Gástrico sobrenadante de células de cáncer causa la apoptosis y fibrosis en los tejidos peritoneales y se traduce en un ambiente favorable para las metástasis peritoneales, in vitro e in vivo

Gástrica sobrenadante de células de cáncer provoca la apoptosis y fibrosis en los tejidos peritoneales y los resultados en un entorno favorable a las metástasis peritoneales, in vitro e in vivo
Antecedentes
Resumen
En este estudio, hemos examinado efectos de los factores solubles liberados por las células de cáncer gástrico en las células mesoteliales peritoneales in vitro e in vivo

.
Métodos
HMrSV5, una línea de células mesoteliales peritoneales humanas, se incubó con sobrenadantes de células de cáncer gástrico. No se observaron cambios morfológicos de las células HMrSV5. Se observó la apoptosis de células HMrSV5 bajo un microscopio electrónico de transmisión y se determina cuantitativamente mediante el ensayo de MTT y citometría de flujo. Las expresiones de las proteínas relacionadas con la apoptosis (caspasa-3, caspasa-8, Bax, Bcl-2) fueron evaluados inmunoquımicamente.
: Resultados de la No se observaron cambios morfológicos conspicuos que indican la apoptosis en las células HMrSV5 24 h después del tratamiento con los sobrenadantes de células de cáncer gástrico. In vivo
, los tejidos peritoneales tratados con sobrenadante de células de cáncer gástrico se espesaron sustancialmente y contenían fibrosis extensa.
Conclusiones
Estos hallazgos demuestran que los sobrenadantes de células de cáncer gástrico pueden inducir la apoptosis y fibrosis en HMrSV5 células mesoteliales peritoneales humanos por medio de sobrenadantes de la metástasis peritoneal temprana, de una manera dependiente del tiempo, e indican que los factores solubles en la cavidad peritoneal sobre la morfología y función de las células mesoteliales para que el ambiente resultante puede llegar a ser favorable para las metástasis peritoneales.
Palabras clave
peritoneal carcinomatosis neoplasias del estómago la apoptosis de células mesoteliales fibrosis Antecedentes
la carcinomatosis peritoneal limita en gran medida la mejora de la prognosis de cáncer gástrico pacientes después de la cirugía [1]. Resultados de metástasis peritoneales en una cascada metastásica, por lo general se producen en el desarrollo de tumores en etapa tardía, lo que contribuye significativamente a la mortalidad relacionada con el cáncer gástrico. Los mecanismos de la metástasis peritoneal de infiltrar difusamente carcinoma no se entienden claramente.
El entorno estroma peritoneal favorece la proliferación de las células tumorales al servir como una rica fuente de factores de crecimiento y quimiocinas conocidos por estar implicados en la metástasis tumoral. Las moléculas que median en esta cascada no se han investigado extensamente [2]. Según se informa, las células mesoteliales podrían evitar la invasión del cáncer y someterse a cambios morfológicos en respuesta a factores solubles liberados por las células del cáncer [3]. Las moléculas específicas que participan en este proceso están dictadas por las características intrínsecas de las células tumorales metastásicas. Las células tumorales tienen que adherirse firmemente sobre la monocapa submesotelial y penetrar en la monocapa mesotelial para la invasión. Buck et al.
[4] exploró el efecto protector de la capa mesotelial, utilizando un modelo de rata en el que el revestimiento mesotelial de peritoneo parietal se eliminó en las ratas experimentales, dejando intacta la membrana basal. Anteriormente puso de manifiesto que la capa de confluencia, las células mesoteliales intactas impide la invasión de células de cáncer de la cavidad abdominal. Sin embargo, una vez que se interrumpe la integridad de esta barrera, se puede producir metástasis, porque el peritoneo ofrece un entorno favorable para las células de cáncer gástrico para crecer [5-9]. Estudios adicionales han demostrado que, antes de la unión de las células de cáncer gástrico en el peritoneo, las células mesoteliales adquieren forma hemisférica y empezar a arrojar. Como resultado, las zonas desnudas del tejido conectivo submesotelial están expuestos a la cavidad peritoneal [10 a 12]. Es probable que la penetración de la monocapa mesotelial por las células tumorales inicia con la apoptosis de células mesoteliales inducida por tumor. En este estudio, se examinaron los efectos de los factores solubles liberados por las células de cáncer gástrico sobre la morfología y la actividad biológica de las células mesoteliales peritoneales in vitro e in vivo.

