Gastrique surnageant de cellules cancéreuses provoque l'apoptose et de la fibrose des tissus péritonéaux et des résultats dans un environnement favorable à des métastases peritoneales, in vitro et in vivo

cellule cancéreuse gastrique surnageant provoque l'apoptose et de la fibrose dans les tissus et les résultats péritonéaux dans un environnement favorable à des métastases peritoneales dans vitro et in vivo

Background
Abstract dans cette étude, nous avons examiné les effets de facteurs solubles libérés par les cellules de cancer gastrique sur les cellules mésothéliales péritonéales in vitro et in vivo

. Méthodes
HMrSV5, une lignée humaine de cellules mésothéliales péritonéale, a été incubé avec des surnageants de cellules de cancer gastrique. Les modifications morphologiques des cellules HMrSV5 ont été observées. HMrSV5 l'apoptose des cellules a été observée sous un microscope électronique à transmission et déterminée quantitativement par un dosage MTT et cytométrie de flux. Expressions de protéines liées à l'apoptose (caspase-3, caspase-8, Bax, Bcl-2) ont été évaluées de façon immunochimique. Résultats
changements morphologiques bien visibles indiquant l'apoptose ont été observés dans les cellules HMrSV5 24 h après le traitement avec les surnageants les cellules de cancer gastrique.
In vivo, les tissus traités avec péritonéaux gastrique surnageant de cellules cancéreuses ont été sensiblement épaissis et contiennent une fibrose extensive.

Conclusions Ces résultats montrent que les surnageants de cellules cancéreuses gastriques peuvent induire l'apoptose et de la fibrose dans HMrSV5 cellules mésothéliales humaines par péritonéaux surnageants dans la métastase péritonéale précoce, d'une manière dépendante du temps, et indiquent que des facteurs solubles dans la cavité péritonéale affectent la morphologie et la fonction des cellules mésothéliales de telle sorte que l'environnement résultant peut devenir favorable aux métastases péritonéales.
Mots-clés
péritonéale néoplasmes carcinose estomac cellule mésothéliale apoptose fibrose Contexte
carcinose péritonéale limite sévèrement l'amélioration des pronostics patients atteints de cancer gastrique de la chirurgie après [1]. Résultats péritonéale de métastases dans une cascade métastatique, se produisant généralement au développement de la tumeur à un stade avancé, ce qui contribue de manière significative à la mortalité liée au cancer gastrique. Les mécanismes de la métastase peritoneale d'un carcinome infiltrant diffusément ne sont pas bien comprises.
L'environnement stromal favorise la prolifération péritonéale des cellules tumorales en agissant comme une source riche en facteurs de croissance et de chimiokines connus pour être impliqués dans la métastase de la tumeur. Molécules médiatrices cette cascade n'a pas été largement étudiés [2]. Apparemment, les cellules mésothéliales pourrait prévenir les cancers envahissants et subissent des modifications morphologiques en réponse à des facteurs solubles libérés par les cellules cancéreuses [3]. Les molécules spécifiques impliquées dans ce processus sont dictées par les caractéristiques intrinsèques des cellules tumorales métastatiques. Les cellules tumorales doivent fixer solidement sur la monocouche submesothelial et pénétrer la monocouche mésothéliales pour l'invasion. Buck et coll.
[4] a exploré l'effet protecteur de la couche mésothéliale, en utilisant un modèle de rat dans laquelle le revêtement mésothélial du péritoine pariétal a été chassé chez les rats expérimentaux, laissant intacte la membrane basale. Nous avons montré précédemment que la couche de confluentes, les cellules mésothéliales intacte empêche l'invasion des cellules du cancer de la cavité abdominale. Cependant, une fois l'intégrité de cette barrière est perturbée, les métastases peuvent se produire, parce que le péritoine offre un environnement favorable pour les cellules de cancer gastrique de croître [5-9]. D'autres études ont montré que, avant la fixation des cellules de cancer gastrique sur le péritoine, les cellules mésothéliales acquérir forme hémisphérique et commencer à jeter. En conséquence, les zones nues du tissu conjonctif submesothelial sont exposés à la cavité péritonéale [10 à 12]. Il est probable que la pénétration de la monocouche mésothéliales par les cellules tumorales amorce avec mésothéliale l'apoptose cellulaire induite par une tumeur. Dans cette étude, nous avons examiné les effets des facteurs solubles libérés par les cellules de cancer gastrique sur la morphologie et l'activité biologique des cellules mésothéliales péritonéales in vitro et in Réactifs Méthodes de vivo
.
