Kombinierte Funktionen auf Basis von MT1-MMP-Expression, CD11b + Immunozyten Dichte und LNR vorhersagen, die klinischen Ergebnisse von Magen cancer

Kombinierte Funktionen auf Basis von MT1-MMP-Expression, CD11b + Immunozyten Dichte und LNR vorhersagen, die klinischen Ergebnisse von Magenkrebs
Zusammenfassung
Hintergrund
die Komplexität der Tumor-Mikroumgebung gegeben, konnte keine einzige Markierung von Krebszellen vorhersagen, angemessen auf die klinischen Ergebnisse von Magenkrebs (GC). Das Ziel dieser Studie, die die prognostische Bedeutung von kombinierten Funktionen wie herkömmliche Pathologie, Proteinase und Immun Daten in GC.
Methoden
Neben pathologischen Studien zu bewerten, wurde die Immunhistochemie verwendet Membran-Typ-1-Matrix-Metalloproteinase zu beurteilen ( MT1-MMP) Expression und CD11b + Immunozyten Dichte in drei unabhängigen Microarrays GC Gewebe 184 GC Gewebe enthält. Separate und kombinierten Merkmale auf ihre Auswirkungen auf das Gesamtüberleben (OS) bewertet wurden.
Ergebnis einschränken? Wir fanden, dass die traditionellen Faktoren, einschließlich der Größe des Tumors, histologischen Grad, Lymphknotenstatus, Serosa-Invasion und TNM-Stadium mit OS assoziiert waren (P
< 0,05 für alle). Außerdem statistisch signifikanten Unterschiede in OS wurden unter Lymphknoten-Verhältnis (LNR) Untergruppen gefunden (P
< 0,001), MT1-MMP-Untergruppen (P
= 0,015) und CD11b + Immunozyten Dichteuntergruppen (P
= 0,031). Am wichtigsten ist, kombiniert Funktion (MT1-MMP positiv, niedrige CD11b + Immunozyten Dichte und hoher LNR) wurde durch multivariate Analyse ergab eine unabhängige prognostische Faktoren für OS werden nach Ausschluss anderer Störfaktoren (HR = 3,818 [95% CI: 2,223-6,557 ], P
< 0,001). Darüber hinaus ist diese kombinierte Funktion bei der Vorhersage der klinischen Ergebnisse nach der Operation eine bessere Leistung hatte lange vor Wiederholung (Fläche unter der Kurve: 0.689 [95% CI: 0,609-0,768], P
< 0,001) stattgefunden hatte.
Schlussfolgerungen
Diese Ergebnisse zeigen, dass bessere Informationen über GC Prognose von kombinierten klinisch-pathologischen Faktoren erhalten werden konnte, Tumorzellen und Tumormikromilieu.
Schlüsselwörter Magenkrebs Prognose Tumormikroumgebung Lymphknoten Verhältnis hintergrund und Magenkrebs (GC) ist die vierthäufigste Krebserkrankung und die dritte Ursache für Krebstod weltweit [1]. Erhebliche Fortschritte bei der Früherkennung von Krebs gemacht worden, aber es gibt noch keine vergleichbaren Fortschritt in der Genauigkeit der klinischen Ergebnisse Vorhersage [2] gewesen. Nur die TNM-Klassifikation der International Union Against Cancer (UICC) oder American Joint Committee on Cancer (AJCC) auf einer Routinebasis verwendet, die das wichtigste Instrument ist die Behandlung Strategie für die GC-Patienten zu führen [3]. Allerdings haben GCs signifikante Heterogenität in ihrer biologischen Verhalten und Tumoren der gleichen klinischen Stadium oft zeigen Unterschiede in klinischen Verlauf und Ansprechen auf die Behandlung [4]. Die Identifizierung von Faktoren, Invasion und Metastasierung zu beeinflussen, und Etablierung von Biomarkern Panels Malignitätspotential vorherzusagen und zu verschiedenen Risikogruppen zu identifizieren einer überragender Bedeutung sind.