Métodos Reactivos

3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazoliumbromide (MTT) se obtuvo de Fluka, EE.UU.. El yoduro de propidio (PI) se obtuvo de Biosharp, EE.UU.. Bcl-2, Bax, caspasa-3, caspasa-8 y anticuerpos primarios de actina, y el anticuerpo secundario, anticuerpo de cabra anti-IgG de ratón se obtuvieron de Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, EE.UU.. medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) y suero de ternera fetal (FCS) se obtuvieron de Gibco BRL (Grand Island, NY, EE.UU.). Otros reactivos de laboratorio se obtuvieron de Sigma, EE.UU.. Se utilizó un microscopio de contraste de fase (Japón Nikon), microscopio electrónico de transmisión (Hitachi H-6001, Japón). Las líneas celulares y cultivo celular

La línea de células mesoteliales peritoneales humanas HMrSV5 se obtuvo del Departamento de Biología Celular , Universidad médica de china, china. HMrSV5 se aisló originalmente de epiplón humano. Brevemente, epiplón recoge de consentir pacientes no urémicos que fueron sometidos a cirugía abdominal electiva, y se incubó en 0,05% de tripsina y 0,01% (v w /) EDTA durante 20 minutos a 37 ° C (w /v). Las células mesoteliales cosechadas se centrifugaron a 150 g durante 5 min y después se transfirieron a 75 cm 2 matraces de cultivo tisular y se cultivaron en una atmósfera humidificada 5% de CO 2 incubadora, en DMEM suplementado con suero de ternera fetal 10% (FCS ), 100 U /ml de penicilina, 100 mg /ml de estreptomicina, 2 mmol /l de L-glutamina y 20 mmol /L hidroxietil piperazina etanosulfónico (HEPES, Gibco BRL, EE.UU.). El medio se cambió cada 2-3 días.
Líneas celulares de carcinoma gástrico humano, MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 y el MGC-803, se obtuvieron del Departamento de Biología Celular de la Universidad Médica de China , China. Estas células se cultivaron en DMEM suplementado con 10% de FCS, 100 U /ml de penicilina, 100 mg /ml de estreptomicina y 2 mmol /L de L-glutamina en un humidificado 5% de CO 2 incubadora a 37 ° C.
Preparación de medios condicionados libres de suero
libre de suero medio acondicionado (SF-CM) se preparó a partir de células de cáncer gástrico o de las células epiteliales gástricas normales como [1] se informó anteriormente. Brevemente, 5,0 x 10 5 células fueron sembradas en placas de cultivo de tejido de 100 mm con 10 ml DMEM, suplementado con 10% de FCS y se incubaron a 37 ° C durante 3 días. Para obtener SF-CM, las células se lavaron dos veces con solución tamponada con fosfato (PBS) y después se incubaron durante 2 días con 3 ml de DMEM libre de suero. El SF-CM se eluyó y se centrifugó a 1000 g durante 5 min, pasado a través de filtros (tamaño de poro: 0,45 m) y se almacena a -20 /6 ratones
° C hasta su uso Animales
Hombre C57BL. (ocho semanas de edad, con un peso de 20 ± 2 g), se obtuvieron de animalario de la Universidad médica de china y se alimenta con agua purificada y una dieta stock comercial en una habitación con aire acondicionado a 20-22 ° C.Animals utilizados en este estudio se mantuvieron de conformidad con la Guía para el Cuidado y uso de Animales de laboratorio publicada por los Institutos nacionales de Salud de Estados Unidos (NIH publicación No. 85-23, revisada en 1996) y la política de Cuidado de Animales y el empleo Comisión de la Universidad de Medicina china.
