A gyomor rákos sejt felülúszó apoptózist és fibrózist a peritoneális szövetekben és az eredményeket a kedvező környezet peritoneális áttétek, in vitro és in vivo körülmények között

A gyomor rákos sejt felülúszó apoptózist és fibrózist a peritoneális szövetekben és az eredményeket a kedvező környezet peritoneális áttétek, in vitro
és in vivo
Abstract
alapon
Ebben a tanulmányban azt vizsgáltuk, hatásai oldható faktorok által felszabadított gyomorrák sejtek peritoneális mesothelialis sejtek in vitro
és in vivo
.
Methods
HMrSV5, egy humán peritoneális mesothelialis sejtvonal inkubáltuk felülúszójából gyomor rákos sejteket. Morfológiai változásait HMrSV5 sejtet figyeltünk meg. Apoptosis a HMrSV5 sejtek alatt megfigyeljük transzmissziós elektronmikroszkóp és mennyiségileg határoztuk meg MTT assay és áramlási citometriával. Kifejezések az apoptózis kapcsolatos fehérjék (kaszpáz-3, kaszpáz-8, Bax, Bcl-2) kerültek immunkémiailag értékeltük.
Eredménye
Feltűnő morfológiai változásokat jelző apoptózisa volt megfigyelhető HMrSV5 sejtekben 24 órával a kezelés után a felülúszók gyomor rákos sejteket. In vivo
, peritoneális szövetek kezelt gyomor rákos sejt felülúszó jelentősen megvastagodott, és tartalmazott kiterjedt fibrózis.
Következtetések
Ezek az eredmények azt mutatják, hogy felülúszójában gyomor rákos sejtek apoptózisának indukálására és fibrózis HMrSV5 humán peritoneális mesothelialis sejtek keresztül felülúszókat a korai peritoneális metasztázis, egy idő-függő módon, és azt jelzik, hogy szolubilis faktorok, a hasüregbe befolyásolják a morfológia és funkció mesothel sejtek úgy, hogy az eredményül kapott környezet válhat kedvező peritoneális áttétek.
kulcsszavak
peritoneális carcinomatosis gyomor neopláziák mesothelialis sejt apoptózis fibrózis alapon
peritoneális carcinomatosis súlyosan korlátozza a javulás a gyomor rákos betegek "prognózis műtét után [1]. A peritoneális áttétek eredményez metasztatikus kaszkád, általában előforduló késői stádiumú daganat kialakulásában, amely jelentősen hozzájárul a gyomorrák kapcsolatos mortalitás. Mechanizmusainak hashártya áttét a diffúz infiltráló carcinoma még nem teljesen tisztázott.
A peritoneális stroma környezet kedvez a tumorsejtek szaporodásához szolgálva, mint egy gazdag forrása a növekedési faktorok és a kemokinek ismert, hogy részt vesz a daganat áttétet. Molekulák közvetítésében ezt kaszkád nem széles körben vizsgálták [2]. Állítólag mesothelialis sejtek megakadályozzák a rák terjedését és mennek morfológiai változások válaszként oldható faktorok által kiadott rákos sejtek [3]. A konkrét molekulák részt ebben a folyamatban által diktált belső jellemzői a metasztatikus tumor sejteket. Tumorsejtek kell csatolni szilárdan a submesothelial egyrétegű és behatolnak a mesotheliális egyrétegű invázió. Buck és munkatársai.
[4] feltárta a védő hatását a mesothel réteg, egy patkány modell, amelyben a mesothel bélés a parietális peritoneum sztrippeléssel eltávolítottuk a kísérleti patkányok, így a bazális membrán ép. Korábban kimutatták, hogy a réteg a összefolyó, intakt mesothelialis sejteket gátolja a rákos sejtek invázióját a hasüregbe. Azonban, ha az integritás ezen akadály megbomlik, metasztázis előfordulhat, mert a hashártya nyújt kedvező környezetet gyomorrák sejtek növekedését [5-9]. További vizsgálatok azt mutatták, hogy a megelőző letiltása gyomorrák sejtek rá hashártya, mesothelial sejtek szert félgömb alakú, és elkezd levetkőzni. Ennek eredményeként, meztelen területeken a submesothelial kötőszövet vannak téve a hasüregbe [10-12]. Valószínű, hogy behatolás a mesothel egyrétegű tumorsejtek által kezdeményez tumor indukálta mesothelialis sejtek apoptózisát. Ebben a vizsgálatban vizsgáltuk a hatását oldható faktorok által felszabadított gyomorrák sejtek morfológiája és biológiai aktivitását a peritoneális mesothelialis sejtek in vitro és in vivo
.
