Kombinované funkcie založené na MT1-MMP expresie, hustota CD11b + imunocyty a LNR predpovedať klinické výsledky rakoviny žalúdka

Kombinované funkcie založené na MT1-MMP expresie, CD11b hustota + imunocyty a LNR predpovedať klinické výsledky rakovinou žalúdka
abstraktné
pozadia
Vzhľadom na zložitosť mikroprostredie nádoru, žiadna jediná značka z rakovinových buniek by mohla adekvátne predpovedať klinický výstupy z rakoviny žalúdka (GC). Cieľom tejto štúdie bolo zhodnotiť prognostický význam kombinovaných prvkov, vrátane konvenčných patológie, proteinázy a imunitných dát v GC.
Metódy
Okrem patologických štúdií, imunohistochemické vyšetrenia bola použitá pre posúdenie membránovú 1 matrix metaloproteinázy ( MT1-MMP), expresie a CD11b + hustota imunocyty v troch nezávislých microarrays GC tkanív, ktoré obsahujú 184 GC tkaniva. Samostatné a kombinované rysy boli vyhodnotené pre ich vplyv na celkové prežívanie (OS).
Výsledky
Zistili sme, že tradičné faktory, vrátane veľkosti nádoru, histologického stupňa, stavu lymfatických uzlín, seróza invázie a TNM štádiu boli spojené s OS (P
menšie ako 0,05 pre všetky). Okrem toho, štatisticky významné rozdiely v operačnom systéme boli nájdené medzi pomerom lymfatických uzlín (LNR) podskupín (P Hotel &0,001), MT1-MMP podskupiny (P
= 0,015), a CD11b + imunocytov hustoty podskupiny (P
= 0,031). A čo je najdôležitejšie, kombinovaný hraný (MT1-MMP pozitívne, s nízkou hustotou CD11b + imunocyty a vysoká LNR) bol nájdený viacrozmerné analýzy ako nezávislý prognostické faktory pre OS po vylúčení inej vedľajšej faktory (HR = 3,818 [95% CI: 2,223-6,557 ], P Hotel <0,001). Navyše, táto vlastnosť v kombinácii mali lepší výkon v predikciu klinické výsledky po operácii dávno predtým, než recidíva nastala (plocha pod krivkou: 0,689 [95% CI: 0,609 - 0,768], P Hotel < 0,001).
Závery
Tieto zistenia naznačujú, že lepšia informovanosť o GC prognóze, ktorú možno získať z kombinovaných faktorov klinicko-patologických, nádorových buniek a mikroprostredie nádoru.
Kľúčové
rakovina žalúdka prognóza mikroprostredie nádoru lymfatických uzlín pomer pozadia
rakovina žalúdka (GC) je štvrtou najčastejšou rakovinou a treťou príčinou úmrtí na rakovinu po celom svete [1]. Značný pokrok sa dosiahol v skorej diagnostike rakoviny, ale tam nebol porovnateľný pokrok v presnosti klinického predpoveď výsledku [2]. Iba TNM klasifikácie Medzinárodnej únie proti rakovine (UICC), alebo spoločného výboru amerického rakoviny (AJCC) je používaný rutinne, ktorá je najdôležitejším nástrojom pre vedenie stratégiu liečby pre pacientov GC [3]. Avšak, GC majú významný heterogénnosť v ich biologickej správania, a nádory rovnaké klinické fáze často ukazujú rozdiely v klinický priebeh a reakcie [4]. Tak, identifikácia faktorov ovplyvňujúcich invázie a metastáz, a zavedenie biomarkerov panelov predvídať malígny potenciál a identifikovať rôzne rizikové skupiny majú prvoradú dôležitosť.
Aj cez mnoho rokov výskumu a stovky správ o nádorových markerov v GC, číslo klinicky užitočnými markery je žalostne malá [5]. V poslednej dobe nový prognostický nástroj pomere lymfatických uzlín (LNR), definovaná ako počet MLN vydelený počtom získaných lymfatických uzlín, bolo navrhnuté. To môže zlepšiť presnosť prognózu a zníženie migrácie fáze, kedy v porovnaní s UICC (2002, 6. vydanie) staging systém [6, 7]. LNR bol považovaný za jeden z najlepších patologickým premenné pre predikciu prognózy rakoviny žalúdka po kuratívny operácii v retrospektívnych štúdií [8], ktorý je úspech v optimalizácii tradičných klinických markerov. Avšak, objav iných takzvaných sľubných markerov v laboratóriu sa premieta pomalšie do klinickej použiteľnosti. Jedným z dôvodov pre to je skutočnosť, že vývoj a progresie rakoviny je určená koevoluce medzi nádorovými bunkami a mikroprostredie nádoru viac ako s jediným mutácie [9]. Ako koevoluce bolo hlásené veľa štúdií, ktoré všetky naznačujú, že interakcia medzi nádorovými bunkami a nádorového strómy vytvoriť unikátny a dynamickú mikroprostredie ovplyvňovať progresiu nádoru [10]. Z tohto dôvodu, skríning nových molekulárnych faktorov z komplexu mikroprostredie nádoru (bunková a stromálne zložky) predstavuje ďalšiu podstatnú prístup k identifikácii prognostických faktorov.
