Gastrico surnatante delle cellule del cancro provoca l'apoptosi e fibrosi nei tessuti peritoneale e si traduce in un ambiente favorevole alle metastasi peritoneali, in vitro e in vivo

delle cellule del cancro gastrico surnatante provoca l'apoptosi e fibrosi nei tessuti peritoneale e si traduce in un ambiente favorevole alle metastasi peritoneali, in vitro e in vivo

astratta
sfondo
in questo studio, abbiamo esaminato gli effetti di fattori solubili rilasciati da cellule di cancro gastrico sulle cellule mesoteliali peritoneali in vitro e in vivo

.
Metodi
HMrSV5, un peritoneale linea di cellule mesoteliali umane, è stata incubata con supernatanti di cellule di cancro gastrico. sono stati osservati cambiamenti morfologici delle cellule HMrSV5. L'apoptosi delle cellule HMrSV5 è stata osservata al microscopio elettronico a trasmissione e quantitativamente determinato mediante saggio MTT e citometria a flusso. Espressioni di proteine ​​apoptosi correlati (caspasi-3, caspasi-8, Bax, Bcl-2) sono stati valutati immunochimicamente
. Risultati
sono stati osservati cambiamenti morfologici cospicui che indicano l'apoptosi nelle cellule HMrSV5 24 ore dopo il trattamento con il surnatante di cellule di cancro gastrico. In vivo
, i tessuti trattati con peritoneali gastrica surnatante delle cellule del cancro sono stati sostanzialmente ispessita e contenevano estesa fibrosi.
Conclusioni
Questi risultati dimostrano che surnatanti di cellule di cancro gastrico può indurre l'apoptosi e fibrosi nei HMrSV5 umani peritoneale cellule mesoteliali attraverso surnatanti nei primi anni di metastasi peritoneale, in modo dipendente dal tempo, e indicano che i fattori solubili nella cavità peritoneale influenzano la morfologia e la funzione delle cellule mesoteliali in modo che l'ambiente risultante può diventare favorevole alla metastasi peritoneali.
Parole
peritoneale neoplasie carcinomatosi stomaco cellule mesoteliali apoptosi Fibrosi Sfondo
carcinosi peritoneale limita fortemente il miglioramento della prognosi dei pazienti oncologici gastrici dopo l'intervento [1]. risultati metastasi peritoneali in una cascata metastatica, di solito si verificano allo sviluppo del tumore in fase avanzata, che contribuisce in modo significativo alla mortalità per cancro gastrico. I meccanismi di metastasi peritoneale diffusamente infiltrante carcinoma non sono chiaramente compreso.
L'ambiente stroma peritoneale favorisce la proliferazione delle cellule tumorali servendo come una ricca fonte di fattori di crescita e chemochine noti per essere coinvolti nella metastasi tumorali. Le molecole che mediano questa cascata non sono stati ampiamente studiati [2]. Secondo quanto riferito, le cellule mesoteliali potrebbero impedire l'invasione del cancro e subire cambiamenti morfologici in risposta a fattori solubili rilasciati dalle cellule tumorali [3]. Le molecole specifiche coinvolte in questo processo sono dettate dalle caratteristiche intrinseche delle cellule tumorali metastatiche. Le cellule tumorali hanno bisogno di fissare saldamente sul monostrato sottomesoteliale e penetrare il monostrato mesoteliali per l'invasione. Buck et al.