Trotz jahrelanger Forschung und Hunderte von Berichten über Tumormarker in der GC, die Zahl von klinisch nützliche Marker ist erbärmlich klein [5]. Vor kurzem wurde eine neue prognostisches Werkzeug von Lymphknoten Verhältnis (LNR), wie die Anzahl der MLN durch die Anzahl der Lymphknoten abgerufen wurde geteilt definiert vorgeschlagen. Es kann die Prognose Genauigkeit verbessern und die Stufe der Migration zu reduzieren, wenn sie mit der UICC (2002, 6. Auflage) Staging-System im Vergleich [6, 7]. LNR wurde als einer der besten klinisch-pathologische Variablen für die Vorhersage der Prognose von Magenkrebs nach kurativer Operation in retrospektiven Studien [8], in Betracht gezogen, die den Erfolg bei der Optimierung der traditionellen klinischen Marker ist. Jedoch übersetzt die Entdeckung von anderen sogenannten vielversprechende Marker in Labor eher langsam in die klinische Anwendbarkeit. Ein Grund dafür ist die Tatsache, dass die Entwicklung von Krebs und Progression durch die Co-Evolution zwischen Tumorzellen und Tumor-Mikroumgebung bestimmt wird eher als eine einzelne Mutation [9]. Solche Co-Entwicklung wurde von vielen Studien berichtet worden, von denen alle zeigen, dass Wechselwirkungen zwischen Tumorzellen und Tumor stromal eine einzigartige und dynamischen Mikroumgebung schaffen, um die Tumorprogression [10] beeinflussen. Daher stellt das Screening neuer molekularer Faktoren von dem Komplex Tumor-Mikroumgebung (zelluläre und stromalen Komponenten) einen weiteren wesentlichen Ansatz prognostische Faktoren zu identifizieren.
MT1-MMP als Membran-Matrix-Metalloproteinase Typ bekannt ist, und MT1-MMP-vermittelte extrazelluläre Matrix (ECM) Abbau durch Tumorzellen oder Stromazellen ist für Krebsinvasion durch Basalmembranen und stromal interstitielle Matrix [11]. Obwohl MT1-MMP prognostische Bedeutung in verschiedenen menschlichen Krebsarten, wie Brustkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs und Darmkrebs gezeigt hat [12, 13], wenig über die genaue Bedeutung von MT1-MMP in GC-Patienten bekannt. Wesentliche Beiträge zur Tumor-Mikroumgebung sind Entzündungen und Entzündungsmediatoren [9]. Es wurde vorgeschlagen, dass die Immun contexture das klinische Ergebnis der Krebspatienten beeinflussen können, und die Immun Score wäre wichtiger Prädiktor vergleichbar mit TNM-Klassifikation [14] sein. CD11b wird durch eine spezifische Untergruppe von myeloischen Zellen exprimiert, einschließlich CD34 + Vorläufern, Monozyten, Granulozyten, NK-Zellen und aktivierten T-Zellen, für die angeborene Immunität Bilanzierung [15, 16]. Die Rolle der Tumorimmunogenität und Immuntherapien werden diskutiert [17]. unser Wissen über die komplexe Rolle von Immunzellen im GC Erweiterung letztlich den Weg für die lang erwartete erfolgreiche Entwicklung von Therapeutika ebnen könnte.
diesem Verständnis Basierend wir prognostische Rolle der zellulären Proteinase Marker MT1-MMP und Mikroimmunmarker untersucht CD11b + Immunozyten in GC. Besonderes Augenmerk wurde auf den prognostischen Wert der kombinierten Merkmale von MT1-MMP, CD11b + Immunozyten Dichte und LNR.
Methoden bezahlt
Patienten und Follow-up die Aufzeichnungen von GC Patienten
, die Operation mit kurativer unterzog Absicht an der Abteilung für Onkologie, Zhongnan Krankenhaus von Wuhan University (Wuhan, China) zwischen Dezember 2002 und Februar 2011 wurden überprüft. Die wichtigsten demographischen und klinisch-pathologischen Merkmale zur Verfügung standen. Bei keinem der Patienten erhielten eine neoadjuvante Chemotherapie vor der Operation. TNM-Stadium wurde nach der 7. Auflage UICC /AJCC TNM-System [18] bestimmt. Durch die jüngsten Follow-up am 31. Mai 2012, dem medianen Follow-up betrug 59,5 (Bereich: 16,8 bis 102,3) Monate. Insgesamt 108 (58,7%) Patienten starben. Das Gesamtüberleben (OS) wurde als das Intervall ab dem Zeitpunkt der Operation zu GC im Zusammenhang mit Tod definiert. Jede Wiederholung in abdomino-Beckenhöhle wurde als lokal-regionale Wiederholung definiert; und ein erneutes Auftreten über den Blutfluss wurde als Fernmetastasen definiert, wie Lebermetastasen und Lungenmetastasen. Eine schriftliche Einverständniserklärung wurde von den Patienten erhalten, und das Studienprotokoll wurde von der Ethikkommission der Zhongnan Krankenhaus von Wuhan Universität genehmigt. Die Studie wurde nach den ethischen Standards der World Medical Association Deklaration von Helsinki durchgeführt.
Magenkrebs Proben und Gewebe-Mikroarrays alle länder Hämatoxylin und Eosin (HE) färbten Folien durch unabhängige Gutachter geprüft wurden, die nicht bewusst waren die klinischen Merkmale oder klinischen Ergebnisse. Drei Gewebe-Mikroarrays (TMA) wurden konstruiert. Kurz gesagt, wurden zwei Kerne von jedem repräsentativen Tumorgewebe (1,5 mm im Durchmesser für jeden Kern) entnommen. Dann wurden drei TMAs Abschnitte mit 184 Tumorgewebe aufgebaut (in Zusammenarbeit mit Shanghai Biochip Company Ltd., Shanghai, China).