morfológica evalúe con un microscopio de contraste de fases
células mesoteliales peritoneales humanas (HPMC) se cultivaron a subconfluencia en un 50 cm 2 plato con DMEM que contenía 10% de FCS. El medio después se cambió a (1) DMEM libre de suero o (2) SF-CM a partir de líneas celulares de cáncer gástrico. Las HPMC en cámaras de 24 pocillos se expusieron a soluciones de ensayo durante 24 h, y se lavaron suavemente con PBS. Ellos fueron examinados bajo un microscopio de contraste de fase para el tamaño, la forma y la integridad de la membrana celular, el citoplasma y núcleo. Microscopía electrónica de transmisión
México La HPMC se cultivaron a subconfluencia en un 50 cm 2 plato con DMEM que contiene 10% de FCS. El medio después se cambió a (1) DMEM libre de suero o (2) SF-CM a partir de líneas celulares de cáncer gástrico. Después de la incubación durante 24 h, las células se trataron con tripsina y después se fijaron en 2,5% microscopía electrónica de glutaraldehído grado enfriado en hielo en PBS (pH 7,3). Las muestras fueron lavadas con PBS, post fija en 1% de tetróxido de osmio con ferricianuro de potasio 0,1%, se deshidrataron a través de una serie de etanol (30% -90%), y se incluyeron en Epon. Semi-fino (300 nm) se cortaron secciones usando un Reichart Ultracut (Reichart Ultracut (Leica, Alemania), se tiñeron con 0,5% de azul de toluidina, y se examinan bajo un microscopio de luz. Los cortes ultrafinos (65 nm) fueron teñidas con acetato de uranilo al 2% y citrato de plomo de Reynold, y se examina en un microscopio electrónico de transmisión en × 5000 × 8000 o ampliación.
se realizó la determinación cuantitativa de daño celular mediante el ensayo de MTT Francia El ensayo de MTT para evaluar la viabilidad de las células mesoteliales peritoneales humanos después del tratamiento con el SF-CM a partir de líneas celulares de cáncer gástrico. Las células en cultivos en placas de 96 pocillos, después de la exposición para controlar o soluciones de prueba por un período de tiempo específico (observado a las 12 h, 24 hy 48 h), se incubaron con 50 mg /ml MTT a una dilución de 1:10, basado en el volumen de medio de cultivo durante 3 horas a 37 ° C. al final del tiempo de incubación, la solución de MTT se eliminó y 150 l de DMSO se añadió a cada pocillo, y se agitó a disolver los cristales formazon de color azul oscuro que se habían formado. La proporción de células viables se determinó midiendo la densidad óptica de cada muestra a 480 nm con un espectrofotómetro. Tres cultivos fueron expuestos a cada solución en cada periodo de tiempo. Se compararon las medias de cada grupo de cultivos.
citometría de flujo
Después de la incubación en las soluciones de ensayo durante 24 h, 48 h y 72 h, se recogieron las células mediante tripsinización. Las células se resuspendieron en PBS a una concentración de 1 × 10 6 /mL y se fijaron en 2 ml de metanol durante 30 min a 4 ° C. Después se fijaron las células CNE2, la mezcla se incubó en 0,5 ml de solución de PI (0,05 mg /ml en 3,8 mol /L de citrato de Na) y 0,5 ml de ARNasa A (0,5 mg /ml) a temperatura ambiente durante 30 min. Finalmente, las células se resuspendieron en 1 ml de PBS y se analizaron por citometría de flujo de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las células en el pico subdiploide se consideraron apoptóticas.
Apariencia histológica del peritoneo
Male ratones C57BL /6 (ocho semanas de edad, con un peso 20 ± 2 g) fueron utilizados en el presente estudio. El experimento siguió las directrices para el uso de animales de laboratorio en investigación y enseñanza. Los ratones fueron alimentados con una comida de laboratorio de pellets estándar y se les proporcionó agua ad libitum
. Los ratones fueron asignados aleatoriamente a uno de tres grupos (n = 5 o 6 en cada grupo). Los ratones en el grupo de DMEM se trataron con DMEM (100 ml /kg) por inyección intraperitoneal en los días 1, 3, 5 y 7. Los ratones en el grupo de SF-CM fueron tratados con 100 ml /Kg de SF-CM de células de cáncer gástrico líneas por inyección intraperitoneal en los días 1, 3, 5 y 7. Nada se añadió a las inyecciones para los ratones de control. Después de 29 días, los ratones fueron anestesiados con éter etílico y se sacrificaron. peritoneos parietales fueron teñidas con hematoxilina y eosina (H & E) y tinción con tricrómico de Masson. Los cambios morfológicos del peritoneo parietal fueron observadas por microscopio de luz. Se determinó espesor de la matriz extracelular submesotelial después de las secciones de tejido tuvieron H & E y tinción Masson. La media de 10 mediciones independientes se calculó para cada sección; a continuación se resumen los datos.