[4] esplorato l'effetto protettivo dello strato mesothelial, utilizzando un modello di ratto in cui il rivestimento mesoteliali del peritoneo parietale è stata rimossa da nei topi sperimentali, lasciando intatta la membrana basale. Abbiamo precedentemente dimostrato che lo strato di confluenti, le cellule mesoteliali intatte ostacola l'invasione delle cellule del cancro della cavità addominale. Tuttavia, una volta che l'integrità di questa barriera è interrotta, può verificarsi metastasi, perché il peritoneo fornisce un ambiente favorevole per le cellule di cancro gastrico a crescere [5-9]. Ulteriori studi hanno dimostrato che, prima l'attaccamento di cellule di cancro gastrico sul peritoneo, cellule mesoteliali acquisire forma emisferica e iniziare a spargere. Come risultato, aree libere del tessuto connettivo sottomesoteliale sono esposti alla cavità peritoneale [10-12]. E 'probabile che la penetrazione del monostrato mesoteliali dalle cellule tumorali inizia con neoplastica apoptosi delle cellule mesoteliali. In questo studio, abbiamo esaminato gli effetti di fattori solubili rilasciati da cellule di cancro gastrico sulla morfologia e l'attività biologica di cellule mesoteliali peritoneali in vitro e in vivo
. Metodi
Reagenti
3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazoliumbromide (MTT) è stato ottenuto da Fluka, USA. Ioduro di propidio (PI) è stato ottenuto da Biosharp, Stati Uniti d'America. Bcl-2, Bax, caspasi-3, caspasi-8 e anticorpi primari actina, e l'anticorpo secondario, di capra anti-IgG di topo sono stati ottenuti da Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, Stati Uniti d'America. medio di Dulbecco modificato Eagle (DMEM) e siero fetale di vitello (FCS) sono stati ottenuti da GIBCO BRL (Grand Island, NY, USA). Altri reagenti di laboratorio sono stati ottenuti da Sigma, Stati Uniti d'America. Un microscopio a contrasto di fase (Giappone Nikon), microscopio elettronico a trasmissione (Hitachi H-6001, Giappone) è stato utilizzato.
Linee cellulari e colture cellulari
La linea di cellule mesoteliali peritoneale umano HMrSV5 è stato ottenuto dal Dipartimento di Biologia Cellulare , China Medical University, Cina. HMrSV5 è stato originariamente isolato dal omento umana. Brevemente, omento raccolto da pazienti consenzienti non uremici che sono stati sottoposti a chirurgia addominale elettiva, ed è stato incubato a 0,05% (w /v) tripsina e 0,01% (w /v) EDTA per 20 min a 37 ° C. Le cellule mesoteliali raccolte sono state centrifugate a 150 g per 5 minuti e poi trasferiti in 75 cm 2 fiasche di coltura tissutale e coltivate in un umidificata al 5% CO 2 incubatore, in DMEM supplementato con 10% di siero fetale bovino (FCS ), 100 U /mL di penicillina, 100 ug /ml di streptomicina, 2 mmol /L di L-glutamina e 20 mmol /L idrossietil piperazina acido etansolfonico (HEPES, GIBCO BRL, USA). Media è stato cambiato ogni 2-3 giorni.
Umani linee di cellule di carcinoma gastrico, MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 e MGC-803, sono stati ottenuti dal Dipartimento di Biologia Cellulare, China Medical University , Cina. Queste cellule sono state coltivate in DMEM supplementato con 10% FCS, 100 U /mL di penicillina, 100 ug /ml streptomicina, e 2 mmol /L di L-glutammina in un umidificata al 5% CO 2 incubatore a 37 ° C.
Preparazione di mezzi condizionati senza siero
siero-Free Media condizionata (SF-CM) è stato preparato da cellule di cancro gastrico o normali cellule epiteliali gastriche come riportato in precedenza [1]. Brevemente, 5,0 × 10 5 cellule sono state seminate in 100 mm piastre di coltura tissutale con 10 mL DMEM, supplementato con 10% FCS e incubate a 37 ° C per 3 giorni. Per ottenere SF-CM, le cellule sono state lavate due volte con soluzione di tampone fosfato (PBS) e quindi incubate per 2 giorni con 3 ml di DMEM privo di siero. Il SF-CM è stato eluito e centrifugato a 1000 g per 5 minuti, passati attraverso i filtri (diametro dei pori: 0,45 um) e conservati a -20 ° C fino all'uso
Animali
Maschio C57BL /6 topi. (otto settimane di vita, del peso di 20 ± 2 g), sono stati ottenuti da stabulario China Medical University e alimentato con acqua purificata e uno stock dieta commerciale in una stanza con aria condizionata a 20-22 ° C.Animals utilizzati in questo studio sono stati mantenuti in conformità con la guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio pubblicato dal National Institutes of Health (NIH pubblicazione No. 85-23, riveduta 1996) e la politica di cura degli animali e del Comitato uso della China Medical University.