3- (4, 5-diméthylthiazol-2-yl) -2,5-diphényl tetrazoliumbromide (MTT) a été obtenu auprès de Fluka, États-Unis. L'iodure de propidium (PI) a été obtenu à partir Biosharp, États-Unis. Bcl-2, Bax, caspase-3, ont été obtenus à partir de Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, USA caspase-8 et des anticorps primaires actine, et l'anticorps secondaire, de chèvre anti-IgG de souris. milieu de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) et sérum de veau fœtal (FCS) ont été obtenus à partir de GIBCO BRL (Grand Island, NY, USA). D'autres réactifs de laboratoire ont été obtenus auprès de Sigma, USA. Un microscope à contraste de phase (Japon Nikon), microscope électronique à transmission (Hitachi H-6001, Japon) a été utilisé.
Lignées cellulaires et culture cellulaire
La lignée humaine de cellules mésothéliales péritonéale HMrSV5 a été obtenue auprès du Département de biologie cellulaire , China Medical University, en Chine. HMrSV5 a été initialement isolé à partir de omentum humain. En bref, l'épiploon recueillies auprès des patients consentants non urémiques qui ont subi une intervention chirurgicale abdominale élective, et a été mis en incubation dans 0,05% (p /v) de trypsine et 0,01% (p /v) d'EDTA pendant 20 min à 37 ° C. Les cellules mésothéliales récoltées ont été centrifugés à 150 g pendant 5 min, puis transférés dans 75 cm 2 flacons de culture tissulaire et on les cultive dans un humidifiée à 5% de CO 2 incubateur, dans du DMEM supplémenté avec 10% de sérum de foetus de veau (FCS ), 100 U /ml de pénicilline, 100 pg /ml streptomycine, 2 mmol /L de L-glutamine et 20 mmol /l hydroxyéthyl pipérazine éthanesulfonique (HEPES, Gibco BRL, USA). Le milieu a été changé tous les 2-3 jours.
Lignées de cellules de carcinome gastrique humaine, MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 et MGC-803, ont été obtenus auprès du Département de biologie cellulaire, Université médicale de Chine , Chine. Ces cellules ont été cultivées dans du DMEM supplémenté avec 10% de FCS, de la pénicilline 100 U /ml, 100 pg /ml de streptomycine et 2 mmol /L de L-glutamine dans un humidifiée de 5% de CO 2 incubateur à 37 ° C.
Préparation de milieux conditionnés exempts de sérum de sérum sans milieu conditionné (SF-CM) a été préparé à partir de cellules de cancer gastrique ou des cellules épithéliales gastriques normales comme indiqué précédemment [1]. En bref, 5,0 x 10 5 cellules ont été ensemencées dans 100 mm des boîtes de culture de tissu avec 10 ml de DMEM, complémenté avec 10% de FCS et incubées à 37 ° C pendant 3 jours. Pour obtenir SF-CM, les cellules ont été lavées deux fois avec une solution tamponnée au phosphate (PBS) puis incubées pendant 2 jours avec 3 ml de DMEM sans sérum. SF-CM a été élue et on le centrifuge à 1000 g pendant 5 min, passé à travers les filtres (taille des pores: 0,45 pm) et conservée à -20 Animaux
C57BL d'° C jusqu'à utilisation /6 souris. (huit semaines, pesant 20 ± 2 g), ont été obtenus à partir de l'animalerie de l'Université médicale de Chine et alimenté avec de l'eau purifiée et un stock régime commercial dans une salle climatisée à 20-22 ° C.Animals utilisées dans cette étude ont été maintenues en conformité avec le Guide pour les soins et l'utilisation des animaux de laboratoire publié par le National Institutes of Health (NIH publication n ° 85-23, révisée en 1996) et la politique de protection des animaux et l'utilisation Comité de l'Université médicale de Chine. morphologique de L'évaluation sous un microscope à contraste de phase