MT1-MMP je známy ako matrix metaloproteinázy membránového typu, a MT1-MMP-sprostredkovanú extracelulárnej matrix (ECM), degradácia nádorovými bunkami alebo buniek strómy je nevyhnutná pre rakovinu inváziu prostredníctvom základných membrán a stromálne intersticiálna matrice [11]. Aj keď MT1-MMP ukázala, prognostický význam v mnohých ľudských rakovín, ako je rakovina prsníka, rakovina pankreasu a rakoviny hrubého čreva [12, 13], len málo je známe o presnom význame MT1-MMP u pacientov s GC. Zásadným spôsobom prispievajú k mikroprostredie nádoru sú zápaly a zápalové mediátory [9]. Bolo navrhnuté, že imunitný väzba môže mať vplyv na klinický výsledok u pacientov s rakovinou, a imunitný skóre by bolo dôležitým prediktorom porovnateľná klasifikácie TNM [14]. CD11b je vyjadrená určitú podmnožinu myeloidných buniek, vrátane CD34 + kmeňových buniek, monocyty, granulocyty, NK buniek a aktivovaných T buniek, čo predstavuje pre prirodzenej imunity [15, 16]. Úloha nádoru imunogenicity a imunoterapia sú diskutované [17]. Rozšírenie našich znalostí o komplexnú úlohu imunitných buniek v GC môže vo svojich dôsledkoch otvoriť cestu k dlho očakávanej úspešný vývoj liečiv.
Na tomto chápaní, sme skúmali prognózovanie úlohu bunková proteinázy markeru MT1-MMP a mikroprostredie imunitný markeru CD11b + imunocyty v GC. Zvláštna pozornosť bola venovaná prognostický význam kombinovaných vlastností MT1-MMP, CD11b hustote + imunocytov a LNR.
Metódy
Pacienti a nadväzujúce
záznamy pacientov, GC, ktorí podstúpili operáciu s liečebnou zámer na oddelení onkológie Zhongnan nemocnice Wuhan University (Wuhan, Čína), od decembra 2002 do februára 2011 boli preskúmané. Hlavné demografické a klinicko-patologické charakteristiky boli k dispozícii. Žiadne pacienti dostávali neoadjuvantnej chemoterapii pred operáciou. TNM etapa bola stanovená v závislosti od 7. vydanie UICC /AJCC TNM systému [18]. Tým posledným nadväznosti na 31. mája 2012, medián follow-up bol 59,5 (rozmedzie: 16.8-102.3) mesiacov. Celkom 108 (58,7%) pacientov zomrelo. Celkového prežívania (OS) bola definovaná ako interval od dátumu operácie na smrť GC účely. Akékoľvek opakovanie v Abdominoplastika-panvovej dutiny bol definovaný ako miestne regionálne recidívy; a opakovanie prostredníctvom prietoku krvi bola definovaná ako vzdialených metastáz, ako je pečeňové metastázy a pľúcne metastázy. Písomný informovaný súhlas bol získaný od pacientov a Protokol štúdia bola schválená etickou komisiou Zhongnan nemocnice Wuhan University. Štúdia bola vykonaná v súlade s etickými štandardami deklarácia Svetovej lekárskej asociácie v Helsínk.
Vzorky rakovinou žalúdka a tkanivových mikročipov
Všetky hematoxylínom a eosínu (HE) -stained sklíčka boli skúmané pomocou nezávislých recenzentov, ktorí neboli vedomí klinické charakteristiky alebo klinické výsledky. Tri tkanivových mikročipov (TMA) boli postavené. Stručne, dve jadrá boli odobraté od každého zástupcu nádorového tkaniva (s priemerom 1,5 mm pre každú vzorku). Potom boli postavené tri TMA úseky s 184 nádorového tkaniva (v spolupráci so Shanghai Biochip Company Ltd., Shanghai, Čína).