morfologica la valutazione al microscopio contrasto di fase
peritoneale cellule mesoteliali umane (HPMCs) sono state coltivate per subconfluence in un cm 50 2 piatto con DMEM contenente 10% FCS. Il mezzo poi è stato cambiato a (1) DMEM senza siero o (2) SF-CM da linee cellulari di cancro gastrico. I HPMCs a 24 pozzetti camere sono state esposte a soluzioni di test per 24 ore, e delicatamente lavate con PBS. Sono stati poi esaminati al microscopio a contrasto di fase per dimensione, forma, e l'integrità della membrana cellulare, citoplasma e nel nucleo. Microscopia elettronica a trasmissione

I HPMCs sono state coltivate per subconfluence in un 50 cm 2 piatto con DMEM contenente 10% FCS. Il mezzo poi è stato cambiato a (1) DMEM senza siero o (2) SF-CM da linee cellulari di cancro gastrico. Dopo incubazione per 24 ore, le cellule sono state tripsinizzate e poi fissati in ghiacciata 2,5% microscopia elettronica grade glutaraldeide in PBS (pH 7,3). I campioni sono stati lavati con PBS, post-fissate in 1% tetrossido di osmio con ferricianuro di potassio 0,1%, disidratati in una serie graduata di etanolo (30% -90%), ed inclusi in Epon. Semi-sottile (300 nm) sezioni sono state tagliate con un Reichart Ultracut (Reichart Ultracut (Leica, Germania), macchiato con lo 0,5% di toluidina blu, ed esaminati al microscopio ottico. Sezioni ultrasottili (65 nm) sono state colorate con il 2% acetato di uranile e citrato di piombo di Reynold, ed esaminato con un microscopio elettronico a trasmissione ad × 5000 o 8000 × ingrandimenti.
determinazione quantitativa del danno cellulare da MTT test
Il saggio MTT è stata effettuata per valutare la vitalità delle cellule mesoteliali peritoneali umane dopo il trattamento con SF-CM da linee cellulari di cancro gastrico. Le cellule in culture piastra a 96 pozzetti, dopo l'esposizione al controllo o soluzioni di prova per un determinato periodo di tempo (osservata a 12 ore, 24 ore e 48 ore), sono state incubate con 50 mg /ml MTT ad una diluizione di 1:10, in base al volume del terreno di coltura per 3 ore a 37 ° C. al termine del periodo di incubazione, la soluzione MTT è stato rimosso e 150 ml di DMSO è stato aggiunto a ciascun pozzetto, e agitata per sciogliere i cristalli formazon blu scuro, che si erano formate. La percentuale di cellule vitali è stata determinata misurando la densità ottica di ciascun campione a 480 nm con uno spettrofotometro. Tre culture sono state esposte a ciascuna soluzione ad ogni periodo di tempo. I mezzi di ogni gruppo di culture sono stati confrontati.
Citometria a flusso
Dopo l'incubazione nelle soluzioni di prova per 24 ore, 48 ore e 72 ore, le cellule sono state raccolte utilizzando tripsinizzazione. Le cellule sono state risospese in PBS alla concentrazione di 1 × 10 6 /mL e fissati in 2 mL di metanolo per 30 minuti a 4 ° C. Dopo che le cellule sono state fissate CNE2, la miscela è stata incubata in 0,5 mL di soluzione PI (0,05 mg /ml in 3,8 mol /L Na citrato) e 0,5 ml di RNasi A (0,5 mg /ml) a temperatura ambiente per 30 min. Infine, le cellule sono state risospese in 1 ml di PBS e analizzate mediante citometria di flusso secondo le istruzioni del produttore. Le cellule nel picco subdiploid stati considerati apoptotico.