Módszerek
Reagensek
3- (4, 5-dimetil-tiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazoliumbromide (MTT) kapunk Fluka, USA. A propidium-jodid (PI) kapunk Biosharp, USA. Bcl-2, Bax, a kaszpáz-3, kaszpáz-8 és az aktin primer antitesteket és a szekunder antitest, kecske anti-egér IgG-t nyertünk a Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, Amerikai Egyesült Államok. Dulbecco-féle módosított Eagle-féle tápközegben (DMEM), és magzati borjúszérumot (FCS) kaptuk a GIBCO BRL-től (Grand Island, NY, USA). Egyéb laboratóriumi reagensek a Sigma, USA. A fáziskontraszt-mikroszkóp (Japán Nikon), transzmissziós elektronmikroszkóp (Hitachi H-6001, Japán) alkalmaztunk.
Sejtvonalak és sejttenyészet
Az emberi peritoneális mesothelialis sejtvonalat HMrSV5 kaptuk a Department of Cell Biology Kína Orvostudományi Egyetem, Kína. HMrSV5 eredetileg izolált humán cseplesz. Röviden, cseplesz gyűjtött beleegyező nem-urémiás betegekben, akiket elektív hasi műtét, és inkubáltuk 0,05% (w /v) tripszint és 0,01% (w /v) EDTA, 20 percig 37 ° C-on. A betakarított mesothelialis sejteket centrifugáltuk 150 g-vel 5 percig, majd átvisszük 75 cm 2 szövettenyésztő lombikokban tenyésztettük, párásított 5% -os CO 2 inkubátorban, DMEM-ben, kiegészítve 10% magzati borjúszérummal (FCS ), 100 U /ml penicillinnel, 100 ng /ml sztreptomicinnel, 2 mmol /l L-glutaminnal és 20 mmol /l hidroxi-etil-piperazin-etánszulfonsav (HEPES, Gibco BRL, USA). A közeget 2-3 naponként cseréltük. Katalógusa emberi gyomor karcinóma sejtvonal MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 és MGC-803, kaptuk a Department of Cell Biology, Kína Orvostudományi Egyetem Kína. Ezek a sejteket tenyésztettünk DMEM, kiegészítve 10% FCS, 100 U /ml penicillinnel, 100 ng /ml sztreptomicinnel, és 2 mmol /l L-glutaminnal, párásított 5% -os CO 2 inkubátorban 37 ° C-on.
előállítása szérummentes kondicionált médiumok
szérum-mentes kondicionált tápközeg (SF-CM) készítettünk gyomor rákos sejtek vagy normális gyomor- hámsejtek mint korábban jeleztük [1]. Röviden, 5,0 × 10 5 sejteket oltottunk 100 mm-es szövettenyésztő edényekben 10-ml DMEM, kiegészítve 10% FCS-sel, és inkubáltuk 37 ° C-on 3 napon keresztül. Ahhoz, hogy SF-CM, a sejteket kétszer mossuk foszfáttal pufferelt sóoldatban (PBS), majd inkubáljuk 2 napig, 3 ml szérummentes DMEM-ben. Az SF-CM eluáltuk, és lecentrifugáltuk 1000 g-vel 5 percig, átengedjük szűrőkön (pórusméret: 0,45 um), és tároljuk -20 ° C-ig használható.
Állatok
hím C57BL /6 egereket (nyolc hetes, súlya 20 ± 2 g), nyerték Kína Orvostudományi Egyetem állattartó berendezésében és etetni tisztított vízzel és egy kereskedelmi készlet diéta egy légkondicionált szobában 20-22 ° C.Animals ebben a vizsgálatban alkalmazott tartottuk összhangban útmutató Care and Use of Laboratory Animals által közzétett amerikai National Institutes of Health (NIH publikáció No. 85-23, 1996-ban átdolgozott), valamint a politika Animal Care and Use Committee of China Orvostudományi Egyetem. katalógusa morfológiai Értékelés alatt fáziskontraszt-mikroszkóp
Humán peritoneális mesothelialis sejteket (HPMCs) tenyésztettünk, hogy szub egy 50 cm-es 2 edényt tartalmazó DMEM 10% FCS-t. A közeget ezután kicseréltük (1), szérummentes DMEM-vagy (2) SF-CM származó gyomor rákos sejtvonalak. A HPMCs 24 mérőhelyes kamrákat kitéve kísérleti oldatok 24 órán, és óvatosan mossuk PBS-sel. Ezeket alatt vizsgáltuk fáziskontraszt-mikroszkóp, a méret, alak, és integritását a sejtmembrán, citoplazma, és a sejtmagban.