Imunohistochémia a vyhodnocovanie imunohistochemických nálezoch
primárnymi protilátkami pre MT1-MMP (sc101451, Santa Cruz , USA, riedenie 1/100), CD11b + (ab52478, abca, UK, riedenie 1/100), zodpovedajúce chrenovou peroxidázou (HRP) konjugovanou sekundárnou protilátkou (ab97265, ab97200, abca, UK, riedenie 1/300), a Diaminobenzidine (DAKO, Denmark), boli získané a overené pre označovanie.
Imunohistochémia protokoly boli popísané už skôr [19]. Stručne povedané, tri TMA boli rezy deparaffinised xylénom thenrehydrated tromi zmenami alkoholu. Endogénnej peroxidázy aktivita bola blokovaná 0,3% peroxidu vodíka po dobu 10 minút. Antigén vyhľadávanie bolo vykonané mikrovlnnom ohreve v 0,01 M Tris-EDTA pufra (pH 9,0) počas 20 minút. Sklíčka sa vyliahli po dobu 1 hodiny s primárnymi protilátkami proti MT1-MMP (sc101451, Santa Cruz, USA, riedenie 1/100), CD11b + (ab52478, abca, UK, riedenie 1/100). Po premytí s Tris-pufrom (TBS, pH 7,4), boli rezy inkubované s b zodpovedajúce chrenovou peroxidázou (HRP) konjugovanou sekundárnou protilátkou (ab97265, ab97200, abca, UK, riedenie 1/300) o ďalších 50 minút. Reakciu antigén-protilátka bola vizualizované s 3,30-Diaminobenzidine (DAKO, Denmark). Po kontrastným hematoxylínom boli rezy dehydratovaná cez vzostupnej alkoholov voči xylénu a montáž. Pozitívne kontroly farbenie bolo vykonané súbežne s parafínových rezoch normálnou ľudských mandlí. Negatívna kontrola bola vykonaná vynechaním primárnej protilátky.
Sklíčka bola skúmaná v Olympus BX51 fluorescenčným mikroskopom vybaveným Olympus DP72 fotoaparátu (Olympus Optical Co., Ltd., Tokyo, Japonsko). Panorama každého značeného jadra bola získaná na základe 4 fotografiách pod zväčšením s nízkou spotrebou (x 100) s vysokým rozlíšením pomocou DP-BSW softvéru (Olympus Optical Co., Ltd., Tokyo, Japonsko). boli použité rovnaké nastavenie pre každú fotografiu, tak, aby sa minimalizovalo výberové skreslenia. MT1-MMP expresie a CD11b hustota + imunocyty boli digitálne hodnotené Image-Pro Plus v6.2 softvér (Media Cybernetics Inc., Bethesda, MD). Ak chcete zachovať výsledky spoľahlivé a porovnateľné, jednotné nastavenie pre všetky snímky bola použitá pre čítanie v oboch farbenie protilátok. Integrovaná optická denzita (Iod) všetkých pozitívneho farbenia MT1-MMP v každom snímku sa meria, a jeho podiel na celkovej ploche každej snímky sa vypočítala ako MT1-MMP expresie. CD11b hustota + imunocyty bol zaznamenaný ako počet pozitívnych buniek na jednotku plochy tkaniva v milimetroch štvorcových. Rezané body pre hustotu MT1-MMP bola preskúmaná "najlepší cut-off prístup zo strany log-rank test" [20]. A 25. percentilu hodnota bola definovaná ako limitná bod na určenie MT1-MMP negatívne a pozitívne expresiu podskupiny v tejto štúdii. Pre CD11b hustote + imunocytov, cut-off bod pre definovanie podskupín (nízkou a vysokou hustotou CD11b + imunocyty) bola stredná hodnota.
Štatistická analýza
štatistické analýzy boli vykonané pomocou softwaru SPSS (verzia 18.0, SPSS Institute, Chicago, IL). Pearsonovho χ 2 testu alebo Fisherov presný test bol použitý na porovnanie kvalitatívne ukazovatele. Kaplan-Meierovej analýzy bola použitá pre analýzu prežitie a význam medzi podskupinami pacientov bola vypočítaná log rank testu. Cox regresie modelu bol použitý na vykonanie multivariačný analýzy. Logistická regresia bola použitá na posúdenie vplyvu binárnych faktorov. Receiver operating charakteristická krivka (ROC), analýza bola použitá pre určenie prediktívnej hodnoty parametrov. Obojstranný P Hotel < 0,05 bola považovaná za štatisticky významné.