Immunhistochemie und Auswertung der immunhistochemischen Befunde
Die primären Antikörper für MT1-MMP (sc101451, Santa Cruz , USA, Verdünnung 1/100), CD11b + (ab52478, Abcam, UK, Verdünnung 1/100), die entsprechende Meerrettich-Peroxidase (HRP) konjugierter Sekundärantikörper (ab97265, ab97200, Abcam, UK, Verdünnung 1/300), und Diaminobenzidin (DAKO, Dänemark) wurden erhalten und für die Kennzeichnung validiert.
Die Immunhistochemie Protokolle zuvor beschrieben wurden [19]. Kurz gesagt, wurden drei TMAs Abschnitte mit Xylol thenrehydrated durch drei Änderungen von Alkohol deparaffinised. Endogene Peroxidaseaktivität wurde 10 min um 0,3% Wasserstoffperoxid blockiert. Antigen Retrieval wurde durch Mikrowellenbehandlung in 0,01 M Tris-EDTA-Puffer (pH 9,0) für 20 min durchgeführt. Die Objektträger wurden für 1 h mit den primären Antikörpern für MT1-MMP (sc101451, Santa Cruz, USA, Verdünnung 1/100), CD11b + (ab52478, Abcam, UK, Verdünnung 1/100) inkubiert. Nach Waschen mit Tris-gepufferter Salzlösung (TBS, pH 7,4) wurden die Schnitte mit b der entsprechenden Meerrettichperoxidase (HRP) konjugierter Sekundärantikörper (ab97265, ab97200, Abcam, UK, Verdünnung 1/300) für weitere 50 min inkubiert. Antigen-Antikörper-Reaktion wurde mit 3,30-Diaminobenzidin (DAKO, Denmark) sichtbar gemacht. Nach Gegenfärbung mit Hämatoxylin, Xylol Schnitte wurden durch aufsteigende Alkohole dehydriert und montiert. Positive Färbung Kontrollen wurden in parallel mit Paraffinschnitten von normalen menschlichen Tonsillen durchgeführt. Negativkontrolle wurde durch Weglassen des primären Antikörpers durchgeführt.
Die Objektträger unter Olympus BX51 Fluoreszenzmikroskop mit einer Olympus DP72 Kamera (Olympus Optical Co., Ltd., Tokio, Japan) ausgestattet wurden untersucht. Panorama jedes markierten Kern wurde anhand von 4 Aufnahmen unter Low-Power-Vergrößerung (× 100) mit hoher Auflösung von DP-BSW-Software (Olympus Optical Co., Ltd., Tokio, Japan) erhalten. Identische Einstellungen wurden für jede Fotografie verwendet, um die Auswahl Bias zu minimieren. Die MT1-MMP-Expression und CD11b + Immunozyten Dichte wurden von Image-Pro Plus-v6.2-Software (Media Cybernetics Inc., Bethesda, MD) digital ausgewertet. Zu halten Ergebnisse zuverlässig und vergleichbar sind, eine gleichmäßige Einstellung für alle Folien wurde für das Lesen der einzelnen Antikörperfärbung angewendet. Integrierte optische Dichte (IOD) aller positiven Färbung von MT1-MMP in jeder Fotografie wurde gemessen und ihr Verhältnis zur Gesamtfläche jeder Fotografie wurde als MT1-MMP-Expression berechnet. CD11b + Immunozyten Dichte wurde als die Anzahl der positiven Zellen pro Gewebeoberfläche Einheit in Quadratmillimetern aufgezeichnet. Cut Punkte für MT1-MMP Dichte wurde durch "die besten Cut-off-Ansatz von Log-Rank-Test" [20] untersucht. Und der 25. Perzentile-Wert wurde als der Cut-off-Punkt definiert die MT1-MMP negativen und positiven Ausdruck Untergruppen in dieser Studie zu bestimmen. Für die CD11b + Immunozyten Dichte, die Cut-off-Punkt für die Definition von Untergruppen (niedrige und hohe CD11b + Immunozyten Dichte) war der Medianwert.
Statistische Analyse
Statistische Analysen mit SPSS-Software durchgeführt wurden (Version 18.0, SPSS Institute, Chicago, IL). Die Pearson χ 2-Test oder der exakte Test nach Fisher wurde verwendet, qualitative Variablen zu vergleichen. Kaplan-Meier-Analyse wurde für das Überleben Analyse und Bedeutung bei Patienten Untergruppen verwendet wurde von Log-Rank-Test berechnet. Das Modell Cox-Regression wurde verwendet, multivariate Analyse durchzuführen. Logistische Regression wurde verwendet, um den Einfluss von binären Faktoren zu bewerten. Empfängerbetriebskennlinie (ROC) -Analyse wurde verwendet, um den Vorhersagewert der Parameter zu bestimmen. Zweiseitiger P
< 0,05 wurde als statistisch signifikant betrachtet.