cellules mésothéliales péritonéales humaines (HPMC) ont été cultivées à subconfluence dans un cm 50 2 plat avec du DMEM contenant 10% de FCS. Le milieu a ensuite été remplacé par (1) DMEM exempt de sérum ou (2) SF-CM à partir de lignées cellulaires de cancer gastrique. Les HPMC dans des chambres de 24 puits ont été exposés à des solutions d'essai pendant 24 h, et lavées doucement avec du PBS. Ils ont ensuite été examinées au microscope à contraste de phase pour la taille, la forme et l'intégrité de la membrane cellulaire, le cytoplasme et le noyau. La microscopie électronique de transmission

Les HPMC ont été cultivées à subconfluence dans un 50 cm 2 plat avec du DMEM contenant 10% de FCS. Le milieu a ensuite été remplacé par (1) DMEM exempt de sérum ou (2) SF-CM à partir de lignées cellulaires de cancer gastrique. Après incubation pendant 24 h, les cellules ont été trypsinées, puis fixées dans 2,5% de microscopie électronique à teneur glutaraldéhyde glacée dans du PBS (pH 7,3). Les échantillons ont été rincés avec du PBS, post-fixes dans du tétroxyde d'osmium 1% avec 0,1% de ferricyanure de potassium, déshydratées à travers une série d'éthanol à gradient (30% -90%), et noyés dans Epon. Semi-mince (300 nm) sections ont été coupées à l'aide d'un Ultracut Reichart (Reichart Ultracut (Leica, Allemagne), colorées avec 0,5% de bleu de toluidine, et examinés sous un microscope optique. Des coupes ultrafines (65 nm) ont été colorées avec 2% d'acétate d'uranyle et du citrate de plomb Reynold et examiné au microscope électronique à transmission à × 5000 ou × 8000 grossissement.
détermination quantitative des dommages aux cellules par test MTT The essai MTT a été effectué pour évaluer la viabilité des cellules mésothéliales peritoneales humaines après traitement SF-CM à partir de lignées cellulaires de cancer gastrique. les cellules dans les cultures en plaque de 96 puits, après une exposition à un contrôle ou des solutions d'essai pendant une période de temps spécifique (observée à 12 h, 24 h et 48 h), ont été mises en incubation avec 50 pg /ml MTT à une dilution de 1:10, par rapport au volume du milieu de culture pendant 3 heures à 37 ° C. a la fin de la période d'incubation, la solution de MTT a été enlevé et 150 ul de DMSO ont été ajoutés à chaque puits, et on a agité à dissoudre les cristaux de formazon bleu foncé qui avaient formé. La proportion de cellules viables a été déterminée en mesurant la densité optique de chaque échantillon à 480 nm avec un spectrophotomètre. Trois cultures ont été exposées à chaque solution à chaque période de temps. Les moyens de chaque groupe de cultures ont été comparées.
Cytométrie de flux
Après incubation dans les solutions d'essai pendant 24 h, 48 h et 72 h, les cellules ont été récoltées en utilisant la trypsine. Les cellules ont été remises en suspension dans du PBS à une concentration de 1 × 10 6 /mL et fixés dans 2 ml de methanol pendant 30 min à 4 ° C. Après que les cellules ont été fixées CNE2, le mélange a été mis en incubation dans 0,5 ml de solution PI (0,05 mg /mL dans 3,8 mol /L de citrate de sodium) et 0,5 ml de RNase A (0,5 mg /mL) à température ambiante pendant 30 min. Enfin, les cellules ont été remises en suspension dans 1 ml de PBS et analysées par cytométrie en flux selon les instructions du fabricant. Les cellules de la crête subdiploid ont été considérés comme apoptotique.