Western Blot
células mesoteliales peritoneales humanas fueron cultivadas a subconfluencia en un 50 cm 2 plato con DMEM que contenía 10% de FCS. Los medios se cambiaron entonces a (1) SF-CM de células de cáncer gástrico MKN-45, MKN-1, SGC-7901, BGC-823 y MGC-803; y (2) DMEM libre de suero que sirve como control. La proteína se extrajo en un tampón de lisis estándar con inhibidores de proteinasa (ortovanadato de sodio, fluoruro de fenilmetilsulfonilo, leupeptina, aprotinina y obtenidos a partir de Bioshop, Burlington, ON, Canadá). Partes alícuotas de 20 g de lisado de proteína se sometieron a electroforesis con un gel de SDS-PAGE 12%, se transfirieron a una membrana de nylon, y se sondearon por separado con anticuerpos para Bcl-2, Bax, caspasa-3 y caspasa-8. Después de la incubación con el anticuerpo secundario, blots fueron desarrollados utilizando un kit ECL Western Blot sustrato (Abcam, EE.UU.). El análisis estadístico

Todos los datos se expresan como x
± sd
. Las comparaciones de los efectos de drogas se hicieron mediante la t de Student
. Un valor de P <
; 0,05 se consideraron significativos.
Resultados
Evaluación morfológica bajo un microscopio de contraste de fase
Mientras HPMC tratados solamente en DMEM libre de suero mostró una típica poligonal y el patrón de adoquines (Figura 1A.), Las células tratadas con SF-CM de células de cáncer gástrico MKN45 durante 24 h comenzó a tener cambios morfológicos, el más evidente de los cuales eran exfoliación y la aparición de zonas desnudas (Figura 1B). Figura 1 Los cambios morfológicos de las células mesoteliales peritoneales humanos bajo el microscopio de contraste de fase. gratis (A) monocapa de HPMC poligonales y adoquines similares cultivadas en DMEM libre de suero. (B-D) Se exfolia aparición de zonas desnudas después del tratamiento con SF-CM a partir de líneas celulares de cáncer gástrico MKN45, SGC7901, y BGC823. (Ampliación: × 40).
Microscopía Electrónica de Transmisión
Después de 24 h de SF-CM del tratamiento celular de cáncer gástrico, características apoptóticas (tales como la condensación de la cromatina nuclear, las arrugas de las membranas nucleares, dilatación del retículo endoplásmico, y la estructura relativamente normal de las mitocondrias) se observaron bajo el microscopio electrónico de transmisión (TEM; las Figuras 2A, B). Bajo TEM, la membrana nuclear se observó a estar intacto, la cromatina se condensa en masas, y en el límite de la membrana o la formación de arco (Figura 2C). La brotación y la formación de los cuerpos de apoptosis también se observaron (Figura 2C). Figura 2 células mesoteliales peritoneales Humanos (HPMC) 24 h después de la incubación con y sin SF-CM de células de cáncer gástrico. Las células de control
(A) muestran núcleos normales y retícula endoplásmico. (B) Las células tratadas con SF-CM de células de cáncer gástrico MKN1 muestran cromatina condensada en masas, y en el límite de la membrana o la formación de arco. Brotación y la formación de los cuerpos de apoptosis se observaron (flechas en B). (C) .Cells tratada con SF-CM de MKN45 células de cáncer gástrico muestran la condensación de la cromatina nuclear (flechas en C). (D) células tratadas con la línea celular de cáncer gástrico MGC-803 fueron similares a B. florecimiento y la formación de los cuerpos de la apoptosis también se observaron.