Výsledky
Hlavné klinicko-patologické rysy a imunohistochemické nálezy
Medzi 184 prípadov v rámci tejto štúdie bolo 132 (71,7%) mužov a 52 (28,3%) ženy, ktoré siahajú do vek od 25 do 85 yr (priemer ± SD: 57,9 ± 12,9 yr). Hlavné demografické a klinicko-patologické charakteristiky boli prezentované v demografii Tabuľka 1.Table 1x pacientov a klinicko-patologické charakteristiky
Položky
Hodnota
Age (M ± SD, rokov)
57,9 ± 12,9
rodovej rovnosti
Muž (%)
132 (71,7)
Žena (%)
52 (28,3)
Tumor umiestnenie
distal žalúdka (%)
98 (53,3)
Non-distálna žalúdok (%)
86 (46,7)
patologických typy
adenokarcinóm
histologického stupňa 1/2
55 (29,9)
No /Stredne diferencovaný adenokarcinóm (%)
55 (29,9)
histologického stupňa 3/4
124 (67,4)
Low /nediferencovanej adenokarcinóm (%)
102 (55,4)
mucinózní karcinóm adenokarcinóm /Signet-ring bunka
22 (12,0)
Ostatné a (%)
5 (2.7)
seroza invázie
Nie (T0, T1, T2) (%)
27 (14,7)
Áno (T3, T4) (%)
157 (85,3)
lymfatických uzlín
Nie (N0) (%)
53 (28,8)
Áno (N1, N2, N3) (%)
131 (71,2)
LNR, medián (rozpätie)
0,33 (0-1)
vzdialenej metastázy
M0 (%)
177 (96,2)
M1 (%)
7 (3,8)
TNM štádia
čoskoro (štádiu I, II) (%)
58 (31,5)
Advanced (Fáza III, IV) (%)
126 (68,5)
chirurgia
resekcii Medzisúčet (%)
159 (86,4)
resekciou Non-Medzisúčet (%)
25 ( 13.6)
chemoterapiu
Nie (%)
35 (19,0)
Áno (%)
149 (81,0)
recidíva
Nie (%)
124 ( 67,4)
Áno (%)
60 (32,6)
Opakovanie mieste B
miestnej-regionálnej
37 (61,7)
Distant
23 (38,3)
Clinical stav na konci roka v nadväznosti
žiť a bez recidívy
72 (39,1)
mŕtvy alebo živý s recidívou
112 (60,9)
MT1-MMP expresie
Negatívne
46 (33,3)
Pozitívne
138 (66,7)
CD11b + imunocyty (buniek /mm2)
Medián (rozsah)
257 (4-2101)
Iní zahŕňali adenoskvamózní metaplastická karcinóm do 3 (1,62%) prípadov, netypické karcinoid v 1 (0,54%), puzdro, a neuroendokrinné karcinóm in 1 (0,54%) case.b 60 opakujúcich sa prípadoch boli hodnotené.
Imunohistochémia bola vykonaná vo všetkých GC TMA a výsledok každej vzorky bola získaná pre obrazy založené na digitálne analýzou (obrázok 1A-1D). MT1-MMP farbenie bol hlavne v cytoplazme alebo na bunkovej membráne nádorových buniek. Väčšina stromálne bunky boli negatívne, aj keď sporadická pozitívne škvrny na týchto bunkách bola tiež pozorovaná (Obrázok 1E, 1G). CD11b + imunocytov infiltroval hlavne do okamihu rakoviny hniezda a stromálne (obrázok 1F, 1H). Úroveň hustoty MT1-MMP a CD11b hustotou + imunocytov boli uvedené v tabuľke 1. 25. percentil hustoty MT1-MMP bolo 0.00186 a 138 (75,0%) pacientov boli dokumentované ako MT1-MMP pozitívne podľa vyššie uvedených kritérií klasifikácie. Stredná hodnota CD11b + imunocytov bolo 257 buniek na jednotku plochy tkaniva v štvorcový milimeter. Obrázok 1 Imunohistochemické poznatky v TMA. (AD) Reprezentatívny príklad MT1-MMP (A), CD11b + imunocyty (C), farbenie na GC mikroskopické sústavy tkanív, a zodpovedajúce digitálny obraz analyzovaný obrázku softvérom, s MT1-MMP (B) a CD11b + imunocytov (D ) zastúpené v červenej farbe. (E, G) MT1-MMP farbenie bol hlavne v cytoplazme alebo na bunkovej membráne nádorových buniek (modrá šípka), a väčšina z strómy buniek malo negatívny farbenie, hoci sporadický pozitívne škvrny na týchto bunkách bola tiež pozorovaná (F, H). CD11b farbenie ukázalo, že CD11b + imunocyty infiltroval hlavne do okamihu rakoviny hniezda a väzivové tkanivá, najmä na invazívne vpredu (červená a zelená šípky).