Aspect histologique de péritoine
Homme C57BL /6 (âgées de huit semaines, pesant 20 ± 2 g) ont été utilisés dans la présente étude. L'expérience a suivi les lignes directrices pour l'utilisation des animaux de laboratoire dans la recherche et l'enseignement. Les souris ont été nourris avec un chow de laboratoire de granulés standard et ont été fournis avec de l'eau ad libitum
. Les souris ont été assignés au hasard à l'un des trois groupes (n = 5 ou 6 dans chaque groupe). Les souris du groupe DMEM ont été traités avec DMEM (100 ml /kg) par injection intrapéritonéale les jours 1, 3, 5 et 7. Les souris dans le groupe SF-CM ont été traités avec 100 ml /kg de SF-CM de cellules de cancer gastrique lignes par injection intrapéritonéale aux jours 1, 3, 5 et 7. Rien a été ajouté à des injections pour les souris témoins. Après 29 jours, les souris ont été anesthésiées avec de l'éther éthylique et sacrifiées. péritoines pariétaux ont été colorées avec de l'hématoxyline et de l'éosine (H & E) et la coloration au trichrome de Masson. modifications morphologiques du péritoine pariétal ont été observées par microscopie optique. L'épaisseur de la matrice extracellulaire submesothelial a été déterminé après les coupes de tissu ont H & E et Masson coloration. La moyenne des 10 mesures indépendantes est calculée pour chaque article; données ont ensuite été résumées.
Western blot
cellules mésothéliales péritonéales humaines ont été cultivées à subconfluence dans un cm 50 2 plat avec du DMEM contenant 10% de FCS. Les médias ont ensuite été modifiés pour (1) SF-CM de cellules gastriques de cancer MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 et MGC-803; et (2) du DMEM exempt de sérum servant de témoin. La protéine a été extraite dans un tampon de lyse standard avec des inhibiteurs de protéases (orthovanadate de sodium, fluorure de phénylméthylsulfonyle, leupeptine et aprotinine obtenus à partir de BioShop, Burlington, ON, Canada). Des aliquotes de 20 pg de protéine de lysat a été soumis à une électrophorèse avec un gel SDS-PAGE 12%, transférés sur une membrane de nylon, et sondées séparément avec des anticorps pour Bcl-2, Bax, la caspase 3 et la caspase-8. Après incubation avec l'anticorps secondaire, buvards ont été développés en utilisant un kit ECL Western Blot Substrat (Abcam, USA).
Analyse statistique
Toutes les données sont exprimées en x
± sd
. La comparaison des effets de la drogue ont été effectuées à l'aide de t
-test de l'étudiant. Une valeur <P
; 0,05 a été considérée comme significative.
Évaluation morphologique des résultats sous une phase microscope à contraste
Bien que HPMC traitées uniquement dans DMEM sans sérum a montré une caractéristique polygonale et motif de pavés (figure 1A)., Les cellules traitées avec SF-CM de cellules de cancer de l'estomac MKN45 pendant 24 h, a commencé à avoir des changements morphologiques, la plus évidente de ce qui était l'exfoliation et l'apparition de zones nues (figure 1B). Figure 1 Les modifications morphologiques des cellules mésothéliales péritonéales humaines sous microscope à contraste de phase.
(A) monocouche de HPMC polygonales et pavées comme cultivées en DMEM sans sérum. (B-D) apparition exfoliés des zones nues après un traitement avec SF-CM à partir de lignées cellulaires de cancer gastrique MKN45, SGC7901 et BGC823. (Grossissement x40).
Microscopie électronique en transmission
Après 24 h de SF-CM de traitement de cellules de cancer de l'estomac, des caractéristiques apoptotiques (telles que la condensation de la chromatine nucléaire, plissement de la membrane nucléaire, la dilatation du reticulum endoplasmique, et une structure relativement normale des mitochondries) ont été observées au microscope électronique à transmission (MET, les figures 2A, B). Sous TEM, la membrane nucléaire a été considérée comme étant intacte, la chromatine condensée en masse, et sur la limite de la membrane ou la formation d'arc (figure 2C). Le bourgeonnement et la formation des corps apoptotiques ont également été observées (figure 2C). Figure 2 cellules humaines péritonéale mésothéliales (HPMC) 24 h après incubation avec et sans SF-CM à partir de cellules de cancer gastrique.
(A) Les cellules de contrôle affichent les noyaux normaux et réticule endoplasmique. (B) Les cellules traitées avec SF-CM à partir de cellules du cancer gastrique MKN1 montrent la chromatine condensée en masse, et sur la limite de la membrane ou la formation d'arc. Bourgeonnement et la formation des corps de l'apoptose ont été observés (flèches B). (C) .Cells traité avec SF-CM de MKN45 cellules de cancer gastrique montrent condensation de la chromatine nucléaire (flèches en C). (D) Les cellules traitées avec la lignée cellulaire de cancer gastrique MGC-803 étaient semblables à B. bourgeonnement et la formation des corps de l'apoptose ont également été observées.