MTT ensayo
para evaluar el potencial de efectos supresores de células de cáncer gástrico SF-CM de HPMC, examinamos su curva de crecimiento en la línea de HPMC HMrSV5. celular de cáncer gástrico SF-CM induce supresión del crecimiento en las células de HPMC, y lo hizo de una manera dependiente del tiempo (Figura 3A). Este efecto se observó a las 0 h, 12 h, 24 hy 48 h. Estos resultados indican que el sobrenadante tumor induce daño de las células mesoteliales o apoptosis. Figura 3 La apoptosis se cuantificó mediante dos métodos: MTT y citometría de flujo. gratis (A) La viabilidad de las células mesoteliales HMrSV5 después del tratamiento con SF-CM de células de cáncer gástrico. (B) La apoptosis se cuantificó por citometría de flujo después del tratamiento con SF-CM de células de cáncer gástrico.
Citometría de flujo
a cuantificar el porcentaje de células apoptóticas después del tratamiento en diversos períodos de tiempo, las células mesoteliales se tiñeron con PI. celulares de cáncer gástrico SF-CM induce eficazmente la apoptosis en las células mesoteliales y lo hizo de una manera dependiente de la dosis después de 48 h (Figura 3.B). Estos resultados fueron los mismos que para el ensayo de MTT
Histología y análisis morfométrico
cambios morfológicos del peritoneo parietal se analizaron mediante H &. E y de Masson tinción tricrómica. Entre los ratones normales, una monocapa de células mesoteliales cubrió la superficie peritoneal sin ningún engrosamiento (Figura 4 a, d). Debido a la aparente incompatibilidad, los ratones que recibieron inyecciones intraperitoneales de DMEM tenían ligero engrosamiento en la zona de colágeno submesotelial peritoneal (Figura 4 b, e); los inyectados por vía intraperitoneal con células de cáncer gástrico SF-CM había marcado engrosamiento de la zona compacta submesotelial y el aumento de la celularidad (Figura 4 C, F). Figura 4 hematoxilina /eosina (H & E) y tinción de Masson de tejidos peritoneo. tejidos
Peritoneo de diferentes grupos se obtuvieron quirúrgicamente y se sometieron a H & E y tinción Masson. (A) Todas las fotos se obtuvieron a 40 aumentos. peritoneo normal consiste en solamente una monocapa de mesotelio con poco fibrosis (a, d). Peritoneo tratados con DMEM también mostró pequeñas cantidades de tejido conectivo debajo de las células mesoteliales (flechas en b, e). Por el contrario, el peritoneo tratada por SF-CM de células de cáncer gástrico se espesó considerablemente y contenía fibrosis extensa (flechas en C, F). parámetros (B) morfométricos de los tejidos peritoneales. Los datos se expresan como la media ± error estándar de la media de al menos 3 experimentos separados. * P Hotel < 0.05.
Western Blot
A continuación, trató de definir con mayor precisión los mecanismos que subyacen a los efectos combinados de la célula de cáncer gástrico SF-CM sobre las proteínas relacionadas con la apoptosis (caspasa-3, caspasa-8, Bax, Bcl-2) . Los niveles de estas proteínas se evaluaron usando análisis de Western blot. los niveles de proteína Bax caspasa-3, caspasa-8, y aumentaron después de 48 h de tratamiento con SF-CM de la mayoría de células de cáncer gástrico, mientras que los niveles de Bcl-2 de proteínas disminuyó (Figura 5). Beta-actina se utilizó como control de carga. Figura 5 Western blot de los niveles de proteínas relacionadas con la apoptosis (caspasa-3, caspasa-8, Bax y Bcl-2) en HPMC con SF-CM de diferentes líneas de tratamiento de células de cáncer gástrico.
privadas de suero se incubaron con HPMC SF-CM de diferentes líneas celulares de cáncer gástrico para un máximo de 48 h; proteína celular total se extrajo y se sometió a análisis de transferencia Western.