Vzťah medzi MT1-MMP prejavu, CD11b hustote + imunocytov a klinicko-patologické rysy
Tam bolo 77 (55,8%) a 15 (32,6%) pacientov s vysokou hustotou CD11b + imunocytov v MT1-MMP pozitívna (n
= 138) a negatívne (n = 46)
podskupín, v uvedenom poradí (P
= 0,006). Pravdepodobnosť, že MT1-MMP expresie sa významne znížili o nízkej hustote CD11b + imunocyty podskupiny (pomer šancí (OR) = 0,383 [95% CI: 0,190 až 0,774], str
= 0,007, logistická regresia). MT1-MMP expresie a CD11b + hustota imunocyty boli korelované s klinicko-patologických funkcií, ako sú zhrnuté v tabuľke 2. MT1-MMP expresie korelovala s malou veľkosťou nádoru (p = 0,007)
, nádor na distálny žalúdka (P
= 0,027) a zvýšené riziko recidívy (P
= 0,001), ale nesúvisí s vekom, pohlavím, histologického stupňa, seróza invázie, stav lymfatických uzlín, TNM štádiu a lokalít recidívy (P Hotel > 0,05 pre všetky). CD11b hustota + imunocyty bola v korelácii so stavom lymfatických uzlín (P
= 0,015), LNR (P
= 0,018) a TNM štádia (P
= 0,011), ale nesúvisí s vekom, pohlavím, veľkosti nádoru , lokalizácia nádoru, histologický stupeň, seroza invázie a riziko recidívy (P Hotel > 0,05 pre všetky) .Table 2 vzťah medzi MT1-MMP, CD11b hustota + imunocyty a činím patologickými rysmi
Premenné

MT1-MMP expresie
hustota CD11b + imunocyty
Negatívne správa (n = 46
)
Pozitívna správa (n = 138)

p
spoločností Low (n = 92
)
High (n = 92
)
P
N
(%)
N
(%)
N
(%)
N
(%)

Vek (rokov) Hotel <
20 (43,5)
0,669
43 (43,4)
56 (56,6) 60
26 (56,5)
0,055
≥60
73 (52,9)
65 (47,1)
49 (57,6)
36 (42,4)
rodovej rovnosti
Muž
33 (25,0 )
99 (75,0)
1.000
66 (50,0)
66 (50,0)
1,000
Žena
13 (25,0)
39 (75,0)
26 (50,0)
26 (50,0)
veľkosť nádoru (cm2) a Hotel < 16
12 (16,4)
61 (83,6)
0,007
35 ( 47,9)
38 (52,1)
0,404
p16
31 (35,2)
57 (64,8)
48 (54,5)
40 (45,5)
Umiestnenie
distálnej
18 (18,4)
80 (81,6)
0,027
51 (52,0)
47 (48,0)
0,555
Non-distálna
28 (32.6)
58 (67,4)
41 (47,7)
45 (52.3)
histologického stupňa b
1/2
13 (23,6)
42 (76,4)
0,845
24 (43,6)
31 (56,4)
0,376
3/4
31 (25,0)
93 (75,0)
63 (50,8)
61 (49,2)
lymfatických uzlín
Áno
31 (23,7)
100 (76,3)
0,511
73 (55,7)
58 (44,3)
0,015
Nie
15 (28,3)
38 (71,7)
19 (35,8)
34 (64,2)
LNR c
≤0.33
27 (28,7 )
67 (71,3)
0,233
39 (41,5)
55 (58,5)
0,018 Hotel > 0,33
19 (21,1)
71 (78,9)
53 (58,9)
37 (41,1)
seroza invázie (T fáza)
T1-2
4 (14,8)
23 (85,2)
0,186
10 (37,0)
17 (63,0)
0,145
T3-4
42 (26,8)
115 (73,2)
82 (52,2)
75 (47,8)
TNM predstavovať
Early (I, II)
13 (22,4)
45 (77,6)
0,583
21 (36,2)
37 (63,8)
0,011
Advanced (III, IV)
33 (26,2)
93 (73,8)
71 (56,3)
55 (43,7)
recidíva
Áno
9 (15,0 )
51 (85,0)
0,029
30 (50,0)
30 (50,0)
1.000
Nie
37 (29,8)
87 (70,2)
62 (50,0)
62 (50,0)
Opakovanie umiestnenie d
miestnej-regionálnej
7 (18,9)
30 (81,1)
0,460
20 (54,1)
17 (45,9)
0,426
Distant
2 (8.7)
21 (91,3)
10 (43,5)
13 (56,5)
analýza bola vykonaná na základe na 161 pacientov s úplnými údajmi o veľkosti nádoru (TS) .b analýza bola vykonaná na základe 179 pacientov so žalúdočnými adenocarcinoma.c medián pomeru lymfatických uzlín (LNR) bol 0,33 (6 prípadov), a prípady, GC sa líšia v odlišných podskupín , d bolo zahrnutých 60 opakované prípady.