Presenza istologica del peritoneo
Maschio C57BL /6 topi (otto settimane, del peso di 20 ± 2 g) sono stati utilizzati nel presente studio. L'esperimento ha seguito le linee guida per l'uso di animali da laboratorio nella ricerca e nell'insegnamento. I topi sono stati alimentati con un chow laboratorio di pellet di serie e sono stati forniti con acqua ad libitum
. I topi sono stati assegnati a caso ad uno dei tre gruppi (n = 5 o 6 in ciascun gruppo). I topi nel gruppo DMEM sono stati trattati con DMEM (100 ml /Kg) per iniezioni intraperitoneali nei giorni 1, 3, 5 e 7. I topi nel gruppo SF-CM sono stati trattati con 100 ml /Kg di SF-CM da cellule di cancro gastrico linee di iniezioni intraperitoneali nei giorni 1, 3, 5 e 7. Nulla è stato aggiunto al iniezioni per i topi di controllo. Dopo 29 giorni, i topi sono stati anestetizzati con etere etilico e sacrificati. peritoneums parietali sono state colorate con ematossilina e eosina (H & E) e la colorazione tricromica di Masson. cambiamenti morfologici del peritoneo parietale sono stati osservati al microscopio luce. Spessore della matrice extracellulare sottomesoteliale è stata determinata dopo le sezioni di tessuto avevano H & E e Masson colorazione. La media di 10 misurazioni indipendenti è stata calcolata per ogni sezione; i dati sono stati poi sintetizzati.
Western blotting
cellule mesoteliali peritoneali umane sono state coltivate per subconfluence in un cm 50 2 piatto con DMEM contenente 10% FCS. I media sono stati poi modificati per (1) SF-CM da gastrico delle cellule tumorali MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 e MGC-803; e (2) DMEM senza siero serve come controllo. La proteina è stato estratto in un tampone di lisi di serie con gli inibitori della proteasi (orthovanadate sodio, phenylmethylsulfonyl fluoro, leupeptina e aprotinina ottenuti da BioShop, Burlington, ON, Canada). Aliquote di 20 ug di lisato proteico è stato elettroforesi con un gel SDS-PAGE 12%, trasferiti su una membrana di nylon, e separatamente sondato con anticorpi per Bcl-2, Bax, caspasi-3 e caspasi-8. Dopo l'incubazione con l'anticorpo secondario, le macchie sono state sviluppate utilizzando un kit ECL Western Blot substrato (Abcam, USA).
Analisi statistica
Tutti i dati sono espressi come x
± sd
. Il confronto degli effetti del farmaco sono state effettuate utilizzando t
-test di Student. Un valore di <P
; 0.05 è stato considerato significativo.
Risultati
valutazione morfologica sotto un microscopio a contrasto di fase
Mentre HPMCs trattati solo in DMEM senza siero ha mostrato un tipico modello poligonale e ciottoli (Figura 1A.), Le cellule trattate con SF-CM da gastrico cellula tumorale MKN45 per 24 h cominciato ad avere cambiamenti morfologici, il più evidente dei quali erano esfoliazione e la comparsa di aree libere (Figura 1B). Figura 1 cambiamenti morfologici delle cellule mesoteliali peritoneali umane sotto il microscopio a contrasto di fase.
(A) monostrato di HPMCs poligonali e ciottoli come coltivate in DMEM senza siero. (B-D) aspetto espansa delle aree nude dopo il trattamento con SF-CM da linee di cellule di cancro gastrico MKN45, SGC7901, e BGC823. (Ingrandimento: × 40).
Microscopia elettronica a trasmissione
Dopo 24 h di SF-CM prodotti dal trattamento delle cellule del cancro gastrico, caratteristiche apoptotici (come la condensazione della cromatina nucleare, rughe delle membrane nucleari, la dilatazione del reticolo endoplasmatico, e relativamente normale struttura dei mitocondri) sono stati osservati al microscopio elettronico a trasmissione (TEM; figure 2A, B). Sotto TEM, la membrana nucleare è stato visto essere intatto, la cromatina condensata in masse, e sul confine della membrana o arco formatura (Figura 2C). Il germogliamento e la formazione di corpi apoptotici sono stati anche osservati (Figura 2C). Figura 2 Le cellule umane mesoteliali peritoneali (HPMC) 24 ore dopo incubazione con e senza SF-CM da cellule di cancro gastrico. Le cellule di controllo
(A) mostrano nuclei normali e reticoli endoplasmatico. (B) Le cellule trattate con SF-CM da cellule tumorali gastrico MKN1 mostrano cromatina condensata in masse, e sul confine della membrana o contenuti arco. In erba e la formazione dei corpi apoptotici sono state osservate (frecce B). (C) .Cells trattati con SF-CM da MKN45 cellule di cancro gastrico mostrano condensazione della cromatina nucleare (frecce in C). (D) Le cellule trattate con gastrica linea di cellule di cancro MGC-803 sono stati simili a B. Il germogliamento e la formazione dei corpi di apoptosi sono stati anche osservati.