Ergebnisse | Die wichtigsten klinisch-pathologische Merkmale und immunhistochemischen Befunde
Unter den 184 Fällen, in dieser Studie waren 132 (71,7%) Männer und 52 (28,3%) Frauen, bis hin in Alter 25 bis 85 Jahre (Mittelwert ± SD: 57,9 ± 12,9 Jahre). Die wichtigsten demographischen und klinisch-pathologischen Eigenschaften wurden in Tabelle 1 1.Table der Patienten Demografie und klinisch-pathologischen Merkmale
Artikel präsentiert

Wert
Alter (M ± SD, J)
57,9 ± 12,9
Geschlecht
männlich (%)
132 (71,7)
weiblich (%)
52 (28,3)
Tumor Lage
Distal Magen (%)
98 (53,3)
Nicht distalen Magen (%)
86 (46,7)
Pathologische Typen
Adenokarzinome
Grading 1/2
55 (29,9)
Well /Mäßig differenziertes Adenokarzinom (%)
55 (29,9)
Grading 3/4
124 (67,4)
Low /Undifferenzierte Adenokarzinom (%)
102 (55,4)
Muzinöses Adenokarzinom /Siegelringzellkarzinom 22
(12.0) ein
5 (2.7) und auch andere (%)
Serosa Invasion
Nein (T0, T1, T2) (%)
27 (14,7)
Ja (T3, T4) (%)
157 (85,3)
Lymphknotenmetastase
Nein (N0) (%)
53 (28,8)
Ja (N1, N2, N3) (%)
131 (71,2)
LNR, Median (Bereich)
0,33 (0-1)
Fernmetastasen
M0 (%)
177 (96,2)
M1 (%)
7 (3,8)
TNM Stadien Frühe (Phasen I, II) (%) 58
(31.5)
Erweiterte (Stufen III, IV) (%)
126 (68,5)
Chirurgie
Teilsumme Resektion (%)
159 (86,4)
Nicht Teilsumme Resektion (%)
25 ( 13.6)
Chemotherapie
Nein (%)
35 (19,0)
Ja (%)
149 (81,0)
Recurrence
Nein (%)
124 ( 67.4)
Ja (%)
60 (32,6)
Recurrence Lage b
Lokale regionale
37 (61,7)
Distant
23 (38,3)
Klinische Status am Ende des Follow-up
Live und ohne Wiederholung
72 (39,1)
tot oder lebendig mit einem Rezidiv
112 (60,9)
MT1-MMP-Expression
Negative
46 (33,3)
Positive
138 (66,7)
CD11b + Immunozyten (Zellen /mm2)
Median (Bereich)
257 (4-2101) TÜV Andere enthalten adenosquamöses Karzinom in 3 (1,62%) Fälle, untypische Karzinoid in 1 (0,54%) Fall und neuroendokrinen Karzinomen in 1 (0,54%) case.b 60 rezidivierende Fälle wurden ausgewertet.
die Immunhistochemie wurde in allen GC TMAs und das Ergebnis durchgeführt jeder Probe wurde für Bilder basierte digitale Analyse (1A-1D) erhalten. MT1-MMP-Färbung war hauptsächlich im Zytoplasma oder auf der Zellmembran von Tumorzellen. Die meisten der Stromazellen waren negativ, obwohl sporadische positive Färbung auf diese Zellen auch (1E, 1G) beobachtet wurde. CD11b + Immunozyten hauptsächlich in der Verbindungsstelle von Krebs Nest und Stromazellen (1F, 1H) infiltriert. Die Höhe der MT1-MMP Dichte und CD11b + Immunozyten Dichte in Tabelle 1 waren die 25. Perzentile der MT1-MMP Dichte betrug 0,00186 und 138 (75,0%) der Patienten als MT1-MMP positiv dokumentiert wurden gemäß den oben genannten Klassifizierungskriterien. Der Medianwert von CD11b + Immunozyten waren 257 Zellen pro Gewebeoberfläche Einheit in Quadratmillimeter. Abbildung 1 Immunhistologische Befunde in TMAs. (AD) repräsentatives Beispiel für MT1-MMP (A), CD11b + Immunozyten (C) Färbung eines GC Gewebemikroarray, und das zugehörige digitale Bild mit dem Bild-Software analysiert, mit MT1-MMP (B) und CD11b + Immunozyten (D ) in rot dargestellt. (E, G) MT1-MMP-Färbung war hauptsächlich im Zytoplasma oder auf der Zellmembran von Tumorzellen (blauer Pfeil), und die meisten der Stromazellen hatten negative Färbung, obwohl sporadische positive Färbung auf diese Zellen beobachtet wurde (F, H). CD11b-Färbung zeigten, dass + CD11b Immunozyten vor allem in der Verbindung von Krebs Nest und Stroma infiltriert, vor allem an der invasiven Front (rote und grüne Pfeile).