Analýza prežitie Apartmán V 184 prípadoch sa medián OS bol 26,8 (rozmedzie 0.8-102.3) mesiacov, a miera prežitia 1-, 3- a 5-yr bola 79,3%, 50,5% a 37,4%, v uvedenom poradí (obrázok 2A). Ako sa dalo očakávať, tieto tradičné faktory boli spojené s operačným systémom GC pacientov, ako je veľkosť nádoru, histologického stupňa, stavu lymfatických uzlín, seróza invázie a TNM štádiu (P Hotel < 0,05 pre všetky). Okrem toho, a to ako s vysokou hustotou CD11b + imunocyty a MT1-MMP negatívne expresie boli korelované s lepšou OS (P
hodnota bola 0,031 a 0,015, v danom poradí.) (Obrázok 2B, 2C). Diskriminácia Schopnosť OS bola zvýšená v LNR podskupín (P Hotel &0,001) v porovnaní s lymfatické uzliny stav podskupiny (P
= 0,015) (obrázok 2D, 2E), a ROC analýza ukázala, že pokiaľ ide o predikciu riziko úmrtia, triedenie podľa LNR (plocha pod krivkou: 0,659 [95% CI: 0,579 - 0,739], P Hotel < 0,001) mali lepší výkon ako pozitívnych lymfatických uzlín číslo (Oblasti pod krivkou: 0,568 [95 % CI: 0,484-0,653], P
= 0,114). Všetky výsledky ukazujú, že MT1-MMP pozitívne, s nízkou hustotou CD11b + imunocyty a vysoko LNR sú rizikové faktory týkajúce sa zlou prognózou (obrázok 2, tabuľka 3). Obrázok 2 Kumulatívny OS pacientov GC. (A) OS 184 pacientov GC. (B) Nízka CD11b + imunocytov hustota bola v súvislosti so zlou OS. (C) Pacienti v MT1-MMP pozitívny skupine boli vystavené vyššiemu riziku úmrtia. (D, E) Ako lymfatické uzliny stav a LNR boli korelované so zlou OS, ale LNR mohol lepšie rozlišovať podskupiny pacientov. (F) Kombinovaná funkcia by mohla naznačovať OS pacientov GC presnejšie.
Tabuľka 3 Analýzy faktorov týkajúcich OS
Premenné
N
N úmrtia (%)

Medián OS (Rozsah)
5-ročné prežitie (%)
Log-rank test χ2value
P
Vek (rokov) Hotel < 60
99
52 (52,5)
30,1 (1,5 - 99,5)
45,1
3,584 0,058
≥60
85
56 (65,9)
24,8 (0,8 - 102,3)
28,6
Pohlavie
Muž
132
74 (56,1)
30,3 (0,8 - 102,3)
40,0
2.114
0,146
Žena
52
34 (65,4)
25,1 (1,3 - 94,8)
30,3
veľkosť nádoru (cm2) Hotel < 16
73
35 (47,9)
41,6 (1.1-99.5)
52,9
7.882
0,005
≥16
88
57 (64,8)
24,2 (0,8 - 102,3)
29,2
histologického stupňa b
1/2
55
88 (56,1)
30.1 (1.1-102.3)
54,2
13,412 Hotel < 0,001
3/4
124
20 (74,1)
16,8 (0,8 - 74,9)
30,1
lymfatických uzlinách metastázy
Áno
131
83 (63,4)
24,8 (0.8-102.3)
52,9
5.895
0,015
Nie
53
25 (47,2)
34,1 (6,1 -99,5)
30,5
seroza invázie (T fáza)
T1-2
27
7 (25,9)
58,9 (20.2-99.5)
74,9
14.742 Hotel < 0,001
T3-4
157
101 (64,3)
24,8 (0,8 - 102,3)
30,8
TNM
čoskoro (I, II)
58
26 (44,8)
35,8 (6.1-99.5)
54,0
9.823
0,002
Advanced
126
82 (65,1)
22,8 (0,8 - 102,3)
29,2
(III, IV)
chirurgia
SR
159
89 (56,0)
30,0 (0.8-102.3)
39,8
5,902 0,015
TR /CR
25
19 (76,0)
18,0 (3,8 - 89,9)
21,8
chemoterapia
Áno
149
87 (49,7)
33,5 (5.3-99.5)
35,9
0,016 0,900
Nie
35
21 (60,0)
28,4 (0,8 až 102,3 )
40,0
LNR c
≤0.33
94
41 (43,6)
38,8 (1,1 - 102,3)
55,1
24,881 Hotel < 0,001
> 0,33
90
67 (74,4)
20,1 (0,8 - 99,1)
18,3
MT1-MMP
Negatívne
46
18 (39,1)
35,7 (3,8 - 79,3)