Transzmissziós elektronmikroszkópos
HPMCs tenyésztettük, hogy szub egy 50 cm-es 2 tál DMEM, amely 10% FCS-t. A közeget ezután kicseréltük (1), szérummentes DMEM-vagy (2) SF-CM származó gyomor rákos sejtvonalak. Az inkubálás után 24 órán, a sejteket tripszinnel kezeltük, majd rögzíteni jéghideg 2,5% elektronmikroszkóppal grade glutáraldehid PBS-ben (pH = 7,3). A mintákat öblítjük PBS, utólag fixáljuk 1% -os ozmium-tetroxid 0,1% kálium-ferricianid, dehidratált keresztül egy fokozatos etanol sorozat (30% -90%), és a beágyazott Epon. Semi-vékony (300 nm) metszeteket használva Reichart Ultracut (Reichart Ultracut (Leica, Németország), megfestettük 0,5% -os toluidinkék, és vizsgálták fénymikroszkóp alatt. Az ultravékony metszeteket (65 nm) megfestettük 2% uranil-acetát és Reynold ólom-citráttal, és vizsgálták a transzmissziós elektronmikroszkóp at × 5000 vagy × 8000 nagyítással.
kvantitatív meghatározását sejtkárosodás MTT assay
az MTT assay-t végeztünk, hogy értékelje életképességét a humán peritoneális mesothel sejtek kezelés utáni SF-CM származó gyomor rákos sejtvonalak. a sejteket 96-lyukú lemezen kultúrák, az expozíció után a vezérlésére vagy vizsgálati oldatok egy bizonyos ideig (figyeltek meg 12 óra, 24 óra és 48 óra), inkubáltuk 50 ng /ml MTT hígításban 1:10 alapuló térfogatú táptalajt 3 órán át 37 ° C-on. a végén az inkubációs idő, az MTT-oldatot eltávolítottuk, és 150 pl DMSO-t adtunk minden egyes lyukba, és addig keverjük, oldják a sötétkék formazon kristályokat képződött. Aránya az életképes sejtek mérésével határoztuk meg az optikai sűrűséget az egyes minták 480 nm-en spektrofotométerrel. Három tenyészeteket kitett minden egyes oldathoz minden egyes időszakban. Az eszköz minden egyes csoport a tenyészeteket összehasonlítva.
Áramlási citometria
inkubálást követően a vizsgálandó oldatba 24 órán, 48 óra és 72 óra, a sejteket összegyűjtöttük alkalmazásával tripszinezéssel. A sejteket PBS-ben reszuszpendáltuk koncentrációban 1 × 10 6 /ml és rögzített 2 ml metanollal 30 percig, 4 ° C-on. Miután a CNE2 sejteket fixáltuk, és az elegyet inkubáltuk 0,5 ml PI-oldatot (0,05 mg /ml 3,8 mol /l Na-citrát) és 0,5 ml RN-áz A (0,5 mg /ml), szobahőmérsékleten 30 percig keverjük. Végül a sejteket újra felszuszpendáltuk 1 ml PBS-ben és áramlási citometriával elemezzük, a gyártó utasításai szerint. A sejteket a subdiploid csúcs tekintettük apoptotikus.