MTT test
per valutare i potenziali effetti soppressivi di gastrico delle cellule tumorali SF-CM su HPMCs, abbiamo esaminato la sua curva di crescita sulla linea HPMC HMrSV5. Gastrico delle cellule tumorali SF-CM indotta soppressione della crescita nelle cellule HPMC, e lo ha fatto in un modo (figura 3A) dipendente dal tempo. Questo effetto è stato osservato a 0 h, 12 h, 24 he 48 h. Questi risultati indicano che il surnatante tumore induce danni alle cellule mesoteliali o apoptosi. Figura 3 apoptosi è stata quantificata mediante due metodi: MTT e citometria a flusso.
(A) vitalità di HMrSV5 cellule mesoteliali dopo il trattamento con SF-CM da cellule di cancro gastrico. (B) L'apoptosi è stata quantificata mediante citometria a flusso dopo il trattamento con SF-CM da cellule di cancro gastrico.
Citometria a flusso
Per quantificare la percentuale di cellule apoptotiche dopo il trattamento in vari periodi di tempo, le cellule mesoteliali sono state colorate con PI. Gastrico delle cellule tumorali SF-CM efficacemente indotto apoptosi nelle cellule mesoteliali e lo ha fatto in modo dose-dipendente dopo 48 ore (Figura 3.B). Questi risultati sono stati gli stessi di quelli per il saggio MTT
analisi morfometrica Istologia ed
morfologiche cambiamenti del peritoneo parietale sono stati analizzati con H &. E e Masson tricromica di colorazione. Tra topi normali, un monostrato di cellule mesoteliali ricoperto la superficie peritoneale senza ispessimento (figura 4 a, d). A causa apparente incompatibilità, i topi trattati con iniezioni intraperitoneali di DMEM avevano lieve ispessimento nella zona di collagene sottomesoteliale peritoneale (Figura 4 b, e); quelli iniettati per via intraperitoneale con gastrico delle cellule tumorali SF-CM aveva segnato ispessimento della zona compatta sottomesoteliale e una maggiore cellularità (figura 4 c, f). Figura 4 ematossilina /eosina (H & E) e Masson colorazione dei tessuti peritoneo.
Peritoneo tessuti provenienti da diversi gruppi sono stati ottenuti chirurgicamente e sottoposti a H & E e Masson colorazione. (A) Tutte le foto sono state ottenute a 40 × ingrandimento. peritoneo Normale costituita solamente da un monostrato di mesotelio con poco fibrosi (a, d). Peritoneo trattate con DMEM ha anche mostrato una piccola quantità di tessuto connettivo sotto le cellule mesoteliali (frecce in b, e). Al contrario, peritoneo trattati con SF-CM da cellule di cancro gastrico è stato sostanzialmente ispessita e conteneva fibrosi estese (frecce in c, f). parametri (B) morfometriche dei tessuti peritoneali. I dati sono espressi come media ± errore standard della media di almeno 3 esperimenti separati. * P
< 0.05.
Western blotting Abbiamo poi cercato di delineare ulteriormente i meccanismi che sono alla base degli effetti combinati di gastrico delle cellule tumorali SF-CM sulle proteine ​​apoptosi correlati (caspasi-3, caspasi-8, Bax, Bcl-2) . I livelli di queste proteine ​​sono state valutate utilizzando l'analisi Western Blot. livelli di proteina Bax caspasi-3, caspasi-8, e aumentati dopo 48 ore di trattamento con SF-CM dalla maggior parte delle cellule di cancro gastrico, mentre Bcl-2 livelli della proteina sono diminuiti (Figura 5). Beta-actina è stata usata come controllo di caricamento. Figura 5 Analisi Western Blot dei livelli di proteine ​​apoptosi correlati (caspasi-3, caspasi-8, Bax e Bcl-2) in HPMCs con SF-CM di diverse cellule del cancro trattamento linee gastrico.
siero-fame HPMCs sono state incubate con SF-CM da diverse linee di cellule di cancro gastrico per un massimo di 48 ore; proteina cellulare totale è stato estratto e sottoposto ad analisi Western Blot
. Discussione
maggior parte degli studi di post-operatorio mostrano tumore recidiva che traumatizzati superfici mesothelial sono i siti per l'adesione delle cellule tumorali preferito. Recentemente, dissociato cellule tumorali all'interno di cavità peritoneale, e le proteine ​​specificamente espresse in metastasi peritoneali di carcinoma gastrico sono stati trovati per essere collegato a prognosi del cancro. Mentre gli approcci immunogenetici mostrano una grande promessa per il trattamento delle metastasi peritoneali di carcinoma gastrico [13-15], gli effetti delle cellule di cancro gastrico sulle cellule mesoteliali sono poco conosciuti.