Test MTT
Pour évaluer les effets suppresseurs potentiels de cellules de cancer gastrique SF-CM sur HPMC, nous avons examiné sa courbe de croissance sur la ligne HPMC HMrSV5. cellule cancéreuse gastrique SF-CM induit la suppression de croissance dans les cellules HPMC, et l'a fait dans un temps dépendant de manière (figure 3A). Cet effet a été observé à 0 h, 12 h, 24 h et 48 h. Ces résultats indiquent que le surnageant de la tumeur provoque des dommages aux cellules mésothéliales, ou l'apoptose. Figure 3 L'apoptose a été quantifiée par deux méthodes: MTT et cytométrie de flux.
(A) Viabilité de HMrSV5 de cellules mésothéliales après traitement avec SF-CM à partir de cellules de cancer gastrique. (B) L'apoptose a été quantifiée par cytométrie de flux après un traitement avec SF-CM à partir de cellules de cancer gastrique.
Cytométrie de flux
Pour quantifier le pourcentage de cellules apoptotiques après le traitement à différents intervalles de temps, les cellules mésothéliales ont été colorées avec du PI. cellule cancéreuse gastrique SF-CM effectivement induit une apoptose dans les cellules mésothéliales et fait d'une manière dépendante de la dose après 48 h (figure 3.B). Ces résultats étaient les mêmes que celles de l'essai MTT Histologie et morphométrique analyse
changements morphologiques du péritoine pariétal ont été analysées à l'aide de H &. Trichrome coloration de E et Masson. Chez les souris normales, une monocouche de cellules mésothéliales recouvrait la surface peritoneale sans épaississement (figure 4 a, d). En raison de l'incompatibilité apparente, les souris recevant des injections intraperitoneales de DMEM avaient un léger épaississement dans la zone collagénique submesothelial péritonéale (Figure 4 b, e); ceux injectés par voie intrapéritonéale avec cellule de cancer gastrique SF-CM avait marqué un épaississement de la zone compacte submesothelial et cellularité accrue (Figure 4 c, f). La figure 4 hématoxyline /éosine (H & E) et Masson coloration des tissus péritoine.
tissus péritoine différents groupes ont été obtenus et soumis à une intervention chirurgicale H & E et Masson coloration. (A) Toutes les photos ont été obtenues à 40 × grossissement. péritoine normale se compose seulement d'une monocouche de mésothélium avec peu de fibrose (a, d). Péritoine traité avec DMEM a également montré de petites quantités de tissu conjonctif sous les cellules mésothéliales (flèches en b, e). En revanche, le péritoine traité par SF-CM provenant de cellules de cancer gastrique a été considérablement épaissie et contient une fibrose étendues (flèches en c, f). paramètres (B) morphométriques des tissus péritonéale. Les données sont exprimées en moyenne ± erreur type de la moyenne d'au moins 3 expériences séparées. * P
< 0,05.
Western blot Nous avons ensuite cherché à définir plus précisément les mécanismes qui sous-tendent les effets combinés de la cellule de cancer gastrique SF-CM sur les protéines liées à l'apoptose (caspase-3, caspase-8, Bax, bcl-2) . Les taux de ces protéines ont été évaluées en utilisant une analyse Western blot. les niveaux de protéine Bax caspase-3, caspase-8, et ont augmenté après 48 h de traitement avec SF-CM de la plupart des cellules de cancer de l'estomac, tandis que les taux de protéine Bcl-2 ont diminué (figure 5). La bêta-actine a été utilisée comme témoin de chargement. Figure 5 Analyse par Western blot des niveaux de protéine liés à l'apoptose (caspase-3, caspase-8, Bax et Bcl-2) avec HPMC SF-CM à partir de différentes cellules cancéreuses gastriques de traitement des lignes.
privées de sérum ont été incubées avec HPMC SF-CM à partir de différentes lignées cellulaires de cancer gastrique pendant 48 h; protéine cellulaire total a été extrait et soumis à une analyse western blot
. Discussion
La plupart des études de post-opératoire montrent une récidive tumorale que traumatisés surfaces mésothéliales sont des sites pour l'adhérence des cellules tumorales préférés. Récemment, dissocie les cellules cancéreuses à l'intérieur des cavités péritonéales, et des protéines spécifiquement exprimées dans les métastases du carcinome gastrique, peritoneal ont été trouvés être liés à des pronostics du cancer. Alors que les approches immunogénétiques sont très prometteurs dans le traitement des métastases péritonéales du cancer gastrique [13-15], les effets des cellules de cancer gastrique sur les cellules mésothéliales sont mal comprises.