Hisztológiai megjelenése hashártya katalógusa Férfi C57BL /6 egerekben (nyolc hetes, súlya 20 ± 2 g) használtunk a jelen tanulmányban. A kísérlet követte útmutatást a laboratóriumi állatok az oktatás és kutatás. Az egereket standard pellet laboratóriumi tápot és kapott vizet ad libitum katalógusa. Az egereket véletlenszerűen három csoport egyikébe (n = 5 vagy 6 minden csoportban). Egerek DMEM csoport kezeltük DMEM-ben (100 ml /kg) intraperitoneális injekciók az 1., 3., 5. és 7. Egerek az SF-CM csoport kezeltük 100 ml /kg SF-CM-re gyomorrák sejt vonalak intraperitoneális injekciók az 1., 3., 5. és 7. Nincs adunk injekciók a kontroll egerekben. 29. nap után az egereket érzéstelenítjük, etil-éter és feláldozni. Parietális peritoneums megfestjük hematoxilinnel és eozinnal (H &E) és Masson-féle trikróm festés. Morfológiai elváltozások a parietális peritoneum észleltek fénymikroszkóppal. Vastagsága a submesothelial extracelluláris mátrix után határoztuk meg a szöveti metszeteken volt H &E és Masson-festéssel. Az átlagos 10 független mérés kiszámítottuk az egyes részekben; adatokat ezután össze.
Western blot
Humán peritoneális mesothelialis sejteket tenyésztettünk, hogy szub egy 50 cm-es 2 edényt tartalmazó DMEM 10% FCS-t. A média ezután változott (1) SF-CM-re gyomorrák sejt MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 és MGC-803; és (2) szérummentes DMEM szolgáló kontrollként. Protein extraháljuk egy standard lízispufferben proteináz inhibitorok (nátrium-ortovanadátot, fenil-metil-fluorid, leupeptin, és aprotinin nyert BIOSHOP, Burlington, ON, Kanada). Alikvotjait 20 pg protein lizátumot elektroforetizáljuk 12% -os SDS-PAGE gélen, átvittük nylon membránra, és külön-külön próbaként antitestekkel Bcl-2, Bax, a kaszpáz-3 és kaszpáz-8. Az inkubálást követően a szekunder antitesttel, blotokat előhívjuk olyan ECL Western Blot Substrate Kit (ABCAM, USA).
Statisztikai analízis
Minden adatot kifejezve X
± SD
. Összehasonlítások drog hatása készült Student-féle T
-próba. A P katalógusa érték < 0,05 értéket tekintettük szignifikánsnak. Katalógusa Eredmények katalógusa morfológiai értékelést alatt fáziskontraszt-mikroszkóp katalógusa Míg HPMCs kezelni csak szérummentes DMEM mutatott tipikus sokszög és macskaköves minta (1A.), Kezelt sejtekben SF-CM-re gyomorrák sejt MKN45 24 órán kezdett, hogy morfológiai változások, a legnyilvánvalóbb amelyek közül hámlás és a megjelenése meztelen területek (1b ábra). 1. ábra morfológiai változásait humán peritoneális mesothelialis sejtek fáziskontraszt mikroszkóp.
(A) egyrétegű sokszögű és macskaköves-szerű HPMCs tenyésztettük szérummentes DMEM-ben. (B-D) Rétegesen megjelenése meztelen területek kezelés után SF-CM gyomor- rákos sejtvonalak MKN45, SGC7901 és BGC823. (Nagyítás: × 40). Katalógusa transzmissziós elektronmikroszkópos katalógusa 24 óra elteltével az SF-CM-re gyomorrák sejt kezelés apoptotikus funkciók (például a kondenzáció a nukleáris kromatin, gyűrődés nukleáris membrán tágulása endoplazmatikus retikulum és viszonylag normális szerkezete a mitokondriumok) figyeltek alatt transzmissziós elektronmikroszkóp (TEM; 2A, B). Alatt TEM, a nukleáris membrán látták, hogy ép, a kromatin sűrített bele tömegek, és a határ a membrán vagy alkotó ív (2C ábra). A bimbózó és megalakult a apoptózis szervek is megfigyelték (2C ábra). A 2. ábra humán peritoneális mesothelialis sejteket (HPMC) 24 h inkubációt követően, és anélkül, SF-CM származó gyomor rákos sejteket. katalógusa (A) Kontroll sejtek megjelenítéséhez normális magok és az endoplazmás retikulumban. (B) kezelt sejtek SF-CM-re MKN1 gyomorrák sejtek jelennek kromatin sűrűsödik tömegek, és a határ a membrán vagy alkotó arch. Bimbózó és megalakult a apoptózis szervek észleltek (nyilak B). (C) .Cells kezelt SF-CM-re MKN45 gyomor rákos sejtek mutatják kondenzáció a nukleáris kromatin (nyilak C). (D) kezelt sejtek gyomorrákos sejtvonal MGC-803 hasonlóak voltak B. Rügyfakadás és megalakult a apoptózis szervek is megfigyeltek. Katalógusa MTT assay katalógusa Hogy értékeli a lehetséges szuppresszálóhatást gyomorrák sejt SF-CM a HPMCs megvizsgáltuk a növekedési görbe a HPMC vonalon HMrSV5. A gyomor rákos sejt SF-CM indukált növekedési szuppressziót HPMC sejtekben, és ezt az idő-függő módon (3A ábra). Ez a hatás volt megfigyelhető 0 óra, 12 óra, 24 óra és 48 óra. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy a tumor felülúszó indukálja mesothelialis sejtkárosodást vagy az apoptózist. 3. ábra Az apoptózist mennyiségileg két módszer: MTT átfolyásos illetve. katalógusa (A) életképessége mesothelialis sejt HMrSV5 kezelés után SF-CM gyomor- rákos sejteket. (B) Az apoptózist mennyiségileg áramlási citometriával végzett kezelés után SF-CM származó gyomor rákos sejteket.