Studio ha mostrato che le cellule mesoteliali offerta protezione contro le metastasi peritoneali di tumore nel mesothelia intatte [9, 16, 17]. Paget et al
ha proposto un "seme e suolo" teoria: le metastasi si verifica solo quando le cellule tumorali vivono e crescono in un ambiente favorevole [18]. Il peritoneo potrebbe essere un ambiente così favorevole per cellule di cancro gastrico scirrhous; possibilmente cellule mesoteliali impediscono alle cellule tumorali di infiltrarsi nel tessuto connettivo sottomesoteliale. Masakazu et al.
[1] ha dimostrato che adiacenti cellule mesoteliali confluenti ostacolato l'invasione da parte delle cellule tumorali. Inoltre, Kiyasu et al.
[3] hanno riportato che, prima dell'impianto peritoneale di cellule tumorali, cellule mesoteliali diventano emisferica e esfoliare dal peritoneo. La nostra ipotesi è che dopo sierosa sono esposti, le cellule tumorali libere capannone da primari siti di cancro gastrico nella cavità addominale inducono l'apoptosi nelle cellule mesoteliali peritoneali [19-21]. Come risultato, le cellule mesoteliali diventano emisferica ed esfoliazione avviene. aree nude di tessuto connettivo sottomesoteliale sono quindi esposti alla cavità peritoneale; questo sito peritoneale ferito diventa un ambiente favorevole per le metastasi peritoneali [22-24].
Avevamo già mostrato gastrica surnatante delle cellule del cancro per ridurre in modo significativo la vitalità delle cellule mesoteliali, ma normale linea di cellule epiteliali gastriche GES-1 esercita alcun effetto sulla cellule mesoteliali [5]. Il nostro studio dimostra anche presente che le cellule mesoteliali in coltura diventano emisferica, ed esfoliazione si verificano quando è stato aggiunto terreno privo di siero condizionato da cellule di cancro gastrico, come mostrato al microscopio a contrasto di fase. Inoltre, la riduzione citoplasmatica, condensazione nucleare e formazione di corpi apoptotici extracellulari e /o intracellulari sono stati osservati al microscopio elettronico a trasmissione. L'apoptosi è stata quantificata due metodi: MTT e citometria a flusso. Noi ipotizziamo che liberi cellule di cancro gastrico nella cavità addominale inducono l'apoptosi delle cellule mesoteliali e causa esfoliazione, portando infine alla metastasi. Questo può essere il meccanismo attraverso il quale le cellule tumorali aderiscono al sottomesoteliale tessuto connettivo, anche se le cellule mesoteliali sono comunque ben organizzati e confluenti. Sono necessari ulteriori studi per caratterizzare SF-CM rilasciato da cellule di cancro gastrico.
Cellule di cancro gastrico può indurre l'apoptosi attraverso percorsi apoptotici mitochondria- e morte recettore-dipendente. cellule di cancro gastrico sopprimere la crescita delle cellule mesoteliali inibendo la proliferazione attraverso la promozione di apoptosi caspasi-dipendente. Caspasi sono citoplasmatici proteasi cisteina specifici aspartato, e svolgono un ruolo importante in apoptosi [25]. La via apoptotica morte recettore-dipendente viene attivato sulla superficie cellulare e richiede l'attivazione di caspasi-8, mentre il percorso mitocondrio-dipendente è avviata dal rilascio di mitocondriale citocromo c nel citoplasma e richiede l'attivazione di caspasi-9. Successivamente, caspasi-8 o -9 possono attivare caspasi-3, che a sua volta gli obiettivi e degrada le proteine ​​cellulari specifiche e vitali, in ultima analisi, con conseguente degradazione del DNA nucleare e la morte cellulare per apoptosi [26]. Bcl-2, un inibitore della via apoptosi mitocondriale, esplica la sua azione di blocco controparti proapoptotiche, che a sua volta impedisce il rilascio del citocromo c e l'attivazione delle caspasi [27]. Bax è un promotore di morte, che viene neutralizzato da heterodimerization con Bcl-2. Bax trasloca nella membrana mitocondriale esterna seguita da fuoriuscita di citocromo c dai mitocondri nel citosol [28]. Caspasi-9 e caspasi-3 sono attivate in sequenza, e questi eventi portano alla rottura del DNA cromosomico. Poiché vi è un'elevata possibilità che gastrico apoptosi mediata tumore delle cellule mesoteliali è il risultato della regolazione di Bcl-2 e Bax, identificazione dei composti target è necessario.