Étude a montré que les cellules mésothéliales d'une protection contre les métastases péritonéales de tumeur dans mesothelia intactes [9, 16, 17]. Paget et al
a proposé une "graine et le sol" théorie: métastase se produit uniquement lorsque les cellules tumorales vivent et grandissent dans un environnement favorable [18]. Le péritoine pourrait être un environnement favorable pour les cellules de cancer gastrique squirrheux; éventuellement, les cellules mésothéliales empêchent les cellules cancéreuses de l'infiltration dans le tissu conjonctif submesothelial. Masakazu et al.
[1] a montré que les cellules mésothéliales confluentes adjacentes entravées par l'invasion des cellules cancéreuses. En outre, Kiyasu et al.
[3] ont rapporté que, avant l'implantation peritoneale de cellules cancéreuses, les cellules mésothéliales deviennent hémisphérique et exfolier du péritoine. Notre hypothèse est que, après séreuse sont exposés, les cellules cancéreuses libres répandre à partir de sites de cancer gastrique primaire dans la cavité abdominale induisent l'apoptose dans les cellules mésothéliales péritonéales [19-21]. En conséquence, les cellules mésothéliales deviennent hémisphérique et exfoliation a lieu. zones nues du tissu conjonctif submesothelial sont ainsi exposés à la cavité péritonéale; ce site péritonéale blessé devient un environnement favorable à la métastase péritonéale [22-24].
Nous avions déjà montré gastrique surnageant des cellules cancéreuses afin de réduire de manière significative la viabilité des cellules mésothéliales, mais la lignée cellulaire épithéliale gastrique normale GES-1 exerce aucun effet sur cellules mésothéliales [5]. Notre étude démontre également que les cellules mésothéliales en culture deviennent hémisphérique, et une exfoliation se produit quand on ajoute du milieu sans sérum conditionné par des cellules de cancer gastrique, comme montré par microscopie contraste de phase. En outre, la réduction cytoplasmique, une condensation nucléaire, et la formation de corps apoptotiques extracellulaire et /ou intracellulaire ont été observés au microscope électronique à transmission. L'apoptose a été quantifiée par deux méthodes: MTT et cytométrie de flux. Nous pensons que les cellules cancéreuses gastriques libres dans la cavité abdominale induisent l'apoptose des cellules mésothéliales et provoquent l'exfoliation, conduisant éventuellement à des métastases. Cela peut être le mécanisme par lequel les cellules cancéreuses adhèrent à submesothelial tissu conjonctif, bien que les cellules mésothéliales sont toujours bien organisées et confluentes. D'autres études sont nécessaires pour caractériser SF-CM libéré par les cellules de cancer gastrique.
Cellules cancéreuses gastriques peuvent induire l'apoptose par des voies apoptotiques récepteur dépendant mitochondria- et de décès. les cellules cancéreuses gastriques inhibent la croissance des cellules mésothéliales par l'inhibition de la prolifération par la promotion de l'apoptose dépendante de la caspase. Les caspases sont cytoplasmiques cystéine-protéases spécifiques aspartate, et jouent un rôle important dans l'apoptose [25]. La mort apoptotique dépendante du récepteur est déclenchée à la surface cellulaire et nécessite l'activation de la caspase-8, alors que la voie mitochondriale dépendante est déclenchée par la libération de cytochrome c mitochondrial dans le cytoplasme et nécessite l'activation de la caspase-9. Par la suite, la caspase-8 ou -9 peuvent activer la caspase-3, qui à son tour des cibles et dégrade les protéines cellulaires spécifiques et vitales, entraînant finalement la dégradation de l'ADN nucléaire et la mort cellulaire par apoptose [26]. Bcl-2, un inhibiteur de la voie de l'apoptose mitochondriale, exerce son action en bloquant leurs homologues pro-apoptotiques, ce qui empêche à son tour la libération de cytochrome c et l'activation des caspases [27]. Bax est un promoteur de mort, qui est neutralisée par hétérodimérisation avec Bcl-2. Bax translocation dans la membrane mitochondriale externe suivie d'une fuite de cytochrome c des mitochondries dans le cytosol [28]. Caspase-9 et la caspase-3 sont activés séquentiellement, et ces événements conduisent à la dégradation de l'ADN chromosomique. Comme il y a une forte possibilité que cancer gastrique apoptose à médiation cellulaire des cellules mésothéliales est le résultat de la régulation de Bcl-2 et Bax, l'identification de leurs composés cibles est nécessaire.