Áramlási citometria
számszerűsítése a százalékos apoptotikus sejtek kezelés utáni különböző időszakokban, mesothelialis sejteket megfestettük PI. A gyomor rákos sejt SF-CM hatékonyan indukált apoptózist mesothelialis sejtekben és ezt a dózistól függő módon 48 óra után (3.b ábra). Ezek az eredmények ugyanazok voltak, mint azok, amelyek a MTT assay.
Szövet- és morfometriai elemzését
morfológiai elváltozások a parietális peritoneum alkalmazásával elemeztük H &E és Masson-féle trikróm festés. Közül normál egerekben, egy mesothelialis egysejtréteg lefedett a peritoneális felület nélkül megvastagodása (4. ábra A, D). Mivel a látszólagos összeférhetetlenség, kapó egerek intraperitoneális injekciók DMEM volt enyhe megvastagodása a peritoneális submesothelial kollagén zóna (a 4. ábra b, e); azokat intraperitoneálisan gyomor rákos sejtek SF-CM megjelölte megvastagodása submesothelial kompakt zóna és a megnövekedett sejtes (4. ábra c, f). 4. ábra hematoxilin /eozin (H &E) és Masson megfestése hashártya szövetekben.
Hashártya szöveteket a különböző csoportok kaptunk sebészetileg és alá kell vetni H &E és Masson-festéssel. (A) Minden fotó kaptuk meg 40 × nagyítással. Normál hashártya áll, csak egy egyrétegű mesothelium kevés fibrózis (A, D). Hashártya kezelt DMEM azt is kimutatta, kis mennyiségű kötőszövet alatt mesothelial sejtek (nyilak b, e). Ezzel ellentétben, a hashártya kezelt SF-CM-re gyomorrák sejtek lényegesen megvastagodott, és tartalmazott kiterjedt fibrózis (nyilak c, f). (B) morfometriai paraméterek peritoneális szövetekben. Az adatokat átlag ± standard hiba az átlag legalább 3 külön kísérletben. * P katalógusa < 0.05.
Western blot katalógusa Ezután kérte, hogy tovább megszabja azokat a mechanizmusokat, amelyek azt az együttes hatása a gyomor rákos sejtek SF-CM on apoptózis kapcsolatos proteinek (kaszpáz-3, kaszpáz-8, Bax, bcl-2) . Ezeknek a fehérjéket értékeltük Western blot analízissel. A kaszpáz-3, kaszpáz-8, és a Bax fehérje szintje növekedett 48 óra után végzett kezelés SF-CM a legtöbb gyomorrák-sejtek, míg a Bcl-2 protein-szint csökkent (5. ábra). A béta-aktin használtunk terhelési kontrollként. 5. ábra Western-blot-analízis az apoptózis-related protein szintet (kaszpáz-3, kaszpáz-8, Bax, és a Bcl-2) HPMCs SF-CM különböző gyomor rákos sejtvonal kezelést.
szérum-éheztetett HPMCs inkubáltuk SF-CM különböző gyomor rákos sejtvonalak akár 48 H; A teljes protein kivontuk, és Western-blot analízissel. katalógusa Vita katalógusa legtöbb tanulmány a posztoperatív recidíva azt mutatják, hogy a traumatizált mezoteliás felületekre előnyösek helyek tumorsejtek tapadását. Nemrégiben társítását rákos sejtek belsejében hasüreg és a fehérjék kifejezetten kifejezve hashártya áttét gyomorrák találták, hogy rákot prognózisok. Míg immungenetikai megközelítések mutatnak nagy ígéretet kezelésére peritoneális metasztázis gyomorrák [13-15], a hatásait gyomorrák sejtek mesothelialis sejtek kevéssé ismert.