In questo studio, abbiamo utilizzato un modello murino di La sclerosi peritoneale indotta da ripetute iniezioni di cellule di cancro gastrico SF-CM. Sperimentale fibrosi peritoneale indotta da iniezioni intraperitoneali ripetute di cellule di cancro gastrico SF-CM potrebbe sclerosi peritoneale non completamente imitare osservato nei pazienti (diffuso carcinoma infiltrante o di tipo VI carcinoma del Bormann). In effetti, i risultati patologici di carcinosi peritoneale e la sclerosi peritoneale non sono uniformi e vari fattori sono coinvolti. Inoltre, si osservano alcune caratteristiche comuni durante lo sviluppo della sclerosi peritoneale tra modelli sperimentali animali gastrico delle cellule tumorali SF-CM-indotte e pazienti umani sottoposti a carcinosi peritoneale. Questi risultati istologici comuni includono una maggiore accumulo di collagene interstiziali, come di tipo I e collagene III, infiltrazione di monociti /macrofagi, aumento di a-SMA + miofibroblasti, e la densità vascolare nel peritoneo [7, 8]. Queste somiglianze nelle alterazioni delle membrane peritoneali tra modelli sperimentali e pazienti carcinomatosi peritoneali umani suggeriscono che si tratta di un modello appropriato per l'esame l'efficacia di vari potenziali reagenti terapeutici per la regolazione carcinosi peritoneale.
Conclusioni
Questi risultati dimostrano che il cancro gastrico cellule possono indurre apoptosi e fibrosi di cellule mesoteliali peritoneali umane attraverso surnatanti nei primi anni di metastasi peritoneale, e indicano che i fattori solubili nella cavità peritoneale possono influenzare la morfologia e la funzione delle cellule mesoteliali modo che l'ambiente risultante diventa favorevole a metastasi peritoneali.
Abbreviazioni
HPMCs:
cellule mesoteliali peritoneali umane
SF-CM:.
senza siero dei media condizionale

Dichiarazione
ringraziamenti
Gli autori desiderano esprimere il loro sincero ringraziamento al Dr. Yan canzone per la sua assistenza tecnica. Questo studio è stato sostenuto da una sovvenzione della Nazionale di Scienze Naturali Fondazione della Cina (NO. 81.071.956 e 81.101.884).
Autori file originali presentati per
di seguito sono riportati i link ai file degli autori originali inviati per le immagini. 'file originale per la figura 1 12876_2011_768_MOESM2_ESM.jpeg Autori 12876_2011_768_MOESM1_ESM.jpeg autori file originale per la figura 2' file originale per la figura 3 12876_2011_768_MOESM4_ESM.jpeg Autori 12876_2011_768_MOESM3_ESM.bmp autori file originale per la figura 4 file originale 12876_2011_768_MOESM5_ESM.bmp degli autori per la figura 5 Conflitto di interessi
gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco.
contributi degli autori
DN, Z-DL e F-NL effettuati studi sulla morfologia e l'attività biologica di cellule mesoteliali peritoneali in vitro
e in vivo
. ZS, Z-FM e FL partecipato alle vivo
studi in. YX e C-GJ hanno partecipato negli studi morfologia. DN e HX hanno partecipato alla progettazione dello studio ed eseguito l'analisi statistica. HX e DN concepito dello studio, e partecipato alla sua progettazione e coordinamento e ha contribuito a redigere il manoscritto. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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