Dans cette étude, nous avons utilisé un modèle expérimental de souris la sclérose péritonéale induite par des injections répétées de cellules de cancer gastrique SF-CM. fibrose péritonéale expérimentale induite par des injections intrapéritonéales répétées de cellules de cancer gastrique SF-CM peut sclérose péritonéale pas complètement mimique observée chez les patients (infiltrant ou carcinome diffusément type de carcinome VI de Bormann). En fait, les résultats pathologiques de carcinose péritonéale et la sclérose péritonéale ne sont pas uniformes et divers facteurs sont impliqués. En outre, certaines caractéristiques communes sont observées au cours du développement de la sclérose péritonéale entre les modèles animaux expérimentaux cellule de cancer gastrique SF-CM-induits et des patients humains subissant une carcinose péritonéale. Ces résultats histologiques communs comprennent l'accumulation de collagènes interstitiels augmenté telles que le type I et III collagène, l'infiltration des monocytes /macrophages, augmentation d'un-SMA + myofibroblastes, et la densité vasculaire dans le péritoine [7, 8]. Ces similitudes dans les altérations des membranes péritonéale entre les modèles expérimentaux et les patients atteints de carcinose péritonéale humains suggèrent que cela est un modèle approprié pour l'examen de l'efficacité de divers réactifs thérapeutiques potentiels pour la régulation de la carcinose péritonéale.
Conclusions
Ces résultats démontrent que le cancer gastrique les cellules peuvent induire l'apoptose et de la fibrose des cellules mésothéliales peritoneales humaines par surnageants dans la métastase peritoneale précoce, et indiquent que des facteurs solubles dans la cavité peritoneale peut affecter la morphologie et la fonction des cellules mésothéliales de telle sorte que l'environnement résultant devient favorable à des métastases peritoneales.
Les abréviations
HPMC:
cellules mésothéliales péritonéales humaines
SF-CM:.
sans sérum médias conditionnelle

Déclarations
Remerciements
Les auteurs tiennent à exprimer leurs sincères remerciements au Dr Yan chanson pour son assistance technique. Cette étude a été soutenue par une subvention de la National Foundation Sciences naturelles de Chine (NO. 81071956 et 81101884).
Auteurs fichiers originaux soumis pour les images
Voici les liens vers les auteurs originaux soumis les fichiers pour les images. de fichier d'origine pour la figure 1 12876_2011_768_MOESM2_ESM.jpeg Auteurs Auteurs 12876_2011_768_MOESM1_ESM.jpeg fichier d'origine pour la figure 2 'fichier d'origine pour la figure 3 Auteurs 12876_2011_768_MOESM4_ESM.jpeg de 12876_2011_768_MOESM3_ESM.bmp Auteurs fichier d'origine pour la figure 4 fichier original 12876_2011_768_MOESM5_ESM.bmp Auteurs »pour la figure 5 intérêts concurrents
les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts. les contributions de
auteurs
DN, Z-DL et F-NL effectué les études sur la morphologie et l'activité biologique des cellules mésothéliales péritonéales in vitro
et in vivo
. ZS, Z-FM et FL ont participé aux vivo
études en. YX et C-GJ ont participé aux études de morphologie. DN et HX ont participé à la conception de l'étude et procédé à une analyse statistique. HX et DN conçus de l'étude, et ont participé à sa conception et la coordination et a contribué à la rédaction du manuscrit. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

• Est splénectomie concomitante bénéfique pour la survie à long terme des patients atteints de cancer gastrique subissant une gastrectomie curative? Une étude unique institution
• Expression et signification clinique de longue non codant l'ARN HNF1A-AS1 dans le cancer gastrique humain