54,0
5,869 0,015
Pozitívne
138
90 (65,2)
25,4 (0,8 - 102,3)
32,2
CD11b + imunocytov hustota
Low
92
62 (67,4)
25,1 (0,8 - 99,1)
27,6
4,655 0,031
High
92
46 (50,0)
30,7 (1.3-102.3)
46,7
kombinovanej vlastnosti (hustota MT1-MMP, CD11b hustoty + imunocyty a LNR)
Skupina aj
73
26 (35,6)
38,7 (6.1-94.1)
61,4
28.173 Hotel < 0,001
skupiny II
111
82 (73,9)
18,1 (0.8- 90.9)
21.1
analýza bola vykonaná na základe 161 pacientov s úplnými údajmi o veľkosti nádoru. b analýza bola vykonaná na základe 179 pacientov s adenokarcinómom žalúdka. c Medián LNR bol 0,33 (6 prípadov), a prípady, GC líšili v odlišných subgroups.OS: celkové prežívanie; SR: medzisúčet resekcia; TR: celkom resekcia; CR: kombinovaná resekcia; LNR :. Pomer lymfatických uzlín
Ako bolo navrhnuté vyššie, kombinované funkcie založené na počte rizikových faktorov boli skúmané s cieľom zlepšiť predikciu GC prognózu (tabuľka 3). Tak, Pacienti boli rozdelení do dvoch podskupín podľa počtu rizikových prvkov: skupina I, bolo pozorované menej ako dva rizikové faktory; a neboli pozorované skupiny II, dva alebo tri rizikové faktory. V kombinácii analýza ukázala, že OS pacientov v skupine II bola výrazne kratšia ako u pacientov v skupine I (P Hotel &0,001). (Obrázok 2F)
Viacrozmerná analýza a ROC analýza
V jednorozmerné analýze, tradičné klinicko -pathological rysy (ako je veľkosť nádoru, T fáze, TNM štádiu, operačných postupov a stav recidívy), MT1-MMP prejavu, CD11b hustote + imunocytov a LNR boli spojené s OS. Okrem toho je riziko úmrtia v kombinovanej skupine II výrazne zvýšil (P Hotel <0,001).
Faktory ukazujú význam vo jednorozmerné analýzy boli integrované do viacrozmerné analýzy Cox pomerného rizika. V tejto štúdii LNR, MT1-MMP, CD11b a kombinované rysy boli vysoko korelované. Preto dve oddelené viacrozmerné modely boli vytvorené, aby sa zabránilo multikolinearita medzi týmito premennými. LNR, MT1-MMP expresie a CD11b hustota + imunocyty boli nezávislé prognostické faktory pre OS po vylúčení ďalších zmätočných faktorov (P Hotel < 0,05 pre všetky) navyše spojené rysy boli nezávislý prognostický faktor, taky (HR = 3,818 [95 % CI: 2,223 - 6,557], P Hotel <0,001) (tabuľka 4) .Table 4 Multiviariačnou analýzy faktorov spojených s OS
faktormi
OS
HR
spoločností 95% CI
P
veľkosti modelu 1
pomerom nádor: < 16 cm2vs
≥16 cm2
1,821
1.168- 2,839 0,008
seroza invázie (T fáza):
T1-2 vs
T3-4
3.232
1.440-7.251
0,004
Lymoh uzlinách metastázy:
Nie vs
Áno
1,012
0,610-1,679
0,964
typy chirurgie: SR vs
TR /CR
2,030
1,128 až 3,653 0,018

LNR: nízka (≤0.33) vs Vysoká (viac ako 0,33)
1.957
1.233-3.108
0,004
MT1-MMP: Negatívny vs
Pozitívna
2,596
1,496 až 4,506 0,001
CD11b hustote + imunocytov: Vysoká vs
Low
1.838
1.183-2.855
0,007
Model veľkosti 2
Tumor: < 16 cm2vs
≥16 cm2
1,734
1,120-2,686
0,014
seroza invázie (T fáza):
T1-2 vs
T3-4
3.013
1,360 až 6,674 0,007
Lymoh uzlinách metastázy:
Nie vs
Áno
0,696
0.404 - 1.200
0,192
typy operácií: SR vs.