Discusión
mayoría de los estudios de post-operatorio espectáculo recurrencia del tumor que traumatizados superficies mesoteliales son sitios para la adhesión de células tumorales preferidos. Recientemente, disociado células cancerosas dentro de las cavidades peritoneales, y las proteínas expresadas específicamente en la metástasis peritoneal de carcinoma gástrico se encontró que estar relacionado con el pronóstico de cáncer. Si bien los enfoques inmunogenéticos muestran una gran promesa en el tratamiento de metástasis peritoneal de carcinoma gástrico [13-15], los efectos de células de cáncer gástrico en las células mesoteliales son poco conocidos.
Estudio mostró que las células mesoteliales proporcionan protección contra la metástasis peritoneal de tumor en mesotelios intactas [9, 16, 17]. Paget et al
propuso una "semilla y el suelo" teoría: la metástasis sólo se produce cuando las células tumorales viven y crecen en un ambiente favorable [18]. El peritoneo podría ser un entorno favorable para las células de cáncer gástrico escirrosos; posiblemente células mesoteliales evitan que las células cancerosas se infiltren en el tejido conectivo submesotelial. Masakazu et al.
[1] demostró que las células mesoteliales adyacentes confluentes obstaculizaron la invasión de las células cancerosas. Además, Kiyasu et al.
[3] informó de que, antes de la implantación peritoneal de las células cancerosas, las células mesoteliales se convierten semiesférica y exfoliar del peritoneo. Nuestra hipótesis es que después de serosa están expuestos, las células cancerosas se desprenden de los sitios libres de cáncer gástrico primario en la cavidad abdominal inducen apoptosis en las células mesoteliales peritoneales [19-21]. Como resultado, las células mesoteliales se convierten semiesférica y la exfoliación tiene lugar. áreas desnudas de tejido conectivo submesotelial están así expuestos a la cavidad peritoneal; peritoneal este sitio lesionado se convierte en un entorno favorable para la metástasis peritoneal [22-24].
Nos había demostrado sobrenadante celular de cáncer gástrico para reducir significativamente la viabilidad de las células mesoteliales, pero la línea de células epiteliales gástrica normal GES-1 ejerce ningún efecto sobre la células mesoteliales [5]. Nuestro presente estudio también demuestra que las células mesoteliales cultivadas se vuelven semiesférica, y se producen exfoliación cuando se añadió medio libre de suero condicionado por células de cáncer gástrico, como se muestra por microscopía de contraste de fase. Además, se observaron reducción citoplasmática, condensación nuclear y la formación de cuerpos apoptóticos extracelulares y /o intracelulares bajo el microscopio electrónico de transmisión. La apoptosis se cuantificó mediante dos métodos: MTT y citometría de flujo. Los autores especulan que las células de cáncer gástrico libres en la cavidad abdominal inducen la apoptosis de las células mesoteliales y causa la exfoliación, que finalmente llevan a la metástasis. Este puede ser el mecanismo por el cual las células cancerosas se adhieren a submesoteliales tejido conectivo, aunque las células mesoteliales son todavía bien organizadas y confluente. Se necesitan más estudios para identificar el SF-CM liberado de las células de cáncer gástrico.
células de cáncer gástrico puede inducir la apoptosis a través de las vías de apoptosis dependientes del receptor mitochondria- y la muerte. células de cáncer gástrico suprimen el crecimiento de células mesoteliales mediante la inhibición de la proliferación a través de la promoción de la apoptosis dependiente de caspasa. Las caspasas son citoplasmáticas proteasas de cisteína-aspartato específica, y juegan un papel importante en la apoptosis [25]. La ruta apoptótica de la muerte dependiente del receptor se activa en la superficie celular y requiere la activación de la caspasa-8, mientras que la vía dependiente de mitocondria se inicia por la liberación de citocromo c mitocondrial en el citoplasma y requiere la activación de la caspasa-9. Posteriormente, la caspasa-8 o -9 pueden activar la caspasa-3, lo que a su vez objetivos y degrada las proteínas celulares específicas y vitales, en última instancia resulta en la degradación del ADN nuclear y la muerte celular por apoptosis [26]. Bcl-2, un inhibidor de la vía de la apoptosis mitocondrial, ejerce su acción mediante el bloqueo de homólogos proapoptóticos, que a su vez impide la liberación de citocromo c y la activación de las caspasas [27]. Bax es un promotor de la muerte, que se neutraliza por heterodimerización con Bcl-2. Bax se transloca en la membrana mitocondrial externa, seguido de filtración de citocromo c de la mitocondria en el citosol [28]. Caspasa-9 y caspasa-3 se activan secuencialmente, y estos acontecimientos conducen a la ruptura del ADN cromosómico. Como hay una posibilidad significativa de que el cáncer de apoptosis mediada por células gástrico de células mesoteliales es el resultado de la regulación de Bcl-2 y Bax, la identificación de sus compuestos diana es necesario.