Tanulmány kimutatta, hogy mesothelialis sejtek feltéve elleni védelem peritoneális metasztázis tumor ép mesothelia [9, 16, 17]. Paget és munkatársai katalógusa javasolt "mag és a talaj" elmélet: áttét csak akkor jelentkezik, amikor a tumorsejteket él és szaporodik kedvező környezet [18]. A hashártya lehet egy ilyen kedvező környezet scirrhous gyomorrák sejtek; esetleg mesothelialis sejtek megakadályozzák a rákos sejtek beszivárgó submesothelial kötőszövet. Masakazu et al.
[1] azt mutatta, hogy a szomszédos összefolyó mesothelial sejteket gátolt invázió rákos sejteket. Ezen túlmenően, Kiyasu et al.
[3] számolt be, hogy megelőzően peritoneális beültetés a rákos sejtek, mesothelialis sejtek válnak félgömb alakú és lereped a hashártya. Hipotézisünk az, hogy miután savóshártyát vannak kitéve, szabad rákos sejtek leválnak primer gyomorrák oldalak hasüregébe apoptózist indukál peritoneális mesothelial sejtekben [19-21]. Ennek eredményeként mesothelialis sejtek válnak félgömb alakú és hámlás zajlik. Meztelen területek submesothelial kötőszövet így ki vannak téve, hogy a peritoneális üregbe; ez sérült peritoneális helyén lesz kedvező környezetet hashártya áttét [22-24].
Korábban már kimutatták, gyomorrák sejt felülúszó, hogy jelentősen csökkenti a életképességét mesotheliális sejtek, de a normál gyomornyálkahártya sejtvonal GES-1 fejt ki semmilyen hatást mesothelialis sejtek [5]. A jelen tanulmány azt is bizonyítja, hogy a tenyésztett mesothelialis sejtek válnak félgömb alakú, és hámlás fordul elő, amikor szérummentes tápközegben kondicionált gyomor rákos sejtek adunk, amint azt a kontraszt fázis mikroszkóp segítségével. Továbbá citoplazmatikus csökkentése, a nukleáris kondenzáció, és képződése extracelluláris és /vagy intracelluláris apoptotikus testek alatt megfigyeljük transzmissziós elektronmikroszkóp. Az apoptózist mennyiségileg két módszer: MTT átfolyásos illetve. Úgy gondoljuk, hogy a szabad gyomorrák sejtek a hasüregben apoptózist indukálni mesothel sejtek és ok hámlás, végül vezető áttétek. Ez lehet a mechanizmus, amely a rákos sejtek tapad submesothelial kötőszövet, bár a mesothel sejtek még jól szervezett és összefolyó. További vizsgálatok szükségesek annak jellemzésére SF-CM felszabaduló gyomor rákos sejteket.
Gyomorrák sejtek befolyásolhatják az apoptózist keresztül mitochondria- és halál receptor-függő apoptotikus folyamatokat. A gyomorrák sejtek elnyomják mesothelialis sejtnövekedést gátló elterjedése támogatása révén a kaszpáz-függő apoptózis. A kaszpázok citoplazmatikus aszpartát-specifikus cisztein proteázok, és fontos szerepet játszanak az apoptózisban [25]. A halál-receptor-függő apoptózis kiváltó a sejt felületén, és előírja, kaszpáz-8, míg a mitokondrium-függő útvonalat kezdeményezi a kibocsátás a mitokondriális citokróm c a citoplazmába, és előírja, kaszpáz-9. Ezt követően, a kaszpáz-8 vagy -9 aktiválhatja kaszpáz-3, ami viszont célokat és lebontja a specifikus és létfontosságú celluláris proteinek, ami végső soron a nukleáris DNS degradáció és az apoptotikus sejthalál [26]. Bcl-2, gátolja a mitokondriális apoptózis útvonal, fejti ki hatását, hogy gátolja a proapoptotikus társaik, ami viszont megakadályozza, hogy a kibocsátás a citokróm C és a kaszpázok aktiválása [27]. Bax egy halál promoter, amely semlegesített heterodimerizálódik Bcl-2. Bax transzlokálódik a külső mitokondriális membrán követi a szivárgás a citokróm c A mitokondriumok a citoszolba [28]. Kaszpáz-9 és kaszpáz-3 aktiválódnak egymás után, és ezek az események vezetnek a bontást a kromoszomális DNS-be. Mivel van egy jelentős lehetősége, hogy a gyomorrák-sejtek által közvetített apoptózis mesothel sejtek az eredménye a szabályozás a Bcl-2 és a Bax, azonosítása a cél vegyületek szükséges.
