroskoopilla. Ultrathin kohdissa (65 nm) värjättiin 2% uranyyliasetaatilla ja Reynoldsin lyijy sitraatti, ja tarkastellaan lähetyksen elektronimikroskoopilla x 5000 tai x 8000 suurennus.
kvantitatiivinen määritys soluvaurioita MTT-määrityksellä
MTT-määritys suoritettiin arvioimaan elinkelpoisuutta ihmisen vatsakalvon mesoteelisolut käsittelyn jälkeen SF-CM mahalaukun syövän solulinjoista. solut 96-kuoppalevylle kulttuureissa, altistumisen jälkeen valvoa tai testiliuosten tietyn ajanjakson (havaittu 12 h, 24 h ja 48 h), inkuboitiin 50 ug /ml MTT laimennoksena 1:10, tilavuuden perusteella elatusainetta 3 tunnin ajan 37 ° C: ssa. lopussa inkubaatioaika, MTT-liuos poistettiin ja 150 ui DMSO: ta lisättiin kuhunkin kuoppaan, ja sekoitettiin liuottaa tummansininen formazon kiteitä, jotka oli muodostunut. Osuus elävien solujen määritettiin mittaamalla optinen tiheys kussakin näytteessä 480 nm: ssä spektrofotometrillä. Kolme viljelmät altistettiin jokaisen liuoksen kullakin ajan. Keinot kunkin ryhmän viljelmiä verrattiin.
Virtaussytometria
inkubaation jälkeen testiliuokset 24 h, 48 h ja 72 h, solut kerättiin käyttäen trypsinaatiolla. Solut suspendoitiin uudelleen PBS: ään konsentraatiossa 1 x 10 6 /ml ja kiinnitetään 2 ml: ssa metanolia 30 minuutin ajan 4 ° C: ssa. Sen jälkeen, kun CNE2 solut kiinnitettiin, seosta inkuboitiin 0,5 ml: PI-liuosta (0,05 mg /ml 3,8 mol /l Na-sitraatti) ja 0,5 ml: ssa RNAasi A: ta (0,5 mg /ml) huoneenlämpötilassa 30 min. Lopuksi solut suspendoitiin uudelleen 1 ml: aan PBS: ää ja analysoitiin virtaussytometrialla mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Solut subdiploid piikin katsottiin apoptoottisia.
Histologinen ulkonäkö vatsakalvon
C57BL /6-hiiriä (kahdeksan viikon ikäisiä, paino 20 ± 2 g) käytettiin tässä tutkimuksessa. Koe noudatti ohjeita käyttöä Laboratory Animals tutkimuksessa ja opetuksessa. Hiiret ruokittiin standardin pelletti- laboratorioruokaa ja toimitettiin vettä ad libitum
. Hiiret jaettiin satunnaisesti yhteen kolmesta ryhmästä (n = 5 tai 6 kussakin ryhmässä). Hiiret DMEM ryhmässä käsiteltiin DMEM (100 ml /kg) vatsaonteloon injektioita päivinä 1, 3, 5 ja 7 hiiret SF-CM ryhmä käsiteltiin 100 ml /kg SF-CM mahalaukun syöpäsolun linjat vatsaonteloon injektioita päivinä 1, 3, 5 ja 7. Mikään lisättiin injektiota varten kontrollihiiriin. Jälkeen 29 päivää, hiiret nukutettiin etyylieetterillä ja uhrataan. Päälaen peritoneums värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (H &E) ja Massonin trikromi-värjäys. Morfologisia muutoksia ja päälaen vatsakalvon havainnoitiin valomikroskoopilla. Paksuus submesothelial soluväliaineen määritettiin sen jälkeen, kun kudosleikkeiden oli H &E-ja Masson värjäystä. Keskimääräinen 10 riippumatonta mittausta laskettiin kunkin osan; Sitten aineisto yhteenvetona.
Western blotting
Ihmisen vatsakalvon mesothelial soluja viljeltiin sen alakonfluenssista 50 cm 2 malja DMEM, joka sisälsi 10% FCS. Tiedotusvälineet Sitten muutettiin (1) SF-CM mahalaukun syöpäsolu MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 ja MGC-803; ja (2) seerumivapaassa DMEM palvelee kontrollina. Proteiini uutettiin standardin hajotuspuskuria proteinaasi-inhibiittorit (natriumortovanadaattia, fenyylimetyylisulfonyylifluoridia, leupeptiiniä ja aprotiniinia saatu BioShop, Burlington, ON, Kanada). Alikvootit 20 ug proteiinia lysaattia elektroforeesissa 12% SDS-PAGE-geelissä, siirrettiin nailonkalvolle, ja erikseen tutkittiin vasta-aineiden kanssa Bcl-2, Bax, kaspaasi-3, ja kaspaasi-8. Seuraavat inkubaatio sekundaari- vasta-aineella, blotit kehitettiin käyttämällä ECL Western Blot Substrate Kit (Abcam, USA).