En este estudio, se utilizó un modelo experimental de ratón de esclerosis peritoneal inducida por inyecciones repetidas de células de cáncer gástrico SF-CM. La fibrosis peritoneal experimental inducida por repetidas inyecciones intraperitoneales de células de cáncer gástrico SF-CM podría esclerosis peritoneal no imitan completamente observada en los pacientes (la infiltración difusa de carcinoma o carcinoma VI Tipo de Bormann). De hecho, los hallazgos patológicos de la carcinomatosis peritoneal y la esclerosis peritoneal no son uniformes y diversos factores están involucrados. Además, se observaron algunas características comunes durante el desarrollo de la esclerosis peritoneal entre modelos animales experimentales inducidos-SF-CM de células de cáncer gástrico y los pacientes humanos sometidos a carcinomatosis peritoneal. Estos hallazgos histológicos comunes incluyen el aumento de acumulación de colágenos intersticiales tales como el tipo I y el colágeno III, la infiltración de monocitos /macrófagos, aumento de la a-SMA + miofibroblastos, y la densidad vascular en el peritoneo [7, 8]. Estas similitudes en alteraciones de las membranas peritoneales entre los modelos experimentales y los pacientes carcinomatosis peritoneal humanos sugieren que este es un modelo apropiado para examinar la eficacia de varios reactivos terapéuticos potenciales para la regulación de carcinomatosis peritoneal.
Conclusiones
Estos hallazgos demuestran que el cáncer gástrico células pueden inducir la apoptosis y la fibrosis de las células mesoteliales peritoneales humanos por medio de sobrenadantes en la metástasis peritoneal temprana, e indican que los factores solubles en la cavidad peritoneal pueden afectar a la morfología y función de las células mesoteliales de modo que el entorno resultante se hace favorable a las metástasis peritoneales.
abreviaciones
HPMC:
células mesoteliales peritoneales humanas
SF-CM:.
libre de suero medios condicional

Declaraciones
Agradecimientos
Los autores desean expresar su agradecimiento al Dr. Yan canción por su asistencia técnica. Este estudio fue apoyado por una beca de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (NO. 81071956 y 81101884).
Los autores originales de los archivos de imágenes presentado
A continuación se presentan los enlaces a los archivos de los autores presentados original para imágenes. 'archivo original para la figura 1 12876_2011_768_MOESM2_ESM.jpeg autores 12876_2011_768_MOESM1_ESM.jpeg Autores archivo original de la figura 2' archivo original para la figura 3 12876_2011_768_MOESM4_ESM.jpeg autores 12876_2011_768_MOESM3_ESM.bmp Autores archivo original de la figura 4 12876_2011_768_MOESM5_ESM.bmp archivo original de los autores de la figura 5 Conflicto de intereses
los autores declaran que no tienen intereses en competencia.
contribuciones de los autores
DN, Z-DL y F-NL llevaron a cabo los estudios de la morfología y la actividad biológica de las células mesoteliales peritoneales in vitro
e in vivo
. ZS, Z-FM y FL participaron en los estudios in vivo en
. YX y C-GJ participaron en los estudios de morfología. DN y HX participado en el diseño del estudio y realizó el análisis estadístico. HX y DN concebido del estudio, y participó en su diseño y la coordinación y la ayudó a redactar el manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

• Es la esplenectomía concomitante beneficioso para la supervivencia a largo plazo de los pacientes con cáncer gástrico sometidos a gastrectomía curativa? Un study
• Expresión y significación clínica de largo no codificante ARN HNF1A-AS1 en la expresión cancer