Beziehung zwischen MT1-MMP-Expression, CD11b + Immunozyten Dichte und klinisch-pathologischen Merkmale
Es waren 77 (55,8%) und 15 (32,6%) Patienten mit hohem CD11b + Immunozyten Dichte in MT1-MMP positiv (n
= 138) und negativen (n
= 46) Untergruppen, bzw. (P
= 0,006). (: P
= 0,007, logistische Regressions Odds Ratio (OR) = 0,383 [0,190 bis 0,774 95% CI]) Die Wahrscheinlichkeit von MT1-MMP-Expression war signifikant für niedrige CD11b + Immunozyten Dichte Untergruppe verringert. Der MT1-MMP-Expression und CD11b + Immunozyten Dichte wurden mit den klinisch-pathologischen Merkmale korreliert, wie in Tabelle 2 MT1-MMP-Expression zusammengefasst wurde mit kleinen Tumorgröße (P
= 0,007) korrelierten, tumor an distalen Magen (P
= 0,027) und erhöhte Rezidivrisiko (P
= 0,001), aber nicht mit dem Alter, Geschlecht, histologischen Grad korreliert sind, Serosa-Invasion, Lymphknotenstatus, TNM-Stadium und Websites von Rezidiven (P
> 0,05 für alle). CD11b + Immunozyten Dichte wurde mit Lymphknoten-Status (P
= 0,015), LNR (P
= 0,018) und TNM-Stadium (P
= 0,011) korreliert, nicht aber mit dem Alter, Geschlecht, Tumorgröße korreliert histologischen Grad, Serosa-Invasion und Rezidivrisiko (P
> 0,05 für alle), Tumorlokalisation, .Tabelle 2 Die Beziehung zwischen MT1-MMP, CD11b + Immunozyten Dichte und cinico-pathologischen Merkmale
Variablen

MT1-MMP-Expression
CD11b + Immunozyten Dichte
Negativ (n
= 46)
Positive (n = 138)

P
Low (n
= 92)
Hoch (n
= 92)
P
N
(%)
N
(%)
N
(%)
N
(%)

Alter (Jahre)
< 60
26 (56,5)
20 (43,5)
0.669
43 (43,4) 56 (56,6)

0.055
≥60
73 (52,9)
65 (47,1)
49 (57,6)
36 (42,4)
Geschlecht
männlich
33 (25.0 )
99 (75,0) 1,000
66 (50,0) auf
66 (50,0)
1.000
Weiblich
13 (25,0)
39 (75,0)
26 (50,0)
26 (50,0)
Tumorgröße (cm 2) ein
< 16
12 (16,4) 61 (83,6)
0,007
35 ( 47.9)
38 (52,1)
0.404
≥16
31 (35,2)
57 (64,8)
48 (54,5)
40 (45,5)
Lage
distal
18 (18,4)
80 (81,6)
0,027
51 (52,0)
47 (48,0)
0.555
Nicht distale
28 (32.6)
58 (67,4)
41 (47,7)
45 (52,3)
Grading b
1/2
13 (23,6)
42 (76,4)
0.845
24 (43,6)
31 (56,4)
0.376
3/4
31 (25,0)
93 (75,0)
63 (50,8)
61 (49,2)
Lymphknotenmetastase
Ja
31 (23,7)
100 (76,3)
0.511
73 (55,7)
58 (44,3)
0.015
No
15 (28,3)
38 (71,7)
19 (35,8)
34 (64,2)
LNR c
≤0.33
27 (28,7 )
67 (71,3)
0.233
39 (41,5)
55 (58,5)
0,018
> 0,33
19 (21,1)
71 (78,9)
53 (58,9)
37 (41,1)
Serosa-Invasion (T-Stadium)
T1-2
4 (14,8)
23 (85,2)
0.186
10 (37,0)
17 (63,0)
0.145
T3-4
42 (26,8)
115 (73,2)
82 (52,2)
75 (47,8)
TNM Frühe (I, II)
13 (22,4)
45 (77,6)
0.583
21 (36,2)
37 (63,8)
0,011
Advanced (III, IV)
33 (26,2)
93 (73,8)
71 (56,3)
55 (43,7)
Recurrence
Ja
9 (15.0 )
51 (85,0) 0,029
30 (50,0) auf
30 (50,0)
1.000
No
37 (29,8)
87 (70,2)
62 (50,0)
62 (50,0)
Recurrence Lage d
Lokale regionale
7 (18,9) 30
(81,1)
0.460
20 (54,1)
17 (45,9)
0.426
Distant
2 (8.7)
21 (91,3)
10 (43,5)
13 (56,5)
eine Analyse durchgeführt wurde, basiert auf 161 Patienten mit vollständigen Daten der Tumorgröße (TS) .B-Analyse basierend auf 179 Patienten mit Magen adenocarcinoma.c der Median der Lymphknoten-Verhältnis (LNR) 0,33 (6 Fälle) durchgeführt wurde, und GC Fälle waren unterschiedlich in verschiedenen Untergruppen . d 60 rezidivierende Fälle wurden eingeschlossen.