TR /CR
2.023
1.134 - 3.606 0.017
Kombinovaná funkcie: Skupina I vs
skupiny II
3,818
2,223-6,557 Hotel < 0,001
OS : celkové prežívanie; HR: pomer rizika; NA: neprijali; SR: medzisúčet resekcia; TR: celkom resekcia; CR: kombinovaná resekcia; LNR :. Pomer lymfatických uzlín
Analýza ROC bola vykonaná ďalej hodnotiť prognostickú výkon zo štyroch nezávislých faktorov v tejto štúdii. Kombinované funkcie by bolo lepšie predvídanie klinické výsledky pacientov GC v porovnaní s inými faktormi (plocha pod krivkou: 0,689 [95% CI:, 609-, 768], P Hotel <0,001) (obrázok 3). Obrázok 3 ROC analýza prediktívne hodnoty pre smrť. Medzi nezávislých prognostických faktorov 4, plocha pod krivkou nové kombinované funkcie bola najväčšia. Spojená rys mohol mať lepší prognostický výkon u pacientov s GC.
Diskusia
Navrhli sme kombinovanú analýzu integrovaných nádorového strómy funkcií ako užitočný stratégiu vyhodnotiť vývoj rakoviny a prežitie pacienta v GC na základe našich štúdií zameraných na koevoluce nádorových buniek a mikroprostredie nádoru a [19, 21, 22]. Táto štúdia bola navrhnutá tak, aby preskúmala uskutočniteľnosť táto spoločná stratégia. Okrem toho bol použitý zlepšený spôsob automatizácie analyzovať digitalizované obrazy zaistiť ako reprodukovateľnosť a dobrý výkon v tejto štúdii. Ako Fridman [23] navrhol, tieto metódy by otvorilo cestu k lepšiemu pochopeniu zložité mikroprostredie nádoru, rovnako ako rutinné vyhodnotenie parametrov pre klinickú liečbu pacientov s rakovinou. Na tomto mieste, 184 prípadov GC boli zahrnuté vyhodnotiť prognostické hodnoty optimalizované konvenčné patologických prognostických faktorov, bunkových molekulárnych faktorov, imunitných faktorov a kombinácia funkcií. To je základným krokom k vytvoreniu fungujúceho prognostický systém integruje oba klinicko-patologické, tumor a stromálne znaky v našich štúdiách Series [19, 21, 22].
184 prípadov, demografia a klinicko-patologické charakteristiky sú obdobné uvádzanými v iných veľkých sériách GC populácie [24]. Naše výsledky ukázali, že expresia MT1-MMP sa často koreluje so zvýšeným rizikom recidívy, ale rozdiel v relapsu mieste nebol štatisticky významný. Tieto výsledky boli podobné ako predchádzajúcej správe [25]. MT1-MMP hrá dôležitú úlohu pri degradácii typov I a IV collagens s cieľom uľahčiť rakovinové bunky šírenia. Okrem toho, MT1-MMP môžu podporovať angiogenézu a micrometastasis cez cievny cestou [26].
Čo sa týka imunitných buniek, povaha, hustota a umiestnenie sú dôležité parametre, ktoré komplexne vyhodnotí in situ
imunitnej reakcie a špecifické úlohu v progresii rakoviny. V tejto štúdii, CD11b + imunocyty boli väčšinou umiestnený na prednej strane invazívne. Rozdiel v hustote CD11b + imunocytov bol štatisticky významný medzi lymfatických uzlín metastáz a non-metastais podskupín. Okrem toho CD11b + imunocytov hustota bola vyššia ako začiatkom pacientov s pokročilým GC, podobne ako na správy Sconocchia et al. a Ladoire et al. [27, 28]. Kandidáti financovaný Ministerstvom školstva Číny (č 5052011303014), Science fond Národnej prírodnej Science Foundation Číny (číslo 81171396), Science fond pre tvorivej výskumnej skupiny Národná prírodná Science Foundation Číny (No. 20621502, 20921062 ), a základný výskum s fondmi pre centrálne univerzít Ministerstva školstva Číny (No. 4103005).
Autori ďalej len "pôvodné predložený súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodnej predložených súborov pre obrázky. Všetci autori prečítali a schválená konečná rukopis.

• Expresia p53, inducibilní syntázy oxidu dusnatého a vaskulárny endoteliálny rastový faktor v žalúdku prekanceróznych a rakovinových lézií: korelácia s klinickou features
• Zvýšenie integrín viazané kinázy non-canonically udeľuje NF-kB sprostredkovanej rastové výhody na buniek karcinómu žalúdka aktiváciou ERK1 /2