Tilastollinen analyysi
Kaikki tiedot ilmaistaan ​​x
± sd
. Vertailuja lääkkeen vaikutuksia tehtiin käyttämällä Studentin t
-testi. S P
arvo < 0,05 pidettiin merkittävänä.
Tulokset
Morfologiset arviointi alle faasikontrastimikroskoopissa
Vaikka HPMC käsitellään vain seerumittomassa DMEM osoitti tyypillisen polygonaalinen ja mukulakivi kuvio (kuvio 1A.), Soluja käsiteltiin SF-CM mahalaukun syöpäsolun MKN45 24 tuntia alkoi olla morfologisia muutoksia, ilmeisin joista hilseily ja ulkonäkö paljain alueilla (kuvio 1 B). Kuva 1 morfologiset muutokset ihmisen vatsakalvon mesoteelisolujen alle faasikontrastimikroskoopissa.
(A) yksikerroksinen monikulmion ja mukulakivikadut kaltaisia ​​HPMC viljeltiin seerumittomassa DMEM. (B-D) Paisutettu ulkonäkö paljain alueiden käsittelyn jälkeen SF-CM mahalaukun syövän solulinjoista MKN45, SGC7901, ja BGC823. (Suurennus: x 40).
Transmissioelektronimikroskopia
24 tunnin SF-CM mahalaukun syöpäsolujen hoitoon, apoptoottiset ominaisuuksia (kuten tiivistymistä ydinvoiman chromatin, rypistymistä ydinvoiman kalvot, laajentuma Endoplasmakalvostoon ja suhteellisen normaali rakenne mitokondrioita) havaittiin alle transmissioelektronimikroskoopilla (TEM, kuviot 2A, B). Under TEM, ydin- kalvo nähtiin olevan ehjä, kromatiinin tiivistyy massoja, ja rajalle kalvon tai muodostavan kaaren (kuvio 2C). Orastava ja muodostumista apoptoosin elinten havaittiin myös (kuvio 2C). Kuvio 2 Ihmisen vatsakalvon mesoteelisolujen (HPMC) 24 tunnin inkuboinnin jälkeen ja ilman SF-CM mahalaukun syöpäsoluja.
(A) Verrokkisoluja näyttää normaalia ytimet ja endoplasmic reticula. (B) Soluja käsiteltiin SF-CM päässä MKN1 mahasyöpä soluilla chromatin tiivistetty massoja, ja rajalle kalvon tai muodostavat kaaren. Orastava ja muodostumista apoptoosin elinten havaittiin (nuolet B). (C) .Cells käsiteltiin SF-CM päässä MKN45 mahasyöpä soluissa näkyy tiivistymistä ydinvoiman chromatin (nuolet C). (D) Solut käsiteltiin mahalaukun syövän solulinja MGC-803 olivat samankaltaisia ​​B. Puhkeavat ja muodostumista apoptoosin elinten havaittiin myös.
MTT-määritystä
arvioimiseksi mahdollisia suppressiivinen vaikutus mahalaukun syövän solujen SF-CM on HPMC, tutkimme sen kasvukäyrä on HPMC linjan HMrSV5. Mahalaukun syöpäsolu SF-CM aiheuttama kasvun hidastuminen vuonna HPMC soluissa, ja teki niin ajasta riippuva tavalla (kuvio 3A). Tämä vaikutus havaittiin 0 h, 12 h, 24 h ja 48 h. Nämä tulokset osoittavat, että kasvain supernatantti indusoi mesothelial soluvaurioita tai apoptoosin. Kuvio 3 Apoptoosi kvantifioitiin menetelmistä: MTT ja virtaussytometria.
(A) elinkelpoisuus mesothelial solujen HMrSV5 hoidon jälkeen SF-CM mahalaukun syöpäsoluja. (B) Apoptoosi kvantifioitiin virtaussytometrialla käsittelyn jälkeen SF-CM mahalaukun syöpäsoluja.