Analyse Überleben
Für 184 Fälle betrug die mediane OS betrug 26,8 (Bereich 0,8 bis 102,3) Monaten, und die 1-, 3- und 5-Jahres-Überlebensrate betrug 79,3%, 50,5% bzw. 37,4%, bzw. (2A). (; 0,05 für alle P
<) Wie erwartet, wurden diese traditionellen Faktoren, die mit GC Patienten OS, wie Tumorgröße, Grading, Lymphknotenstatus, Serosa-Invasion und TNM-Stadium in Verbindung gebracht. Darüber hinaus sind sowohl hohe CD11b + Immunozyten Dichte und MT1-MMP negativen Expression wurden mit besseren OS korreliert (P
Wert betrug 0,031 und 0,015, respectively.) (2B, 2C). Die Unterscheidungsfähigkeit in OS wurde in LNR Untergruppen erhöht (P
< 0,001) im Vergleich zu den Lymphknoten Statusuntergruppen (P
= 0,015) (Figur 2D, 2E) und ROC-Analyse zeigte, dass in Bezug auf die Vorhersage die Klassifizierung von LNR (Fläche unter der Kurve: 0.659 [95% CI: 0,579-0,739], P
< 0,001) Risiko des Todes, hatte eine bessere Leistung als positive Lymphknoten-Nummer (Flächen unter der Kurve: 0.568 [95 % CI: 0,484-0,653], P
= 0,114). Alle Ergebnisse zeigten, dass MT1-MMP positiv, niedrige CD11b + Immunozyten Dichte und eine hohe LNR Risikofaktoren waren zu einer schlechten Prognose in Verbindung (Abbildung 2, Tabelle 3). Abbildung 2 Kumulative OS von GC-Patienten. (A) OS von 184 GC-Patienten. (B) Niedrige CD11b + Immunozyten Dichte wurde zu einer schlechten OS bezogen. (C) Patienten in MT1-MMP positive Gruppe für den Tod bei höheren Risiko waren. (D, E) Beide Lymphknoten-Status und LNR mit schlechter OS korreliert wurden, aber LNR bessere Patientenuntergruppen unterscheiden konnte. (F) kombinierten Merkmale OS von GC-Patienten zeigen konnten genauer.
Tabelle 3 Analysen von Faktoren in Bezug auf OS
Variablen
N
N des Todes (%)

Median OS (Range)
5-Jahres-Überlebensrate (%)
Log-Rank-Test χ2value
P
Alter (Jahre)
< 60
99
52 (52,5)
30,1 (1,5-99,5)
45,1
3.584
0.058
≥60
85
56 (65,9)
24,8 (0,8 bis 102,3)
28,6
Geschlecht
männlich
132
74 (56,1)
30,3 (0,8 bis 102,3)
40,0
2,114
0.146
Weiblich
52
34 (65,4)
25,1 (1,3-94,8)
30,3
Tumorgröße (cm 2) ein
< 16
73
35 (47,9)
41,6 (1,1-99,5)
52,9
7,882
0,005
≥16
88
57 (64,8)
24,2 (0,8 bis 102,3)
29,2
Grading b
1/2
55
88 (56,1)
30,1 (1,1 bis 102,3)
54,2
13,412
< 0,001
3/4
124
20 (74,1)
16,8 (0,8-74,9)
30,1
Lymphknoten Metastasen
Ja
131
83 (63,4)
24,8 (0,8 bis 102,3)
52,9
5,895
0.015
Kein
53
25 (47,2)
34.1 (6.1 -99,5)
30,5
Serosa-Invasion (T-Stadium)
T1-2
27
7 (25,9)
58,9 (20,2-99,5)
74,9
14,742
< 0,001
T3-4
157
101 (64,3)
24,8 (0,8 bis 102,3)
30,8
TNM Frühe (I, II)
58
26 (44,8)
35,8 (6,1-99,5)
54,0
9,823
0.002
Erweiterte
126
82 (65,1) 22,8
(,8-102,3)
29,2
(III, IV)
Chirurgie
SR
159
89 (56,0)
30,0 (0,8 bis 102,3)
39,8
5,902
0.015
TR /CR
25
19 (76,0)
18,0 (3,8-89,9)
21,8
Chemotherapie
Ja
149
87 (49,7)
33,5 (5,3-99,5)
35,9
0,016
0.900
No
35
21 (60,0)
28,4 (,8-102,3 )
40,0
LNR c
≤0.33
94
41 (43,6)
38,8 (1,1 bis 102,3)
55,1
24,881
< 0,001
> 0,33
90
67 (74,4)
20,1 (0,8-99,1)
18,3
MT1-MMP
Negative
46
18 (39,1)
35,7 (3,8-79,3)
54,0
5,869
0.015
Positive
138
90 (65.2)
25,4 (0,8 bis 102,3)
32,2
CD11b + Immunozyten Dichte
Nieder
92
62 (67,4)
25,1 (0,8-99,1)
27,6
4,655
0,031
hoch
92
46 (50,0)
30,7 (1,3 bis 102,3)
46,7
kombinierten Merkmale (MT1-MMP Dichte, CD11b + Immunozyten Dichte und LNR)
Gruppe I 73
26 (35,6)
38,7 (6,1-94,1)
61,4
28,173
< 0,001
Gruppe II
111
82 (73,9)
18,1 (0,8- 90.9)
21,1