Ebben a vizsgálatban felhasználtuk egy egér kísérleti modellje peritoneális szklerózis által indukált ismételt injekciók gyomorrák sejt SF-CM. Kísérleti peritoneális fibrózis okozta ismétlődő intraperitoneális injekcióval gyomorrák sejt SF-CM talán nem teljesen utánozzák peritoneális szklerózis betegeknél megfigyelt (diffúz infiltráló karcinóma vagy Bormann VI-os típusú carcinoma). Tény, patológiai peritonealis carcinomatosis és peritoneális szklerózis nem egységes, és a különböző tényezők vesznek részt. Ezen túlmenően, bizonyos közös tulajdonságok figyelhetők fejlesztése során a peritoneális szklerózis között gyomorrák sejt SF-CM-indukált kísérletes állati modellek és az emberi átesett betegek peritoneális carcinomatosis. Ezek a közös hisztológiai eredmények közé tartozik a fokozott felhalmozódása interstitialis kollagének, mint például az I. típusú és III kollagén, beszivárgó monocitákat /makrofágokat, növekedése a-SMA + miofibrobiastok, és a vaszkuláris sűrűség a hashártya [7, 8]. Ezek a hasonlóságok változások a peritoneális membránok között kísérletes modellekben és emberi peritoneális carcinomatosis betegek azt sugallják, hogy ez egy alkalmas modell vizsgálatára hatásosságát különböző potenciális terápiás szabályozó reagensek peritoneális carcinomatosis.
Következtetések
Ezek az eredmények azt bizonyítják, hogy a gyomorrák sejtek indukálnak apoptózist és fibrózis humán peritoneális mesothelialis sejtek keresztül felülúszókat a korai peritoneális metasztázis, és azt jelzik, hogy szolubilis faktorok, a hasüregbe hatással lehet a morfológia és funkció mesothel sejtek úgy, hogy az eredményül kapott környezet válik kedvező peritoneális áttétek.
Rövidítések katalógusa HPMCs: katalógusa emberi peritoneális mesothelial sejtek
SF-CM: katalógusa szérum-mentes feltételes média. Matton
nyilatkozatok katalógusa Köszönetnyilvánítás
A szerzők szeretnék kifejezni köszönetemet Dr. Yan Song az ő technikai segítséget. Ez a tanulmány támogatott a támogatást a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (NO. 81071956 és 81101884). Katalógusa A szerzők eredeti beküldötteknek képeket
alábbiakban a linkeket a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 12876_2011_768_MOESM1_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájlt az 1. ábra szerinti 12876_2011_768_MOESM2_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 2. ábrán 12876_2011_768_MOESM3_ESM.bmp A szerzők eredeti fájl 3. ábra 12876_2011_768_MOESM4_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 4. ábra 12876_2011_768_MOESM5_ESM.bmp A szerzők eredeti fájl 5. ábra versengő érdekek
a szerzők kijelentik, hogy nem ellentétes érdekek. katalógusa szerzôk hozzájárulása katalógusa DN, Z-DL és az F-NL elvégzett vizsgálatok morfológiai és biológiai aktivitását peritoneális mesothelialis sejtek in vitro
és in vivo katalógusa. ZS, Z-FM és FL részt az in vivo
vizsgálatokban. YX és C-GJ részt a morfológia tanulmányok. DN és HX részt a vizsgálat kialakítása és végezte a statisztikai elemzést. HX és DN fogant a tanulmány, és részt vett a tervezés és koordináció, és segített, hogy megfogalmazza a kéziratot. Minden szerző elolvasta és jóváhagyta a végleges kéziratot. Katalógusa

• Velejárója splenectomiát előnyös a hosszú távú túlélés betegek gyomorrák alatt gyógyító gasztrektómiának? Egy-intézmény study
• Expression és klinikai jelentősége a hosszú, nem kódoló RNS-HNF1A AS1 emberi gyomor cancer