Virtaussytometria
kvantifioimiseksi prosenttiosuus apoptoottisten solujen käsittelyn jälkeen eri ajanjaksoja, mesoteelisolujen värjättiin PI. Mahalaukun syöpäsolu SF-CM tehokkaasti indusoi apoptoosin mesoteelisolujen ja teki niin annoksesta riippuvalla tavalla 48 tunnin jälkeen (kuva 3 B). Nämä tulokset olivat samat kuin MTT-määritystä.
Histologia ja morfometristä analyysiä
morfologisia muutoksia ja päälaen vatsakalvon analysoitiin H &E ja Massonin trikromi-värjäys. Niistä normaalit hiiret, joka on mesothelial yksisolukerros kuuluvat vatsakalvon pintaan ilman paksuuntumista (kuvio 4 a, d). Johtuen ilmeinen yhteensopimattomuus, hiiret, jotka saivat suonensisäistä ruiskua DMEM oli lievä paksuuntuminen vatsakalvon submesothelial kollageeniverkoston vyöhykkeen (kuva 4 b, e); ne injektiona vatsaonteloon mahalaukun syöpäsolu SF-CM oli merkitty paksuuntuminen submesothelial kompakti alue ja lisääntynyt solukkoisuus (kuvio 4 c, f). Kuvio 4 Hematoksyliini /eosiini (H &E) ja Masson-värjäys vatsakalvon kudoksiin.
peritoneum kudoksissa eri saatiin kirurgisesti ja saatettiin H &E ja Masson värjäystä. (A) Kaikki kuvat saatiin 40-kertaisella suurennuksella. Normaali vatsakalvon koostuu vain yhden kerroksen Mesothelium vähän fibroosia (a, d). Vatsakalvon käsiteltiin DMEM osoitti myös pieniä määriä sidekudoksen alle mesoteelisolujen (nuolet b, e). Sen sijaan, vatsakalvo hoitaa SF-CM mahalaukun syöpäsolujen oleellisesti paksuuntunut ja sisälsi laaja fibroosia (nuolet c, f). (B) morfometrinen parametrit vatsakalvon kudoksiin. Data ilmaistaan ​​keskiarvona ± keskivirhe keskiarvo on vähintään 3 erillisestä kokeesta. * P
< 0,05.
Western blotting
Sitten haetaan määritellä tarkemmin mekanismeja, joiden johdosta yhdistetyt vaikutukset mahalaukun syövän solujen SF-CM apoptoosiin liittyvien proteiinien (kaspaasi-3, kaspaasi-8, Bax, bcl-2) . Määriä näitä proteiineja arvioitiin Western blot -analyysiä käyttämällä. Kaspaasi-3-, kaspaasi-8, ja Bax-proteiinin tasot nousivat 48 tunnin kuluttua hoidon SF-CM useimpien mahalaukun syöpäsoluja, kun taas Bcl-2-proteiinin tasot laskivat (kuvio 5). Beeta-aktiini käytettiin lastaus ohjaus. Kuvio 5 Western blot-analyysi apoptoosin liittyvän proteiinin tasot (kaspaasi-3, kaspaasi-8, Bax ja Bcl-2) in HPMC kanssa SF-CM eri mahasyöpä solulinjoissa hoitoon.
seerumin puutteessa HPMC inkuboitiin SF-CM eri mahasyöpä solulinjoja jopa 48 h; solun kokonaisproteiinia uutettiin ja suoritettiin Western blot-analyysi.
Keskustelu Dating tutkimukset jälkeisen kasvaimen uusiutumisen osoittavat, että traumoja mesothelial pinnat ovat edullisia sivustoja kasvainten soluadheesiota. Äskettäin irrottaneet syöpäsolujen sisällä vatsakalvon onteloita, ja proteiinit spesifisesti ilmaistu vatsakalvon etäpesäke mahakarsinooman todettiin Syöpää ennusteiden. Vaikka immunogenetic lähestymistavat näyttävät lupaavilta hoidossa vatsakalvon etäpesäke mahakarsinooman [13-15], vaikutukset mahasyövän solujen mesoteelisolujen huonosti.