eine Analyse auf Basis von 161 Patienten mit vollständigen Daten der Tumorgröße durchgeführt wurde. b Die Analyse wurde mit einem Adenokarzinom des Magens auf Basis von 179 Patienten durchgeführt. c Der Median der LNR betrug 0,33 (6 Fälle) und GC Fälle waren unterschiedlich in verschiedenen subgroups.OS: Gesamtüberleben; SR: subtotaler; TR: Totalresektion; CR: kombinierte Resektion; LNR. Lymphknoten Verhältnis
Wie oben vorgeschlagen, kombinierten Merkmale von der Anzahl der Risikofaktoren beruhten Vorhersage von GC Prognose (Tabelle 3) zu verbessern, untersucht. So wurden die Patienten in zwei Untergruppen unterteilt nach der Anzahl der Risikomerkmale: Gruppe I, weniger als zwei Risikofaktoren festgestellt wurden; und Gruppe II, zwei oder drei Risikofaktoren beobachtet. Kombinierte Analyse zeigte, dass das Betriebssystem der Patienten in Gruppe II signifikant kürzer als Patienten in der Gruppe war ich (P
< 0,001). (2F)
Multivariate Analyse und ROC-Analyse
In univariaten Analyse traditionellen clinico -pathological Features (wie Tumorgröße, T-Stadium, TNM-Stadium, Operationsmethoden, und ein erneutes Auftreten Status), MT1-MMP-Expression, CD11b + Immunozyten Dichte und LNR wurden mit OS verbunden. Darüber hinaus ist die Todesrisiko in kombinierten Gruppe II signifikant erhöht (P
< 0,001).
Faktoren Bedeutung von univariaten Analyse zeigt, integriert wurden in multivariaten Analyse Proportional-Hazards-Cox. In dieser Studie, LNR, MT1-MMP, CD11b und kombiniert Funktionen wurden stark korreliert. Daher werden zwei getrennte multivariate Modelle wurden erzeugt, um die multicollinearity unter diesen Variablen zu vermeiden. LNR, MT1-MMP-Expression und CD11b + Immunozyten Dichte waren unabhängige prognostische Faktoren für OS nach anderen Störfaktoren ohne (P
< 0,05 für alle) Darüber hinaus sind die kombinierten Merkmale waren unabhängiger prognostischer Faktor, auch (HR = 3,818 [95 % CI: 2,223-6,557], P
< 0,001) (Tabelle 4) .Tabelle 4 Multivariate mit OS
Faktoren
OS
assoziierten Faktoren analysiert
HR
95% CI

P
Modell 1 | Tumorgröße: < 16 cm2vs
≥16 cm2
1,821
1.168-
2,839 0,008
Serosa-Invasion (T-Stadium):
T1-2 vs
T3-4
3,232
1,440-7,251
0,004
Lymoh Knoten Metastasierung:
No vs
Ja
1.012
0,610-1,679
0.964
Chirurgie-Typen: SR vs
TR /CR
2.030
1,128-3,653
0,018
LNR: niedrig (≤0.33) vs High (> 0,33)
1,957
1,233-3,108
0,004
MT1-MMP: Negative vs
Positive
2,596
1,496-4,506
0,001
CD11b + Immunozyten Dichte: hoch vs
Nieder 1,838
1,183-2,855
0,007
Modell 2
Tumorgröße: < 16 cm2vs
≥16 cm2
1.734
1,120-2,686
0,014
Serosa-Invasion (T-Stadium):
T1-2 vs
T3-4 3,013

1,360-6,674
0,007
Lymoh Metastasierung Knoten:
Kein vs
Ja 0,696
0.404
- 1,200
0.192
Chirurgie-Typen: SR vs
TR /CR
2,023
1,134-3,606
0,017
kombinierten Merkmale: Gruppe I vs
Gruppe II
3,818
2,223-6,557
< 0,001
OS : Gesamtüberleben; HR: Hazard Ratio; NA: nicht angenommen; SR: subtotaler; TR: Totalresektion; CR: kombinierte Resektion; LNR. Lymphknoten Verhältnis
ROC-Analyse wurde die prognostische Leistung der vier unabhängige Faktoren in dieser Studie weiter zu bewerten, umgesetzt. Kombinierte Merkmale wäre besser, die klinischen Ergebnisse der GC-Patienten im Vergleich zu anderen Faktoren (Fläche unter der Kurve: 0.689 [95% CI: 0,609 bis 0,768], P
< 0,001) vorherzusagen (Abbildung 3). Abbildung 3 ROC-Analyse der Vorhersagewert für den Tod. Unter den 4 unabhängige prognostische Faktoren, die Fläche unter der Kurve des neuen kombinierten Merkmal war die größte. Die kombinierte Funktion bessere prognostische Leistung in GC-Patienten haben könnte.