Tutkimus osoitti, että mesoteelisolujen antoi suojan vatsakalvon etäpesäke kasvaimen ehjä mesoteelin [9, 16, 17]. Paget et ai
ehdotti "siemen ja maaperä" teoria: etäpesäke ilmenee vain, kun kasvainsoluja elää ja kasvaa suotuisassa ympäristössä [18]. Vatsakalvon voisi olla sellainen suotuisan scirrhous mahasyövän soluja; mahdollisesti mesoteelisolujen estää syöpäsolujen päätymisen submesothelial sidekudosta. Masakazu ym.
[1] osoitti, että vierekkäiset konfluentteja mesoteelisolujen estänyt hyökkäyksen syöpäsoluja. Lisäksi, Kiyasu et al.
[3] on raportoitu, että ennen vatsakalvon implantaatiota syöpäsoluja, mesoteelisolujen tulevat puolipallon ja kuorivat päässä vatsakalvon. Meidän hypoteesi on, että kun herakalvojen altistuvat, vapaa syöpäsoluja irtoa ensisijainen mahasyövän sivustoja vatsaonteloon indusoi apoptoosin vatsakalvon mesoteelisolujen [19-21]. Tämän seurauksena, mesoteelisolujen tulevat puolipallon ja hilseily tapahtuu. Paljaalla alueilla submesothelial sidekudoksen siten alttiina vatsakalvononteloon; Tämän loukkaantunut vatsakalvon sivuston tulee suotuisa ympäristö vatsakalvon etäpesäke [22-24].
Olimme aikaisemmin osoittaneet mahasyövän solusupernatantissa vähentämään merkittävästi elinkelpoisuutta mesoteelisolujen, mutta normaali mahan epiteelisolujen linja GES-1 kiinnostavuus ei ole vaikutusta mesoteelisolujen [5]. Nykyinen tutkimus osoittaa myös, että viljellyt mesoteelisolujen tulevat puolipallon, ja hilseily ilmetä seerumia ehdollistettu mahasyövän solut lisättiin, kuten sitä vastoin vaiheen mikroskoopilla. Lisäksi sytoplasminen vähentäminen, ydin- tiivistyminen, ja muodostuminen solunulkoisen ja /tai solunsisäisiä apoptoottisia kappaleita havaittiin alle lähetyksen elektronimikroskoopilla. Apoptoosi kvantifioitiin menetelmistä: MTT ja virtaussytometria. Me spekuloida, että vapaa mahalaukun syöpäsoluja vatsaonteloon indusoida mesoteelisolujen ja aiheuttaa hilseily, joka lopulta johtaa etäpesäkkeitä. Tämä voi olla mekanismi, jolla syöpäsolut kiinni submesothelial sidekudoksen, vaikka mesoteelisolujen ovat edelleen hyvin organisoitu ja konfluentteja. Lisätutkimuksia tarvitaan kuvaamaan SF-CM vapautuu mahalaukun syöpäsoluja.
Mahasyöpää solut voidaan indusoida apoptoosia mitochondria- ja kuoleman reseptori-riippuvainen apoptoottisia reittejä. Mahalaukun syöpäsolut tukahduttaa mesothelial solujen kasvua estämällä proliferaation edistämällä kaspaasiriippuvaisen apoptoosin. Kaspaasit ovat sytoplasminen aspartaatti erityisiä kysteiiniproteaaseista, ja tärkeitä rooleja apoptoosin [25]. Kuoleman reseptori-riippuvaisen apoptoottisen reitin laukaisee solun pinnalla, ja se edellyttää kaspaasi-8, kun taas mitokondrioissa-riippuvaisen reitin aloitetaan vapautuminen mitokondrion sytokromi-c-sytoplasmaan ja vaatii kaspaasi-9. Myöhemmin kaspaasi-8 tai -9 voi aktivoida kaspaasi-3, joka puolestaan ​​tavoitteita ja heikentää erityisten ja elintärkeä solun proteiinien, mikä johtaa lopulta tuman DNA hajoamista ja apoptoottisen solukuoleman [26]. Bcl-2, estäjä mitokondriaalisen apoptoosin koulutusjakson, kykenee sen toiminta estämällä proapoptoottiset kollegansa, mikä puolestaan ​​estää vapautumisen sytokromi c ja aktivoinnista caspases [27]. Bax on kuolema promoottori, joka on neutraloitu hetero- Bcl-2. Bax translokoituu ulompaan mitokondrion kalvon seuraa vuoto sytokromin c peräisin mitokondriot sytosoliin [28]. Kaspaasi-9 ja kaspaasi-3 aktivoituvat peräkkäin, ja nämä tapahtumat johtavat jakautuminen kromosomi-DNA. Koska on olemassa suuri mahdollisuus, että mahalaukun syövän soluvälitteistä apoptoosin mesoteelisolujen on seurausta asetuksen Bcl-2: n ja Bax, tunnistaminen tavoitteensa yhdisteiden on tarpeen.
Tässä tutkimuksessa käytimme hiiren kokeellisessa vatsakalvon skleroosia aiheuttama toistuvia injektioita mahasyövän solun SF-CM. Kokeellinen vatsakalvon fibroosia aiheuttama toistuva vatsaonteloon injektioita mahasyövän solun SF-CM ehkä ole täysin jäljitellä vatsakalvon skleroosia potilailla (hajanaisesti soluttautuminen karsinooma tai Bormannin tyyppi VI syöpä). Itse asiassa, patologinen havainnot vatsakalvon carcinomatosis ja vatsakalvon skleroosia eivät ole yhtenäisiä ja erilaiset tekijät ovat mukana. Lisäksi tiettyjä yhteisiä piirteitä noudatetaan kehittämisen aikana vatsakalvon skleroosia välillä mahasyövän solun SF-CM aiheuttama eläinkokeissa ja ihmisten potilailla, jotka saavat vatsakalvon carcinomatosis. Nämä yhteiset histologiset löydökset ovat lisääntynyt kertyminen interstitiaalinen kollageenien, kuten tyypin I ja III kollageenin, soluttautuminen monosyyttien /makrofagien, kasvuun a-SMA + myofibroblasteja, ja verisuonten tiheys vatsakalvon [7, 8]. Nämä yhtäläisyydet korjauksilla vatsakalvon kalvojen välillä kokeellisissa malleissa ja ihmisen vatsakalvon carcinomatosis potilailla viittaavat siihen, että tämä on sopiva malli tutkittaessa tehokkuutta eri potentiaalisia terapeuttisia reagensseja säätelemiseksi vatsakalvon carcinomatosis.
Johtopäätökset
Nämä havainnot osoittavat, että mahasyövän solut voivat indusoida apoptoosia ja fibroosi ihmisen vatsakalvon mesoteelisolujen läpi supernatantteja alussa vatsakalvon etäpesäkkeitä, ja osoittavat, että liukoinen tekijöitä vatsaonteloon voi vaikuttaa morfologia ja toiminta mesoteelisolujen niin, että tuloksena ympäristöstä tulee suotuisa vatsakalvon etäpesäkkeitä.
lyhenteet
HPMC:
Ihmisen vatsakalvon mesoteelisolujen
SF-CM:
Seerumin vapaan ehdollinen media.

julistukset
kiitokset
kirjoittajat haluavat ilmaista vilpittömät kiitokset tohtori Yan Song hänen teknistä tukea. Tutkimus tukivat avustusta National luonnontieteiden Foundation of China (NO. 81071956 ja 81101884).
Kirjoittajien alkuperäinen toimitti asiakirjat kuville
Alla linkkejä kirjoittajien alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville. 12876_2011_768_MOESM1_ESM.jpeg Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 12876_2011_768_MOESM2_ESM.jpeg Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 2 12876_2011_768_MOESM3_ESM.bmp Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 3 12876_2011_768_MOESM4_ESM.jpeg Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 4 12876_2011_768_MOESM5_ESM.bmp Kirjoittajien alkuperäisen tiedoston luku 5 kilpailevat edut
kirjoittajat ilmoittavat, että heillä ei ole kilpailevia intressejä.
Tekijät maksuosuudet
DN, Z-DL ja F-NL tutkimukset suorittaneen morfologiaan ja biologista aktiivisuutta vatsakalvon mesoteelisolujen in vitro
ja in vivo
. ZS, Z-FM ja FL osallistui in vivo
tutkimuksissa. YX ja C-GJ osallistui morfologia tutkimuksissa. DN ja HX osallistuivat tutkimuksen suunnittelu ja suorittaa tilastollisen analyysin. HX ja DN raskaaksi tutkimuksen ja osallistui sen suunnittelu ja koordinointi ja auttoi laatimaan käsikirjoituksen. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Onko samanaikaisesti pernanpoistoa hyödyllistä pitkällä aikavälillä säilyttämään potilaalla on mahasyöpä joille parantava gastrectomy? Yksittäinen-laitoksen tutkimuksessa
• Expression ja kliininen merkitys pitkän ei-koodaavan RNA HNF1A-AS1 ihmisen mahasyövän