Diskussion
Wir haben eine kombinierte Analyse von integrierten Tumor Stroma-Features als nützliche Strategie der Tumorprogression und das Überleben der Patienten in GC auf dem fokussierten auf der Grundlage unserer Studien zur Bewertung vorgeschlagen Co-Evolution von Tumorzellen und Tumormikroumgebung und [19, 21, 22]. Diese Studie wurde entworfen, um die Machbarkeit dieser kombinierten Strategie zu erkunden. Außerdem wurde ein verbessertes Verfahren Automatisierungs die digitalisierten Bilder zu analysieren, verwendet, um sowohl die Reproduzierbarkeit und eine gute Leistung in dieser Studie zu gewährleisten. sowie an die Routine Auswertung von Parametern für die klinische Behandlung von Krebspatienten als Fridman [23] vorgeschlagen, würden solche Methoden ebnen den Weg, um besser auf die komplexe Tumor-Mikroumgebung zu verstehen. Hierbei wurden 184 GC Fälle die Prognosewerte der optimierten konventionellen pathologischen prognostische Faktoren, zellulären molekularen Faktoren, Immunfaktoren und die kombinierten Merkmale zur Bewertung einbezogen. Dies ist der wesentliche Schritt in Richtung einer tragfähigen Prognosesystems für sowohl klinisch-pathologischen, Tumor und Stroma-Funktionen in unserer Serie Studien zu integrieren [19, 21, 22].
Von 184 Fällen sind die Demographie und die klinisch-pathologischen Eigenschaften ähnlich wie diejenigen, die in anderen großen Reihe von GC Bevölkerung berichtet [24]. Unsere Ergebnisse zeigten, dass die Expression von MT1-MMP häufig mit einem erhöhten Rezidivrisiko korreliert wurde, aber der Unterschied in Rezidiv Lage war statistisch nicht signifikant. Diese Ergebnisse waren ähnlich wie bei früheren Bericht [25]. MT1-MMP spielt eine wichtige Rolle in Typen abbau I und IV Kollagene Ausbreitung von Krebszellen zu erleichtern. Zusätzlich MT1-MMP Angiogenese und Mikrometastase über vaskulären Weg fördern [26].
Hinsichtlich Immunzellen, sind die Beschaffenheit, Dichte und Position wichtiger Parameter umfassend die in situ
Immunreaktion und die spezifische auszuwerten Rolle bei der Krebsprogression. In dieser Studie + CD11b Immunozyten wurden meist an der invasiven Front gelegen. Der Unterschied in der CD11b + Immunozyten Dichte war statistisch signifikant zwischen Lymphknoten-Metastasen und nicht-metastais Untergruppen. Weiterhin wurde die CD11b + Immunozyten Dichte Anfang höher als erweiterte GC Patienten, ähnlich zu den Berichten von Sconocchia et al. und Ladoire et al. [27, 28]. Die Kandidaten Gefördert durch das Ministerium für Bildung von China (Nr 5052011303014), Wissenschaftsfonds der National Natural Science Foundation of China (Nr 81171396), Wissenschaftsfonds für kreative Forschungsgruppen der National Natural Science Foundation of China (Nr 20621502, 20921062 ) und die Grundlagenforschung Fonds für die zentralen Universitäten des Ministeriums für Bildung von China (Nr 4.103.005).
Autoren Original vorgelegt Dateien für Bilder
Nachfolgend finden Sie die Links zu den Autoren ursprünglich eingereichten Dateien für Bilder. Alle Autoren haben gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.

• Expression von p53, induzierbare Stickstoffmonoxid-Synthase und vascular endothelial growth factor in Magen präkanzerösen und kanzerösen Läsionen: Korrelation mit klinischen Merkmalen
• Eine Erhöhung der Integrin-linked kinase nicht-kanonisch verleiht NF-kappaB vermittelte Wachstumsvorteile gegenüber Magenkrebszellen durch Aktivierung von ERK1 /2